PRE INFORME DE PRACTICAS DE LABORATORIO

Presentado por:

ADRIANA ESPERANZA TRUJILLO MARTINEZ

CODIGO: 37551212

Tutor virtual:

GOLDA MEYER TORRES VARGAS

UNIVERSIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA (UNAD)

16 de marzo de 2013
2. DESARROLLO DE LAS PRCTICAS

No. 1: METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE

AMINOACIDOS Y PROTEINAS
OBJETIVOS

Que el estudiante reconozca los aminocidos como unidades estructurales

de las protenas.

Que el estudiante analice, mediante reacciones cualitativas coloreadas la

presencia de aminocidos y enlaces peptdicos en las muestras.
Que el estudiante establezca la relacin entre la estructura y la funcin de las
protenas y prdida de esta al variar su PH y solubilidad (precipitacin y
desnaturalizacin).

1. Captulo 1 y 2 de la unidad 1: Biomolculas del mdulo del curso,

enfatizando en:
a. Clasificacin de aminocidos:
Definicin. Los aminocidos son las unidades fundamentales de las protenas; la
funcin biolgica de una protena depende de su composicin y conformacin de
tales unidades.
Consta de un grupo amino, un grupo carboxilo, un tomo de hidrogeno y un grupo
distinto R. En el organismo tambin se les encuentra en forma individual
participando en el metabolismo, por ejemplo a pH fisiolgico (7.4), el triptfano
est implicado en el crecimiento y en la produccin hormonal. Si por alguna razn,
es modificado el pH de 7.4 a 5.9, este aminocido llegar a estar en la forma de
in Zwitterion, en este estado, el balance de cargas elctricas es igual a cero.

Aminocidos no polares o hidrofobicos: En estos aminocidos la

cadena lateral, aliftica o aromtica, no tiene grupos que interacten
fcilmente con solventes acuosos y de ah el nombre de hidrofobicos.
A este grupo pertenecen: La alanina (Ala), Vallina (Val), Leucina (Leu), Isoleucina
(Ile) , prolina (Pro), fenilamina (Phe), triptfano (Trp), metionina (Met).

Aminocidos polares no cargados: A diferencia de los anteriores, estos

AA se solubilizan con mayor facilidad en solventes acuosos y su grupo R no
posee cagas positivas o negativas a PH fisiolgico, es decir, PH cercanos a
6,5 y 7,0.
A este grupo pertenecen: Glicina (Gli), Serina (Ser), Treonina (Thr), cistena
(CySH), cistina (CySSCy), tirosina (Tyr), Asparagina (Asn), glutamina (Gln),
hidroxi-prolina (OH-Pro).

Aminocidos cidos: Se caracterizan porque su grupo R-(COOH) est

 cargado negativamente a PH fisiolgico. Los AA con su respectivo pk a son:
Asprtico (Asp), glutmico (Glu).
En consecuencia pierden su carga nicamente a PH bastante cido y en su forma
libre o como constituyentes de las protenas estn cargados negativamente.

Aminocidos bsicos: En ellos, el grupo R (generalmente -NH) est

cargado positivamente a PH fisiolgico.
A este grupo pertenecen: Histidina (His), Lisina (Lys), Arginina (Arg).
b. Enlace peptdico: Es un enlace covalente entre el grupo amino (NH2) de un
aminocido y el grupo carboxilo (COOH) de otro aminocido. Los pptidos y las
protenas estn formados por la unin de aminocidos mediante enlaces
peptdicos. El enlace peptdico implica la prdida de una molcula de agua y la
formacin de un enlace covalente CO-NH. Es, en realidad, un enlace amida
sustituido.
c. Niveles de estructuracin: Se considera que cuando un pptido sobrepasa los
40-50 AA tenemos una cadena polipeptdica que llamamos protena. Estos
polmeros poseen un considerable grado de complejidad que se expresa en todas
las protenas en por lo menos tres niveles de estructura y en algunas hasta cuatro.

Estructura primaria: Esta definida por la composicin en AA y su

secuencia en la protena. La determinacin de la composicin de una
protenas se logra sometiendo la protena a una hidrlisis drstica con
cidos o bases (generalmente HCL 6N y Ba(OH)2 4N) y analizando
cuantitativamente la mezcla AA libres que resultan.
La primera protena a la que se le determino su estructura primaria fue la Insulina.

Estructura secundaria: Es el ordenamiento espacial de las cadenas

polipeptdicas resultante de interacciones por puentes de hidrogeno
formados nicamente entre los tomos que intervienen en el enlace
peptdico.
En las protenas fibrosas que tienen un papel estructural, este problema se
resuelve mediante la adopcin de uno de los siguientes tipos de estructura:

Grupo I: Estructura de la hoja plegada, se caracteriza por tener una unidad

de repeticin de 6.5 a 7.0 , con formacin de puentes de hidrogeno
intermoleculares entre al menos dos cadenas o segmentos de cadenas que
pueden ser paralelas (van al mismo sentido) o anti paralelas (van en
sentido opuesto). La protena ms importante de este grupo es la Fibroina
de la seda, constituida bsicamente por Gly 45%, Ala 26% y Ser 12% con
una secuencia repetitiva.

Grupo II: Estructura en -hlice, posee una unidad de repeticin de 5.1 a

5.4 , y los puentes de hidrogeno son exclusivamente intramoleculares, el
 ordenamiento espacial de las cadenas polipeptdicas resultante de las
interacciones por puentes de hidrogeno formados nicamente entre los
tomos de hidrogeno del nitrgeno y el oxgeno del carbono carbonlico que
conforman el enlace peptdico. A este grupo pertenece la -queratina, que
es el constituyente ms importante de fibras como el cabello y lana y de
tejidos de proteccin como la piel, plumas, cuernos, uas, etc.

Grupo III: Estructura de triple hlice, posee una unidad de repeticin de 2.8
, y los puentes de hidrogeno se forman entre tres cadenas polipeptdicas
que se enrollan entre s, de manera helicoidal. El mejor ejemplo es el
colgeno, protena que constituye un 30% de las protenas del cuerpo
humano y est presente en tejido conjuntivo, piel, huesos, tendones.

Estructura terciaria: Consiste en la distribucin espacial de todos los

grupos de la protena, es decir, su conformacin tridimensional.

Puentes de hidrogeno intramoleculares o intermoleculares, cuando la

protena tiene ms de una cadena polipeptdica, que se forman entre
cadenas laterales, o entre cadenas laterales y atamos del enlace peptdico.

Enlaces salinos o ionices que resultan de la atraccin electrosttica entre

grupos R con cargas opuestas

Uniones hidrofobicas provenientes de las interacciones entre cadenas

laterales de AA no polares, que tienden a asociarse entre s excluyendo el
agua.

Enlaces covalentes entre grupos R de CySH (enlaces disulfuro), Lys y Glu o

Asp (enlace amida).
Caractersticas estructurales comunes:

La protena es una molcula compacta cuya forma se asemeja en muchos

casos a una esfera con cavidades protuberancias.

Los aminocidos polares y los cargados estn generalmente situados en el

exterior, en ntimo contacto con el medio acuoso circundante.

Los aminocidos hidrofobicos se ubican preferencialmente en regiones

internas donde se encuentran pocas molculas de agua iones.

Los segmentos de -hlice que se presentan estn interrumpidos por Pro o

por OH-Pro.

En una protena dada proveniente de diferentes especies, la conformacin

es similar.

Estructura cuaternaria: Esta dada por la asociacin reversible de varias

cadenas polipeptdicas (monmeros) iguales o diferentes. Este tipo de
estructura solo la poseen algunas protenas. Un buen ejemplo de este tipo
 de protenas es la hemoglobina (Hb) que se encuentra presente en los
glbulos rojos y tiene como funcin el transporte de oxgeno a los tejidos.
d.Solubilidad de protenas: desnaturalizacin por calor y PH extremos.
Precipitacin por metales pesados, precipitacin acidica.

Desnaturalizacin por calor: es un cambio estructural de las protenas o

cidos nucleicos, donde pierden su estructura nativa, y de esta forma su
ptimo funcionamiento y a veces tambin cambian sus propiedades fsico-
qumicas.

PH extremos: Los iones H+ y OH- del agua provocan efectos parecidos,

pero adems de afectar a la envoltura acuosa de las protenas tambin
afectan a las cargas elctricas de los grupos cidosy bsicas de las
cadenas laterales de los aminocidos. Esta alteracin de la carga
superficial de las protenas elimina las interacciones electrostticas que
estabilizan la estructura terciaria y a menudo provoca su precipitacin. La
solubilidad de una protena es mnima en su punto isoelctrico, ya que su
carga neta es cero y desaparece cualquier fuerza de repulsin
electrosttica que pudiera dificultar la formacin de agregados.

