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Las protenas son uno de los principales componentes de todas nuestras clulas.
Los aminocidos (compuestos orgnicos), Los aminocidos tiene tres tipos de
reacciones qumicas importantes: (1) reacciones debido a la presencia del grupo
carboxilo (COO- ), (2) reacciones debidas al grupo amino (NH), y (3) reacciones
debido al grupo R. Las reacciones debidas al grupo carboxilo y al grupo amino son
generales y se dan para todos los aminocidos. Las reacciones del radical R son
reacciones especficas; por ejemplo, cistena da una reaccin para azufre, triptfano
da ciertas reacciones de color debido a que su molcula contiene el grupo indol,
tirosina da otras reacciones de color debido a su grupo fenlico, etc.
2
Nos muestran la descripcin de los reactivos y el mtodo, luego el procedimiento y
los materiales en general; y luego el procedimiento segn el tipo de reaccin
BIURET, Se basa en la reaccin de sales de Cu+2 con molculas que contienen
ms de dos enlaces peptdicos en un medio alcalino; el cobre es reducido a Cu+
formando complejos color prpura que tienen un mximo de absorcin a 540 nm
LOWRY, Resulta de la reaccin de Biuret sobre los enlaces peptdicos, adems de
la reduccin del reactivo de fosfomolibdatofosfotungstato (Folin-Ciocalteu) por las
protenas pretratadas con cobre en medio alcalino, dando una coloracin azul,
determinado a 650 nm. BRADFORD, Basado en el Azul Brillante de Coomasie G-
250 cambia de rojo a azul, al unirse a residuos aromticos y arginina en las
protenas.
Dentro de los CIDOS GRASOS Los lpidos son biomolculas orgnicas formadas
bsicamente por C, H y O, P, N y S. con algunas propiedades fsicas, Son
mayoritariamente insolubles en agua y solubles en disolventes orgnicos, tales
como ter, cloroformo, alcanos (ej.hexano), benceno, acetona y alcoholes. De
acuerdo a la estructura qumica los lpidos se clasifican en dos grupos, de acuerdo
al contenido en su composicin cidos grasos (Lpidos saponificables) o no lo
posean (Lpidos insaponificables).
3
Descubrimos como diferenciar la solubilidad en lpidos y el ensayo de
saponificacin con bases fuertes, NaOH o KOH. E identificar la REACCIN CON
EL SUDN III que es un colorante que se utiliza para detectar especficamente las
grasas, porque es insoluble en agua y en cambio es soluble en las grasas. Al ser de
color rojo, cuando se disuelve tie las grasas de color rojo anaranjado.
4
CONTENIDO
RESUMEN .............................................................................................................. 2
INTRODUCCION .................................................................................................... 6
PRACTICA 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO ............................... 9
PRACTICA 2. PROPIEDADES BIOQUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS ............ 11
PRACTICA 3. BIOQUIMICA DE LAS PROTEINAS .............................................. 18
PRACTICA 4. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS .................................... 21
PRACTICA 5. CARACTERISTICAS DE LOS ACIDOS GRASOS ......................... 25
RESULTADOS ...................................................................................................... 32
PRACTICA 1. SEGURIDAD Y NORMAS DE LABORATORIO ............................. 32
PRACTICA 2. PROPIEDADES BIOQUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS ............ 44
PRACTICA 3. BIOQUIMICA DE LAS PROTEINAS .............................................. 61
PRACTICA 4. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS .................................... 72
PRACTICA 5. CARACTERISTICAS DE LOS ACIDOS GRASOS ......................... 84
CONCLUSIONES.................................................................................................. 91
5
INTRODUCCION
Al igual que los aminocidos en las protenas tambin incluye algunas reacciones
qumicas para su identificacin como, la reaccin de Biuret en donde el sulfato de
cobre y sosa se une con los enlaces peptdicos formando complejos de color violeta;
6
la reaccin de aminocidos azufrados la cual se basa en la separacin mediante un
lcali del azufre de los aminocidos el cual al reaccionar con la solucin de acetato
de plomo forma el sulfuro de plomo y el mtodo de Bradford en el que se emplea un
colorante hidrofbico que al encontrarse en el entorno hidrofbico de una protena
toma una tonalidad azul.
