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INFORME PRACTICA DE LABORATORIO

MONICA MARIA RAMOS POVEDA: 1.120.564.189


YENNY PATRICIA PRADA SIBO: 1.073.674.940
YULY PAOLA PINILLA PINILLA: 1.120.573.356
RUBY YARITZA CARO ACEVEDO: 1.006.811.537

UNIVERDIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA - UNAD


CATEDRA: BIOQUIMICA
ACACIAS META
3 DE NOVIEMBRE 2016
RESMEN

Los temas o prcticas que desarrollamos durante este laboratorio consto de


procedimientos experimentales o pruebas qumicas para identificar y analizar las
macromolculas como carbohidratos, lpidos, protenas y cidos nucleicos no sin
antes poner en prctica las practica de la seguridad y normas de laboratorio;
personales, para la utilizacin de productos qumicos, para la utilizacin de
instrumentacin y las normas en caso de emergencia.

Para las PROPIEDADES BIOQUMICAS DE LOS AMINOCIDOS; primero se


clasificaron los aminocidos, junto con su nombre y nomenclatura, e identificamos
cuales son hidrofobicos y cuales solubles en el agua, para las pruebas bioqumicas
para identificar los aminocidos, se debe tener en cuenta segn la tonalidad que
estos toman, por medio de la reaccin de Ninhidrina con la cual se identifican los
grupos alfa-amino libres, presentes en pptidos y protenas, si el grupo amino es
primario tomara una tonalidad violeta, amarillo para la prolina, y caf para la
asparagina, la reaccin de REACCIN DE BIURET la producen los pptidos y las
protenas, pero no los aminocidos formando un complejo de color violeta,
REACCION XANTOPROTEICA. Los anillos aromticos presentes en algunos
aminocidos reaccionan con cido ntrico concentrado formando nitro derivados de
color amarillo o anaranjado por lo cual esta reaccin permite reconocer la presencia
de Tirosina, Fenilalanina y Triptfano, REACCION DE MILLON ,El anillo fenlico
tiene un comportamiento caracterstico frente a las sales de Mercurio a pH cido,
formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenlico de la tirosina y las
protenas que la contienen, REACCION DE SAKAGUCHI El grupo guanidinio
presente en la cadena lateral de la Arginina reacciona con soluciones de alfanaftol
en presencia de Bromo en medio alcalino formando complejos coloreados rosados
o rojos. Adems nos ensean los materiales los reactivos y los procedimientos
segn el tipo de reaccin, de manera detallada.

Las protenas son uno de los principales componentes de todas nuestras clulas.
Los aminocidos (compuestos orgnicos), Los aminocidos tiene tres tipos de
reacciones qumicas importantes: (1) reacciones debido a la presencia del grupo
carboxilo (COO- ), (2) reacciones debidas al grupo amino (NH), y (3) reacciones
debido al grupo R. Las reacciones debidas al grupo carboxilo y al grupo amino son
generales y se dan para todos los aminocidos. Las reacciones del radical R son
reacciones especficas; por ejemplo, cistena da una reaccin para azufre, triptfano
da ciertas reacciones de color debido a que su molcula contiene el grupo indol,
tirosina da otras reacciones de color debido a su grupo fenlico, etc.

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Nos muestran la descripcin de los reactivos y el mtodo, luego el procedimiento y
los materiales en general; y luego el procedimiento segn el tipo de reaccin
BIURET, Se basa en la reaccin de sales de Cu+2 con molculas que contienen
ms de dos enlaces peptdicos en un medio alcalino; el cobre es reducido a Cu+
formando complejos color prpura que tienen un mximo de absorcin a 540 nm
LOWRY, Resulta de la reaccin de Biuret sobre los enlaces peptdicos, adems de
la reduccin del reactivo de fosfomolibdatofosfotungstato (Folin-Ciocalteu) por las
protenas pretratadas con cobre en medio alcalino, dando una coloracin azul,
determinado a 650 nm. BRADFORD, Basado en el Azul Brillante de Coomasie G-
250 cambia de rojo a azul, al unirse a residuos aromticos y arginina en las
protenas.

Para la IDENTIFICACIN DE CARBOHIDRATOS sabemos que son los que


constituyen el grupo de biomolculas ms abundante sobre la tierra poseen la
composicin Cn(H2O)n. Estas molculas usualmente contienen carbono, hidrgeno
y oxgeno en una proporcin de 1:2:1. Se clasifican Cuando dos monosacridos se
unen se produce un disacrido, y cuando dos o ms se unen se produce un
polisacrido. Estructuralmente, un hidrato de carbono tpico es una cadena
hidrocarbonada con varios grupos alcohol y un carbono ms oxidado, en forma de
grupo carbonilo. Este grupo oxidado puede situarse en el extremo de la cadena
(aldehdo), o adyacente, en posicin 2 (cetonas)
El ensayo de BENEDICT (Detecta la presencia de azcares reductores) Se basa
en la reduccin de Cu2+ a Cu+ en medio bsico dbil, el de FEHLING (Detecta la
presencia de azcares reductores) Los azcares reductores, en medio alcalino, son
capaces de reducir el in Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo, MOLISH es un
ensayo para reconocimiento general de carbohidratos en el que los polisacridos y
disacridos se hidrolizan con cido sulfrico concentrado hasta monosacridos y se
convierten en derivados del furfural o 5-hidroximetil furfural los cuales reaccionan
con -naftol formando un color prpura violeta. PRUEBA DE TOLLENS Esta prueba
La galactosa, algunas pentosas y el cido glucurnico dan un color rojo con el HCl
y floroglucina. La glucosa da tambin un color rojo con la floroglucina, pero muy
opaco, en contraste con el color rojo transparente de la galactosa, REACCIN DE
LUGOL (YODO) El reactivo de lugol que contiene una mezcla de yodo y yoduro,
permite reconocer polisacridos, particularmente el almidn por la formacin de una
coloracin azul violeta intensa y el glicgeno y las dextrinas por formacin de
coloracin roja

Dentro de los CIDOS GRASOS Los lpidos son biomolculas orgnicas formadas
bsicamente por C, H y O, P, N y S. con algunas propiedades fsicas, Son
mayoritariamente insolubles en agua y solubles en disolventes orgnicos, tales
como ter, cloroformo, alcanos (ej.hexano), benceno, acetona y alcoholes. De
acuerdo a la estructura qumica los lpidos se clasifican en dos grupos, de acuerdo
al contenido en su composicin cidos grasos (Lpidos saponificables) o no lo
posean (Lpidos insaponificables).

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Descubrimos como diferenciar la solubilidad en lpidos y el ensayo de
saponificacin con bases fuertes, NaOH o KOH. E identificar la REACCIN CON
EL SUDN III que es un colorante que se utiliza para detectar especficamente las
grasas, porque es insoluble en agua y en cambio es soluble en las grasas. Al ser de
color rojo, cuando se disuelve tie las grasas de color rojo anaranjado.

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CONTENIDO

RESUMEN .............................................................................................................. 2
INTRODUCCION .................................................................................................... 6
PRACTICA 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO ............................... 9
PRACTICA 2. PROPIEDADES BIOQUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS ............ 11
PRACTICA 3. BIOQUIMICA DE LAS PROTEINAS .............................................. 18
PRACTICA 4. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS .................................... 21
PRACTICA 5. CARACTERISTICAS DE LOS ACIDOS GRASOS ......................... 25
RESULTADOS ...................................................................................................... 32
PRACTICA 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO ............................. 32
PRACTICA 2. PROPIEDADES BIOQUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS ............ 44
PRACTICA 3. BIOQUIMICA DE LAS PROTEINAS .............................................. 61
PRACTICA 4. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS .................................... 72
PRACTICA 5. CARACTERISTICAS DE LOS ACIDOS GRASOS ......................... 84
CONCLUSIONES.................................................................................................. 91

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INTRODUCCION

La gua de prctica de laboratorio nos explica los procedimientos experimentales


usados en bioqumica para identificar macromolculas como carbohidratos, lpidos,
protenas y cidos nucleicos, a travs de pruebas qumicas, las cuales realizaremos
durante el desarrollo de la actividad.

Las reacciones para determinar aminocidos incluyen la reaccin con la Ninhidrina


con la cual se identifican los grupos alfa-amino libres presentes en pptidos y
protenas, si el grupo amino es primario tomara una tonalidad violeta, amarillo para
la prolina y caf para la asparagina; la reaccin de Biuret que es caracterstica de
los pptidos y las protenas pero no de los aminocidos; la reaccin Xantoproteica
en la que los anillos aromticos presentes en los aminocidos reaccionan con el
cido ntrico formando nitroderivados de color amarillo o naranja por lo que se puede
reconocer la presencia de tirosina, fenialanina y triptfano; la reaccin de Million en
la que el anillo fenolitico reacciona frente a las sales de mercurio formando
complejos de color rojo, por ultimo tenemos la reaccin de Sakaguchi en donde el
grupo guanidinio presente en la cadena lateral de la arginina reacciona con las
soluciones de alfa naftol en presencia de bromo formando complejos de color
rosado o rojos.

Al igual que los aminocidos en las protenas tambin incluye algunas reacciones
qumicas para su identificacin como, la reaccin de Biuret en donde el sulfato de
cobre y sosa se une con los enlaces peptdicos formando complejos de color violeta;

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la reaccin de aminocidos azufrados la cual se basa en la separacin mediante un
lcali del azufre de los aminocidos el cual al reaccionar con la solucin de acetato
de plomo forma el sulfuro de plomo y el mtodo de Bradford en el que se emplea un
colorante hidrofbico que al encontrarse en el entorno hidrofbico de una protena
toma una tonalidad azul.

En cuanto a los carbohidratos para su identificacin se utilizan reacciones como la


reaccin de Benedict que permite detectar la presencia de azucares reductores, la
reaccin de Fehling en donde se oxida el grupo carbonilo del azcar formando un
grupo carboxilo; la reaccin de Molish en la que el cido sulfrico cataliza la
hidrolisis de los enlaces glucosidicos de la muestra y la deshidratacin a furfural o
hidroximertilfurfural dando como resultado un producto coloreado; prueba de
Tollens la cual es usada para el reconocimiento de la galactosa y sus derivados
formando complejos de color rojo y la reaccin de Lugol en la que se da la formacin
de cadenas de poliyoduro a partir de la reaccin entre el almidn y el yodo presente
en el reactivo de lugol.

Para identificar cidos grasos se utiliza la reaccin con el Sudan III debido a que es
insoluble en agua y soluble en las grasa forma complejos de color rojo anaranjado
al disolverse en estas.

Los objetivos principales de esta prctica son:

Comprender las propiedades bioqumicas de los aminocidos, al igual que


su definicin y clasificacin.

Conocer las pruebas bioqumicas para la identificacin de los aminocidos.

Realizar las pruebas propuestas en la gua de laboratorio con el fin de


identificar los aminocidos.

Identificar la relacin entre las protenas y los aminocidos.

Determinar las reacciones que se producen debido al grupo amino y carboxilo


propios de los aminocidos.

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Reconocer las reacciones que se producen por tener el radical R las cuales
son especficas para los aminocidos de esas protenas.

Discutir el referente terico sobre la identificacin de los carbohidratos,


concepto y clasificacin de los mismos.

Distinguir los diferentes ensayos para el reconocimiento de los carbohidratos.

Ejecutar el reconocimiento de los carbohidratos con la realizacin de los


ensayos para dicha actividad.

Estudiar las caractersticas de los cidos grasos, definicin y clasificacin.

Desarrollar la prctica para la determinacin de la solubilidad en los lpidos.

Efectuar el ensayo de saponificacin con el fin de conocer la reaccin en los


cidos grasos o lpidos que poseen cidos grasos en su estructura.

Realizar las actividades de las prcticas teniendo en cuenta las normas de


seguridad y las indicaciones del docente responsable de la prctica.

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1. REVISION BIBLIOGRAFICA

PRACTICA 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO

1.1.1. NORMAS PERSONALES

Acudir con vestimenta cmoda y apropiada (jean, blusa manga larga).


Usar calzado cerrado que cubra completamente el pie.
Portar la bata durante toda la practica dentro del laboratorio.
No ingerir alimentos, ni masticar chicle dentro del laboratorio, al igual que evitar
tocar partes del cuerpo y llevar las manos a la boca o introducir lapiceros en la
boca, nariz y odos.
Asistir puntualmente en la fecha y hora programada, entrar a las instalaciones
del laboratorio cuando el docente este.

1.1.2. NORMAS DE UTILIZACION DE PRODUCTOS QUIMICOS

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Si se realiza una reaccin qumica utilizar recipientes adecuados a la cantidad
que se va a usar.
No usa recipientes de alimentos para contener productos qumicos, rotular los
recipientes para tener informacin sobre la sustancia contenida.
No utilice vidrios agrietados, no utilizar jeringas para pipetear o aspirar con la
boca las pipetas de vidrio.
Mantener en funcionamiento los extractores de aire, utilizar las campaas
extractoras siempre que sean posible.
Si se requiere detectar el olor de una sustancia no hacerlo directamente
colocando la cara sobre el recipiente, utilizar la mano abierta como pantalla, los
frascos deben cerrarse despus de su uso.
Para realizar diluciones con cidos, se debe verter el cido sobre el agua no al
contrario.
No devolver a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados y
no se deben sacar sustancias qumicas del laboratorio sin autorizacin.

1.1.3. NORMAS PARA LA UTILIZACION DE INSTRUMENTOS

Utilizar los recipientes adecuados para determinar el peso de los productos


qumicos con balanza.
Mantener limpio y seco el lugar en donde van a estar los instrumentos elctricos.
Leer las instrucciones de uso de los instrumentos.
Revisar el material de vidrio para comprobar fisuras antes de usarlos.

1.1.4. NORMAS DE EMERGENCIA

Si se tuviera que evacuar el laboratorio se debe:

Cerrar la llave del gas


Salir de forma ordenada siguiendo las instrucciones del docente.

Es importante que al iniciar la prctica localicemos los equipos de emergencia del


laboratorio como lo son:

Duchas y lavaojos
Botiqun
Absorbente para derrames
Alarma de emergencia

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Salida de emergencia
Recipiente para el vidrio roto

PRACTICA 2. PROPIEDADES BIOQUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS

Los aminocidos son compuestos orgnicos que contiene un grupo amino y


carboxilo y por lo tanto poseen propiedades acidas y bsicas, poseen propiedades
diferente a los compuestos orgnicos de bajo peso molecular y semejan ms bien
sales inorgnicas, son fcilmente solubles en medios acuosos pero ligeramente
solubles o insolubles en solventes orgnicos. Sus puntos de fusin son muy altas
comparados con los compuestos orgnicos de bajo peso molecular y la mayora
tiene un punto de fusin por encima de los 200C. Algunos aminocidos contienen
grupos ionizables en la cadena lateral R, lo que afecta las caractersticas fsicas ya
sea que este se encuentre libre en solucin o combinado con otro en una protena.