Precipitaciones por metales pesados: Los metales pesados tienen el

efecto de precipitar protenas de sus soluciones creando enlaces (cross-
linkings) entre los grupos amino libres y los grupos carboxilo libres.
2. Pruebas cualitativas: enfatizar en las reacciones qumicas que tienen lugar
y el principio del mtodo:

Reaccin de la ninhidrina: La ninhidrina es un qumico que reacciona con

los aminocidos hallados en la transpiracin y forma un producto azul-
violeta que es conocido como prpura de Ruhemann. Es un polvo que
necesita ser disuelto en un solvente y luego puede aplicarse sobre el papel.
La coloracin producida por la ninhidrina es independiente de la coloracin
original del aminocido. Esta prueba es positiva tanto para protenas como
para aminocidos. en aquellos casos donde no da positiva la prueba de
biuret y da positiva la de ninhidrina, indica que no hay protenas, pero si hay
aminocidos libres.

Reaccin Xantoproteica: es un mtodo que se puede utilizar para

determinar la cantidad de protena soluble en una solucin, empleando
cido ntrico concentrado. La prueba da resultado positivo en aquellas
protenas con aminocidos portadores de grupos aromticos,
especialmente en presencia de tirosina. Si una vez realizada la prueba se
neutraliza con un lcali, se torna color amarillo oscuro
Segn las guas qumicas es una reaccin cualitativa, ms no cuantitativa. Por
ende determina la presencia o no de protenas. Para cuantificar se usa otra
reaccin, como la de Biuret, y se hace un anlisis espectro fotomtrico.
 Reaccin de milln: Se prepara disolviendo una parte de mercurio (Hg) en
una parte de cido ntrico (HNO3). De esta forma, la presencia de
cantidades relativamente altas de mercurio conduce a la formacin de
Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en medio fuertemente cido
reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloracin roja
caracterstica. Al finalizar la reaccin, durante la cual se desprende gran
cantidad de xidos de nitrgeno, el reactivo se puede diluir con dos veces
su volumen en agua y deber ser decantada algunas horas despus la
solucin clara sobrenadante. Se deben tomar precauciones para la correcta
eliminacin de los residuos de mercurio.

Prueba de Pauly: Una reaccin colorimtrica para la identificacin de

compuestos imidazol que implica una reaccin con
diazobenzenesulphonate

Prueba de Nitroprusiato: es el compuesto inorgnico con

la frmula Na 2 [Fe (CN) 5 NO] 2H 2 O. Esta sal de color rojo, que es a
menudo abreviado SNP, es un potente vasodilatador. La sal de sodio se
disuelve en agua y en menor medida en etanol para dar soluciones que
contengan el di amonio Fe (CN) NO.

Reaccin de Sakaguchi: guanidinas en una solucin alcalina de

desarrollar un color rojo intenso cuando son tratados con -naftol y el
hipoclorito de sodio, una prueba cualitativa de forma gratuita arginina, o en
una protena. es aquel que detecta la presencia de protenas, pptidos
cortos y otros compuestos con dos o ms enlaces peptdicos en sustancias
de composicin desconocida.

Prueba de biuret: Est hecho de hidrxido potsico (KOH) y sulfato cprico

(CuSO4), junto con tartrato de sodio y potasio (KNaC4O64H2O). El reactivo,
de color azul, cambia a violeta en presencia de protenas, y vira a rosa
cuando se combina con polipptidos de cadena corta. El Hidrxido de
Potasio no participa en la reaccin, pero proporciona el medio alcalino
necesario para que tenga lugar. Se usa normalmente en el ensayo de
Biuret, un mtodo colorimtrico que permite determinar la concentracin de
protenas de una muestra mediante espectroscopio ultravioleta-visible a una
longitud de onda de 540 nm (para detectar el ion Cu2+).
MATERIALES Y/O REACTIVOS
Material de vidrio

Tubos de ensayo

Gradillas

Esptulas

Pipetas 1,5 y 10 ml
 Mallas de asbesto

Papel filtro

Embudos

Agitador de vidrio

Erlenmeyer 100 y250 ml

Vasos de precipitado 250 y 500 ml

Probeta 100ml

Pinzas para tubos en madera

Vidrios reloj grandes

Mortero con mango

Soporte para embudos

Pinzas para tubos de ensayo metlicas

Vasos de precipitado de 1000 y 600 ml plstico.

Material biolgico y otros

Alimento de origen vegetal o animal: concentrados, protena crnica,

hgado, huevo, etc.

Tapabocas

Libros de bioqumica

Marcador de vidrio

Cinta para rotular

Cuaderno de laboratorio

Bata blanca
Reactivos

Reactivo del milln

Agua destilada, solucin de CuSO4 1%

Solucin de NaOH 30% y 40%, solucin saturada de NaCl

HNO3 concentrado, cristales de sacarosa

 HCl concentrado, cido tricloracetico 10%

Solucin cidopcrico saturada, etanol 95%

Solucin de (NH4SO4) al 50%, acetona

Solucin de acetato de plomo 0.5%

Reactivo de Sakaguchi, cido actico glacial

HSO4 concentrado, cido actico al 30%

Aminocidos: glicina, tirosina, triptfano, aminocidos, azufrados, leucina.

Ninhidrina (2g/l) preprese en fresco, hidrxido de amonio

cido sulfanilico (10g/l en solucin de HCl 1 mol/l)

Nitrito de sodio, carbonato de sodio.

Acetato de plomo, nitrato de mercurio

Nitro prusiano de sodio (20 g/l), preprese fresco

Alfa-Naftol, agua de bromo

cido fosfrico, Molibdato de sodio

Tungsteno de sodio, sulfato de cobre, nitrato de sodio

Equipos

Estufas (5)

PH metro (1)

Centrifuga

Balanza analtica

Termmetro 120C

Mecheros

Espectrofotmetro
Seguridad Industrial
Sulfato de cobre: No combustible en caso de incendio se desprende humo o
gases txicos e irritantes. Produce tos, dolor de garganta, enrojecimiento, dolor
abdominal, sensacin de quemazn, nauseas, diarrea, shock o colapsos, vomito.
Hidrxido de sodio: No combustible, el contacto con la humedad o el agua puede
generar suficiente calor puede producir el inicio de sustancias combustibles.
cido Ntrico: No combustible, pero facilita la combustin de otras sustancias. En
caso de incendio se desprende humos o gases txicos e irritantes.
Acetato de Plomo: Tos, enrojecimiento, dolor de garganta
cido clorhdrico: Corrosivo, sensacin de quemazn, tos, dificultad respiratoria,
jadeo, dolor de garganta.
Etanol: Altamente inflamable, las mezclas vapor / aire son explosivas.
Acetona: Altamente inflamable, las mezclas vapor/aire son explosivas
cido sulfrico: No combustible, muchas reacciones pueden producir incendio o
explosin, desprende humos.
cido actico: Inflamable, el calentamiento intenso puede producir aumento de la
presin con riesgo de estallido.
Hidrxido de amoniaco: No combustible, sensacin de quemazn, tos, dificultad
respiratoria,, jadeo, dolor de garganta.
cido sulfanilico: Combustible, labios o uas azulados, piel azuladas, tos,
vrtigo, dolor de cabeza, dificultad respiratoria, dolor de garganta.
Nitrato de sodio: Peligro de fuego en contacto con otros combustibles, toxico por
ingestin, muy toxico para los organismos acuticos.
Nitrato de mercurio: Por inhalacin causa irritacin en las vas respiratorias,
causa dolor de garganta, tos, dificultad para respirar, en contacto con la piel puede
producir irritacin.
cido fosfrico: Es muy corrosivo y puede producir quemaduras
PROCEDIMIENTO DE LA PRACTICA
PRUEBAS CUALITATIVAS

Obtencin de extractos

Caso de alimentos, coloque Alimentos concentrados o slidos, muela o

30gr. en vaso precipitado, macere, recoja en vaso precipitado,
agregue 100ml
Solucin de huevo,
clara de aguahaga un orificio en un
agregue 100
extremo delmlhuevo,
de agua destilada, agite 10
vierta
destilada, agite 10 minutos, filtre, minutos y filtre,
la clara en un vaso precipitado, dejando dentro la yema, agregue a la recoja en vasos
conserve el liquido precipitados marcados,
clara 100 ml de agua destilada y agite con el fin de disolverla. deseche residuo.

MARCHA DE LA PRACTICA
 1. Extracto PRUEBA DE BIURET 2. NaOH al 30%,
problema
2ml.
2ml.

3. Mezclar y aadir gota a gota sulfato cprico al 1%, agitado despus de cada
adicin, hasta aparecer color violeta, azul o amarillo. El color violeta indica la reaccin
positiva.

REACTIVO DE MILLON
REACTIVO DEL MILLON

Extracto problema 2ml. Reactivo del milln 0.5 ml.