Para identificar cidos grasos se utiliza la reaccin con el Sudan III debido a que es
insoluble en agua y soluble en las grasa forma complejos de color rojo anaranjado
al disolverse en estas.
7
Reconocer las reacciones que se producen por tener el radical R las cuales
son especficas para los aminocidos de esas protenas.
8
1. REVISION BIBLIOGRAFICA
9
Si se realiza una reaccin qumica utilizar recipientes adecuados a la cantidad
que se va a usar.
No usa recipientes de alimentos para contener productos qumicos, rotular los
recipientes para tener informacin sobre la sustancia contenida.
No utilice vidrios agrietados, no utilizar jeringas para pipetear o aspirar con la
boca las pipetas de vidrio.
Mantener en funcionamiento los extractores de aire, utilizar las campaas
extractoras siempre que sean posible.
Si se requiere detectar el olor de una sustancia no hacerlo directamente
colocando la cara sobre el recipiente, utilizar la mano abierta como pantalla, los
frascos deben cerrarse despus de su uso.
Para realizar diluciones con cidos, se debe verter el cido sobre el agua no al
contrario.
No devolver a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados y
no se deben sacar sustancias qumicas del laboratorio sin autorizacin.
Duchas y lavaojos
Botiqun
Absorbente para derrames
Alarma de emergencia
10
Salida de emergencia
Recipiente para el vidrio roto
11
Bioqumica Prctica. Aminocidos y Protenas. Cap 5. Tomado de:
http://www.bioquimica.dogsleep.net/Laboratorio/Plummer/Chp05a.pdf
cidos: Con mayor nmero de radicales carboxilo que amino, por lo que su
carga neta es negativa.
12
Bsicos: Con mayor nmero de radicales amino que carboxilo y con carga
neta positiva
13
14
Clasificacin de los Aminocidos 2
15
Clasificacin de los Aminocidos 3
16
Alberto Garca Jerez. Bucaramanga 2015. Universidad Nacional Abierta y a
Distancia UNAD. Escuela de Ciencias Bsicas Tecnologa e Ingeniera.
Biomolculas. Tomado de: http://datateca.unad.edu.co/contenidos/201103/2016-
I/BIOMOLECULAS3.pdf
17
Mercurio a pH cido, formando complejos color rojo ladrillo con el
anillo fenlico de la tirosina y las protenas que la contienen.
18
1.1.7. ESTRUCTURA DE LAS PROTEINAS
19
Miguel Calvo. Qumica de los Alimentos. Estructura de las Protenas. Tomado de:
http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/aminoacids/estructurprot.html
Las protenas conjugadas o heteroprotenas: Son las que estn compuestas por
aminocidos y otra sustancia de naturaleza no proteica que recibe el nombre de
grupo prosttico. Las protenas conjugadas pueden a su vez clasificarse en funcin
de la naturaleza de su grupo prosttico. As, se habla de glucoprotenas, cuando el
grupo prosttico es un glcido, lipoprotenas cuando es un lpido, metal o protenas
cuando es un ion metlico, fosfoprotenas cuando es un grupo fosfato, etc. Otro
criterio de clasificacin de las protenas es la forma tridimensional de su molcula.
Las protenas fibrosas son de forma alargada, generalmente son insolubles en agua
y suelen tener una funcin estructural, mientras que las protenas globulares forman
arrollamientos compactos de forma globular y suelen tener funciones de naturaleza
dinmica (catalticas, de transporte, etc)
20
1.1.9. IDENTIFICACION DE LAS PROTEINAS
21
Los carbohidratos son molculas formadas por carbono, hidrgeno y oxgeno (C,
H, O) e incluyen algunas de las molculas ms relevantes en la vida de los
organismos, como son la glucosa, que es universalmente utilizada por las clulas
para la obtencin de energa metablica, el glucgeno contenido en el hgado y el
msculo, que forma la reserva de energa ms fcilmente accesible para las clulas
del organismo y la ribosa y desoxirribosa que forman parte de la estructura qumica
de los cidos nucleicos.
22
Clasificacin de los carbohidratos
23
insoluble por eso aadimos tartrato sdico potsico que acta como
estabilizador al formar un complejo con el Cu2+.
24
1.1.10.5. REACCION DE LUGOL: Es una reaccin qumica usada para
determinar la presencia o alteracin de almidn u otros polisacridos.
