Fluorescencia.

La fluorescencia es un fenmeno de emisin en el cual ciertas molculas pueden excitarse por la

absorcin de radiacin electromagntica y al relajarse a su estado basal liberan el exceso de
energa en forma de fotones con una longitud de onda ms grande. Este proceso es casi
inmediato, la radiacin es absorbida y emitida en millonsimas de segundo, diferencindose de la
fosforescencia donde la emisin ocurre despus de un cierto lapso de tiempo.

Los electrones se encuentran en distintos niveles de energa y cada nivel tiene una energa
determinada. Cuando una REM incide sobre una molcula, los electrones que se encuentran en
niveles de baja energa pasan a un orbital de mayor energa, generando lo que se conoce como
estado excitado. Este estado es inestable, provocando que la molcula regrese a su estado basal.
La molcula puede perder la energa absorbida por medios no radiantes (vibracin o colisiones) o
por medios radiantes (emisin de fotones). La molcula vibrara utilizando parte de la energa
mientras que el resto lo emitir como un fotn, el cual tendr una energa menor que la radiacin
absorbida (longitud de onda mayor).

La capacidad de fluorescencia de una sustancia est dada por la cantidad de dobles enlaces
conjugados que posea. Los electrones deslocalizados pueden absorber radiacin, excitarse y
retornar a su posicin original, liberando parte de esta energa como fotones. La mayora de los
compuestos que contienen anillos aromticos proporcionan emisin fluorescente. Los anillos
heterocclicos ms sencillos (piridina, furano, pirrol, etc) no la presentan pero las estructuras de
anillos fusionados con ms de dos anillos (quinolina, isoquinolina, indol) lo hacen con frecuencia.

El instrumento con el cual se mide la fluorescencia se llama fluormetro. Este consta de una fuente
de radiacin, seleccionadores de longitud de onda, detector y sistema de lectura. La fuente emite
radiacin con la intensidad suficiente para excitar la muestra, un seleccionador separa la longitud
de onda deseada y la conduce a la muestra, cuando la muestra es excitada emitir radiacin en
todas las direcciones del espacio, la luz emitida es recogida por un segundo seleccionador y
conducida a un detector donde queda registrada por el sistema de lectura.