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OBTENCIN DE COLESTEROL DEL CEREBRO DE UNA ANIMAL

INTRODUCCIN

El colesterol es quiz el esteroide mejor conocido debido a su relacin con la


arteriosclerosis. Se encuentra ampliamente distribuido en todas las clulas del
organismo, pero especialmente en las del tejido nervioso. Es el constituyente
de mayor importancia en las membranas celulares y de las lipoprotenas
plasmticas. A menudo se encuentra combinado con cidos grasos como ester
de colesterico. Existen en las grasas animales pero no es las vegetales. El
nombre qumico es 3-hidroxi-5,6 colesteno. El colesterol tambin es identificado
como un grupo principal de lipoprotenas para transportar a los lpidos en el
plasma. Aproximadamente la mitad del colesterol del organismo se origina de
su sntesis y el resto es proporcionado por una alimentacin promedio. El
hgado sintetiza ms o menos 10% del total en los seres humanos, el intestino
cerca de 15% y la piel una gran porcin del resto. Prcticamente los tejidos que
contienen clulas nucleadas son capaces de sintetizar colesterol. La fraccin
microsomica y el citosol son responsables de su sntesis.

PROCEDIMIENTO

Se pesan los frascos, etiquetndolos como fraccin 1 a la 3. Solo pesaremos


en papel aluminio 2.5 gramos de cerebro, este se picara y se colocara en un
tubo de centrfuga, adicionndole acetona, 1ml por cada 0.5 g. de cerebro, se
homogeniza el tejido por 1 minuto y s centrfuga a 3000 rpm. Se decanta el
SN en el frasco fraccin I, y al residuo se le aadir 2 ml de acetona y se
homogeniza nuevamente, se centrfuga y se vuelve a colocar el SN con la
fraccin I, (fraccin I es colesterol).

Por 5 minutos se dejara el residuo a temperatura ambiente para evaporar la


acetona. Se adicionan 3 ml de ter al residuo, esto s centrfuga por 2 minutos
a 3000 rpm; el SN se colecta en otro tubo de centrfuga con la leyenda fraccin
A, esto contiene fosfolpidos, nuevamente se har otra extraccin con ter y se
junta el SN en la fraccin A. Ahora quitaremos los residuos de ter dejando que
le d un poco de aire, entonces se adicionaran 3 ml de etanol al 95% caliente
(70), agitando y despus centrifugando (2 min. a 3000 rpm), el SN se colecta
en el frasco de la Fraccin III, la cual son glucolpidos, y se har otra vez la
extraccin con 3 ml de etanol.

Calcularemos el volumen de la fraccin A y agregaremos 2 volmenes de


acetona, homogenizamos y centrifugamos (mismo tiempo y rpm); el SN se
colocara con la Fraccin I; al residuo se adiciona 3 ml de ter y agitarlo 4
minutos y despus centrifugamos, el SN se colocara en el frasco de la Fraccin
II (fosfolpidos), esta extraccin se repetir dos veces ms y los SN van al
mismo lugar.

En cada frasco se colocaran dos perlas de ebullicin y se evaporara a


sequedad todos los frascos sobre la parrilla, no deben quemarse los residuos.
Por ltimo se pesaran los frascos nuevamente y calcularemos la cantidad
obtenida de cada fraccin.
LIPIDOS: EXTRACCION DE COLESTEROL APARTIR DE CEREBRO.

OBJETIVO:
El alumno, aprovechando las propiedades de solubilidad de los lpidos en
solventes orgnicos, extraer el colesterol a partir de u7na muestra de cerebro.

INTRODUCCION

Los lpidos son una familia muy heterogenia de substancias en cuanto a su


composicin qumica; sin embargo, casi todos comparten una propiedad
comn, ser solubles en solventes orgnicos (ter, cloroformo, acetona etc.).

Existen 3 grupos fundamentales de lpidos:

1.- los simples: formados por la unin de un alcohol ms cido graso (grasas,
aceites, ceras).

2.- los compuestos: adems de alcohol y cidos grasos, contiene en su


molcula otra sustancia, por ejemplo los fosfolipidos (contiene fosforo en su
molcula)

3.- los derivados: de estructura muy variable y compleja, derivan de una


estructura bsica repetitiva llamada unidad isoprenoide.
Ejemplo de este grupo: el colesterol.