Una solucin de yodo-diyodo disuelto en una solucin acuosa
de yoduro de potasio - reacciona con almidn produciendo un
color prpura profundo. Este tipo de prueba puede realizarse con
cualquier producto que contenga almidn como ser patatas, pan o
determinados frutos.
Los cidos grasos son cidos orgnicos monoenoicos, que se encuentran presentes
en las grasas, raramente libres, y casi siempre esterificando al glicerol y
eventualmente a otros alcoholes. Son generalmente de cadena lineal y tienen un
nmero par de tomos de carbono. La razn de esto es que en el metabolismo de
los eucariotas, las cadenas de cido graso se sintetizan y se degradan mediante la
adicin o eliminacin de unidades de acetato. No obstante, hay excepciones, ya que
se encuentran cidos grasos de nmero impar de tomos de carbono en la leche y
grasa de los rumiantes, procedentes del metabolismo bacteriano del rumen, y
tambin en algunos lpidos de vegetales, que no son utilizados comnmente para la
obtencin de aceites.
25
Miguel Calvo. Qumica de los Alimentos. cidos Grasos. Tomado de:
http://milksci.unizar.es/bioquimica/temas/lipidos/acidosgrasos.html
cidos grasos saturados: Que slo tienen enlaces simples entre los tomos de
carbono. Esta circunstancia permite la unin entre varias molculas mediante
puentes de hidrgeno. Cuanto mayor sea la cadena (ms carbonos), mayor es la
posibilidad de formacin de puentes de hidrgeno. Por ello, a temperatura ambiente,
los cidos grasos saturados suelen encontrarse en estado slido.
cidos grasos insaturados: Que tienen uno o varios enlaces dobles en su cadena
y sus molculas presentan codos, con cambios de direccin en los lugares donde
aparece un doble enlace. La distancia entre los carbonos no es la misma que la que
hay en los dems enlaces de la molcula. Esto origina que las molculas tengan
ms problemas para formar puentes de hidrgeno.
26
Clasificacin segn estructura molecular
27
saponifican, es decir se produce el jabn (sal del cido graso) y la
glicerina (glicerol).
28
2. MATERIALES Y METODOS
MATERIAL CANTIDAD
Tubos de ensayo (140mm x 14mm) 15
Gradilla 2
Pinza para tubos 2
Pipetas Pauster con bulbo 4
Beaker o vasos de precipitados de 500 ml 5
Estufa 1
Cmara de flujo laminas 1
Pipetas de vidrio: 0.5, 5 y 10 ml 4
Pera de goma para pipetas 4
Vidrios reloj grandes
Probeta 100 ml
Baln aforado de 25 ml
Agitados de vidrio
Balanza analtica
Espectrofotmetro
Micropipeta 10 l
Micropipeta 20 - 200 l
Micropipeta 200 1000 l
Puntas de 200 l amarillas para micropipeta 1
Puntas de 1000 l azules para micropipeta 1
Agitados vortex multiple para tubos
Materiales para prctica bioqumica
REACTIVOS PRECAUCION
Reactivo ninhidrina Evitar la inhalacin, contacto con la piel en caso de
presentarse aclarar con abundante agua, evitar
contacto con los ojos. Usar equipo de seguridad para
evitar accidentes.
NaOH Usar equipo de seguridad ya que este es irritante y
corrosivo en los tejidos evitar la inhalacin ya que
causa daos en el tracto respiratorio y el contacto con
los ojos puede producir irritacin de la crnea
ulceraciones, nubosidades y finamente su
desintegracin.
29
Sulfato cprico (CuSO) Nocivo por ingestin, afecta al hgado y riones causa
irritacin a la piel, ojos y tracto respiratorio. Usar
equipo de seguridad.
Acido actico Usar equipo de proteccin personal al manipularlo, en
(CH3COOH) caso de inhalacin llevar a un lugar fresco y bien
ventilado, en caso de salpicadura en los ojos lavar con
abundante agua, quitar ropa y calzado en caso de
derrame, en caso de ingestin enjuagar la boca y
suministre agua fresca, no provocar vomito.
Cloruro de sodio (NaCl) Usar equipo de seguridad y evitar ingestin puede
revocar vmito y acides estomacal, en caso de
contacto con los ojos irritacin y ardor, con el contacto
con la piel causa irritacin e irritacin en las vas
respiratorias.
