ASIGNATURA: GENTICA

DOCENTE: RODRIGUEZ SOTO, JUAN CARLOS

CICLO: III

PRCTICA N: 11

"OBTENCION Y OBSERVACION DE CROMOSOMAS EN Mus

Musculus"

ALUMNO: MUDARRA SARE, Josu

TRUJILLO PER
2017
 INTRODUCCIN

La colchicina (C22H25NO6) ha sido utilizada durante muchos aos como la piedra

angular del tratamiento de la gota, hasta la aparicin de los antiinflamatorios no
esteroideos (AINEs), tiene cierto protagonismo en la teraputica actual como
inmunomodulador y antifibrtico en diversas enfermedades autoinmunes.

En estudios de citogentica la colchicina es utilizada porque es una sustancia capaz

de alterar la divisin celular, tambin es un alcaloide que acta como inhibidor de la
mitosis a nivel de la metafase, ya que impide la formacin del huso acromtico y,
por lo tanto, evita la separacin de las cromtidas hermanas y su migracin a los
polos de la clula. La colchicina se utiliza para el estudio de la mitosis ya que
acumula las clulas en metafase.

Por otra parte el uso de solucin fijadora fra es vital ya que esta se encarga de
mantener los cromosomas en un estado morfolgico estable evitando que se
deformen excesivamente y permita su caracterizacin y reconocimiento.

En el presente trabajo se sigui un protocolo establecido para la correcta extraccin

de los cromosomas mitticos de Mus musculus, los cuales pudieron ser
caracterizados y ubicados en uno de los tipos de cromosomas existentes en la
naturaleza (telocntricos).

Objetivos

- Mostrar a los estudiantes una serie de tcnicas citogenticas sencillas para

la obtencin y observacin de placas metafsicas, determinacin del nmero
cromosmico en ratones.
- Adquirir destrezas y habilidades en el manejo del material biolgico y en el
montaje de las preparaciones cromosmicas.
I. MATERIALES

A) Material biolgico:

- Ratn adulto (Mus musculus)

B) Reactivos:

- Colchicina 0,02%
- Solucin de KCl 0,075 M
- Fijador Carnoys
- Orcena actica

C) Materiales y equipos:

- 01 microscopio
- 01 centrifuga
- Jeringa de tuberculina
- Pipeta Pasteur
- Laminas portaobjetos
- Laminillas
- Tubos de ensayo 13x100
- Tijeras
- Aceite de inmersin

II. PROCEDIMIENTO

1. Inocular al espcimen con colchicina 0.02% (0,1 mL por 10 g de peso),

que haba sido preparado horas antes de realizarse la inoculacin, va
intraperitoneal. Esperar un mnimo de 1 hora antes de realizarse el
procedimiento.
2. Sacrificar al espcimen y disertarlo. Aislar los huesos largos de las
extremidades retirando msculos y tendones.

3. Raspar con tijeras la epfisis de los huesos en una solucin de KCl 0,075
M hasta obtener una suspensin, luego con una pipeta Pasteur, pasar la
suspensin a tubos de ensayo.

4. Incubar a 37 C durante 30 minutos y centrifugar a 1000 rpm durante 10

minutos.

5. Eliminar el sobrenadante y agregar el precipitado 1mL o 2mL de fijador

Carnoys. Dejar actuar durante 15 minutos.

6. Homogenizar lentamente con pipeta Pasteur y centrifugar a 800 rpm.

7. Eliminar el sobrenadante. Repetir el paso anterior dos veces ms

(homogenizado y centrifugado) si fuera necesario.

8. Al ltimo precipitado, agregar 1 mL de Carnoys, homogenizar y gotear la

suspensin celular sobre una lmina portaobjetos desde una altura de 40
a 60 cm.

9. Dejar secar a temperatura ambiente, agregar una gota de orcena actica

sobre la muestra, colocar una laminilla cubreobjetos, dejar colorear de 1
a 2 minutos y observar al microscopio a 100x.

10. Identificar las placas metafsicas y contar los cromosomas en por lo

menos 10 metafases para determinar el nmero cromosmico de la
especie.
III. RESULTADOS
IV. DISCUSION

Mus musculus es una especie con variedad cromosmica, por lo que se ha

descrito ms de 97 poblaciones cromosmicas, con un nmero diploide
comprendido entre 22 y 40 cromosomas, siendo muy comn en Amrica
Latina el nmero de 2n=40 y en Europa y frica, si flucta entre nmeros
diploides menores (lvarez-Romero, 2005).

En el presente trabajo, el nmero cromosmico de Mus musculus fue de

2n=40, las caractersticas observadas en los cromosomas de ratn, fueron
que se trata de cromosomas del tipo telocntricos (por la ausencia del brazo
corto p) aunque en muchas placas metafsicas se pudo generar confusin
porque los brazos q de los cromosomas se abrieron a tal punto de semejaban
ser metacntricos.

La altura desde que se dej caer la muestra (mdula sea de ratn)

determina que los cromosomas estn muy juntos y que adems los brazos q
estn muy separados simulando ser otro tipo de cromosoma.

Se debe tener muy en cuenta que la prdida de cromosomas en muchas de

las placas metafsicas observadas es posible que se d a causa de la tincin
y sus sucesivos enjuagues.

V. CONCLUSIONES.

- Se demostr la tcnica citogentica para la obtencin y observacin de

placas metafsicas, y determinacin del nmero cromosmico en ratones.

- Se adquiri destrezas y habilidades en el manejo del material biolgico y en

el montaje de las preparaciones cromosmicas.
VI. REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS

- EBERHARD PASSARGE. Gentica texto y atlas. Ed. Mdica

Panamericana, 2009. Pg. 190 195.
- BENJAMN A. PIERCE. Gentica: Un enfoque conceptual. Ed. Mdica
Panamericana, 2009. Pg. 534 536.
- LVAREZ-ROMERO, J. Y R. A. Mus musculus. Vertebrados
superiores exticos en Mxico. Medelln. 2005.
 ANEXOS

Fig. N 1: Sacrificio del espcimen Mus musculus

Fig. N 2: Raspado con tijeras la epfisis de los huesos KCl 0,075 M

Figura N 3: agregado de 1mL o 2mL de fijador Carnoys

 Figura N 4: Suspensin celular sobre una lmina portaobjetos desde
una altura de 40 a 60 cm.

Fig. N 5 y 6: Coloracin con orceinta actica y observacin de placas metafasicas.