Respecto a su punto isoelctrico los aminocidos migran a un campo elctrico y


esta propiedad constituye la base de uno de los mtodos para su separacin. La
direccin y magnitud de la migracin depende en gran parte de la forma inica
predominante del aminocido en solucin, la cual a su vez est determinada por el
pH del amortiguador usado por electroforesis.

Los aminocidos se encuentran unidos en las molculas de protenas por enlaces


peptdicos (-CO-NH-) que se forman por la condensacin del -COOH de un
aminocido con el -NH2 de otro. Cuando varios aminocidos se unen para dar un
polmero de bajo peso molecular este se conoce como polipptido, mientras que el
trmino protena se usa generalmente para polmeros de aminocidos de peso
molecular grande.

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Bioqumica Prctica. Aminocidos y Protenas. Cap 5. Tomado de:
http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp05a.pdf

1.1.5. CLASIFICACION DE LOS AMINOACIDOS

Cada uno de las 20 -aminocido encontradas en las protenas se puede distinguir


por la substitucin de los grupos-R en el tomo del carbono-. Existen dos clases
amplias de aminocidos de acuerdo a si el grupo-R, hidrofbicos o hidroflicos. Los
aminocidos hidrofbicos tienden a rechazar el ambiente acuoso y, por lo tanto,
residen predominante dentro de las protenas. Esta clase de aminocidos no se
ionizan ni participan en la formacin de enlaces de H. Los aminocidos hidroflicos
tienden a interactuar con el ambiente acuoso, estn implicados a menudo en la
formacin de enlaces de H y se encuentran predominantemente en las superficies
externas de las protenas o en los sitios reactivos de las enzimas.

La clasificacin se basa en los grupos R de los aminocidos, que en unos es polar


e hidrfilo y en otros apolar e hidrfobo. Se suelen hacer cuatro grupos:

Neutros no polares o hidrfobos: Carentes de grupos capaces de formar


enlaces de hidrgeno, con igual nmero de radicales amino que carboxilo.

Neutros polares sin carga: Ms solubles en agua que los no polares,


porque sus radicales R pueden establecer puentes de hidrgeno.

cidos: Con mayor nmero de radicales carboxilo que amino, por lo que su
carga neta es negativa.

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Bsicos: Con mayor nmero de radicales amino que carboxilo y con carga
neta positiva

Clasificacin de los Aminocidos 1

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14
Clasificacin de los Aminocidos 2

15
Clasificacin de los Aminocidos 3

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Alberto Garca Jerez. Bucaramanga 2015. Universidad Nacional Abierta y a
Distancia UNAD. Escuela de Ciencias Bsicas Tecnologa e Ingeniera.
Biomolculas. Tomado de: http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201103/2016-
I/BIOMOLECULAS3.pdf

1.1.6. IDENTIFICACION DE AMINOACIODOS

1.1.6.1. REACCION CON LA NINHIDRINA: La ninhidrina es un poderoso


agente reactivo comn para observar las bandas de separacin de
aminocidos por cromatografa o electroforesis, tambin es utilizada
con fines cuantitativos para la determinacin de
aminocidos Reacciona con todos los aminocidos alfa cuyo pH se
encuentra entre 4 y 8, dando una coloracin que vara de azul a violeta
intenso. Este producto colorido (llamado prpura de Ruhemann) se
estabiliza por resonancia, la coloracin producida por la ninhidrina es
independiente de la coloracin original del aminocido.

Esta prueba es positiva tanto para protenas como para aminocidos.


En aquellos casos donde no da positiva la prueba de Biuret, da
positiva la de ninhidrina, e indica que no hay protenas pero s hay
aminocidos libres.

1.1.6.2. REACCION DE BIURET: La reaccin debe su nombre al biuret, una


molcula formada a partir de dos de urea (H2N-CO-NH-CO-NH2),
que es la ms sencilla que da positiva esta reaccin la presencia de
protenas en una mezcla se puede determinar mediante la reaccin
del Biuret. El reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solucin acuosa
alcalina (de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un
compuesto de color violeta, debido a la formacin de un complejo de
coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no
compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos
presentando un mximo de absorcin a 540 nm.

Bioqumica. 2014. Reaccin de Biuret. Tomado de: http://bioquimicamarzo-


julio.blogspot.com.co/2014/07/reaccion-de-biuret.html

1.1.6.3. REACCION DE MILLON: Es un Ensayo qumico que sirve para saber


si existe tirosina en la solucin, si esto es as se genera
un cogulo blanco que por calentamiento pasa al rojo carne. El anillo
fenlico tiene un comportamiento caracterstico frente a las sales de

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Mercurio a pH cido, formando complejos color rojo ladrillo con el
anillo fenlico de la tirosina y las protenas que la contienen.

Universidad de Bogot, Jorge Tadeo Lozano. Laboratorio de Qumica Orgnica.


Ensayos para Reconocimiento de Aminocidos. Tomado de:
http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/organic
a/guia_9_aminoacidos.pdf

1.1.6.4. REACCION DE SAKAGUCHI: Esta prueba es positiva para


compuestos que contengan el grupo guanidinio como la arginina. El
reactivo que se utiliza contiene -naftol e hipoclorito sdico, en medio
alcalino. La aparicin de una coloracin roja es indicativo de una
reaccin positiva.

Universidad de Bogot, Jorge Tadeo Lozano. Laboratorio de Qumica Orgnica.


Ensayos para Reconocimiento de Aminocidos. Tomado de:
http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/organic
a/guia_9_aminoacidos.pdf

PRACTICA 3. BIOQUIMICA DE LAS PROTEINAS

Las protenas son biomolculas de elevado peso molecular (macromolculas) y


presentan una estructura qumica compleja. Sin embargo, cuando se someten a
hidrlisis cida, se descomponen en una serie de compuestos orgnicos sencillos
de bajo peso molecular: los - aminocidos. Este rasgo lo comparten las protenas
con otros tipos de macromolculas: todas son polmeros complejos formados por la
unin de unos pocos monmeros o sillares estructurales de bajo peso molecular,
existen 20 -aminocidos diferentes que forman parte de las protenas.

En las molculas proteicas los sucesivos restos aminocidos se hallan unidos


covalentemente entre s formando largos polmeros no ramificados. El tipo de enlace
que los une recibe el nombre de enlace peptdico. Las cadenas de aminocidos de
las protenas no son polmeros al azar, de longitud indefinida, cada una de ellas
posee una determinada composicin qumica, un peso molecular y una secuencia
ordenada de aminocidos.

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1.1.7. ESTRUCTURA DE LAS PROTEINAS

Estructura primaria: Una cadena polipeptdica consiste en una cadena lineal de


aminocidos unidos por enlaces peptdicos. El primer puesto de la cadena
corresponde al grupo amino terminal, y la estructura primaria es la secuencia en la
que estn situados todos los constituyentes hasta llegar al carboxilo terminal. Esta
secuencia est codificada genticamente.

Existen cadenas polipeptdicas de cualquier nmero de aminocidos, sin que exista


una solucin de continuidad entre pptidos y protenas. Por convencin, se suele
considerar protena aquellos polipptidos con un peso molecular del orden de
10.000 o ms.

Estructura secundaria: La estructura secundaria es la forma en la que la cadena


polipeptdica se pliega en el espacio. En una protena, cada tramo de cadena
polipeptdica tiene distinta estructura secundaria. Existen varias formas definidas de
estructura secundaria, las ms importantes de las cuales son las llamadas hlice a y
hoja plegada b.

Las estructuras secundarias definidas estn mantenidas por puentes de hidrgeno


formados exclusivamente entre los grupos amino y carboxilo que constituyen el
esqueleto de la cadena polipeptdica. Consecuentemente, los parmetros
estructurales (distancias, ngulos) sern iguales, independientemente de la
protena y de los aminocidos que formen la estructura.

Estructura terciaria: La estructura terciaria de la protena es la forma en la que se


organizan en el espacio los diferentes tramos de la cadena polipeptdica, que
pueden tener una estructura secundaria definida, como las hlices u hojas o no
tenerla. La estructura terciaria est mantenida por enlaces inicos y de puentes de
hidrgeno entre las cadenas laterales de los aminocidos, enlaces hidrofbicos y
eventualmente puentes disulfuro.

Estructura cuaternaria: La estructura cuaternaria de una protena es la forma en


la que se asocian las distintas subunidades constituyentes, si es que existen. Es
decir, para poder hablar de estructura cuaternaria es necesario que la protena est
formada por varias subunidades. Como ejemplos de protenas con estructura
cuaternaria se puede considerar la hemoglobina, las inmunoglobulinas o la miosina.

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Miguel Calvo. Qumica de los Alimentos. Estructura de las Protenas. Tomado de:
http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/aminoacids/estructurprot.html

1.1.8. CLASIFICACION DE LAS PROTEINAS

Las protenas se clasifican en dos clases principales atendiendo a su composicin.

Las protenas simples u holoprotenas: Son las que estn compuestas


exclusivamente por aminocidos.

Las protenas conjugadas o heteroprotenas: Son las que estn compuestas por
aminocidos y otra sustancia de naturaleza no proteica que recibe el nombre de
grupo prosttico. Las protenas conjugadas pueden a su vez clasificarse en funcin
de la naturaleza de su grupo prosttico. As, se habla de glucoprotenas, cuando el
grupo prosttico es un glcido, lipoprotenas cuando es un lpido, metal o protenas
cuando es un ion metlico, fosfoprotenas cuando es un grupo fosfato, etc. Otro
criterio de clasificacin de las protenas es la forma tridimensional de su molcula.
Las protenas fibrosas son de forma alargada, generalmente son insolubles en agua
y suelen tener una funcin estructural, mientras que las protenas globulares forman
arrollamientos compactos de forma globular y suelen tener funciones de naturaleza
dinmica (catalticas, de transporte, etc)

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1.1.9. IDENTIFICACION DE LAS PROTEINAS

1.1.9.1. REACCION DE AMINOACIDOS AZUFRADOS: Se pone de


manifiesto por la formacin de un precipitado negruzco de sulfuro de
plomo. Se basa esta reaccin en la separacin mediante un lcali, del
azufre de los aminocidos, el cual al reaccionar con una solucin de
acetato de plomo, forma el sulfuro de plomo.

Escuela europea de Luxemburgo. 6 Secundaria. Seccin Espaola Bio 4.


Protenas. Tomado de:
http://www.euroschool.lu/prof.montilla/ficheroactivi/actividadesbio4_6/PPROTEINA
S

1.1.9.2. METODO DE BRADFORD: Este mtodo se basa en el uso de un


colorante hidrofbico cuyas disoluciones acuosas en presencia de
cido fosfrico tienen un color pardo y que, al encontrarse en el
entorno hidrofbico del interior de una protena, origina un color azul
intenso que se puede medir fcilmente.

Este mtodo depende, pues de la interaccin relativamente


inespecfica entre un colorante hidrofbico y las protenas, por lo que
es relativamente sensible a la presencia de contaminantes tales como
restos de detergente y lquidos orgnicos como el metanol. Su
principal ventaja es que resulta ms rpido y fcil de emplear que otros
mtodos alternativos, y ms sensible que la medida de absorbancia a
280 nm. Para determinar la concentracin de protena total presente
en una muestra se requiere la preparacin de una curva de calibrado
empleando una protena patrn, que generalmente suele ser la
seroalbmina bovina.

Escuela europea de Luxemburgo. 6 Secundaria. Seccin Espaola Bio 4.


Protenas. Tomado de:
http://www.euroschool.lu/prof.montilla/ficheroactivi/actividadesbio4_6/PPROTEINA
S

PRACTICA 4. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS

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Los carbohidratos son molculas formadas por carbono, hidrgeno y oxgeno (C,
H, O) e incluyen algunas de las molculas ms relevantes en la vida de los
organismos, como son la glucosa, que es universalmente utilizada por las clulas
para la obtencin de energa metablica, el glucgeno contenido en el hgado y el
msculo, que forma la reserva de energa ms fcilmente accesible para las clulas
del organismo y la ribosa y desoxirribosa que forman parte de la estructura qumica
de los cidos nucleicos.

Desde el punto de vista qumico, los carbohidratos son polihidroxi aldehdos o


cetonas y sus polmeros y existen en tres categoras principales distinguibles por el
nmero de unidades de azcar que los forman: monosacridos, oligosacridos y
polisacridos. Los polisacridos liberan a la hidrlisis centenares o millares de
monosacridos; mientras que los oligosacridos producen de dos a l0
monosacridos y los monosacridos mismos son las unidades mnimas de los
carbohidratos que ya no se pueden hidrolizar. Se les llama carbohidratos debido a
que su estructura qumica semeja formas hidratadas del carbono y se representan
con la frmula Cn (H2O)n.

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Clasificacin de los carbohidratos

Bioquimica.2012. Carbohidratos. Tomado de:


http://ibcbioquimica.blogspot.com.co/2012/03/carbohidratos.html

1.1.10. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS

1.1.10.1. PRUEBA DE BENEDICT: Identifica azcares reductores (aquellos


que tienen su OH libre del C anomrico), como la lactosa, la glucosa,
la maltosa, y celobiosa. En soluciones alcalinas, pueden reducir el
Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita de la solucin alcalina
como Cu2O de color rojo-naranja. El reactivo de Benedict consta de:
Sulfato cprico; hidrato de sulfato de sodio y o cloruro, Carbonato
Anhidro de Sodio, adems se emplea NaOH para alcalinizar el medio.

El fundamento de esta reaccin radica en que en un medio alcalino,


el ion cprico (otorgado por el sulfato cprico) es capaz de reducirse
por efecto del grupo Aldehdo del azcar (CHO) a su forma de Cu+.
Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo ladrillo
correspondiente al xido cuproso (Cu2O).El medio alcalino facilita que
el azcar est de forma lineal, puesto que el azcar en solucin forma
un anillo de piransico o furansico. Una vez que el azcar est lineal,
su grupo aldehdo puede reaccionar con el ion cprico en solucin.