REACTIVO XANTOPROTEICO

1. Extracto REACCION 2. HNO3
problema XANTOPROTEICA concentrado
2 ml. (observar) 1 ml.

3. Mezclar, calentar al bao mara y observar, adicionar

solucin de NaOH al 40% lentamente sin agitar y observar.

PRUEBA DE LIEBERMAN

1. Extracto PRUEBA DE 2. Cristales de

problema LIEBERMAN sacarosa una pizca
2 ml.

3. HCl concentrado 5ml.

4. Calentar a ebullicin por 5 a 7 minutos.

GRUPA SH

1. Extracto GRUPOS SH 2. Hidrxido de sodio

problema al 40% (NaOH), 1 ml.
2ml.
 3. Acetato de plomo al 0.5%, 1 ml.

Mezclar bien, calentar en llama por 4 min.

Mezclando continuamente y observar.

REACCCION DE SAKAGUCHI

1. Extract REACCION DE 2. Reactivo

o SAKAGUCHI Sakaguchi 0.5 ml.
proble
ma 2
ml.
3. Mezclar bien y observar.

REACCION DEL ACIDO GLIOXILICO

1. Extracto REACCION DEL ACIDO 2. cido
problema GLIOXILICO actico
2 ml.
glacial 2 ml.

3. HSO4 concentrado, dejar caer lentamente por las paredes del tubo inclinado, hasta que
forme dos capas, observe el cambio de color en la Interface, si se forma un anillo violeta
en la Interface de los dos lquidos, la reaccin se considera positiva.

REACCION DE NINHIDRINA

REACCION DE LA NINHIDRINA

Extracto problema, ajustar pH a 7.0, 1 ml. Solucin de ninhidrina, hervir a bao mara por 2
min. Observar coloracin.

PRUEBA DE PAULY

1. cido PRUEBA DE PAULY 2. Extracto

sulfanili problema 2 ml.
co 1 ml.
 3. Enfriar en hielo

4. Agregar solucin NaNO2 y enfriar por 3 min.

5. Adicionar Na2CO3, anotar colores formados

PRUEBA DE NITRIPRUSIATO

1. Solucin 2. Mezclar con el

de PRUEBA DE extracto
Nitroprusi NITROPRUSIANO
ato de problema 2 ml.
sodio 0.5
ml.
3. Adicionar Hidrxido de
amonio, reposar por 5 minutos.
0.5 ml.

PRECIPITACION DE PROTEINAS

PRECIPITACION ACIDICA

Extracto problema 2 ml. cido actico al 30%,

Extracto problema 2 Extracto
0.5 ml. Agite, observe formacin precipitado
ml. problema 2ml.
(enturbiamiento). Solucin saturada de cloruro
Acido pcrico de sodio (NaCl). Mezclar y calentar por 1 cido
saturado 1 ml. minuto. Presenta enturbiamiento +o- intenso, tricloroacetico al
se observa grumos en las paredes. Observe el 10% , 2ml.
Agite y observe tubo en fondo oscuro
formacin Agite y observe
precipitado formacin
(enturbiamiento) precipitado
(enturbiamiento)
SOLVENTES ORGANICOS

SOLVENTES ORGANICOS

Extracto problema 2 ml.

Extracto problema 2ml.
Etanol al 95% 2 ml.
Acetona 2 ml.
Observe formacin del
Observe formacin de precipitado
precipitado
(enturbiamiento)
(enturbiamiento)

SULFATO DE AMONIO

1. Extracto problema SULFATO DE 2. Solucin de sulfato de

2 ml. AMONIO amonio al 50%, 2 ml.

3. Mezclar, dejar en reposo 10 min. Observe si forma precipitado.

Centrifugar a 3000 r.p.m. por 10 min., observar. La reaccin positiva
se manifiesta por formar precipitado, dependiendo de la
concentracin de albumina presente en la muestra.

DESNATURALIZACION POR CALOR

DESNATURALIZACION POR CALOR

1. Extracto problema 2 ml.

2. Caliente agua durante 10 min. Asegurndose que la

temperatura interna llegue a 95 - 100 CC. Observe formacin
de precipitado (enturbiamiento).

METALES PESADOS

1. Extracto METALES PESADOS 2. Gotas del metal,

problema 2ml.
5 gotas
 Calentar suavemente a bao
mara si no observa reaccin
inmediata.

.PRACTICA 2
FRACCIONAMIENTO DE PROTENAS EN SENMILLAS DE LEGUMINOSAS Y
CEREALES POR SULUBILIDAD

OBJETIVO

Que el estudiante compruebe la teora con la prctica en relacin al

comportamiento segn la solubilidad de protenas.

Que el estudiante obtenga las fracciones de albmina, globulinas,

prolaminas y glutelinas a partir de tejidos biolgicos.

Que el estudiante calcule mediante espectrofotometra, la concentracin de

protenas en cada una de las fracciones anteriores.

FUNDAMENTOS TEORICOS
Las protenas: Las protenas pueden formar soluciones estables debido a las
cargas de hidratacin de las molculas de protena y a las cargas elctricas que
ellas poseen.
La solubilidad de las protenas es la resultante de dos fuerzas que se oponen, la
atraccin de molculas de solvente por las molculas de protenas promueve su
mantencin en solucin, en cambio la traccin de molculas de protenas entre s
tiende a evitar su disolucin, es decir las protenas tienden a ser solubles cuando
tienen una carga neta (a valores de pH por encima o por debajo de sus puntos
isoelctricos. En cambio s se mezclan macromolculas cargadas positiva y
negativamente, la atraccin electrosttica hace que tiendan a asociarse unas con
otras.
El estudio de los factores que afectan la solubilidad de las protenas, ha permitido
idear gran cantidad de mtodos para precipitar estas sustancias de sus
soluciones. Estos mtodos tienen su principal aplicacin en la desproteinizacin
de los diversos fluidos biolgicos (sangre, orina, lquido cefalorraqudeo, etc.) en
los cuales se hace necesaria su interferencia en la determinacin de otras
sustancias presentes en estos medios.
Clasificacin de Osborne de las protenas, por el criterio de solubilidad
La clasificacin comnmente usada no se basa en aspectos estructurales de stas
sino
Principalmente en su solubilidad frente a diferentes solventes.
Desafortunadamente entre los grupos clasificados no existe un lmite fijo, pero de
todas maneras permite el fraccionamiento de las protenas provenientes de una
misma fuente. Segn Osborne, las protenas vegetales pueden clasificarse segn
su solubilidad en: albminas, globulinas y glutelinas. Las albminas corresponden
al grupo de protenas que son solubles en agua destilada y en soluciones salinas
diluidas.
Las globulinas son insolubles (globulinas) o muy ligeramente solubles en agua
destilada pero son solubles en soluciones salinas diluidas. Con base en las
propiedades de solubilidad no es posible distinguir entre albminas y
seudoglobulina.
Si se aplican los conceptos de precipitacin por salado, se observa que las
globulinas precipitan en soluciones de sulfato de amonio del 50% de saturacin,
mientras que las albminas lo hacen a concentraciones mayores del 75% de
saturacin. Estas precipitaciones son mejores si se hacen a pH cercanos a sus
puntos isoelctricos.
Las prolaminas son insolubles en agua pero se disuelven en soluciones acuosas
de alcoholes de bajo peso molecular, en concentraciones entre el 50 y el 90%.
Las glutelinas son insolubles en los solventes anteriores pero se solubilizan en
soluciones diluidas de cido o base.

MATERIALES Y/O REACTIVOS

Vaso de precipitado de 50 ml

Mortero con mango

Esptula

Vidrio de reloj

Vaso de precipitado de 600 , 250, 500 ml

Vaso de precipitado de plstico de 1000 , 600 ml

Agitador de vidrio

Pipeta de Pasteur
 Probeta de 100 ml

Embudo y soporte

Erlenmeyer de 250 y 50 ml

Tubo de ensayo

Gradillas

Pipetas de 1 , 5, 10 ml

Pinzas para tubo de ensayo

Harinas de diferentes cereales y leguminosas

Reactivos de folin

Sulfato de cobre

Tartrato sdico de potasio

Carbonato de sodio

Hidrxido de sodio

Cloruro de sodio

etanol

reactivo de biuret
 PROCEDIMIENTO

PRACTICA DOS

Mtodo de Biuret:

Sobre cada uno de los extractos que

Pasar 2 gramos de la muestra en
un tubo de ensayo agregar 1 ml de
agua agitar manualmente durante
10 minutos vaciar la solucin en
un baln aforado de 250 ml
agregar de nuevo 10 ml de agua y
repetir el proceso.
Despus de repetir el proceso
verter en el mismo baln aforado
y completar la solucin con agua.
contienen las diferentes fracciones cada
grupo procedera la determinacin de
protenas, aplicando el mtodo de Biuret.
La curva de calibracin se har utilizando
como patrn una solucin de albmina de
huevo de
Concentracin conocida.
Para las muestras de soya, arveja y frjol,
de las fracciones de albminas y
glutelinas deber
Tomarse para cada una y por aparte, una
alcuota de 0,5 ml y llevarse a un volumen
de 5 ml (dilucin n 1 a 10) con agua
desmineralizada para las albminas y con
NaOH 0,1 N para las
Glutelinas. Estas diluciones se usarn
como extractos problemas para dichas
Volver a realizar el proceso pero
fracciones.
agregndole
En 15 tubos de ensayocloruro de sodio
rotulados y llevarlo a
pipetear
uncantidades
en c/u las baln de reactivos

