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Bilirrubina

Para la determinacin de bilirrubina directa y total

SIGNIFICACION CLINICA de trabajo en el laboratorio de anlisis clnicos.


La bilirrubina, compuesto de degradacin de la hemoglobina, Todos los reactivos y las muestras deben descartarse de
es captada por el hgado para su conjugacin y excrecin acuerdo a la normativa local vigente.
en la bilis. Las alteraciones hepatocelulares u obstrucciones Reactivo B: H315 + H320: Provoca irritacion cutanea y
biliares pueden provocar hiperbilirrubinemias. ocular. H314: Provoca quemaduras graves en la piel y
La eritroblastosis fetal o anemia hemoltica del recin nacido lesiones oculares graves. P262: Evitar el contacto con los
es una patologa provocada por incompatibilidad materno- ojos, la piel o la ropa. P305 + P351 + P338: EN CASO DE
fetal en la que se produce una destruccin excesiva de CONTACTO CON LOS OJOS: Enjuagar cuidadosamente
glbulos rojos. Esto resulta en un severo aumento de la con agua durante varios minutos. Quitar las lentes de contac-
bilirrubina srica con el consecuente riesgo de difusin del to, si lleva y resulta facil. Seguir enjuagando. P302 + P352:
pigmento al sistema nervioso central, por lo que la determi- EN CASO DE CONTACTO CON LA PIEL: Lavar con agua
nacin de la bilirrubina en estos nios recin nacidos resulta y jabon abundantes. P280: Llevar guantes/prendas/gafas/
sumamente importante. mascara de proteccion.

FUNDAMENTOS DEL METODO ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DE


La bilirrubina reacciona especficamente con el cido sulfa- ALMACENAMIENTO
nlico diazotado produciendo un pigmento color rojo-violceo Reactivos Provistos: son estables a temperatura ambiente
(azobilirrubina) que se mide fotocolorimtricamente a 530nm. (< 25oC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.
Si bien la bilirrubina conjugada (directa) reacciona direc- Diazorreactivo: en refrigerador (2-10oC) y en frasco de vidrio
tamente con el diazorreactivo, la bilirrubina no conjugada color caramelo es estable 3 meses a partir de la fecha de
(indirecta) requiere la presencia de un desarrollador acuoso su preparacin.
(Reactivo A) que posibilite su reaccin. De forma tal que, para
que reaccione la bilirrubina total (conjugada y no conjugada) INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOS
presente en la muestra, debe agregarse benzoato de cafena REACTIVOS
al medio de reaccin. La presencia de sedimento y/o cambio de coloracin de los
reactivos, pueden ser indicio de deterioro de los mismos.
REACTIVOS PROVISTOS
A. Reactivo A: solucin acuosa de benzoato de cafena 0,13 mol/l, MUESTRA
tamponada y estabilizada. Suero, plasma o lquido amnitico
B. Reactivo B: solucin de cido sulfanlico 29 mmol/l y a) Recoleccin: obtener suero o plasma de la manera
cido clorhdrico 0,17mol/l. usual. Proteger de la luz natural o artificial, envolviendo el
C. Reactivo C: solucin de nitrito de sodio 0,07 mol/l. tubo con papel negro.
Tambin es posible realizar la determinacin en lquido amnitico.
REACTIVOS NO PROVISTOS b) Aditivos: en caso de que la muestra a emplear sea plas-
- Agua destilada. ma, debe usarse heparina para su obtencin.
- Bilirrubina Standard de Wiener lab. para efectuar la c) Sustancias interferentes conocidas: hemlisis modera-
calibracin peridica del equipo. da o intensa inhibe la reaccin directa, obtenindose valores
de bilirrubina total falsamente aumentados.
INSTRUCCIONES PARA SU USO Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de las
Reactivo A: listo para usar. drogas en el presente mtodo.
Reactivo B: listo para usar. d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento:
Diazorreactivo: de acuerdo al volumen de trabajo, mezclar la muestra debe ser preferentemente fresca. En caso de
1parte de Reactivo C con 21 partes de Reactivo B. Rotular no efectuarse el ensayo en el momento, el suero debe
y fechar. conservarse hasta 48 horas en el refrigerador (2-10oC)
y la sangre entera no ms de 24 horas en refrigerador o
PRECAUCIONES 12 horas a temperatura ambiente. El lquido amnitico es
Los reactivos son para uso diagnstico "in vitro". conveniente mantenerlo congelado hasta el momento de
Utilizar los reactivos guardando las precauciones habituales efectuar el ensayo.