Wikipedia. Reaccin de Benedict. Tomado de:


https://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Benedict

1.1.10.2. REACCION DE FEHLING: Esta prueba se utiliza para el


reconocimiento de azcares reductores. El poder reductor que pueden
presentar los azcares proviene de su grupo carbonilo, que puede ser
oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el grupo
carbonilo se encuentra combinado no puede presentar este poder
reductor.

Los azcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir


el ion Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo
carbonilo del azcar se oxida a grupo carboxilo. En medio fuertemente
bsico como en nuestro caso el NaOH el ion Cu2+ formara Cu (OH)2

23
insoluble por eso aadimos tartrato sdico potsico que acta como
estabilizador al formar un complejo con el Cu2+.

Bioqumica. 2011. Prueba de Fehling. Tomado de: http://bioquimicamarzo-


julio.blogspot.com.co/2014/06/prueba-de-fehling.html

1.1.10.3. REACCION DE MOLISCH: La prueba de Molish permite detectar la


presencia de hidratos de carbono en una muestra; est basada en la
formacin de furfural o derivados de ste (originado por los cidos
concentrados que provocan una deshidratacin de los azcares) a
partir de los carbohidratos para obtener el furfural que se combina con
el -naftol sulfonato originando un complejo prpura. Es una reaccin
muy sensible puesto que soluciones de glucosa al 0.001% y sacarosa
al 0.0001% dan positiva la prueba. Tambin sirve para el
reconocimiento general de carbohidratos donde polisacridos y
disacridos se hidrolizan formando monosacridos formando un color
prpura violeta.

Todos los glcidos por accin del cido sulfrico concentrado se


deshidratan formando compuestos furfricos (las pentosas dan
furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural). Estos furfurales se
condensan con el reactivo de Molish (solucin alcohlica de alfa-
naftol), dando un producto violeta.

Bioqumica. 2011. Reaccin de Molisch. Tomado de: http://bioquimicamarzo-


julio.blogspot.com.co/2014/06/prueba-de-molisch.html

1.1.10.4. PRUEBA DE TOLLENS: Es un procedimiento de laboratorio para


distinguir un aldehdo de una cetona: se mezcla un agente oxidante
suave con un aldehdo o una cetona desconocida; si el compuesto se
oxida, es un aldehdo, si no ocurre reaccin, es una cetona. El
complejo de plata amoniacal [Ag(NH3)2]+ en solucin bsica es el
agente oxidante utilizado en la prueba de Tollens. Si hay un aldehdo
presente, ste se oxida a la sal del cido RCOO-. Al mismo tiempo, se
produce plata metlica Ag(s) por la reduccin del complejo de plata
amoniacal.

Qumica orgnica. Ensayos Fehling y Tollens. Tomado de:


http://www.quimicaorganica.net/ensayos-fehling-tollens.html

24
1.1.10.5. REACCION DE LUGOL: Es una reaccin qumica usada para
determinar la presencia o alteracin de almidn u otros polisacridos.
Una solucin de yodo-diyodo disuelto en una solucin acuosa
de yoduro de potasio - reacciona con almidn produciendo un
color prpura profundo. Este tipo de prueba puede realizarse con
cualquier producto que contenga almidn como ser patatas, pan o
determinados frutos.

Esta reaccin es el resultado de la formacin de cadenas de


poliyoduro a partir de la reaccin del almidn con el yodo presente en
la solucin de un reactivo llamado Lugol. La amilasa, el componente
del almidn de cadena lineal, forma hlices donde se juntan las
molculas de yodo, formando un color azul oscuro a negro.
La amilopectina, el componente del almidn de cadena ramificada,
forma hlices mucho ms cortas, y las molculas de yodo son
incapaces de juntarse, obtenindose un color entre naranja y amarillo.
Al romperse o hidrolizarse el almidn en unidades ms pequeas de
carbohidrato, el color azul-negro desaparece. En consecuencia, esta
prueba puede determinar el final de una hidrlisis, cuando ya no hay
cambio de color constituyendo una evidencia experimental
ampliamente utilizada.

Wikipedia. Prueba del Yodo. Tomado de:


https://es.wikipedia.org/wiki/Prueba_del_yodo

PRACTICA 5. CARACTERISTICAS DE LOS ACIDOS GRASOS

Los cidos grasos son cidos orgnicos monoenoicos, que se encuentran presentes
en las grasas, raramente libres, y casi siempre esterificando al glicerol y
eventualmente a otros alcoholes. Son generalmente de cadena lineal y tienen un
nmero par de tomos de carbono. La razn de esto es que en el metabolismo de
los eucariotas, las cadenas de cido graso se sintetizan y se degradan mediante la
adicin o eliminacin de unidades de acetato. No obstante, hay excepciones, ya que
se encuentran cidos grasos de nmero impar de tomos de carbono en la leche y
grasa de los rumiantes, procedentes del metabolismo bacteriano del rumen, y
tambin en algunos lpidos de vegetales, que no son utilizados comnmente para la
obtencin de aceites.

25
Miguel Calvo. Qumica de los Alimentos. cidos Grasos. Tomado de:
http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/lipidos/acidosgrasos.html

1.1.11. CLASIFICACION DE LOS ACIDOS GRASOS

cidos grasos saturados: Que slo tienen enlaces simples entre los tomos de
carbono. Esta circunstancia permite la unin entre varias molculas mediante
puentes de hidrgeno. Cuanto mayor sea la cadena (ms carbonos), mayor es la
posibilidad de formacin de puentes de hidrgeno. Por ello, a temperatura ambiente,
los cidos grasos saturados suelen encontrarse en estado slido.

cidos grasos insaturados: Que tienen uno o varios enlaces dobles en su cadena
y sus molculas presentan codos, con cambios de direccin en los lugares donde
aparece un doble enlace. La distancia entre los carbonos no es la misma que la que
hay en los dems enlaces de la molcula. Esto origina que las molculas tengan
ms problemas para formar puentes de hidrgeno.

Clasificacin de los cidos grasos saturados e insaturados

26
Clasificacin segn estructura molecular

Geocities. Lpidos. Tomado de:


http://www.geocities.ws/batxillerat_biologia/lipids.htm

1.1.12. IDENTIFICACION DE ACIDOS GRASOS

1.1.12.1. SOLUBILIDAD EN LIPIDOS: Las grasas son insolubles en agua.


Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequesimas
gotitas formando una emulsin de aspecto lechoso, que es transitoria,
puede seprese en reposo, por reagrupacin de las gotitas de grasa
en una capa que por su menor densidad se sita sobre la de agua.

Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD. Guie de Practica de Laboratorio.


Tomado de: http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201103/2015-
II_BIOQUIMICA_201103/GUIA_LABORATORIO/201103_GUIA_DE_LABORATOR
IO_2015.pdf

1.1.12.2. SAPONIFICACION: Es la hidrlisis con catlisis bsica de grasas y


aceites para producir jabn. Los aceites vegetales y las grasas
animales son triglicridos (esteres de glicerina con cidos grasos), y
al ser tratados con una base fuerte como (NaOH) o (KOH) se

27
saponifican, es decir se produce el jabn (sal del cido graso) y la
glicerina (glicerol).

Grasas y Aceites Vegetales. (2014). Saponificacin. Tomado de: http://grasas-y-


aceites-vegetales.webnode.com.co/aplicaciones/saponificacion/

1.1.12.3. REACCION DE SUDAN III: Es un mtodo utilizado generalmente para


demostrar la presencia de grasas mediante tincin de triglicridos,
aunque tambin tie otros lpidos. Pertenece al grupo
de colorantes indiferentes, que son aquellos que no tienen afinidad
por estructuras cidas o bsicas. Son insolubles en el agua y tien
aquellas sustancias que tienen un poder de disolucin superior al del
lquido empleado para preparar la solucin colorante.

28
2. MATERIALES Y METODOS

Para la realizacin de la practica tendremos encuentra los siguiente materiales y


reactivos dependiendo del mtodo a desarrollar.

MATERIAL CANTIDAD
Tubos de ensayo (140mm x 14mm) 15
Gradilla 2
Pinza para tubos 2
Pipetas Pauster con bulbo 4
Beaker o vasos de precipitados de 500 ml 5
Estufa 1
Cmara de flujo laminas 1
Pipetas de vidrio: 0.5, 5 y 10 ml 4
Pera de goma para pipetas 4
Vidrios reloj grandes
Probeta 100 ml
Baln aforado de 25 ml
Agitados de vidrio
Balanza analtica
Espectrofotmetro
Micropipeta 10 l
Micropipeta 20 - 200 l
Micropipeta 200 1000 l
Puntas de 200 l amarillas para micropipeta 1
Puntas de 1000 l azules para micropipeta 1
Agitados vortex multiple para tubos
Materiales para prctica bioqumica

REACTIVOS PRECAUCION
Reactivo ninhidrina Evitar la inhalacin, contacto con la piel en caso de
presentarse aclarar con abundante agua, evitar
contacto con los ojos. Usar equipo de seguridad para
evitar accidentes.
NaOH Usar equipo de seguridad ya que este es irritante y
corrosivo en los tejidos evitar la inhalacin ya que
causa daos en el tracto respiratorio y el contacto con
los ojos puede producir irritacin de la crnea
ulceraciones, nubosidades y finamente su
desintegracin.

29
Sulfato cprico (CuSO) Nocivo por ingestin, afecta al hgado y riones causa
irritacin a la piel, ojos y tracto respiratorio. Usar
equipo de seguridad.
Acido actico Usar equipo de proteccin personal al manipularlo, en
(CH3COOH) caso de inhalacin llevar a un lugar fresco y bien
ventilado, en caso de salpicadura en los ojos lavar con
abundante agua, quitar ropa y calzado en caso de
derrame, en caso de ingestin enjuagar la boca y
suministre agua fresca, no provocar vomito.
Cloruro de sodio (NaCl) Usar equipo de seguridad y evitar ingestin puede
revocar vmito y acides estomacal, en caso de
contacto con los ojos irritacin y ardor, con el contacto
con la piel causa irritacin e irritacin en las vas
respiratorias.
Albumina Usar equipo de seguridad para evitar contacto directo
con esta.
Acido ntrico (HNO3) Se debe usar el equipo de proteccin personal ya que
este qumico causa irritacin, quemaduras y
ulceracin de los tejidos con los que este en contacto.
Acetato de Plomo Evitar la inhalacin provoca tos, dolor de garganta,
inflamacin de los bronquios, destruccin de las
mucosas nasales, al contacto con los ojos provoca
irritacin e inflamacin de la conjuntiva, visin
borrosa, en la piel produce enrojecimiento,
resequedad y alergia.
Naftol Evitar la inhalacin y que es destructivo para los
tejidos de las membranas mucosas y las vas
respiratorias superiores, en los ojos provoca
quemaduras, es toxico si se absorbe por la piel
provoca quemaduras.
Hipoclorito de sodio Usar guantes para su manipulacin, emplearlo en
zonas ventiladas, en los ojos causa irritacin.
Acido Sulfrico (H2SO) Evitar contacto con la piel ya que es altamente
corrosivo puede causar dao en los riones y
pulmones por inhalacin, puede causar quemaduras
en la boca y garganta e irritacin en los ojos.
Reactivo de Millon No inhalar los vapores, usar guates y gafas
apropiadas, irrita los ojos y la piel.
Fenol Evitar contacto con la pie en caso de derrame
quedarse inmediatamente la ropa y los zapatos
contaminados, en caso de contacto con los ojos lavar
con abundante agua.
Acido fosfrico Evitar la inhalacin, en caso de contacto con los ojos
lavar con abundante agua, si se ingiere se debe tomar
abundante agua para diluir el cido.

30
Etanol Puede producir resequedad en la piel, enrojecimiento
en contacto con los ojos, por inhalacin puede
producir tos, dolor de garganta, por ingestin nuseas
y dolor abdominal.
Reactivos para prctica bioqumica

31
RESULTADOS

PRACTICA 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO

Antes de iniciar la prctica de bioqumica, se socializaron las normas de


bioseguridad para el uso del laboratorio de bioqumica, al igual que las normas para
el uso de sustancias qumicas, las normas para la utilizacin de los instrumentos de
igual forma las normas de emergencia.

2.1.1. NORMAS PERSONALES:

Acudir con vestimenta cmoda y apropiada (jean, blusa manga larga).


Usar calzado cerrado que cubra completamente el pie.
Portar la bata durante toda la practica dentro del laboratorio.
No ingerir alimentos, ni masticar chicle dentro del laboratorio, al igual que evitar
tocar partes del cuerpo y llevar las manos a la boca o introducir lapiceros en la
boca, nariz y odos.
Asistir puntualmente en la fecha y hora programada, entrar a las instalaciones
del laboratorio cuando el docente este.

2.1.2. NORMAS DE UTILIZACION DE PRODUCTOS QUIMICOS

Si se realiza una reaccin qumica utilizar recipientes adecuados a la cantidad


que se va a usar.
No usa recipientes de alimentos para contener productos qumicos, rotular los
recipientes para tener informacin sobre la sustancia contenida.
No utilice vidrios agrietados, no utilizar jeringas para pipetear o aspirar con la
boca las pipetas de vidrio.
Mantener en funcionamiento los extractores de aire, utilizar las campaas
extractoras siempre que sean posible.
Si se requiere detectar el olor de una sustancia no hacerlo directamente
colocando la cara sobre el recipiente, utilizar la mano abierta como pantalla, los
frascos deben cerrarse despus de su uso.
Para realizar diluciones con cidos, se debe verter el cido sobre el agua no al
contrario.

32
No devolver a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados y
no se deben sacar sustancias qumicas del laboratorio sin autorizacin.

2.1.3. NORMAS PARA LA UTILIZACION DE INSTRUMENTOS

Utilizar los recipientes adecuados para determinar el peso de los productos


qumicos con balanza.
Mantener limpio y seco el lugar en donde van a estar los instrumentos elctricos.
Leer las instrucciones de uso de los instrumentos.
Revisar el material de vidrio para comprobar fisuras antes de usarlos.

2.1.4. NORMAS DE EMERGENCIA

Si se tuviera que evacuar el laboratorio se debe:

Cerrar la llave del gas


Salir de forma ordenada siguiendo las instrucciones del docente.

Es importante que al iniciar la prctica localicemos los equipos de emergencia del


laboratorio como lo son:

Duchas y lavaojos
Botiqun
Absorbente para derrames
Alarma de emergencia
Salida de emergencia
Recipiente para el vidrio roto

A continuacin de acuerdo a la gua de laboratorio daremos respuesta a las


siguientes preguntas

A. Realiza la identificacin de los equipos de emergencia dentro del


laboratorio al igual que las sealizaciones con las que cuenta el mismo.