Para hallar la
Mtodo de Folin- lowry:
concentracin del
patrn en mg/ml,
Preparacin de los reactivos:
1. Solucin alcalina de carbonato de debe realizar el
sodio (Na2CO3 20 g/l en NaOH 0.1 respectivo
mol/l).Se debe preparar primero el anlisis de la
NaOH al 0.1 M y luego el carbonato se Concentracin de
debe disolver en este, preparar 200 la solucin
ml. patrn: 0.25
mg/ml y el
2. Solucin de sulfato de cobre volumen que se
tartrato-sdico potsico: Preparar una toma de la
solucin de sulfato decobre SO4Cu solucin
en tartrato sdico potsico 10 g/l) Patrn.
preparar de esta solucin 300 ml.
5. Con los
3. El da de la prctica se debe valores de
PRACTICA NO. 3: ENSAYOS ENZIMTICOS CUALITATIVOS

Objetivos

Que el estudiante entienda el papel de las enzimas como catalizadores de

los diferentes procesos bioqumicos y su importancia en los diferentes
procesos metablicos.

Que el estudiante analice mediante reacciones cualitativas la actividad

enzimtica de la sacarosa y alfa-amilasa.

Que el estudiante establezca relaciones entre la estructura y la funcin de

las enzimas y prdida de esta al variar al variar su temperatura ptima de
trabajo.
El estudiante como parte de su autogestin en el desarrollo de su aprendizaje
autnomo, se servir investigar antes de la prctica y a manera de pre informe los
siguientes temas, enfatizando en la reacciones qumicas que tienen lugar y el
principio del mtodo:
Solubilidad y precipitacin de las protenas.

La solubilidad de una protena est influenciada por los siguientes factores: (a) su
composicin en aminocidos (una protena rica en aminocidos polares es en
general ms soluble que una rica en aminocidos hidrofbicos); (b) su estructura
tridimensional (las protenas fibrosas son en general menos solubles que las
globulares); (c) el entorno de la propia protena.

MATERIALES Y/O REACTIVOS

Material de vidrio

Vaso precipitado de 50 ml

Mortero con mango

Esptula

Vidrio reloj

Vaso precipitado de 600ml, 250 ml, 500 ml,

Vaso de precipitado plstico de 1000 ml, 600 ml

Agitador de vidrio
 Pipeta Pasteur

Probeta de 100 ml.

Embudos y soporte

Erlenmeyer 250 ml, 50 ml,

Tubos de ensayos

Gradillas

Pipetas 1, 5, 10 ml.

Pinzas para tubos de ensayo

Pinzas de madera para tubos de ensayo

Material biolgico

Levadura granulada comercial (no sirve pulverizada)

Solucin saliva
Reactivos

Acetona 300 ml

Agua destilada

Solucin de sacarosa al 5%, 100 ml.

Reactivo de Fehling

Hielo

100 ml. TCA al 10%

200 ml Solucin de almidn 2%

100 ml de KCL al 1.0%

100 ml de solucin de lugol

50 ml solucin acido tartrico al 1%

50 ml de solucin de NaOH al 0.1 N

50 ml de solucin de NaOH al 0.5 N

 50 ml de cido clorhdrico al 10%

100 ml de solucin glucosa al 5%

Reactivo de selliwanoff

150 ml de cido tartrico al 1%

150 ml de NaOH 0.1 M

Solucin de HCl al 5% solucin de NaOH al 5%

Hielo y agua caliente

Equipos

Estufa a 38C

Balanzas (5)

Estufas (4)

Mallas (4)

Termmetros (4)

Bao termosttico a 38C previamente

Papel filtro (5 para cada grupo)

PH metro (2)
 PROCEDIMIENTO
Experimento No. 1
SACAROSA

LA SACARASA Extraccin de la enzima

Tome 17 gr de levadura granulada en Vierta el filtrado en vaso precipitado y agregue 50

un mortero y tritrela, reducida a
polvo, psela a un vaso precipitado
con 100 ml de agua destilada y agite
10 min. Filtre en papel filtro en
embudo.
ml de acetona, mezcle y djela 10 min. Decante
parte del lquido cuidando de no perder el
precipitado esta enzima su crasa, coloque en
hielo para evitar desnaturalizacin, marque como
solucin de enzima.

ACTIVIDADD ENZIMATICA

ACTIVIDAD
1. Solucin ENZIMATICA
de 2. Agua
enzima 3 Enzima hervida destilada 3 ml
ml

3. Disuelva el precipitado y lleve a ebullicin a

95C por 10 min a bao mara

4. Deje enfriar, adicionar sacarosa

en solucin fresca 2 ml.

5. Colocar el tubo a 38C durante 30 min. Realizar

prueba de Fehling
PRUEBA DE FILHLING

1. En un tubo PRUEBA DE FEHLING

2. En un tubo
colocar solucin
colocar solucin B
de A. Fehling 1ml
de Fehling 1ml

3. Agua destilada 3ml

4. Solucin enzima
hervida

5. Colocar el tubo en una solucin de agua

hirviendo por 5 a 10 min. Observar

SELIWANOFF

1. Enzima SELIWANOFF 2. Reactivo de

hervida 5ml. selliwanoff 5 ml.

3. Caliente a bao mara Y Observar

ACTIVIDAD ENZIMATICA

ACTIVIDAD ENZIMATICA 2. Agua

1. Solucin de
enzima 3ml. destilada
Enzima cruda
3ml

3. Adicionar sacarosa.

4. Realizar prueba de Fehling

5. Colocar en tubo a 38C durante 30 min.

PRUEBA DE FEHLING

1. En un tubo
coloque solucin
A de Fehling 1ml
2. En un tubo
PRUEBA DE FEHLING
coloque solucin
B de Fehling 1ml

3. Agua
destilada 3 ml

4. Repita la prueba de Fehling usando solucin de

enzima cruda glucosa al 5%. Observar

5. Solucin enzima hervida 3ml, coloque el tubo en solucin

de agua hirviendo por 5-10 min. Observar

SELIWANOF
2. Reactivo de
1. Enzima SELIWANOFF selliwanoff 1ml.
cruda 3ml caliente a bao
mara, observe

3. Repetir procedimiento pero

colocar fructuosa al 5%

4. Observar los dos tubos si hay formacin color rojo indicativo

cetosas, fructosa proviene de la hidrlisis de la sacarosa
 2. Experimento No. 2:
-amilasa

- amilasa
Obtencin de la enzima

1. Recolectar muestra de saliva para 2. Adicione a la saliva 10 ml de agua

obtener solucin de enzima, enjuague con destilada y mezcle, filtre y rotule el
agua de bolsa y proceda a recoger en un Erlenmeyer como Solucin de Enzima -
beaker de 50 ml aprox. 10 ml de saliva amilasa, incube a 37 - 38C.

Experimento No. 3:
Degradacin enzimtica de polisacridos

1. Colocar 30 ml solucin almidn, 2

gotas saliva en tres tubos de ensayo,
marcados, A, B, C.
Determinar el pH en cada tubo, utilice pH
metro.
Agregue al tubo A 1.0ml de HCl al 5%, al
B 1.0ml de NaOH 5%, C 1.0ml de agua
2. Retirar los tubos de ensayo del bao
mara, aadir 5 gotas de lugol a cada uno,
registrar cambios.
En otros tres tubos de ensayo marcados
D, E,F, adicione 3ml de lugol y 2 gotas de
saliva.

Prepara bao mara a 37C, colocar los Durante 10 min colocar tubo D en hielo,
tres tubos de ensayo durante 10 min. tubo E bao mara 37C, tubo F agua
hirviendo. Retirar y agregar 5 gotas de
lugol a cada uno. Registrar cambios.

PRACTICA 4
ESTUDIO CINETICO DE LA UREASA
OBJETIVO

Que el estudiante entienda el papel de las enzimas como catalizadores de

los diferentes procesos bioqumicos y su importancia en los diferentes
procesos metablicos.