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La accin de la luz es capaz de destruir en una hora hasta
un 50% de la bilirrubina presente en la muestra. Es por tal Reactivo A - 1,5 ml
motivo que debe protegerse cuidadosamente. Reactivo B 0,2 ml -

MATERIAL REQUERIDO (no provisto) Diazorreactivo - 0,2 ml


- Espectrofotmetro o fotocolormetro. Proceder de la misma manera que en la tcnica I.
- Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados. Dividir el resultado final por 5,37.
- Frasco de vidrio color caramelo.
- Tubos.
- Reloj o timer. CALCULO DE LOS RESULTADOS
Bilirrubina total (mg/l) = (T - B) x f
CONDICIONES DE REACCION Bilirrubina directa (mg/l) = (D - B) x f
- Longitud de onda: 530nm en espectrofotmetro o 520- Bilirrubina libre (indirecta) = BRB total - BRB directa
550nm en fotocolormetro con filtro verde. El factor colorimtrico (f) debe calcularse con Bilirrubina
- Temperatura de reaccin: temperatura ambiente Standard de Wiener lab.
- Tiempo de reaccin: 5 minutos
- Volumen de muestra: 200 ul METODO DE CONTROL DE CALIDAD
- Volumen final de reaccin: 2,9 ml Si la muestra a ensayar es suero o plasma, procesar 2 nive-
les de un material de control de calidad (Standatrol S-E 2
niveles) con concentraciones conocidas de bilirrubina, con
PROCEDIMIENTO cada determinacin.
I- TECNICA PARA SUERO
En tres tubos marcados B (Blanco), D (Directa) y T VALORES DE REFERENCIA
(Total) colocar: Bilirrubina en suero o plasma
- Adultos:
B D T Directa: hasta 2 mg/l
Total: hasta 10 mg/l
Muestra (suero) 200 ul 200 ul 200 ul
- Recin nacidos:
Agua destilada 2,5 ml 2,5 ml - Nacidos a trmino Prematuros
Reactivo A - - 2,5 ml Sangre de cordn 25 mg/l
hasta las 24 hs 60 mg/l 80 mg/l
Reactivo B 200 ul - -
hasta las 48 hs 75 mg/l 120 mg/l
Diazorreactivo - 200 ul 200 ul del 3 al 5 da 120 mg/l 240 mg/l
Mezclar de inmediato cada tubo por inversin. Luego Los valores comienzan luego a disminuir para alcanzar el
de 5 minutos, leer en espectrofotmetro a 530 nm o en nivel promedio del adulto al mes del nacimiento. En los pre-
fotocolormetro con filtro verde (520-550nm), llevando el maturos, los niveles de bilirrubina tardan ms en alcanzar la
aparato a cero con agua destilada. Las lecturas pueden normalidad, dependiendo del grado de inmadurez heptica.
efectuarse entre 4 y 15 minutos, excepto para la bilirru- Bilirrubina en lquido amnitico
bina directa que debe leerse a los 5 minutos exactos. Si Valores menores de 1 mg/l son considerados normales, mientras
se lee antes, habr subvaloracin de los resultados por que entre 1 y 2,7mg/l sugieren la posibilidad de un feto afectado.
reaccin incompleta. Si se lee despus, habr sobreva- Los niveles por encima de 2,7 mg/l slo se encuentran en
loracin porque comienza a reaccionar la bilirrubina libre. presencia de eritroblastosis fetal. Si la cantidad de bilirrubina
Sueros ictricos: debe emplearse la tcnica descripta es superior a 4,7 mg/l el feto ya se encuentra afectado y tiene
pero con menores cantidades de muestra, de acuerdo probablemente algn tipo de falla circulatoria.
a la severidad de la ictericia. De tal forma, en caso de Si la cantidad de bilirrubina sobrepasa los 9,5mg/l la muerte
ictericia moderada se usarn 50 ul de suero mientras fetal es inminente.
que frente a una ictericia intensa se requieren slo 20 ul. Se recomienda que cada laboratorio establezca sus propios
Multiplicar los resultados obtenidos por 3,79 y 9,38 valores de referencia.
respectivamente.
CONVERSION DE UNIDADES
II- TECNICA PARA LIQUIDO AMNIOTICO
Bilirrubina (mg/l) = Bilirrubina (mg/dl) x 10
Se determina bilirrubina total. En dos tubos marcados
Birrubina (umol/l) = Bilirrubina (mg/dl) x 17,1
B (Blanco) y T (Total) colocar:
B T LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO
Ver Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.
Muestra (lquido amnitico) 1 ml 1 ml La accin de la luz, tanto sobre los sueros como sobre las
Agua destilada 1,5 ml - soluciones standard, es capaz de destruir en una hora hasta
el 50% de la bilirrubina presente.