33
PICTOGRAMA SIGNIFICADO

Este pictograma
significa que en este
espacio debemos de
tener precaucin y
usar tapabocas para
evitar la inhalacin de
sustancias que
pongan en peligro
nuestra vida.

Cuando encontramos
este pictograma
significa que
debemos usar gafas
para proteger
SEALIZACION
nuestros ojos de
cualquier agente que
pueda afectarlos

Este pictograma
significa que
debemos usar
guantes, tapabocas
y bata para evitar
accidentes en el
laboratorio.

34
Este pictograma nos
informa sobre cul es
la salida que
debemos tomar en
caso de que se
presente un
accidente.

Este elemento se
utiliza en caso de que
se presente algn
accidente dentro del
laboratorio, es decir
si se presenta un
incendio podemos
utilizar este elemento
para extinguir las
llamas.

INSTRUMENTOS

Estos elementos son


el botiqun de
emergencia y el
botiqun absorbente
para derrames.

35
Estos elementos son
indispensables en
caso de que se
presente un
accidente y se
generen ruptura de
vidrios, al igual que
para desechar los
elementos usados en
la prctica.

Este elemento se
utiliza para realizar la
extraccin de los
olores qumicos y as
evitar posibles
accidentes por la
inhalacin de los
mismos

Sealizacin y elementos del laboratorio de bioqumica UNAD

B. Mencionaremos los reactivos usados en la prctica y su respectiva


formula qumica.

REACTIVO FORMULA QUMICA


Ninhidrina C9H6O4
Reactivo de tollens [Ag(NH3)2]NO3
Reactivo de benedict CuSO4 . 5H2O + Na2CO3 + H2O
Reactivo de lugol I2
Reactivo de fehling CuSO4
Tirosina C9H11NO3
Reactivo de molish (CH2O)n
Amoniaco NH4OH
Biuret CuSO4.5H2O
Reactivo de milln (Hg(NO3)2)
Acetato de plomo Pb(C2H3O2)2
Hidrxido de sodio NaOH
Acido sulfrico H2SO4
36
Sudan III C22H16N4O
Glucosa C6H12O6
Glicina C2H5NO2
Lisina C6H14N2O2
Reactivos y formula qumica.

C. Describe una propiedad fsica de las sustancias

REACTIVO PROPIEDAD FISICA


Ninhidrina Es un slido; pH: 4,6 5.0 a 10 g/l;
densidad 680 kg/m3; solubilidad en
agua 20 g/l a 20C
Reactivo de tollens
Reactivo de benedict Es un lquido; color: azul; olor: inodoro;
densidad (20/4): 1,153; solubilidad:
miscible con agua.
Reactivo de lugol Es un lquido; color: incoloro; pH: 6.8;
densidad: 1,01.
Reactivo de fehling Es un lquido; color: azul; olor:
caracterstico; densidad: 1,215 kg.
Tirosina Es un slido; color blanco; punto de
fusin 318C; densidad >1450 mg/kg
Reactivo de molish
Amoniaco Es un lquido; color transparente;
presin de vapor 500 hPa; densidad de
0,91
Biuret Es un lquido; color azul; densidad
(20/4): 1,059; solubilidad: miscible con
agua.
Reactivo de milln Es un lquido transparente e incoloro;
densidad (20/4): 1,358; solubilidad:
miscible con agua.
Acetato de plomo Polvo cristalino; color blanco; insoluble
en agua; pH 5,5 6,5; densidad 2.55;
peso molecular 379,35 g/mol.
Hidrxido de sodio Punto de ebullicin 1388C; punto de
fusin 318,4C; densidad 2,13g/ml;
soluble en agua, alcoholes y glicerol.
Acido sulfrico Liquido aceitoso incoloro o caf; punto
de ebullicin 274(100%), 280 (95%);
densidad 3,4; viscosidad 21/25C; pH
0,3; soluble en agua y alcohol etlico.

37
Sudan III Solido; color marrn rojizo; puno de
fusin 199; insoluble.
Glucosa Solido; incoloro; punto de fusin 146C;
densidad 630 kg/m3; temperatura de
ignicin 500C.
Glicina Solido cristalino; color blanco; punto de
fusion 240C; densidad 1,000 kg/m3;
pH 5,9 6,4.
Lisina Polvo; color blanco con amarillo; punto
de congelacin / fusin 215C; peso
molecular 146,1; soluble en agua.
Reactivos y sus propiedades fsicas.

D. Mencione posibles riesgos que representa la sustancia para la salud

REACTIVO RIESGO
Ninhidrina Por inhalacin produce insuficiencia
respiratoria e irritacin de las mucosas.
Contacto con la piel irritacin cutnea.
Contacto con los ojos irritacin ocular
grave.
Por ingestin irritacin de las mucosas
de la boca, garganta, esfago y tracto
esfago-intestinal.
Reactivo de Benedict La ingestin de una pequea cantidad
produce un riego grave para la salud, en
caso de que ocurra se debe enjuagar la
boca, no inducir el vmito y llamar al
centro de informacin toxicolgico o a
un mdico. Adems produce irritacin
ocular grave.
Reactivo de Lugol Contacto con la piel produce irritacin
local.
Por ingestin conduce a trastornos
gstricos e intestinales.
Reactivo de fehling Irritacin ocular grave e irritacin
cutnea.
Tirosina Irritacin en ojos y piel por contacto,
irritacin de las membranas mucosas y
del tracto respiratorio.
Amoniaco Provoca quemaduras graves en la piel
y lesiones oculares graves, puede ser
letal por ingestin.

38
Biuret Irritacin ocular grave e irritacin
cutnea.
Reactivo de milln Irritacin ocular grave e irritacin
cutnea.
Acetato de plomo Por inhalacin produce tos, dolor de
garganta, asfixia, inflamacin de los
bronquios, destruccin de las mucosas
nasales y las vas respiratorias.
Contacto con los ojos produce
enrojecimiento, dolor , visin borrosa,
conjuntivitis y ceguera permanente
Contacto con la piel produce
enrojecimiento, dolor, resequedad de la
piel, dermatitis y alergias.
Ingestin conlleva a calambres
abdominales, estreimiento,
convulsiones, dolor de cabeza,
nuseas y vomito.
Hidrxido de sodio Inhalacin produce irritacin leve y
dao grave del tracto respiratorio
superior.
Contacto con los ojos es corrosivo
causa irritacin, quemaduras que
pueden terminar en ceguera.
Contacto con la piel es corrosivo y
produce irritacin, quemaduras graves
y cicatrices.
Ingestin corrosivo produce
quemaduras severas en la boca,
garganta y estmago.
Acido sulfrico Inhalacin produce quemaduras,
dificultad respiratoria, tos y sofocacin.
Ingestin es corrosivo causa
quemaduras severas de boca y
garganta, perforacin del estmago y
esfago, dificultad para comer,
nauseas, sed, vomito con sangre y
diarrea.
Contacto con la piel causa quemaduras
severas, profundas y dolorosas.
Contacto con los ojos es corrosivo
causa irritacin, lesiones irreversibles y
puede causar ceguera.
Sudan III Produce irritacin al contacto con la piel
y los ojos.

39
Glucosa Irritacin en los ojos y puede producir
disturbios gastrointestinales por
ingestin de grandes cantidades.
Glicina En caso de inhalacin puede producir
tos, ahogo e irritacin.
Lisina Irritacin en los ojos y en la piel.
Riegos de los reactivos usados

E. Indique cual es el equipo o la vestimenta de seguridad necesaria para


manipular la sustancia.

REACTIVO VESTIMENTA DE SEGURIDAD


Ninhidrina Gafas de seguridad
Traje protector
Guantes de caucho nitrilo
Mascarilla
Al finalizar sustituir la ropa
contaminada, lavar cara y manos al
terminar el trabajo.
Reactivo de Benedict Evite la exposicin innecesaria
Mascarilla homologada
Llevar guantes
Gafas qumicas o de seguridad
No tomar, beber, fumar durante su
utilizacin.
Reactivo de Lugol Evite la exposicin innecesaria
Mascarilla homologada
Llevar guantes
Gafas qumicas o de seguridad
No tomar, beber, fumar durante su
utilizacin.
Reactivo de fehling Mascarilla
Guantes
Ripa adecuada
Procure una buena ventilacin para
evitar la formacin de vapores
Tirosina Aparato de respiracin autnomo
Gafas de seguridad qumica
Bata
Guantes fuertes de goma
Amoniaco Mascarilla
Guantes adecuados
Gafas
Vestimenta de proteccin

40
Procure una buena ventilacin
Biuret Llevar guantes
Gafas
Mascarilla de proteccin
Usar prendas adecuadas
Lavarse las manos tras la manipulacin
Procure una buena ventilacin para
evitar vapores
Reactivo de milln Usar guantes apropiados
Gafas
Tapabocas o mascarilla
Bata
Acetato de plomo Traje de proteccin
Mascarilla
Guantes
Gafas protectoras de nitrilo
Botas
Hidrxido de sodio Lentes de seguridad
Bata
Guantes de nitrilo
Siempre debe manejarse en una
campana y no debe utilizarse lentes de
contacto al trabajar con este
compuesto.
Acido sulfrico Gafas de seguridad
Guantes
Botas de caucho
Ropa protectora
Respirador con filtro para vapores
cidos.
Sudan III Gafas de proteccin con un protector en
los costados
Guantes de proteccin qumica
Bata
Glucosa Mascarilla en presencia de polvo
Gafas
Guantes de nitrilo
Sustituir la ropa contaminada lavar las
manos al terminar el trabajo.
Glicina Proteccin para los ojos
Guantes
Ropa adecuada
No se requiere de proteccin
respiratoria.
Lisina Lentes de seguridad
Guates de proteccin

41
Ropa adecuada
Mascarilla
Vestimenta de seguridad para las sustancias usadas

F. Resuma la informacin obtenida en el rea de reactividad del smbolo


de diamante

REACTIVO VESTIMENTA DE SEGURIDAD


Ninhidrina Producto explosivo
Reaccin violenta con oxidantes fuertes
y cidos fuertes
Descomposicin trmica a 250C, se
descompone con la exposicin a la luz
Reactivo de Benedict Producto muy reactivo
Toxicidad aguda categora 4
Irritacin ocular categora 2A
Peligroso para el medio ambiente
categora 2
Peligroso en contacto con cidos ya
que libera gases txicos
Reactivo de Lugol Peligroso para el medio ambiente
categora 3
Reactivo de fehling Irritacin cutnea categora 2
Irritacin ocular categora 2A
Peligroso para el medio ambiente
acutico peligro agudo categora 2 y
crnico categora 2
Tirosina Peligro para la salud produce irritacin
cutnea, irritacin ocular grave e
irritacin de las vas respiratorias
La descomposicin por calor produce
humos txicos.
Amoniaco Gas inflamable categora 2
Explosivo en caso de calentamiento
Toxico en caso de inhalacin categora
3
Corrosivo cutneo categora 1 y 1B
Toxico para los organismos acuticos
aguados categora 1 y crnicos
categora 2
Biuret Peligroso para la salud produce
irritacin cutnea categora 2 e irritacin
ocular grave categora 2A

42
Reactivo de milln Peligroso para la salud produce
irritacin ocular grave e irritacin
cutnea
Toxico por inhalacin
Toxico para organismos acuticos
Acetato de plomo Peligroso para la salud en caso de
ingestin
Estable bajo condiciones de
manipulacin y almacenamiento
recomendadas
Toxico para ecosistemas acuticos
Hidrxido de sodio Altamente corrosivo en los tejidos
Acido sulfrico Vapores txicos
Altamente corrosivo
Peligroso para la salud puede producir
cncer
Altamente reactivo con agua
Sudan III Esta sustancia no rene los criterios
para ser clasificada como peligrosa.
Glucosa Producto no peligroso
Peligro para la salud clasificacin 1.
Inflamacin y reactividad clasificacin
0.
Toxico para los peces.
Glicina Sustancia no peligrosa
Lisina Sustancia no peligrosa
Clasificacin 0 para salud,
inflamabilidad y reactividad.

43
PRACTICA 2. PROPIEDADES BIOQUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS

2.1.5. REACCION CON LA NINHIDRINA

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo


con 1.5 mL de Preparar los tubos de ensayo. Agregar 2 ml de solucin de
1 ninhidrina
Glicina1% ninhidrina (0.3%)
con 1.5 mL de Agregue a cada tubo de ensayo
2 Ninhidrina
Albmina1% 1.5mL de la solucin
con 1.5 mL de correspondiente.
3 Ninhidrina
Tirosina 1%
con 1.5 mL de 2 ml de solucin (0.3%) de
4 Ninhidrina
Glicina 1% ninhidrina a cada tubo.
con 1.5 mL de
5 ninhidrina
Triptfano 1% Tubos de ensayo en un bao de
agua hirviente por unos 10 1.5 ml de solucin respectiva
minutos. +
con 1.5 mL de
6 Ninhidrina Bao de agua hirviente por
Leucina al 1%
Observar y tomar apuntes de los 10 minutos.
cambios.
Procedimiento reaccin con Ninhidrina

Esta reaccin forma complejos coloreados con la Ninhidrina, violeta azuloso en la


mayora de los aminocidos cuyo grupo amino es primario, amarillo para la prolina
e hidroxiprolina y caf para la asparangina.

Las reacciones pueden ser:


Incoloro: No es protena ni aminocido.
Violeta o amarillo: Protena, polipptido o aminocido
Rojo o amarillo fuerte: Hidroxiprolina o Prolina.

Reaccin de Ninhidrina:

44
Permite identificar la presencia de protenas y aminocidos libres. El grupo -
amino de los aminocidos al reaccionar con la ninhidrina (hidrato de
tricetohidrindeno) forma complejos de color azul-violeta, amarillo para la prolina
e hidroxiprolina y caf para la asparraguina que tiene un grupo amido en la
cadena lateral.