Que el estudiante evale la capacidad enzimtica de la ureasa frente a

cambios de pH, concentracin de enzima y temperatura
MATERIALES Y/O REACTIVO

100 gr de habas verdes

100 gr de frijol verde

100 gr de habichuela verde

100 gr de frijol de soya

Hoja de papel milimetrado, regla, borrador y lpiz

Buffer de fosfato

Solucin de urea al 0.05 M

Solucin de cloruro de mercurio al 1%

Indicador de tashiro

Solucin de cido clorhdrico al 0.1 N

Solucin de cloruro de sodio al 1%

Solucin de fenol

Hidrxido de sodio

Vidrio de reloj

Vaso de precipitado

Baln aforado

Agitador de vidrio

Tubo de ensayo

Pipeta probeta

Bureta

Pinzas

Soporte
 PROCEDIMIENTO

Para la Transferir la
extraccin de sobrenadara a un Para el mtodo 1 se
ureasa pesar 5 baln aforado; lo que preparan 5 tubos de
gr de la muestra quedo en el ensayo pro cada serie;
pasarla a un Erlenmeyer se realiza los primero 5 tubos
Erlenmeyer y el anterior servirn como blanco y
agregarle 10 ml procedimiento. Reunir los otros 5 tubos se
de cloruro de las dos soluciones en utilizaran para tomar el
sodio y agitarlo el baln aforado y pH.
por 15 minutos completar con 25ml de
cloruro de sodio y
dejarlo en hielo

Para extraer la
Se colocan doce tubos y se enzima se pesa Se le agrega a cada
marcar se les adiciona los 0,5gr de materia tubo los indicadores
indicadores (ureasa, HCL, vegetal se coloca despus se incuban
entre otros) se mezclan en un mortero con al terminar este
bien y se coloca en un 20 ml de cido proceso se le
bao a temperaturas entre clorhdrico y se adiciona a cada tubo
50 o 68C macera se realiza la tres gotas de tashiro
extraccin por 15 y se titula con cido
minutos y despus clorhdrico
se realiza los pasos
Para el mtodo 3 que se hicieron en
este se har en el primer mtodo
dos sesiones para
la primera se har
lo que se realiz Se coloca la solucin en
Para la segunda sesin se
en el primer 5 tubos se mezclan
har el proceso de ser pesara
mtodo o sea que bien y se colocan en un
5 gr de urea y se coloca en un
se repetir el bao despus se deja
Erlenmeyer se le adiciona
anterior mtodo enfriar y se colocan la
NaCl y luego se pasa a un
solucin de cada tubo
baln aforado se repite el
en un Erlenmeyer se
proceso con lo quedo y se
titula con HCl y se
completa con 20 ml de NaCl
compara con las otras
titulaciones
PRACTICA No. 5: DETERMINACION DE VITAMINA C
OBJETIVO

Que el estudiante reconozca presencia de vitamina C en diferentes

muestras de alimentos.

Que el estudiante cuantifique el contenido de Vitamina C en las muestras

analizadas y comparar su valor con datos tericos.

Que el estudiante establezca la importancia biolgica de la vitamina C en

los procesos metablicos.

MATERIALES Y /O REACTIVOS
Material de vidrio

Gradilla

Tubos de ensayo

Pipetas de 5 y 10 ml

Tapones de caucho

Probetas de 100ml
Material biolgico

Jugo de naranja, limn, tomate, zanahoria y durazno

Tabletas de vitamina C
Reactivos

Solucin de almidn al 5%

Lugol

2-Nitroanilina 0,16% en actico-HCl

Nitrito de sodio 0,08% en agua

Etanol 96%

Acido oxlico 0,15% y solucin de vitamina c recin preparada al 0,2 mg/ml.

Equipos

Termmetros
 Papel indicador

Espectrofotmetro

Mecheros

Mallas

PROCEDIMIENTO
FORMA CUALITATIVA

1. Disolver 0,5 3. Identifique 5 tubos con A, B, C, D, E

gr. de almidn 2. En tubo de ensayo adicionar 2.0
en 10.0 ml de ml de solucin almidn y 1.0 ml de
agua lugol. Adicione tableta de
vitamina C, registre lo observado,
la decoloracin de la mezcla es
indicacin de la vitamina c, tenga
en cuenta este resultado.
coloque en cada uno 1.0 ml de
solucin de almidn y 1.0 ml de lugol.
Aada gotas de naranja al tubo A,
gotas de limn tubo B, 1,0 ml de jugo
de tomate tubo C, 1.0 ml de zanahoria
tubo D y de durazno al tubo E Tape los
tubos con tapn de caucho y agite,
registre sus observaciones.

FORMA CUANTITATIVA

Frutas ctricas tomar 1 ml de jugo Para otras frutas se pesa y macera lo

pesarlo y agregar 4ml de cido
oxlico al 0.15% se mezcla y se filtra
determinacin
P colorimtrica
mejor posible con 4ml de solucin de
cido oxlico al 0,15%. Filtrar y completar
con solucin de oxlico hasta un volumen
final de 5 ml.
PRACTICA 6
AISLAMIENTO DEL ARN EN LA LEVADURA
OBJETIVO

Que el estudiante aprenda a extraer el ARN de los dems componentes

Celulares a partir de la levadura.

Que el estudiante analice , los reactivos con los cuales se separa el ARN
De los dems componentes celulares

Que el estudiante analice la composicin qumica del ARN

MATERIALES Y/O REACTIVOS

gradilla Levadura seca.

Solucin de fenol termmetros

Tubos de ensayo

Acetato de potasio

Centrifuga

Pipetas de 5 y 10ml

Tapones de caucho

Etanol absoluto

Probetas de 100 ml

Vasos de precipitado de 250,600 ml.

 PROCEDIMIENTO
Agite mecnicamente la suspensin
Deje reposar por 15 durante 30 min a T ambiente. Luego
Colocar 30 gr
Min. A esta temperatura y Centrifugue
de levadura
agregue 160 ml de En fro a 3000 g durante 15 min,
en120 ml de
solucin concentrada de para romper la emulsin
agua a 37 c
fenol

Con una pipeta Pasteur remueva Agregue Enfre la

cuidadosamente la capa superior Acetato de potasio al solucin en
acuosa y Centrifugue a 10000 sobrenadante hasta hielo por 1 hora.
g durante 5 min en una centrifuga obtener una Recoja el
refrigerada paraseparar la concentracin final de precipitado por
protenadesnaturalizada. 20g/L y precipite el centrifugacin
ARN aadiendo 2
en frio a 2000 g
volmenes de etanol. por
5 min.

Lave el ARN con una El contenido de ARN en la

mezcla de etanol-agua (3:1) levadura es de aproximadamente
, luego con etanol y 4% de su
finalmente con ter; Peso seco.
Deje secar al aire y pese.

PRACTICA No. 7
AISLAMIENTO Y DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS

OBJETIVOS

Reconocer la presencia de ARN y ADN en los tejidos biolgicos

Analizar, mediante reacciones cualitativas coloreadas de ADN y ARN en

tejidos biolgicos.

Establecer relaciones entre la estructura y la funcin de ARN y ADN en los

procesos metablicos.
MATERIALES Y/O RECTIVOS
Materiales de vidrio

Balanza, esptula, vasos de precipitado de 600 y 250 ml

Probeta de 100 ml, pipeta de 25 y 10 ml, agitadores de vidrio

Tubos de ensayo, tubos falcn de 15 ml

Tampn + detergente: NaCl 0,14 M, acetato magnsico mM, KCl 5mM,

dodecil sulfato sdico (SDS) al 1%

Material biolgico

Levadura seca

Hgado de ternera

Cebolla cabezona fresca

Detergente lavavajillas, sal, zumo de pia o papaya

Reactivos

Solucin de fenol

Acetato de potasio

Etanol absoluto

ter etlico, alcohol de 96 muy frio

Fenol / cloroformo/ isoamilico (25:24:1)

Acetato sdico 3M pH 5,2

Tampn tris- EDTA: tris 10 mM, EDTA 1 mM, pH 7,5

Equipos

Balanza analtica

Termmetros

Centrifuga
 Espectrofotmetro
Batidora
PROCEDIMIENTO
ISLAMIENTO DEL ARN EN LEVADURA
AISLAMIENTO DEL ARN EN LEVADURA
1. Suspenda 30 gr de levadura seca en
120ml de agua a 37C
2. Deje reposar por 15 min a esta
temperatura y agregar 160ml de
solucin concentrada de fenol.
3. Agitar mecnicamente durante 30
min a T ambiente. Luego
centrifugue en frio a 3000 gr durante
15 min.
4. Con una pipeta Pasteur remueva la
capa acuosa, centrifugue a 1000 gr
durante 5 min en centrifuga
refrigerada para separar la protena
desnaturalizada
1. Agregar acetato de potasio al
sobrenadante hasta obtener una
concentracin final de 20 g/l y
precipite el ARN aadiendo 2
volmenes de etanol.
2. Enfri la solucin en hielo por 1
hora.
3. Recoja el precipitado por
centrifugacin en frio a 2000 g por 5
min.
4. Lave el ARN con una mezcla de
etanol-agua; luego con etanol y
finalmente con ter; deje secar al
aire y pese.
5. El contenido de ARN en la levadura
es de aproximadamente el 4% de su
peso seco
AISLAMIENTO Y DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS

AISLAMIENTO Y DETERMINACION DE ACIDOS NUCLEICOS

1. En tubo de vidrio de fondo

1. Centrifugar a 3500 rpm durante 5 min
redondo tomar 0,1-0,2 gr de
y separar con cuidado la fase acuosa.
hgado, pesarlo y anotar su peso
2. Aadir 1/10 de volumen, de fase
hmedo.
acuosa recuperada, de acetato sdico
2. Desmenuzarlo con una varilla de
3M pH 5,2 y mezclar.
vidrio y aadirle 10 veces el peso
3. Aadir gota a gota 2.5 volmenes de
hmedo de tampn salino +
fase acuosa de etanol absoluto.
detergente.
4. Al aadir el etanol el DNA precipita en
3. Transferirlo a un tubo falcn de 15
forma de ovillo si no aparece incubar
ml. Aadir el mismo volumen de
5 min en hielo. Centrifugar a 3500
fenol/cloroformo/alcohol isoamilico
rpm, 5 min y re suspender el
que se halla aadido de tampn
precipitado de cido nucleico en 2 ml
salino con detergente.
de tampn tris/EDTA pH 7.5.
4. Agitar vigorosamente

EXTRACCION DEL ADN DE UNA CEBOLLA

1. En vaso agua agregue 3 cucharaditas de detergente lavavajillas y una

de sal aadir agua destilada llenar vaso.

2. Mezcle solucin con cebolla y licua a velocidad Max. 30 seg, filtrar

liquido con filtro de caf. Llenar hasta un vaso cristal con disolucin
filtrada.
3. Aada 3 cucharaditas de caf, zumo pia o papaya y mezcle.

4. Aade un volumen de alcohol frio equivalente al del filtrado, haciendo

resbalar por las paredes del vaso para formar una capa sobre el
filtrado.

5. Deja reposar de 2 a 3 min para formar zona turbia entre las dos.
PRACTICA No. 8: PROPIEDADES FISICO QUIMICAS DE LOS
CARBOHIDRATOS.
OBJETIVOS

Que los estudiantes reconozcan los monosacridos como unidades

estructurales de polisacridos, como la celulosa, almidn y glucgeno y su
importancia en los diferentes procesos metablicos.

Que el estudiante analice mediante reacciones cualitativas coloreadas la

presencia de monosacridos y la presencia del enlace glucocsidico en las
muestras.

Que el estudiante establezca relaciones entre la estructura y la funcin de

los monosacridos y polisacridos y prdida de esta al variar sus
propiedades fsicas qumicas.

MATERIALES Y/O REACTIVOS

Material de vidrio

Tubos de ensayo

Vasos de precipitado de 250 y 600 ml

Pipetas de 10 ml

Material biolgico

Trozo de pan

Papa
Reactivos

Solucin de glucosa

Solucin de fructuosa

Solucin de almidn

Solucin de yodo o reactivo de lugol

Solucin diluida de HCl

Alcohol etlico, reactivo de Tollens, reactivo de Fehling A y B

 Equipos

Mecheros de gas

Estufas

Termmetros
PROCEDIMIENTO
SOLUBILIDAD

1. Se toma 0.5 gr de azcar SOLUBILIDAD 2. Repetir los dos pasos anteriores

en cada tubo de ensayo, con otros tubos de ensayo pero con
rotulados. alcohol etlico.

3.ada 2 ml de agua a cada tubo de ensayo

agitar 1 min y dejar en reposo 30 segundos.

4. Construya un cuadro donde cualifique cuantitativamente el

grado de solubilidad de las diferentes muestras.

PRUEBA CON LOS REACTIVOS DE TOLLENS Y FEHLING

PRUEBA CON LOS REACTIVOS DE TOLLENS Y FEHLING

1. Realice montaje a
1. Verifique T en bao mara a
bao mara y caliente
a 60. 60C, coloque dentro un vaso
de precipitado los diferentes
2. Prepare soluciones tubos y llvelos al bao mara
de cada azcar al por 5 min.
10%. Tome 0.1 ml de
cada solucin y 2. Repita los pasos 2 y 4 pero
llvela a diferentes utilice 0.5 ml del reactivo A de
tubos de ensayo, Fehling y 0.5 ml del reactivo B.
rotulados.
3. Tome 2.0 ml de solucin
sacarosa y agregue 3 o 4 gotas
de solucin diluida de HCl Agite
 POLISACARIDO

1. Prepare solucin concentrada de almidn en agua, caliente

hasta formar engrudo deje en reposo hasta enfriar, aada 2
gotas de solucin de yodo o reactivo de lugol.

2. Repita esta prueba utilizando reactivo de lugol en una

rebanada de papa o pan. Anote observaciones.

PRACTICA No. 9: HIDRLISIS DE POLISACARIDOS, METODO DEL

REACTIVO 3,5 - DINITROSALICILATO

OBJETIVO

Que los estudiantes comparen tres mtodos de hidrlisis de polisacridos,

determinando la cantidad de azcar reductor formado mediante la reaccin
de la glucosa con 3,5-dinitrosalicilat de sodio.

Que los estudiantes reconozcan los productos de hidrlisis de

Polisacridos.

Que los estudiantes cuantifiquen la concentracin de glucosa residual como

producto de las hidrlisis cida, enzimtica por el Mtodo 3,5-
dinitrosalicilato de sodio del almidn y celulosa.

MATERIALES Y/O REACTIVOS

Materiales de vidrio

Tubos de ensayo

Vasos de precipitado de 1000, 600, 50 ml

Pipetas de 10 ml, probetas de 100 ml, agitadores de vidrio

Material biolgico

Saliva

200 g de maicena
Reactivos

Solucin de almidn soluble ( 6mg/ml) en buffer fosfato de sodio 0.02 M PH

6.9

NaOH 4N, HCl 4N. NaOH 20%

Reactive 3,5-dinitro salicilato de sodio: (disolver 5 g de cido 3,5-dinitro

saliclico en 100 ml de NaOH 2N, calentar. Por separado, adicionar 150 g
de tartrato de sodio y potasio a 250 ml de agua calentar. Mezclar las dos
soluciones y completar a 500ml)

Buffer fosfato de sodio 0.02 M PH 6.9 en NaCl 0.005 M.

Reactivo de Lucas. (134 g de ZnCl2 en 89 de HCl concentrado).

Equipos

Espectrofotmetro

Balanza

Centrifuga
Procedimiento
HIDRLISIS ACIDA

HIDRLISIS ACIDA

PASO 1.Rotular 8 tubos de ensayo agregando en orden los siguientes reactivos:

PASO 2. Solucin de almidona, agua destilada, NaOH 2.4 N, HCl 4N
PAS 3. Colocar los tubos a baos Mara a ebullicin. Finalizado tiempo sacar los tubos y
detener la hidrolisis agregando NaOH 2.4N y reactivo 3,5-dinitrosalicilato.
PAS 4. Introducir los tubos a bao de ebullicin durante 5 min, enfriar y agregar 7 ml de
agua destilada. Agitar y medir transmitancia a 540 nm.

HIDROLISIS ENZIMATICA

HIDRLISIS ENZIMATICA

PASO 1.Recoger 2 ml de saliva en un vaso de precipitado, diluir5l tomando 0.3 ml

de saliva y 19.7 ml de buffer de fosfato de sodio PH 6.9 en NaCl 0.0005 M.
PAS 2. Rotular 8 tubos de ensayo agregando los siguientes reactivos: solucin
almidn, agua destilada, saliva diluida. Adicione la saliva a 2 tubos y agregar el
reactivo 3,5-dinitrosalicilato, agitar todos los tubos y dejar a T ambiente.
PASO 3.Luego de terminar la incubacin agregar reactivo 3,5-dinitrosalicilato,
colocar todos los tubos en bao a ebullicin durante 5 min, enfri y agregue 8 ml de
agua destilada.
HIDROLISIS ACIDA DE LA ELULOSA EN PRESENCIA DE ZnCl2

HIDROLISIS ACIDA DE LA ELULOSA EN PRESENCIA DE ZnCl2

PASO 1. Colocar en una capsula un trozo de algodn o papel filtro, agregar 3

ml de reactivo Lucas y calentar durante 3 min agitndolo.
PAS 2. Dejar enfriar y neutralizar con NaOH al 20% si se forma precipitado
centrifugue
PRACTICA 10 a 2500 rpm durante 10 min y luego pasar 0,5 ml del sobrenadante
a un tubo.
PAS 3. Adicione 1 ml de NaOH 2,4 N y 1 ml del reactivo 3,5-dinitro salicilato
MATERIALES Y/O REACTIVOS
y proceder de igual forma a las hidrlisis anteriores
Vasos de precipitado 200 ml 100 g

hgado fresco de cerdo

Solucin de KOH 30% 50 ml

Balanza analtica (1)

Vasos de precipitado de1000 ml (vidrio y plstico)

Solucin de tricloroacetico TCA10%.