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PERFORMANCE SIMBOLOS
a) Reproducibilidad: procesando replicados de las mismas Los siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de
muestras en un mismo da, se obtuvo lo siguiente: reactivos para diagnstico de Wiener lab.
Bilirrubina directa Este producto cumple con los requerimientos previstos
Nivel
2,1 mg/l
D.S.
0,18 mg/l
C.V.
8,5 %
C por la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanitarios
para el diagnstico "in vitro"

26,0 mg/l 0,62 mg/l 2,4 % P Representante autorizado en la Comunidad Europea


Bilirrubina total
Nivel D.S. C.V.
V Uso diagnstico "in vitro"
9,8 mg/l 0,47 mg/l 4,7 %
127,7 mg/l 1,45 mg/l 1,1 %
X Contenido suficiente para <n> ensayos

b) Linealidad: la reaccin es lineal hasta 150 mg/l. H Fecha de caducidad

c) Recuperacin: agregando cantidades conocidas de


bilirrubina a distintos sueros, se obtuvo una recuperacin l Lmite de temperatura (conservar a)

entre 100 y 106%. No congelar


d) Lmite de deteccin: depende del espectrofotmetro
empleado y de la longitud de onda. De acuerdo con la sen- Riesgo biolgico
sibilidad requerida para un A mnimo de 0,001, el menor
F
cambio de concentracin detectable ser de 0,17 mg/l. Volumen despus de la reconstitucin

Cont. Contenido
PRESENTACION
Equipo para 200 determinaciones (Cd. 1120001).
g Nmero de lote

BIBLIOGRAFIA Elaborado por:


- Botwell, J. H. - Clin. Chem. 10/3:197 (1964).
M
- Watson, D. - Clin. Chem. 7/6:603 (1961). Nocivo
- Ichida, T.; Nobuoka, M. - Clin. Chim. Acta 19/2:249 (1968).
- Zaroda, R. - Am. J. Clin. Path. 45/1:70 (1966). Corrosivo / Custico
- OBrien, D. et al - Laboratory manual of pediatric micro-
biochemical techniques, Harper & Row Pub - 4a Ed. (1968). Irritante
- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",
AACC Press, 4th ed., 2001. Consultar instrucciones de uso
i
Calibr. Calibrador

b Control

b Control Positivo

c Control Negativo

h Nmero de catlogo

M Wiener Laboratorios S.A.I.C.


Riobamba 2944
2000 - Rosario - Argentina

Wiener lab.
http://www.wiener-lab.com.ar
Dir. Tc.: Viviana E. Ctola
Bioqumica
Producto Autorizado A.N.M.A.T.
Disp. N: 252/75-5347/98 2000 Rosario - Argentina
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