Materiales y mtodos

Se tom una muestra de glicina, albumina, tirosina, lisina y se disolvi en 20 ml


de agua destilada y se coloc cada muestra en un vaso precipitado; luego se
coloc 1.5 ml de cada muestra en distintos tubos de ensayo. Se adiciono 2ml de
ninhidrina (0,3) a cada tubo y se calent a bao de agua hirviente por 10 minutos

Resultados

Fue una prueba positiva para la prueba de glicina y lisina debido a que esta
presenta un grupo amino que reacciona con la ninhidrina, el cual es un agente
oxidante fuerte que efecta la descarboxilacin oxidativa de los aminocidos, y
forman dixido de carbono, amonaco y un aldehdo que contiene un tomo de
carbono menos que el compuesto original

2.1.6. REACCION DE BIURET

45
Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo
con 5 ml de NaOH 2,5N
1 solucin de + Preparar los tubos de ensayo. 1 ml de
Leucina al 1% sulfato cprico NaOH 2,5N
con 1.5 mL NaOH 2,5N Agregue a cada tubo de ensayo +
2 de + 1 ml de 3 gotas de solucin de
Albmina1% sulfato cprico NaOH 2,5N de la solucin sulfato cprico al 1%
con 1.5 mL NaOH 2,5N correspondiente.
3 de Tirosina +
1% sulfato cprico Agregue 3 gotas de solucin de
NaOH 2,5N sulfato cprico al 1% a cada
con 1.5 mL
4 + tubo de ensayo.
de Glicina 1%
sulfato cprico
Agite cada tubo de ensayo
con 1.5 mL NaOH 2,5N

5 de Triptfano +
Observar y tomar apuntes de los
1% sulfato cprico 5ml de solucin respectiva
cambios.
Procedimiento reaccin de Biuret

Esta reaccin forma complejos de color violeta cuya intensidad depende de la


concentracin de la protena.

Azul o amarillo: Aminocidos


Violeta: Protenas y Polipptidos

46
Reaccin De Biuret

Permite determinar la presencia de enlaces peptdicos en una muestra debido a


la formacin de un compuesto de coordinacin de color violeta. El reactivo de
Biuret consiste en CuSO4 en solucin acuosa alcalina

Materiales y mtodos

Se tom una muestra de glicina, albumina, tirosina, lisina y se disolvi en 20 ml


de agua destilada y se coloc cada muestra en un vaso precipitado; luego se
coloc 1.5 ml de cada muestra en distintos tubos de ensayo. Se adiciono 1 ml
Biuret en cada tubo de ensayo, luego se procede a esperar resultados

Resultados

Los resultados obtenidos indican que la albumina presenta enlaces pptidos por
lo que se observ un color violeta. Las dems muestras como la lisina, tirosina y
glicina al no tener enlaces pptidos sus resultados fueron negativos ya que
dieron una coloracin azul porque los enlaces pptidos fueron eliminados.

2.1.7. REACCION XANTOPROTEICA

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo


HNO3 Agregue, 0,5 ml de HNO3
con 1.5 ml de
+ Preparar los tubos de ensayo. +
1 solucin de
NaOH
Triptfano 1%

47
HNO3 Agregue, 0,5 ml de HNO3
con 1.5 mL de + concentrado en cada tubo, en la
2
Albmina1% NaOH campana de extraccin.

HNO3 Retire los tubos del bao y djelos
con 1.5 mL de + enfriar.
3
Metionina 1% NaOH
Agregue lentamente 1 ml de
Amoniaco (NH4OH) concentrado en 1.5 ml de solucin respectiva
la campana de extraccin o 1.5 mL. +
de NaOH al 40%, Bao de agua hirviente por 10
HNO3 minutos.
con 1.5 mL de + Observar y tomar apuntes de los +
4
Fenilalanina 1% NaOH cambios. Agregue 1 ml de Amoniaco
(NH4OH) 1.5 mL de NaOH al
40%.
+
observe el cambio de color
Procedimiento reaccin Xantoproteica

Forma nitroderivados de color amarillo o anaranjado permitiendo reconocer la


presencia de Tirosina, Fenilalanina y Triptfano.

Incoloro: Otros aminocidos


Amarillo, naranja o verde: Tirosina, fenilalanina o triptfano.

Reaccin Xantoproteica

Esta prueba caracteriza a los aminocidos aromticos. Los aminocidos


reaccionan con cido ntrico concentrado y forman nitrocompuestos de color
amarillo o anaranjado por lo cual esta reaccin permite reconocer la presencia de
Tirosina, Fenilalanina y Triptfano.

48
Materiales y mtodos

Se tom una muestra de glicina, albumina, tirosina, lisina y se disolvi en 20 ml


de agua destilada y se coloc cada muestra en un vaso precipitado; luego se
coloc 1.5 ml de cada muestra en distintos tubos de ensayo. Se adiciono 0.5 ml
de cido ntrico (HNO), luego se colocan los tubos en bao Mara, y toman
diferentes coloraciones por ejemplo la albumina se coloca verde viche, la lisina
queda transparente, la tirosina verde oscuro y la glicina transparente se dejan
enfriar y se adiciona lentamente 1ml de amoniaco (NHOH) concentrado en la
campana de extraccin o 1.5 ml. de NaOH al 40%, a cada tubo, se procede a
esperar resultados y observar cmo cambian de color las muestras.

Resultados

Revisando la muestra se evidencio que la muestra de albumina dio positiva ya


que presento una coloracin amarilla ya que al reaccionar con HNO y las gotas
de solucin al 40% de Amoniaco
(NH4OH) reaccionaron de forma correcta y el resultado obtenido fue una muestra
de coloracin amarilla, las dems muestras como la lisina y glisina no
presentaron tincin alguna y la muestra de tirosina al no tener en su estructura
anillos aromticos no debe presentar la coloracin amarilla

49
2.1.8. REACCION DE MILLON

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo


con 1.5 ml Reactivo de Agregue 15 gotas del Reactivo
de solucin Milln Preparar los tubos de ensayo. de Milln
1
de Tirosina + +
1% sulfato cprico agregue 15 gotas del Reactivo de
Reactivo de Milln a cada tubo de ensayo
con 1.5 mL
2 de
Milln
+ Agregue 3 gotas de solucin de
Albmina1%
sulfato cprico sulfato cprico al 1% a cada tubo de
Reactivo de ensayo.
con 1.5 mL
3 de Leucina
Milln
+ Retire con cuidado los tubos de
1%
sulfato cprico ensayo del bao de Mara y
colquelos en la gradilla. 1.5 ml de solucin respectiva
+
Observar y tomar apuntes de los Bao de agua hirviente por 10
cambios. minutos
+
Dejar enfriar.

Procedimiento reaccin de Millon

Forma complejos de color rojo ladrillo debido al anillo fenlico de la tirosina y las
protenas que la contienen.

Rojo: Tirosina
Incoloro: Fenilalanina

Reaccin De Millon

Permite identificar la presencia de tirosina en una muestra. La mezcla de nitrito


y nitrato mercricos y de cido ntrico, (reactivo de Milln) reacciona con este
aminocido formando una sal de color rojo.

Materiales y mtodos

Se tom una muestra de solucin de glicina al 1%, solucin de albumina al 1%,


solucin de tirosina al 1%, solucin de al 1% y se disolvi en 20 ml de agua
destilada y se coloc cada muestra en un vaso precipitado; luego se coloc 1.5
ml de cada muestra en distintos tubos de ensayo. Se agregaron 15 gotas del
reactivo de milln, luego se coloca en bao de agua hirviente por 10 minutos al
terminar los 10 minutos se deja enfriar y se observan los resultados

50
Resultados

Se observ que la muestra de tirosina dio positivo Cuando Milln se adiciona a


las protenas que tienen tirosina, stas forman un precipitado blanco, debido a la
presencia del cido mineral fuerte que las desnaturaliza. Al calentar se obtiene
un color rojo ladrillo, debido a la mercurializacin, en posicin, del anillo aromtico
de la tirosina.

2.1.9. REACCION DE SAKAGUCHI

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo


Hidrxido de Enfre en bao de hielo por 10
Sodio (NaOH Preparar los tubos de ensayo. minutos.
con 5 mL de + +
1 solucin de alfa-naftol Enfre en bao de hielo por 10 minutos. 1 ml de Hidrxido de Sodio
Arginin4.a 1% + (NaOH) al 5%
hipoclorito de 1 ml de Hidrxido de Sodio (NaOH) al 5% +
Sodio a cada tubo de ensayo. Dejar enfriar 10 minutos.
Hidrxido de +
Sodio (NaOH Dejar enfriar 10 minutos. 2 gotas de alfa-naftol al 1%.
con 1.5 mL + +
2 de alfa-naftol Agregue con un gotero, 2 gotas de alfa- 2 gotas de hipoclorito de Sodio al
Albmina1% + naftol al 1% a cada tubo de ensayo. 10%.
hipoclorito de
Sodio Agregue 2 gotas de hipoclorito de Sodio al
Hidrxido de 10% a cada tubo.
Sodio (NaOH
Con 1.5 mL + Observar y tomar apuntes de los cambios.
3 de protena alfa-naftol
de trigo 1%. +
hipoclorito de
Sodio

51
Hidrxido de
Sodio (NaOH
+
con 1.5 mL
4 de Leucina
alfa-naftol
+
hipoclorito de
Sodio
5 ml de solucin respectiva

Procedimiento reaccin de Sakaguchi

Forma complejos coloreados rosado o rojos ya que la arginina reacciona con la


solucin de alfa naftol en presencia de bromo en medio alcalino.

Incolora: Otros aminocidos


Rojo: Arginina
Negro o gris: Cistena, cistina, metionina.

Al terminar de realizar las reacciones para determinar los aminocidos se contina


con la prctica 3 la cual consiste en la identificacin de las protenas, para las cuales
tambin se emplean reacciones las cuales mencionaremos a continuacin:

52
Reaccion De Sakaguchi

Esta prueba es positiva para compuestos que contengan el grupo guanidinio


como la arginina. El reactivo que se utiliza contiene -naftol e hipoclorito sdico,
en medio alcalino. La aparicin de una coloracin roja es indicativo de una
reaccin positiva

Materiales y mtodos

Se tom una muestra de solucin de glicina al 1%, solucin de albumina al 1%,


solucin de tirosina al 1%, solucin de al 1% y se disolvi en 20 ml de agua
destilada y se coloc cada muestra en un vaso precipitado; luego se coloc 1.5
ml de cada muestra en distintos tubos de ensayo, se agregan 0.5 ml de sakaguchi
, luego se procede a colocar en hielo por 10 minutos, observar y tomar apuntes
a los cambios

Resultados

En las muestras observadas se obtuvo negativo para todas muestras ya que la


coloracin no fue roja o rosada la cual es la que indica si la muestra es positiva,
al colocarlas en el hielo tornaron coloraciones muy oscuras

53
B. Proponga de acuerdo a la pruebas una clasificacin de los aminocidos
utilizados y relacione la importancia de la aplicacin de algunas de
estas pruebas aplicadas a otras reas del conocimiento como:
microbiologa, qumica de alimentos entre otras.

La Hidrlisis del Hipurato:

Fundamento:

54
Detectar la capacidad de la bacteria de hidrolizar el hipurato mediante la enzima
hipuricasa.
La hidrlisis del hipurato dar como resultado glicina, que reaccionar con la
Ninhidrina provocando un cambio de color. Esta prueba se utiliza en la
identificacin de Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, Gardnerella
vaginalis y Streptococcus agalactiae. (Ana Fernndez Olmos, 2010)

Mtodo:

Realizar una suspensin bacteriana en 0.01 ml de agua destilada


Aadir un disco de hipurato
Incubar durante 2 horas a 37C
Revelar la suspensin aadiendo II gotas de Ninhidrina para detectar la
formacin de glicina
Incubar durante 30 minutos a 37C

Interpretacin de los resultados:

La aparicin de un color prpura intenso pondr de manifiesto la presencia de


glicina, dando como resultado una prueba positiva.
Si el hipurato no se hidroliza a glicina, tras la adicin del reactivo de Ninhidrina
no habr cambio de color dando como resultado una prueba negativa. (CHACN,
2012)

Reaccin de Biuret en

Evaluacin del mtodo del Biuret para la cuantificacin de las protenas


totales en el lquido cefalorraqudeo

Se evalu un mtodo para la determinacin de las protenas totales en el lquido


cefalorraqudeo, basado en la reaccin del Biuret, modificando el reactivo para
su cuantificacin en el suero. La prueba dio un coeficiente de variacin
intracorrida de 1,4% a 2,1% para niveles de 0,59 g/1 a 2,62 g/1. Esta variacin
es menor que la encontrada en otros mtodos, incluyendo el turbidimtrico. La
linealidad del mtodo se conserva hasta una concentracin de 7,0 g/1. El mtodo
evaluado (y) correlacion bien con otro procedimiento basado tambin en el
principio de biuret (x): r= 0,9953; y - 0,0645 + 1 ,0428x; n = 51. La tcnica
demostr ser rpida y sencilla, lo cual la hace aplicable a los exmenes de
emergencia. Palabras clave: protenas - lquido cefalorraqudeo - biuret -
espectrofotometra - trastornos del sistema nervioso central. (Quesada, s.f.)

Determinacin de nitrgeno:

Es una tcnica que permite determinar indirectamente la masa de una poblacin


bacteriana. Existen distintas tcnicas para determinar la cantidad de nitrgeno

55
que contiene una muestra con relacin al compuesto que se quiera determinar.
Puede analizarse el nitrgeno no proteico mediante el NO2-, NO3-, NH4+, el
nitrgeno proteico mediante absorcin en UV, Reaccin de Biuret, Reaccin de
Lowry, o el nitrgeno total mediante la Digestin de Kjeldah. (Bacteriologa, s.f.).

C. Para el siguiente pentapeptido, diga cuales pruebas y porque sern


positivas. (ALA - VAL- GLY-GLU-LYS)

Reaccin Alanina Valina Glicina Glutamito Lisina


ALA VAL GLY GLU LYS
NINHIDRINA + - + - +
BIURET + - - - -
MILLON + + - - -
XANTOPROTEICA + - - - -
SACAGUCHI + - - - -

Reaccin de Ninhidrina

La Ninhidrina es un poderoso agente y reactivo comn para visualizar las bandas


de separacin de aminocidos por cromatografa o electroforesis, tambin es
utilizada con fines cuantitativos para la determinacin de aminocidos.
Reacciona con todos los aminocidos alfa cuyo pH se encuentra entre 4 y 8, dando
una coloracin que vara de azul a violeta intenso. Este producto colorido (llamado
prpura de Ruhemann) se estabiliza por resonancia, la coloracin producida por la
Ninhidrina es independiente de la coloracin original del aminocido
Esta prueba es positiva tanto para protenas como para aminocidos. en aquellos
casos donde no da positiva la prueba de biuret y da positiva la de Ninhidrina, indica
que no hay protenas, pero si hay aminocidos libres. (Dapnhe, 2016)

Reaccin de Biuret

Permite detectar los oligopptidos de tres y ms aminocidos. La prueba consiste


en la formacin de un complejo entre al menos dos enlaces peptdicos consecutivos
con un ion cprico Cu(II) en medio alcalino. El complejo es de color violeta y la
intensidad depende del nmero de enlaces presentes.