Incubadora

Erlenmeyer 250 ml 50 ml

Solucin saturada deNa2SO4

Centrifuga y tubos

Pipetas de 5 y 10 ml

amortiguadora:

tampn

fosfato sdico 0,02 M;

NaCl 0,005 M pH

Estufas (1)

Agitadores de vidrio
 Reactivo de Fehling A y B. Mallas

micro pipetas

Reactivo de tollens.

Probetas 100 ml

10 ml de tolueno

Vidrio reloj

Reactivo de Benedict

Esptulas

cido actico glacial

Tubos de ensayo

hielo

gradillas

Sacarosa

Pinzas para tubos de ensayo

Lactosa

Tollens

Fehling A y B.
 PROCEDIMIENTO

Pese un Erlenmeyer de 50 Se calienta en un bao de agua

ml.Se ponen 3 ml de la
solucin de hidrxido
potsico al 30% en un
Procedimiento Erlenmeyer de 50ml.
Se pesan 8 g de tejido
(aproximadamente) y se
introducen en el
Erlenmeyer. Sepesa este
conjunto.
hirviendo, agitando con cuidado
para acelerar el
Proceso, durante 20 minutos (o
hasta su digestin). Se enfra el
tubo una vez
Acabada la digestin.
Una vez enfriado el tubo de se
aaden 0,2 ml de la solucin
saturada de Na2SO4
y se mezclan fuertemente.
Reposar 5 minutos.

Segunda
Centrifugacin: Primera
Se centrifuga de nuevo. Centrifugacin:
Se aade el sobrenadante Se pesan los tubos de
a un tubo de ensayo largo, centrifuga.Se pasa la
alque previamente se han solucin a tubos de Se precipita el
aadido 10 mL de etanol al centrfuga se centrifuga glucgeno que
95%,desechando el 3000rpm durante 5 est en solucin
sedimento de la minutos. Se desecha el por adicin de 7
centrifugacin. Se deja sobrenadante Se m de etanol al
Reposar 5 minutos para que Aaden 5 ml de la 95%.
se produzca la precipitacin solucin de TCA al 10% Se agita y deja en
delglucgeno. al tubo y sedisuelve fro en un bao
totalmente el sedimento
de hielo durante 5
agitando fuertemente.
minutos.

Tercera
Centrifugacin:
Se traslada la solucin al
tubo de centrfuga
previamentePesado, y se
centrifuga durante 5
minutos Una vez
acabada la
centrifugacin se tira el
sobrenadante.
El sedimento obtenido
representa el glucgeno
Prcticamente exento de
sustancias
contaminantes. Secaren
la estufa a 35C hasta su
utilizacin.
Cantidad de Solucin de
Glucgeno Glucgeno
Se pesa en la balanza De acuerdo a la cantidad
el tubo con el de glucgeno obtenido
glucgeno desecado, hacer lasiguiente
Obtenido en la parte relacin:8 mg de
anterior, y se anota el glucgeno por 0.5 ml de
resultado.( solucin tampn fosfato
Determinar la cantidad 0,02 M pH 7,0 que
de glucgeno contenga NaCl 0,005 M,
De esta manera queda
obtenido).
preparado el glucgeno
para lassiguientes
determinaciones.
 Adicin de la Recoleccin
Alfa amilasa De la alfa Hidrolisis
Tome cuatro tubos de ensayo y Amilasa enzimtica del
encada uno agregue Recoja 20 ml de alfa glucgeno por
amilasa salival la enzima
Fresca. alfamailasa

Sobre el
Glucgeno
De solucin de glucgeno
1 ml
Solucin de saliva 3
mlIncubar a 37 C por 45
minutosAL cabo del
tiempo adicionar a
cacaTubo TCA (cido
tricloroactico `para
Parar la reaccin)
1 ml.Realice las pruebas
respectivas
paraDeterminar los
productos de la
Hidrlisis del almidn.
Prueba de
FEHLING
Solucin A de Fehling 1
mlSolucin B de Fehling 1
mlAgua destilada 1 ml
Solucin de glucgeno +
enzima 2 mlColocar el
tubo en una solucin
deagua hirviendo por 5-
10 minutos
Prueba de
TOLLENS
Reactivo de tollens 2ml
Solucin de glucgeno +
enzima 2 mlAgite los tubos
y djelo un bao deagua a
35 C, durante 5 minutosUn
espejo de plata o un
precipitadonegro es prueba
positiva indica lapresencia
de glucosa proveniente de
la
Hidrlisis del glucgeno.

REALICE TODAS LAS

Extraccin de
Las enzimas intestinales.
Utilice intestino delgado
(duodeno) de residuo recin
sacrificada (no sirve intestinos
EXTRACCIO de ms de unda, y estos
N DE LAS deben refrigerasen (no
congelar) en elMenor tiempo
ENZIMAS posible. En caso de que el
INTESTINALE Laboratorio no se realice
S inmediatamente se sacrifique
el animal, extraer la primera
porcin delIntestino delgado
(duodeno) y mantngalo en el
Refrigerador a un tiempo no
mayor de 12 horas a
laprctica.
OPERACIONES BAJO
BANO DE HIELO.
Utilice de 10 a 15 cm de duodeno.
Crtelo a lolargo con unas tijeras
provistas de buen corte, laveel
intestino preferiblemente con agua
destilada,crtelo en pedazos
pequeitos y en un mortero,
Tritrelo, en bao de hielo
Recoja el molido en un vaso de
precipitado enbao de hielo y
agregue 50 ml de agua destilada y2
gotas de tolueno. Agite bien. Es
aconsejable que
Trabaje hasta aqu lo ms rpido
posible. Agitar.Durante unos 15
minutos y filtre a travs de unatela
limpia, sobre un bao de hielo. En el
lquido,que debe salir claro, estn
las enzimas.
AccinEnzimtica
Solucin de sacarosa recin
preparadaAl 5%5 mlA cada tubo ACCION DE
adicionar enzima cruda 5 LAS
SOLUCION DE
mlIncubar a 38C por una DISACARID ENZIMA
hora.Repetir:Solucin de lactosa ASAS Mantenga en hielo el tubo de
y maltosa recinPreparada al enzima cruda.
5%5 mlA cada tubo adicionar
enzima cruda 2 ml

PRUEBA DE
PRUEBA DEBARFOED
BENEDICT
Reactivo de BARFOED 2m, Solucin enzimtica
Reactivo de Benedict
2.0 ml, Bao mara por 5 minutos
2mSolucin enzimtica 2.0 ml
Repita el procedimiento para la siguienteSolucin
Bao mara por 5
problema.Para que sea positivo para
minutosRepita el
Monosacridos, la coloracin una vezen el bao
procedimiento para la
mara no debe durar ms de5 minutos. Despus
siguientesolucin
de los 5 min seconsideran disacridos.
problema.Repita la experiencia
sobre solucionesde sacarosa y
lactosa.

Prueba de PRUEBA DE
Tollens FEHLING
Realice la prueba de Fehling a las
Realice la prueba de tollens a lassoluciones Soluciones enzimticas con los
enzimticas con lossiguientes sustratos: siguientes sustratos: lactosa,
lactosa, sacarosa y sacarosa ymaltosa. De igual forma
Maltosa. De igual forma realice patronespara realice patronespara glucosa,
glucosa, sacarosa, lactosa y sacarosa, lactosa y maltosa.
Maltosa.
PRCTICA 11
RECONOCIMIENTO CUALITATIVO DE LIPIDOS

OBJETIVO

Que el estudiante reconozca los diferentes tipos de lpidos que se

encuentran en los tejidos biolgicos.
Que el estudiante analice los resultados obtenidos en las reacciones
cualitativas, la presencia de algunos de los tipos de lpidos como fosfolpido,
cidos grasos, colesterol y glucolipido en cada una de las muestras.
Que el estudiante establezca relaciones entre la estructura y La funcin de
las los lpidos y su participacin en los diferentes procesos metablicos.