El colesterol es un compuesto de tipo lipidito, que solo existe en los productos


de origen animal (los vegetales no contienen colesterol), se halla en numerosos
alimentos, pero aun cuando nos alimentemos con aquellos que no lo
contengan, siempre abra colesterol en nuestro cuerpo, o en el de los animales,
dado que el hgado lo produce, y otras clulas tambin, de aqu que este
ampliamente difundido en muchas clulas del cuerpo.

El colesterol realiza constantes funciones dentro del organismo, pero su exceso


puede llegar a ser perjudicial.
Puede acumularse en el interior de los vasos sanguneos, reduciendo la luz de
los mismos (arteriosclerosis).

MATERIALS REACTIVOS
Licuadora acetona
2 vasos p.p. 1000 ml alcohol etlico
1 vaso p.p. 250 ml
1 varilla de vidrio
1 embudo buchner
MATERIAL BIOLOGICO

1 matras kitasato 25 gr. De cerebro


1 bomba de basio
2 papel filtro
1 matraz baln 500 ml con brazo
Para destilacin.
1 refrigerante
2 mangueras de ule latex
1 probeta 100 ml
1 mechero de buncen
1 tela de asbesto
2 soportes universal
1 pieza doble para bureta
1 aro para soporte universal
1 tubo de vidrio acodado
1 balanza granatoria.
4 trozos de gasa aprox. 15X15 cm.

PROCEDIMIENTO

Extraccin de colesterol a partir de cerebro.

1.- pese 25 gr, de cerebro de res o de cerdo.

2.- colquelos en un baso de licuadora y anadeles 100 ml de acetona.

3.- licuar durante 1 min.

4.- pasar el licuado a un vaso de p.p. de 1000 ml.

5.- lavar el vaso de la licuadora con 15 ml de acetona y vaciar este lavado al


vaso de p.p. de 1000 ml, para mezclarlo con el que tiene el paso 4.

6.- agitar por 10 minutos usando una varilla de vidrio.

7.- filtrar la suspensin a trabes e un embudo bucher, montado sobre el matraz


kitasato, el cual a su ves se conecta a la bomba de vaci.

8.- pasar el filtrado del martaz kitasato a un baso de precipitado de 1000


ml. CONSERVAR ESTE FILTRADO.

9.- tomar el residuo que queda en el embudo buchner, y pasarlo al vaso de la


licuadora usando 50 ml de acetona.

10.- licuar durante un minuto.

11.- filtrar a travs del embudo buchner tal y como hizo en el paso 7.

12.- mezclar el filtrado obtenido en el matraz kitasato con el del vaso de


precipitado que contiene el filtrado del paso 8.

13.- transferir los filtrados del paso 12 a un matras baln de 1000 ml.

14.- armar el equipo de destilacin (refrigerante), conectarlo con el matraz


baln. (Pida ayuda de su instructor). Abrir la llave del agua.
15.- aplicar calor suave al matraz baln para eliminar la acetona por destilacin.

16.-una ves destilada toda la acetona, enfriar el matraz baln en agua


corriente.

17.- disolver el material del matras del baln en un volumen mnimo de alcohol
caliente.

18.- filtrar aun en caliente, a travs de papel filtro (colocado sobre un embudo).

19.- secar el colector al aire y anote el rendimiento en peso (considere


descontar el peso del papel filtro).

5.1- resultados esperados

A pesar de que en el cerebro existen numerosos lpidos como:

cidos grasos, fosfatidiletanolaminas, fosfatidilserinas, fosfatidilcolinas,


esfingolipidos, etctera, estas no son soluble en acetona, por lo tanto, no son
extriados del cerebro.

El colesterol si es soluble en acetona, y al usar alcohol caliente se puede


cristalizar, de ah que se espere obtener en el papel filtro estos cristales de
colesterol.

Para comprobar que esto es realmente colesterol, se podra aplicar


posteriormente sobre el producto la prueba de lieberman-burchard (dara color
verde muy intenso), a la prueba de salkowski (2 capas de color, una rojiza en la
porcin superior y una amarillenta en la porcin anterior)