56
El Cobre (II) se aade en forma de Sulfato de Cobre. Dado que las soluciones de
Sulfato de Cobre tiene color azul, la cantidad de reactivo aadida debe ser
controlada para evitar positivos falsos. El nombre se proviene del compuesto Biurea
(NH2-CO-NH-CO-NH2) el cual da positiva la prueba. Mediante esta reaccin es
posible seguir el proceso de hidrlisis proteica, la reaccin ser negativa cuando la
hidrlisis sea completa.

La Reaccin Xantoproteica

Algunos aminocidos como Fenilalanina, Tirosina y Triptofano, tienen anillo


aromticos derivados de benceno y por ello tiene las propiedades qumicas del
benceno y sus derivados. Una de estas propiedades es la reaccin de nitracin del
anillo bencnico con cido Ntrico concentrado. Los anillos Benceno de Tirosina y
Triptofano estn activados y reaccionan fcilmente, mientras que el benceno de la
Fenilalanina no tiene sustituyentes que lo activan y reacciona con ms dificultad

El nombre de la reaccin se deriva del griego xantos, que significa amarillo, que es
el color caracterstico de la reaccin positiva. El color amarillo se intensifica en
medio alcalino. Esta reaccin es la que provoca el color amarillo cuando se salpica
la piel con cido Ntrico concentrado, las protenas de la piel tienen Tirosina y
Triptfano, los cuales al nitrarse, le dan a la piel un color amarillo caracterstico

Reaccin de Millon

57
Millon. Es especfica para el grupo fenlico por lo tanto, la dan positiva todas las
sustancias que poseen esta funcin, como la Tirosina y todas las protenas que
contengan Tirosina. El primer paso de la reaccin de Millon consiste en la nitracin
del anillo fenlico de la Tirosina, por el cido Ntrico del reactivo. La Tirosina nitrada
forma complejos con los iones Mercurioso Hg(I) y Mercrico Hg(II) del reactivo
produciendo un precipitado rojo o una solucin roja, ambos resultados positivos.

Algunas protenas pueden formar el precipitado rojo desde el inicio, mientras que
otras primero forman un precipitado blanco, que se debe calentar para dar el color
rojo indicativo de la presencia de Tirosina. Cualquier sustancia con un grupo fenlico
dar positiva la reaccin de Millon y puede interferir con la deteccin de Tirosina
(Vargas, s.f.)

Reaccin De Sakaguchi

Est reaccin es especfica para la identificacin del grupo guanidino. Se


fundamenta en la condensacin del grupo guanidino con l a-naftol en un medio
altamente oxidante, con la posterior produccin de un compuesto de color rojo
intenso. Esta prueba da positiva frente a la arginina as como a las protenas que
contienen este aminocido. (Prcticas de Bioqumica, s.f.)

D. Defina los siguientes trminos:

58
Aminocidos

Un aminocido es una molcula orgnica con un grupo amino(-NH2) y un grupo


carboxilo (-COOH).1 Los aminocidos ms frecuentes y de mayor inters son
aquellos que forman parte de las protenas. Dos aminocidos se combinan en
una reaccin de condensacin entre el grupo amino de uno y el carboxilo del otro,
liberndose una molcula de agua y formando un enlace amida que se
denomina enlace peptdico; estos dos "residuos" de aminocido forman
un dipptido. Si se une un tercer aminocido se forma un tripptido y as,
sucesivamente, hasta formar un polipptido. Esta reaccin tiene lugar de manera
natural dentro de las clulas, en los ribosomas. (Wikipedia, Aminocido, 2016)

Protenas

Las protenas son molculas formadas por aminocidos que estn unidos por un
tipo de enlaces conocidos como enlaces peptdicos. El orden y la disposicin de
los aminocidos dependen del cdigo gentico de cada persona. Todas las
protenas estn compuestas por:

Carbono
Hidrgeno
Oxgeno
Nitrgeno

Y la mayora contiene adems azufre y fsforo.

Las protenas suponen aproximadamente la mitad del peso de los tejidos del
organismo, y estn presentes en todas las clulas del cuerpo, adems de
participar en prcticamente todos los procesos biolgicos que se producen.
(Unidad Editorial Revistas, 2016)

Anlisis cualitativo

El anlisis cualitativo tiene como objetivo la identificacin del analito (tomos,


iones, molculas o grupos qumicos) presente en la muestra sometida al proceso
analtico. La palabra identificacin se emplea comnmente para describir el
proceso analtico cualitativo comporta un reconocimiento a travs de las
caractersticas qumicas o fisicoqumicas del analito o su producto de reaccin.
La palabra determinacin es empleada usualmente en el mbito del anlisis
cuantitativo (Analtica, s.f.)

Anlisis cuantitativo

59
qumica se conoce como anlisis cuantitativo a la determinacin de la
abundancia absoluta/relativa (muchas veces expresada como concentracin) de
una, varias o todas las sustancias qumicas presentes en una muestra.1
Una vez que se conoce la presencia de cierta sustancia en una muestra, la
cuantificacin o medida de su abundancia absoluta o relativa puede ayudar en la
determinacin de sus propiedades especficas.
Por ejemplo, el anlisis cuantitativo realizado por espectrometra de masas sobre
muestras biolgicas puede aportar, por la proporcin de abundancia relativa de
ciertas protenas especficas, indicaciones de ciertas enfermedades, como el
cncer. (Wikipedia, Anlisis cuantitativo (qumica), 2016)

60
PRACTICA 3. BIOQUIMICA DE LAS PROTEINAS

2.1.10. REACCION DE BIURET

Tubo Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo


con 3 mL de Preparar los tubos de ensayo.
CuSO4 al 1%
solucin de 4 a 5 gotas de solucin de
1 +
Albmina de huevo Aadir de 4 a 5 gotas de CuSO4 al 1%
hidrxido sdico
1% solucin de CuSO4al 1% +
2 ml hidrxido sdico
con 3 mL de
Aadir 2 ml de solucin de
solucin de CuSO4 al 1%
hidrxido sdico al 20%.
2 aminocidos +
Tirosina, Triptfano hidrxido sdico
o Fenilalanina. Agitar para que se mezcle.

CuSO4 al 1% Observar y tomar apuntes de los
con 3 mL de Leche
3 + cambios.
1%
hidrxido sdico
CuSO4 al 1%
con 3 mL de Aceite
4 +
de cocina
hidrxido sdico
CuSO4 al 1%
con 3 mL de con 3 mL de solucin
5 +
Glucosa respectiva
hidrxido sdico
+
Agitar y observar color
violeta, azul o amarillo.
Procedimiento reaccin Biuret

61
Se tomaron seis tubos de ensayo y se les agreg a cada uno 3ml de solucin
diferente de albumina de huevo al 1%, tirosina, leche, carne, aceite y glucosa, luego
se agregaron 5 gotas de reactivo de Biuret.(CuSo4) Luego se observan cambios
que demuestren la presencia de protenas.

62
Agitar y observar los resultados.

o Al realizar la prueba con la glucosa se pudo observar un color azul claro en


la parte del fondo y arriba un anillo de azul oscuro.

o Al realizar la prueba con la leche se pudo observar que la muestra toma


un pequeo tono azul violceo claro, el cual se podra decir que se
determin una presencia de protenas.

o La tirosina toma un color azul ms oscurito que la glucosa y un anillo azul


oscuro en la parte superior

o Al realizar la prueba con clara de huevo se observ que la muestra toma


un color violeta en la parte de arriba y en la parte de abajo uno ms claro.

o Al realizar la prueba con la carne se observ que la muestra toma un color


violeta oscuro en todo el entorno y un anillo ms oscuro en la parte superior

o Al realizar la prueba con el aceite se pudo observar la separacin de las


dos mezclas en la parte inferior tono azul claro y en la parte superior capa
gruesa de partculas blancas

63
2.1.11. REACCION DE AMINOACIDOS AZUFRADOS

Tubo Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo


hidrxido Preparar los tubos de 2 ml hidrxido
con 3 mL de sdico ensayo. sdico
1
solucin de + +
Albmina de acetato de Aadir 2 ml de solucin de solucin de
huevo 1% plomo hidrxido sdico al 20%. acetato de
plomo al 5%
con 3 mL de hidrxido Aadir 10 gotas de solucin +
solucin de sdico de acetato de plomo al 5%
2
aminocidos +
Tirosina, acetato de Calentar el tubo hasta
Triptfano o plomo ebullicin.
Fenilalanina.
hidrxido Observar y tomar apuntes
sdico de los cambios.
con 3 mL de +
3 con 3 mL de
Leche 1% acetato de
solucin
plomo El precipitado de color respectiva
negruzco indica que se ha +
hidrxido formado sulfuro de Calentar el tubo
sdico Plomo, utilizndose el
con 3 mL de hasta ebullicin.
+ azufre de los aminocidos
4 Aceite de
acetato de
cocina
plomo

hidrxido
sdico
con 3 mL de +
5
Glucosa acetato de
plomo

Procedimiento reaccin de aminocidos azufrados

64
Reaccin de color negruzco que reacciona ante la presencia de aminocidos con la
solucin de acetato de plomo para formar el sulfuro de plomo.

Se tomaron seis tubos de ensayo y se les agreg a cada uno 3ml de solucin
diferente de albumina de huevo al 1%, tirosina, leche, carne, aceite y glucosa, luego
se agregaron de reactivo, (hidrxido sdico + acetato de plomo) y se colocan a
calentar hasta ebullicin.

Luego se observan cambios

65
Al realizar la prueba con la carne se observ que la muestra toma un color rojo
claro grisceo.

Al realizar la prueba con el aceite se pudo observar la homogenizacin de los


compuestos y color amarillo claro

Al realizar la prueba con clara de huevo se observ que la muestra toma un color
negruzco plateado en la parte superior y en el fondo se forma un anillo amarillo.

Con La tirosina toma un color negruzco plateado en la parte superior y en el fondo


se forma un anillo amarillo

Al realizar la prueba con la leche se pudo observar que la muestra toma en la


parte superior mantiene su color inicial blanco y en el fondo se forma el anillo
negruzco plateado

Al realizar la prueba con la glucosa se pudo observar que el color naranja es


remplazado por un tono negruzco plateado en la parte superior y en el fondo se
forma un anillo amarillo.

66
4.3.3 METODO DE BRADFORT

Para este proceso se debe usar el espectrofotmetro para mirar la transmitancia


de cada tubo para tomar los resultados, recordando que cada tubo tiene protena,
menos el primero que es el que se utiliza para calibrar el espectrofotmetro; cada
que se coloca un tubo que contenga protena.

ESPECTOFOTOMETRIA:

TUBOS Standard Agua 1% Reactivo de TRANSMITANCIA


20mg/ml biuret
Blanco o sin 0l 100 l 1 ml 100
protena
1 25 l 75 l 1 ml 98.4
2 50 l 50 l 1 ml 87.6
3 75 l 25 l 1 ml 77.8
4 100 l 0 l 1 ml 37.4

RESULTADOS

1. Elaboracin de la recta patrn. Para ello representar en el papel


milimetrado adjunto la absorbancia de cada uno de los tubos que
contenan albmina bovina frente a la cantidad de protenas
correspondiente. Si se dispone de una calculadora con capacidad
para hacer rectas de regresin, compruebe el coeficiente de
correlacin de la recta obtenida. En cualquier caso determine la
pendiente de la recta.

67
Para las diluciones del problema, interpolar la absorbancia obtenidas sobre
la recta representada para saber la cantidad de protenas presentes en cada
una de ellas. Alternativamente, haga el clculo mediante la pendiente de la
recta.

En las grficas podemos identificar que segn la protena as mismo da el resultado


de transmitancia, pero las dos tienen en comn que ha menor concentracin mayor
es la transmitancia.

2 Teniendo en cuenta los volmenes de muestra usados en cada caso y


teniendo en cuenta la dilucin realizada, calclese la concentracin de
protenas en la muestra analizada. Dar el resultado en gramos de
protena por 100 ml de leche.

68
VOLUMEN DE CONCENTRACIN DE
LECHE PROTENA
20 25
25 50
30 75

PREGUNTAS:

A. Cules son los principales mtodos colorimtricos usados en la


determinacin de protenas?

Reaccin de biuret.
Reaccin de aminocidos azufrados
Mtodo de Bradford.

B. Cul es la reaccin de un alfa-aminocido y ninhidrina

La ninhidrina es utilizada con fines cuantitativos para la determinacin de


aminocidos. Reacciona con todos los aminocidos alfa cuyo pH se
encuentra entre 4 y 8, dando una coloracin que vara de azul a violeta
intenso. Esta prueba es positiva tanto para protenas como para
aminocidos. En aquellos casos donde no da positiva la prueba de Biuret, da
positiva la de ninhidrina, e indica que no hay protenas pero s hay
aminocidos libres.

C. Cul es la reaccin con el reactivo de Biuret?

En solucin alcalina el Cu+2 reacciona con el enlace peptdico de las


protenas dando un color purpra que se cuantifica
espectrofotomtricamente (540nm). Como estndar se utiliza una solucin
de albmina. Protena + Cu+2 Complejo Cu-Protena (prpura)

D. Qu protenas dan positivas con la prueba de Hopkins-cole?

Para las protenas que contienen triptfano. ( un aminocido esencial en


la nutricin humana. Es uno de los 20 aminocidos incluidos en el cdigo
gentico (codn UGG).)La solucin que se va a examinar se mezcla con
cido glioxlico y se agrega cido sulfrico concentrado. Un anillo entre
violeta y rojo en la unin de los dos lquidos indica que la reaccin es positiva.

69
E. Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo?

La desnaturalizacin de protenas se da en la clara de los huevos, que son


en gran parte albminas en agua. En los huevos frescos, la clara es
transparente y lquida; pero al cocinarse se torna opaca y blanca, formando
una masa slida intercomunicada. Esa misma desnaturalizacin puede
producirse a travs de una desnaturalizacin qumica, por ejemplo
volcndola en un recipiente con acetona. Desnaturalizacin Irreversible de la
protena de la clara de huevo y prdida de solubilidad, causadas por la alta
temperatura (mientras se la fre)

F. Cul de los tres agentes utilizados tiene mayor poder de


desnaturalizacin?