MATERIALES Y/O REACTIVOS

Probeta de 100 ml
3 huevos
180 ml de etanol
Estufa y malla
Agitador de vidrio
20 gramos de cerebro fresco de res.
200 ml de ter
centrifuga
Vaso de precipitado de 600 ml
50 ml de KOH 1.5N
Perlas de vidrio
Vaso de precipitado de 1000 ml
50 ml de acetona
Varilla para reflujo
Vaso de precipitado de 600 ml plstico
 50 ml de HNO3
Corchos con orificios
Vaso de precipitado de 1000 ml plstico
Solucin de molibdato de amonio
Microcoscopio (1)
Vaso de precipitado de 50 ml
50 ml de acetona
Plancha de calentamiento
esptula
20 ml de etanol
Papel filtro
Erlenmeyer de 250 ml
20 ml de ter
mechero
Pipetas de 10 ml
Soporte universal y pinzas.
10 ml de acetona
Pinzas para la varilla
refrigerante
10 ml de HNO3
Pinzas para crisol
Solucin de molibdato de amonio
Crisol o cpsula mediana y pequea.
30 ml de acetona
Pinzas de madera
10 ml de HCl
Embudos
 50 ml de NaOH al 30 %
Reactivo Ay B de Fehling

PROCEDIMIENTO

Preparar una solucin de alcohol Lave el residuo con 20 ml de

ter as: 40 ml de alcohol y 20
ml de ter. Un huevo, hacer un
Procedimien orifico en uno de los extremos y
to #1: a travs de l deje salir la clara.
reconocimie Luego transfiera la yema a un
nto de vaso de precipitado que
colesterol y contenga una mezcla de 40 ml
fosfolpido a de etanol
partir de la y 20 ml de ter, disuelva bien la
yema de yema, agitando durante 10
Huevo minutos, filtre a travs de papel
filtro y recoja el filtrado en un
vaso de precipitado seco.
Prepare una solucin de mezcla
de etanol- ter (2:1), tome 14 ml
de etanol y mezcle con 7 ml de
ter.
la mezcla de etanol- ter
(2:1). Evapore a sequedad el
filtrado anterior sobre una
plancha de calentamiento o a
bao mara, cuidando de no
dejar quemar el residuo.
Disuelva el residuo en 5 ml de
ter y virtalo poco apoco y
agitando en un vaso de
precipitado que contenga 20
ml de acetona. Se debe
formar un precipitado que
generalmente es fosfolpido.
Centrifugue y recoja el
sobrenadante en un vaso de
precipitado de 50 ml. El
precipitado debe recogerlo
guardarlo para la prueba de
fosfolpido

5 ml de alcohol y pasar la
solucin a un tubo de centrifuga Enfriar y aadir 20 ml Reconocimiento
y centrifugar durante 5 minutos. de ter, agita r durante de colesterol
Pasar el lquido sobrenadante a 10 minutos y Evapore el lquido
otro tubo de centrifuga y aadir centrifugar. El anterior a bao
agua gota a gota hasta que precipitado es jabn, mara, hasta que se
seforma bastante precipitado. descartar. Guardar el forme una pasta
Dejar en reposo durante 15 Sobrenadante que Agregue 15 ml de
minutos y centrifugar contiene colesterol. Solucin de KOH al
nuevamente y Tome el sobrenadante, 1.5 N, agite bien y
Decantar el lquido evaprelo en un bao transfiera a un
sobrenadante, guardar y de vapor, lejos de la Erlenmeyer de 250
marcar como sobrenadante de llama, cuando ya ml y deposite en l
colesterol. Recogerel quede Perlas de vidrio y
precipitado. Slo el residuo, caliente la mezcla a
adicionar reflujo durante 20
minutos.
Reconocimiento de Con el residuo, agregue 10
Fosfoglicridos o ml de acetona, vuelva a
fosfolpido Procedimiento #2: centrifugar y el
Utilice el resto del extraccin de lpidos del sobrenadante colquelo en
precipitado. Paselo a cerebro elvaso de extracto I
un crisol y caliente Pese 4 gramos de cerebro Coloque el residuo de los
sobre un mechero fresco de res. Reprtalos tubos a bao mara por 10
hasta en dos tubos de centrifuga, minutos y agrguele 5 ml
Convertirlo macrelos con ayuda de un de ter, mezcle,centrifugue
completamente en agitador suavemente contra a 3000 rpm por 1 minuto,
cenizas. Disolver el las paredes del tubo. decante el ter en otro
residuo en 5 ml de Agregue 5 ml de acetona, vaso de 50 ml marcado
agua destilada y 5 mezcle comoextracto II.
gotas de HNO3 Durante 10 minutos, Al residuo adicinele 5 ml
concentrado, filtren y centrifugue a 3000 rpm por de ter y vuelva a
agregue al filtrado 1 ml dos minutos. Decante la centrifugar y el lquido
de solucin de acetona en un Erlenmeyer depostelo en el vaso del
Molibdato de amonio. de 50 ml y colquele el Extracto II. Repita
Observe la coloracin y nombre de extracto I. nuevamente la operacin.
la formacin de
precipitado.

Al residuo que queda, agregu 5

ml de ter, mezcle bien, y
centrifugue, decante el lquido en Separacin de los
el lpidos del extracto Extienda en los tubos el
Vaso del precipitado extracto II. Al II Evapore a bao residuo y squelo a bao
residuo adicione, 3 ml de etanol mara el extracto II. mara, una vez secos
caliente, mezcle y centrifugue y Agregue al residuo 5 adicione 5 ml de etanol al
decante el etanol en el vaso ml de acetona, 97% caliente, mezcle bien,
De extracto III. mezcle bien y centrifugue a 3000 rpm a 2
Evapore los extractos II y III, hasta Centrifugue por 2 minutos, decante el etanol
sequedad. (en bao mara), Tome min. Decante el en un tercer
el extracto II, adicione 4 ml de Vaso de 50 ml y marcado
etanol caliente y realice las lquido en el vaso de
como extracto III. Repita una
pruebas para fosfolpido. extracto I.
vez ms el procedimiento
desde la adicin de los 5 ml
de etanol caliente.
Prueba para fosfolpido:
Coloque el extracto en una
cpsula de porcelana, evapore el
etanol, contine calentando hasta
que el residuo quede
completamente en cenizas,
adicione 5 gotas de HNO3, y 5 ml
de agua destilada, disuelva bien
las cenizas y filtre, al filtrado
adicione 5 ml de Molibdato de
amonio ,
Observe la coloracin y
formacin de precipitados.
Prueba para glucolipido y esfingolipidos
Disuelva el extracto III, en 3 ml de etanol,
calentando para disolverla, agregue 4 ml de
agua y realice: Agregue 1 ml de HCL
concentrado, agite bien, caliente a bao de
agua hirviendo por 15 minutos. Deje enfriar y
adicinele gota a gota NaOH al 30% hasta
alcalinizar (con tiras de papel
Indicador de pH), realice la prueba de Fehling.

PRACTICA 12
REMPLAZADA POR LA PRACTICA 6
PRACTICA 6 AISLAMIENTO DEL ARN EN LA LEVADURA

OBJETIVO

Que el estudiante aprenda a extraer el ARN de los dems componentes

Celulares a partir de la levadura.

Que el estudiante analice , los reactivos con los cuales se separa el ARN
De los dems componentes celulares

Que el estudiante analice la composicin qumica del ARN

MATERIALES Y/O REACTIVOS

gradilla Levadura seca.

Solucin de fenol termmetros

 Tubos de ensayo

Acetato de potasio

Centrifuga

Pipetas de 5 y 10ml

Tapones de caucho

Etanol absoluto

Probetas de 100 ml

Vasos de precipitado de 250,600 ml.

PROCEDIMIENTO
AISLAMIENTO DEL ARN EN LA LEVADURA

Agite mecnicamente la
Colocar 30 gr Deje reposar por 15 suspensin durante 30 min
Min a esta temperatura y a T ambiente. Luego
de levadura
agregue 160 ml de Centrifugue
en120 ml de
solucin concentrada de En fro a 3000 g durante
agua a 37 c
fenol 15 min, para romper la
emulsin

Con una pipeta Agregue Enfre la

Pasteur remueva Acetato de solucin en
cuidadosamente la potasio al hielo por 1 hora.
capa superior acuosa sobrenadante Recoja el
y Centrifugue a 10000 hasta obtener una precipitado por
g durante 5 min en concentracin
centrifugacin
una centrifuga final de 20g/L y
precipite el en frio a 2000 g
refrigerada por
ARN aadiendo 2
paraseparar la 5 min.
volmenes de
protenadesnaturaliza
da. etanol.
Lave el ARN con una
mezcla de etanol-agua
(3:1) , luego con etanol y El contenido de ARN en la levadura es
finalmente con ter; de aproximadamente 4% de su
Deje secar al aire y pese. Peso seco.
 BIBLIOGRAFIA

Garca, Jerez Alberto (2011). Modulo Bioqumica, UNAD. Acreditador.

Pato Pino, 2008. Bioqumica II, Alfa, Buenos Aires

Principios de Qumica. Editorial Mdica Panamericana.

Pacheco, D. (2001). Bioqumica Estructural y Aplicada a la Medicina.

Instituto Politcnico Nacional.

Flores, J. (2002). Reacciones de Identificacin de Carbohidratos. [Gua de

Estudio]. Caracas: UPEL.

Wades, L. G. (2004). Qumica Orgnica (4 ed.). Madrid: Pearson Prentice

Hall