El efecto de la temperatura, cuando la temperatura es elevada aumenta la


energa cintica de las molculas con lo que se desorganiza la envoltura
acuosa de las protenas y, se desnaturalizan

G. Cmo podramos saber que una sustancia desconocida es una


protena?

Para saber si una sustancia desconocida, es una protena se utiliza el


Reactivo de Biuret. El reactivo, de color azul, cambia a violeta en presencia
de protenas.

H. Qu coloracin da la reaccin del Biuret?

La coloracin que presenta es el color violeta, indicando la presencia de


protenas.

I. Una protena coagulada podra dar la reaccin del Biuret?

Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua
soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de
cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 C o al
ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. Si una protena
coagulada podra dar la reaccin de Biuret, porque el reactivo reacciona con
cualquier protena, liquida o slida, por ejemplo cuando haces una
cuantificacin de protenas en suero (liquida) o cuando haces una prueba
cualitativa en huevos, carne, papas, etc.

70
J. Si se realiza la reaccin del Biuret sobre un aminocido como la Glicina
es positiva o negativa? Por qu?

La glicina no reaccion con el reactivo de Biuret porque est en forma libre


y no hay enlaces peptdicos con los que pueda reaccionar este reactivo. De
esta manera, la glicina dio una prueba negativa. Adems en la reaccin
xantoprotica da negativo porque carece de grupos aromticos

71
PRACTICA 4. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS

Los carbohidratos son molculas formadas por carbono, hidrgeno y oxgeno (C,
H, O) e incluyen algunas de las molculas ms relevantes en la vida de los
organismos, como son la glucosa, que es universalmente utilizada por las clulas
para la obtencin de energa metablica, el glucgeno contenido en el hgado y el
msculo, que forma la reserva de energa ms fcilmente accesible para las clulas
del organismo y la ribosa y desoxirribosa que forman parte de la estructura qumica
de los cidos nucleicos.

Desde el punto de vista qumico, los carbohidratos son polihidroxi aldehdos o


cetonas y sus polmeros y existen en tres categoras principales distinguibles por el
nmero de unidades de azcar que los forman: monosacridos, oligosacridos y
polisacridos. Los polisacridos liberan a la hidrlisis centenares o millares de
monosacridos; mientras que los oligosacridos producen de dos a l0
monosacridos y los monosacridos mismos son las unidades mnimas de los
carbohidratos que ya no se pueden hidrolizar. Se les llama carbohidratos debido a
que su estructura qumica semeja formas hidratadas del carbono y se representan
con la frmula Cn (H2O)n.

Clasificacin de los carbohidratos

Bioquimica.2012. Carbohidratos. Tomado de:


http://ibcbioquimica.blogspot.com.co/2012/03/carbohidratos.html

72
2.1.12. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS

73
2.1.12.1. PRUEBA DE BENEDICT: Identifica azcares reductores (aquellos
que tienen su OH libre del C anomrico), como la lactosa, la glucosa,
la maltosa, y celobiosa. En soluciones alcalinas, pueden reducir el
Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita de la solucin alcalina
como Cu2O de color rojo-naranja. El reactivo de Benedict consta de:
Sulfato cprico; hidrato de sulfato de sodio y o cloruro, Carbonato
Anhidro de Sodio, adems se emplea NaOH para alcalinizar el medio.

74
Glucosa: positivo
Fructosa: positivo
Maltosa: positivo
Sacarosa: Negativo
Almidn: Negativo
La glucosa, fructosa y maltosa presentan un
precipitado de color anaranjado denominado xido
cuproso (Cu20) es decir que se trata de azcares
reductores.
La sacarosa no presenta evidencia de precipitado
color rojo ladrillo con la reaccin de oxidacin de
Benedict, por lo que se confirma, que no es un azcar
no reductor.

CONCLUSIN

Mediante la reaccin de Benedict podemos identificar azcares reductores y


comprobar que la reduccin que se lleva a cabo es por el efecto del grupo aldehdo
del azcar (CHO) en forma de Cu+ y el nuevo in se observa a modo de precipitado
de color rojo anaranjado o amarillo ladrillo que corresponde al xido cuproso(Cu2O).

2.1.12.2. REACCION DE FEHLING: Esta prueba se utiliza para el


reconocimiento de azcares reductores. El poder reductor que pueden
presentar los azcares proviene de su grupo carbonilo, que puede ser
oxidado a grupo carboxilo con agentes oxidantes suaves. Si el grupo
carbonilo se encuentra combinado no puede presentar este poder
reductor.

Los azcares reductores, en medio alcalino, son capaces de reducir


el ion Cu2+ de color azul a Cu+ de color rojo. Para ello el grupo
carbonilo del azcar se oxida a grupo carboxilo. En medio fuertemente
bsico como en nuestro caso el NaOH el ion Cu2+ formara Cu (OH)2
insoluble por eso aadimos tartrato sdico potsico que acta como
estabilizador al formar un complejo con el Cu2+.
Bioqumica. 2011. Prueba de Fehling. Tomado de: http://bioquimicamarzo-
julio.blogspot.com.co/2014/06/prueba-de-fehling.html

75
Glucosa: positivo
Fructosa: positivo
Maltosa: positivo
Sacarosa: Negativo
Lactosa: positivo
Almidn: Negativo

De acuerdo a los resultados positivos, que se dio en la glucosa, maltosa, lactosa


este reactivo, reacciona principalmente con los aldehdos porque tienen un grupo
carbonilo ms expuesto, que le da el carcter reductor, y existe la presencia del
precipitado rojo ladrillo (xido cuproso).

Por otro lado, refirindonos a los que dieron negativos (que no nos dio coloracin),
esto se da porque es una azcar constituida por una molcula de glucosa y de
fructosa, tiene un enlace entre el primer carbono de la glucosa y el segundo carbono
de la fructosa, y no queda grupos reductores disponibles. Al no ser reductor, la
prueba de Fehling es negativa, y por lo que se intuye, no posee el grupo carbonilo
apto y libre, necesario como para reaccionar con el reactivo Fehling, y a ebullicin,
no se observ ningn cambio.

CONCLUSIN

Podemos concluir que las muestras de glucosa, fructosa, maltosa y galactosa son
azcares reductores, ya que se form un precipitado de color rojo ladrillo (xido
cuproso).

76
2.1.12.3. REACCION DE MOLISCH: La prueba de Molish permite detectar la
presencia de hidratos de carbono en una muestra; est basada en la
formacin de furfural o derivados de ste (originado por los cidos
concentrados que provocan una deshidratacin de los azcares) a
partir de los carbohidratos para obtener el furfural que se combina con
el -naftol sulfonato originando un complejo prpura. Es una reaccin
muy sensible puesto que soluciones de glucosa al 0.001% y sacarosa
al 0.0001% dan positiva la prueba. Tambin sirve para el
reconocimiento general de carbohidratos donde polisacridos y
disacridos se hidrolizan formando monosacridos formando un color
prpura violeta.

Todos los glcidos por accin del cido sulfrico concentrado se


deshidratan formando compuestos furfricos (las pentosas dan
furfural y las hexosas dan hidroximetilfurfural). Estos furfurales se
condensan con el reactivo de Molish (solucin alcohlica de alfa-
naftol), dando un producto violeta.
Bioqumica. 2011. Reaccin de Molisch. Tomado de: http://bioquimicamarzo-
julio.blogspot.com.co/2014/06/prueba-de-molisch.html

77
Glucosa: positivo
Fructosa: positivo
Maltosa: positivo
Sacarosa: Negativo
Lactosa: positivo
Almidn: Negativo

2.1.12.4. PRUEBA DE TOLLENS: Es un procedimiento de laboratorio para


distinguir un aldehdo de una cetona: se mezcla un agente oxidante
suave con un aldehdo o una cetona desconocida; si el compuesto se
oxida, es un aldehdo, si no ocurre reaccin, es una cetona. El
complejo de plata amoniacal [Ag(NH3)2]+ en solucin bsica es el
agente oxidante utilizado en la prueba de Tollens. Si hay un aldehdo
presente, ste se oxida a la sal del cido RCOO-. Al mismo tiempo, se
produce plata metlica Ag(s) por la reduccin del complejo de plata
amoniacal.
3. Qumica orgnica. Ensayos Fehling y Tollens. Tomado de:
http://www.quimicaorganica.net/ensayos-fehling-tollens.html
3.1.1.1.

78
Glucosa: Negativo
Fructosa: positivo
Maltosa: positivo
Sacarosa: Negativo
Lactosa: Negativo
Almidn: Negativo

3.1.1.2. REACCION DE LUGOL: Es una reaccin qumica usada para


determinar la presencia o alteracin de almidn u otros polisacridos.
Una solucin de yodo-diyodo disuelto en una solucin acuosa
de yoduro de potasio - reacciona con almidn produciendo un
color prpura profundo. Este tipo de prueba puede realizarse con
cualquier producto que contenga almidn como ser patatas, pan o
determinados frutos.

Esta reaccin es el resultado de la formacin de cadenas de


poliyoduro a partir de la reaccin del almidn con el yodo presente en
la solucin de un reactivo llamado Lugol. La amilasa, el componente
del almidn de cadena lineal, forma hlices donde se juntan las
molculas de yodo, formando un color azul oscuro a negro.
La amilopectina, el componente del almidn de cadena ramificada,
forma hlices mucho ms cortas, y las molculas de yodo son
incapaces de juntarse, obtenindose un color entre naranja y amarillo.
Al romperse o hidrolizarse el almidn en unidades ms pequeas de
carbohidrato, el color azul-negro desaparece. En consecuencia, esta
prueba puede determinar el final de una hidrlisis, cuando ya no hay
cambio de color constituyendo una evidencia experimental
ampliamente utilizada.

79
El almidn es coloreado de
violeta negruzco positivo,
debido a que se juntan las
molculas de yodo,
introducindose en las
espiras de la molcula del
almidn.

CONCLUSIN
Se identific mediante la Prueba de Yodo la presencia de almidn
(polisacridos).

PREGUNTAS
1. Explique por qu el monosacrido gliceraldehido da negativa la prueba
Molish.

Da negativo ya que la prueba de Molish es una reaccin general para carbohidratos


que contienen ms de 5 tomos de carbono, y el gliceraldehido tiene un carbono.
Para identificar monosacridos se utiliza la Prueba de Barfoed.

2. Cules son las aplicaciones prcticas de las pruebas estudiadas?

Las aplicaciones realizadas en la presente practica ayudan a la determinacin


especifica de carbohidratos en general, sin importar si son monosacridos,
80
disacridos o polisacridos (Molish). Las dems pruebas son usadas para la
determinacin especifica de azucares segn sus grupos funcionales y el nmero
determinado de carbonos.

3. Defina los siguientes trminos:


Carbono anomrico: hace referencia al carbono carbonilico que se
transforma en un nuevo centro quiral tras una ciclacin hemicetal o
hemiacetal.
Centro quiral: es un tomo unido a cuatro sustituyentes diferentes. Una
molcula que posee un centro quiral y tiene una imagen espectacular no
superponible con ella, denominada enantimero.
Levo rotatorio: se denomina as a los monosacridos que poseen actividad
ptica y desvan el plano de la luz polarizada hacia la izquierda e sentido
opuesto a las manecillas del reloj.

4. Dibuje los monosacridos glucosa, galactosa, ribosa y fructosa, clasifquelos


segn el nmerode tomos de carbono y la funcin principal

5. Efectu un enlace hemiacetlico y uno hemicetlico, escriba las diferencias


entre ambos enlaces.

El enlace hemiacelatico se forma por reaccin entre el carbonilo de un grupo cetona


con un grupo hidroxilo de un alcohol, y el enlace hemicelatico se da entre el
carbonilo de un grupo aldehdo con un hidroxilo de un alcohol.

81
6. Escriba las funciones: aldehdica, cetnica, alcohlica, cida, colquelas en
orden de reactividad y explique el porqu de ese orden.

alcohlica < cetnica < aldehdica < cida

Esto se debe a que los productos resultantes en cada caso son energticamente
ms estables que el reactivo que les dio origen. Es decir, el alcohol rinde productos
energticamente ms inestables que los cidos orgnicos.

7. Explique en qu consiste la hidrlisis cida de disacridos.


Se producen dos molculas de monosacrido por hidrlisis.

La hidrlisis de un enlace glucosdico se lleva a cabo mediante la disociacin de


una molcula de agua del medio. El hidrgeno del agua se une al oxigeno del
extremo de una de las molculas de azcar; el OH se une al carbono libre del otro
residuo de azcar. El resultado de esta reaccin, es la liberacin de un
monosacrido y el resto de la molcula que puede ser un monosacrido si se trataba
de un disacrido o bien del polisacrido restante si se trataba de un polisacrido
ms complejo.

Los disacridos y los polisacridos deben ser hidrolizados hasta monosacridos


para poder pasar la pared intestinal para llegar al torrente sanguneo y poder
ingresar al interior de las clulas para su utilizacin.

8. Defina los siguientes trminos: azcar reductor y azcar no reductor, cite


ejemplos.

Los azcares reductores son aquellos azcares que poseen su grupo carbonilo
(grupo funcional) intacto, y que a travs del mismo pueden reaccionar con otras
especies. Los azcares reductores provocan la alteracin de las protenas mediante
la reaccin de glucosilacin no enzimtico tambin denominada reaccin de
Maillard o glicacin.

azcares reductores
82
El monosacrido ms importante y el azcar reductor es glucosa. En el cuerpo, la
glucosa se conoce como azcar en la sangre, porque es esencial para la funcin
cerebral y la energa fsica. La fructosa es otro azcar reductor y es conocido como
el ms dulce de todos los monosacridos. La galactosa, otro azcar reductor, es un
componente de la lactosa que se encuentra en los productos lcteos. La maltosa no
se encuentra a menudo en la naturaleza, sino que se produce durante la digestin
cuando las molculas de almidn se descomponen.

Azcares no reductores

Algunos disacridos, como la sacarosa, son azcares no reductores, lo que significa


que no pueden donar electrones a otras molculas. La sacarosa se compone de
dos azcares reductores, glucosa y fructosa, y no contiene grupos carbonilo libres.
La sacarosa se encuentra naturalmente en muchos alimentos y, a menudo se aade
a muchos alimentos procesados contribuir dulzura.

9. Efectu un enlace glucosdico.

Terminadas estas reacciones y de identificar los carbohidratos procedemos a


realizar la practica 5 que consiste en determinar las caractersticas de los cidos
grasos.

83
PRACTICA 5. CARACTERISTICAS DE LOS ACIDOS GRASOS

Iniciaremos determinando la solubilidad en los lpidos siguiendo estos pasos:

3.1.2. SOLUBILIDAD

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo


con 3 ml de 4 mL de agua Preparar los tubos de ensayo. 4 mL de hexano
1
Aceite vegetal destilada
con 3 ml de 4 mL de hexano
2 4 mL de hexano
Aceite vegetal
Agite los tubos.

deje reposar unos minutos

Observar y tomar apuntes de los


cambios. 3 ml de Aceite vegetal
+
Agite los tubos
+
Dejar en reposo.
+
Observar y tomar apuntes de
los cambios.
Procedimiento para determinar la solubilidad de los lpidos

Tomamos dos tubos uno para poder comparar y determinar la reaccin, luego de
seguir los pasos anteriormente mencionados obtenemos la siguiente reaccin:

84
En la imagen podemos ver en el primer tubo que no se produce una mezcla al
contrario se ve perfectamente la divisin entre las dos sustancia el agua y el aceite
debido a que el aceite subir debido a su menor densidad, pero en el segundo tubo
vemos como se mezclan las dos sustancias el aceite y el hexano, debido a que las
grasas son solubles en disolventes orgnicos.

Luego de observar la reaccin anterior, realizamos el ensayo de saponificacin


desarrollando los siguientes pasos

3.1.3. SAPONIFICACION

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo


3 mL de Agregar manteca en un tubo
3 mL de NaOH
1 aceite Preparar los tubos de ensayo. de ensayo.
(1 N)
vegetal
Agregar 3 mL solucin de NaOH
3 mL de (1 N).
2 aceite 3 mL de KOH
vegetal Agitar.

Bao de agua hirviente por
10 minutos.

Dejar enfriar. 3 ml de la solucin de NaOH
(1 N).
Observar y tomar apuntes de los +
cambios. Bao de agua hirviente por
10 minutos.
Si posible repetir el mismo procedimiento Observar y tomar apuntes de
con KOH
los cambios.

85
Procedimiento ensayo de Saponificacin

Para esta prctica tomamos dos tubos y los preparamos segn los pasos anteriores
dndonos como resultado la siguiente reaccin:

En la siguiente imagen podemos observar la formacin de tres capas las cuales son
ms visibles en el segundo tubo el cual contiene NaOH, una capa inferior clara que
contiene la solucin sobrante junto con la glicerina que se form, una capa
intermedia semislida que es el jabn formado, y por ultimo una capa superior que
contiene el aceite que no sufri ninguna reaccin aunque no se ve en la imagen en
esta reaccin la mezcla se solidifico mientras que en el primer tubo que contiene
KOH la mezcla es lquida. Esta reaccin se da porque los cidos grasos reaccionan
con bases fuertes en este caso el NaOH y el KOH dando lugar a los jabones ya sea
solidos o lquidos.

Por ultimo realizamos la Reaccin con el Sudan III, para la cual seguimos estos
pasos:

3.1.4. REACCION CON EL SUDAN III

Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo


con 3 ml de 3 ml de Aceite vegetal
1 Aceite Sudan III Preparar los tubos de ensayo.
vegetal

86
con 3 mL de
2 Aceite Tinta roja Agregar 3mL de aceite vegetal.
vegetal
Agregar 8 gotas de Sudan III

Observar y tomar apuntes de los


cambios.

8 gotas de Sudan III

Observar y tomar apuntes de


los cambios.
Procedimiento reaccin con el Sudan III

Luego de haber seguido los pasos obtuvimos los siguientes resultados:

Podemos observar como en el primer tubo al que se le aplica Sudan III se forma un
anillo en la parte superior sobre el aceite cambiando de color de rojo a un anaranjado
debido a que el sudan III detecta especficamente las grasas y se va disolviendo y
tiendo las grasas de anaranjado, en el segundo tubo el cual contiene tinta roja
podemos observar que la mezcla se tie del color rojo y se forma un sobrante en el
fondo sin mostrar ningn cambio en su color.

Al finalizar las practica 5, procedemos a desarrollar las preguntas orientadas a la


prctica:

87
A. Qu son los jabones?

Los jabones son sales sdicas o potsicas de los cidos grasos, solubles en agua.
Se fabrican a partir de grasas o aceites que son mezclas de triacilgliceroles o de sus
cidos grasos, mediante tratamiento con un lcali o base fuertes es decir de
hidrxido sdico, que dar jabones duros, o hidrxido potsico, que dar jabones
blandos ms adecuados para jabones lquidos y cremas de afeitar. Por sus
caractersticas, los jabones son surfactantes aninicos.
Wikipedia. Jabn. Tomado de: https://es.wikipedia.org/wiki/Jab%C3%B3n

B. Cmo se pueden obtener los jabones?

En esencia el proceso de obtencin del jabn, sea industrial o artesano, consta de


tres fases: saponificacin, sangrado y moldeado.

Saponificacin: Se hierve la grasa en grandes calderas, se aade lentamente soda


custica (NaOH) y se agita continuamente la mezcla hasta que comienza a ponerse
pastosa. La reaccin que ha tenido lugar recibe el nombre de saponificacin y los
productos son el jabn y la leja residual que contiene glicerina: grasa + soda
custica jabn + glicerina.

Sangrado: el jabn obtenido se deposita en la superficie en forma de grnulos. Para


que cuaje de una manera completa se le aade sal comn (NaCl). Esta operacin
recibe el nombre de sangrado o salado; con ella se consigue la separacin total del
jabn (que flotar sobre la disolucin de glicerina), de la sosa custica (que no ha
reaccionado) y de agua.

Moldeado: ya habiendo realizado el sangrado, el jabn se pasa a otro recipiente o


vasija donde se le pueden aadir perfumes, colorantes, productos medicinales, etc.
Entonces, todava caliente, se vierte en moldes, se deja enfriar y se corta en
pedazos.

Wikipedia. Jabn. Tomado de: https://es.wikipedia.org/wiki/Jab%C3%B3n

C. Por qu en la saponificacin la glicerina aparece en la fase acuosa?

La saponificacin es una reaccin qumica entre un cido graso (o un lpido


saponificable, portador de residuos de cidos grasos) y una base o lcali, en la que
se obtiene como principal producto la sal de dicho cido y la base. Estos

88
compuestos tienen la particularidad de ser anfipticos, es decir tienen una parte
polar y otra apolar (o no polar), con lo cual pueden interactuar con sustancias de
propiedades dispares. Por ejemplo, los jabones son sales de cidos grasos y
metales alcalinos que se obtienen mediante saponificacin

Un lpido saponificable sera todo aquel que est compuesto por un alcohol unido a
uno o varios cidos grasos (iguales o distintos). Esta unin se realiza mediante un
enlace ster, muy difcil de hidrolizar. Pero puede romperse fcilmente si el lpido
se encuentra en un medio bsico. En este caso se produce la saponificacin
alcalina. En los casos en los que para la obtencin del jabn se utiliza un glicrido
o grasa neutra, se obtiene como subproducto el alcohol llamado glicerina, que
puede dar mayor beneficio econmico que el producto principal.

D. Qu enzima logra en el aparato digestivo la hidrolisis de las grasas?

La lipasa bucal: La lipasa lingual se secreta en forma constante en baja cantidad.


Sin embargo, ante la presencia del alimento en la boca (factor mecnico) y/o por
estimulacin parasimptica (factor neurolgico), la enzima es secretada en gran
cantidad en la cavidad bucal. Esta lipasa acta sobre el bolo alimentario en su
trnsito hacia el estmago(es decir actan despus de que los alimentos se
degluten) y tambin durante la permanencia del alimento en este rgano. El pH
ptimo de la lipasa lingual es de 4,5 pero su actividad comienza a pH 2. La enzima
no es inactivada por la actividad proteoltica de la pepsina gstrica, por lo cual sigue
actuando en la cavidad gstrica. La lipasa lingual es una acil-ester-hidrolasa de alta
especificidad, degrada los triglicridos de la dieta en cidos grasos y digliceridos.

Blog. (2010) Cavidad bucal. Enzimas de la cavidad oral. Tomado de: http://cavidad-
bucal.blogspot.com.co/2010/06/enzimas-de-la-cavidad-oral.html

Lipasa gstrica: La lipasa gstrica acta sobre todo en los recin nacidos
modificando los triglicridos de cadena media contenidos en la leche materna. Este
proceso favorece la digestin de estos triglicridos particulares as como el aporte
de lpidos.

Kioskea.net. (2015). Lipasa gstrica Definicin. Tomado de:


file:///C:/Users/ESPNIC~1/AppData/Local/Temp/lipasa-gastrica-definicion-22701-
nkl2qr.pdf

Lipasa pancretica: es una enzima que se produce en el pncreas y se secreta en


el intestino delgado donde ayuda a descomponer las grasas (lpidos) que comemos
para convertirlas en cidos grasos y glicerol. El pncreas constituye el origen

89
principal y primario de la lipasa srica. La lipasa pancretica humana es una
glucoprotena, con un peso molecular de 45.000 daltons.

Wikipedia. Lipasa Pancretica. Tomado de:


https://es.wikipedia.org/wiki/Lipasa_pancre%C3%A1tica

E. Indique lo que ocurre con las mezclas de aceite Sudan III y aceite
tinta y explique a que se debe la diferencia entre ambos resultados.

Aceite Sudan III: se form el anillo de color naranja y se fue tiendo toda la
mezcla. Este resultado se debe a que le aceite y las grasa son un compuesto
orgnicos que existente en la naturaleza los cuales consiste en esteres formados
por tres molculas de cidos grasos y un molcula de alcohol glicerina, por lo tanto
el sudan III reconoce estas molculas y las tie del color anaranjado.

Aceite tinta roja: la tinta se precipit al fondo de la mezcla, esto se debe a que la
tinta solo se dispersa ya que no es especfica para grasas por lo que no reacciona
con las molculas de este.

La diferencia de las dos reacciones se debe a que el Sudan III es especfico para
teir aceites mientras que la tinta es solo para diferenciar.

F. Qu ocurre con la emulsin de agua en aceite trascurridos unos


minutos de reposo? y con la de los otros compuestos empleados? a
qu se deben las diferencias observadas entre ambas emulsiones?

Lo que podemos observar despus de unos minutos entre el agua y el aceite es que
el aceite sube y el agua se encuentra abajo debido a que el agua es ms densa que
el aceite, en el aceite y hexano se observa que hay una disolucin entre los dos ya
que son solubles uno con el otro.

G. Qu ocurre con la emulsin cuando se le aade detergente?

En el caso del aceite y el NaOH o KOH se forman tres capas, la inferior que contiene
sobrante junto con glicerina, una media que es el jabn y una superior que

90
constituye el aceite inalterado la diferencia entre las dos reacciones es que en la de
NaOH la mezcla se solidifica mientras que en la de KOH se torna liquida.

CONCLUSIONES

Con la realizacin del presente informe podemos concluir:

Es fundamental y de vital importancia que antes de ingresar a una prctica


de laboratorio contemos con todo el equipo que permita nuestra seguridad
con lo son los guantes, tapabocas, bata, ropa adecuada y zapatos cerrados,
al igual hay que reconocer el entorno dentro del laboratorio identificar la
salida de emergencia las duchas y botiquines para estar preparados en caso
de un accidente.

Los aminocidos se denominan as por tener un grupo amino (-NH2) y un


grupo carboxilo (-COOH).

Todos los aminocidos componentes de las protenas son L-alfa-


aminocidos

Los lpidos son insolubles en agua pero solubles en disolventes orgnicos


como el ter, benceno, cloroformo entre otros.

Los cidos grasos reaccionan con bases fuertes como el NaOH y el KOH,
formando sales solidas conocidos como jabones, y dependiendo de la base
se tornaran solido o lquidos.

El Sudan III es un colorante especifico el cual reacciona al contacto con los


cidos grasos reconociendo sus molculas y tindolas de un color
anaranjado.

91
Aprendimos a diferenciar que el Reactivo de Biuret, es de color azul, y que
cambia a violeta en presencia de protenas y segn la cantidad de estas se
da la tonalidad del color. +protena + violeta.

Aprendimos que para identificar los aminocidos azufrados debemos


identificar cuando se manifiesta un precipitado negruzco de sulfuro de plomo.

Identificamos como la concentracin de protenas de una muestra se realiza


por medio del mtodo de Bradford mediante la cuantificacin de la
absorbancia en un espectrofotmetro.

4. BIBLIOGRAFIA

1. Bioqumica Prctica. Aminocidos y Protenas. Cap 5. Tomado de:


http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp05a.pdf

2. Alberto Garca Jerez. Bucaramanga 2015. Universidad Nacional Abierta y a


Distancia UNAD. Escuela de Ciencias Bsicas Tecnologa e Ingeniera.
Biomolculas. Tomado de:
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201103/2016-
I/BIOMOLECULAS3.pdf

3. Bioqumica. 2014. Reaccin de Biuret. Tomado de: http://bioquimicamarzo-


julio.blogspot.com.co/2014/07/reaccion-de-biuret.html

4. Universidad de Bogot, Jorge Tadeo Lozano. Laboratorio de Qumica


Orgnica. Ensayos para Reconocimiento de Aminocidos. Tomado de:
http://avalon.utadeo.edu.co/comunidades/estudiantes/ciencias_basicas/orga
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5. Miguel Calvo. Qumica de los Alimentos. Estructura de las Protenas. Tomado


de: http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/aminoacids/estructurprot.html

6. Escuela europea de Luxemburgo. 6 Secundaria. Seccin Espaola Bio 4.


Protenas. Tomado de:

92
http://www.euroschool.lu/prof.montilla/ficheroactivi/actividadesbio4_6/PPRO
TEINAS

7. Bioquimica.2012. Carbohidratos. Tomado de:


http://ibcbioquimica.blogspot.com.co/2012/03/carbohidratos.html

8. Wikipedia. Reaccin de Benedict. Tomado de:


https://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Benedict

9. Bioqumica. 2011. Prueba de Fehling. Tomado de: http://bioquimicamarzo-


julio.blogspot.com.co/2014/06/prueba-de-fehling.html

10. Bioqumica. 2011. Reaccin de Molisch. Tomado de: http://bioquimicamarzo-


julio.blogspot.com.co/2014/06/prueba-de-molisch.html

11. Qumica orgnica. Ensayos Fehling y Tollens. Tomado de:


http://www.quimicaorganica.net/ensayos-fehling-tollens.html

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