Albumina Usar equipo de seguridad para evitar contacto directo
con esta.
Acido ntrico (HNO3) Se debe usar el equipo de proteccin personal ya que
este qumico causa irritacin, quemaduras y
ulceracin de los tejidos con los que este en contacto.
Acetato de Plomo Evitar la inhalacin provoca tos, dolor de garganta,
inflamacin de los bronquios, destruccin de las
mucosas nasales, al contacto con los ojos provoca
irritacin e inflamacin de la conjuntiva, visin
borrosa, en la piel produce enrojecimiento,
resequedad y alergia.
Naftol Evitar la inhalacin y que es destructivo para los
tejidos de las membranas mucosas y las vas
respiratorias superiores, en los ojos provoca
quemaduras, es toxico si se absorbe por la piel
provoca quemaduras.
Hipoclorito de sodio Usar guantes para su manipulacin, emplearlo en
zonas ventiladas, en los ojos causa irritacin.
Acido Sulfrico (H2SO) Evitar contacto con la piel ya que es altamente
corrosivo puede causar dao en los riones y
pulmones por inhalacin, puede causar quemaduras
en la boca y garganta e irritacin en los ojos.
Reactivo de Millon No inhalar los vapores, usar guates y gafas
apropiadas, irrita los ojos y la piel.
Fenol Evitar contacto con la pie en caso de derrame
quedarse inmediatamente la ropa y los zapatos
contaminados, en caso de contacto con los ojos lavar
con abundante agua.
Acido fosfrico Evitar la inhalacin, en caso de contacto con los ojos
lavar con abundante agua, si se ingiere se debe tomar
abundante agua para diluir el cido.
30
Etanol Puede producir resequedad en la piel, enrojecimiento
en contacto con los ojos, por inhalacin puede
producir tos, dolor de garganta, por ingestin nuseas
y dolor abdominal.
Reactivos para prctica bioqumica
31
RESULTADOS
32
No devolver a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados y
no se deben sacar sustancias qumicas del laboratorio sin autorizacin.
Duchas y lavaojos
Botiqun
Absorbente para derrames
Alarma de emergencia
Salida de emergencia
Recipiente para el vidrio roto
33
PICTOGRAMA SIGNIFICADO
Este pictograma
significa que en este
espacio debemos de
tener precaucin y
usar tapabocas para
evitar la inhalacin de
sustancias que
pongan en peligro
nuestra vida.
Cuando encontramos
este pictograma
significa que
debemos usar gafas
para proteger
SEALIZACION
nuestros ojos de
cualquier agente que
pueda afectarlos
Este pictograma
significa que
debemos usar
guantes, tapabocas
y bata para evitar
accidentes en el
laboratorio.
34
Este pictograma nos
informa sobre cul es
la salida que
debemos tomar en
caso de que se
presente un
accidente.
Este elemento se
utiliza en caso de que
se presente algn
accidente dentro del
laboratorio, es decir
si se presenta un
incendio podemos
utilizar este elemento
para extinguir las
llamas.
INSTRUMENTOS
35
Estos elementos son
indispensables en
caso de que se
presente un
accidente y se
generen ruptura de
vidrios, al igual que
para desechar los
elementos usados en
la prctica.
Este elemento se
utiliza para realizar la
extraccin de los
olores qumicos y as
evitar posibles
accidentes por la
inhalacin de los
mismos
37
Sudan III Solido; color marrn rojizo; puno de
fusin 199; insoluble.
Glucosa Solido; incoloro; punto de fusin 146C;
densidad 630 kg/m3; temperatura de
ignicin 500C.
Glicina Solido cristalino; color blanco; punto de
fusion 240C; densidad 1,000 kg/m3;
pH 5,9 6,4.
Lisina Polvo; color blanco con amarillo; punto
de congelacin / fusin 215C; peso
molecular 146,1; soluble en agua.
Reactivos y sus propiedades fsicas.
REACTIVO RIESGO
Ninhidrina Por inhalacin produce insuficiencia
respiratoria e irritacin de las mucosas.
Contacto con la piel irritacin cutnea.
Contacto con los ojos irritacin ocular
grave.
Por ingestin irritacin de las mucosas
de la boca, garganta, esfago y tracto
esfago-intestinal.
Reactivo de Benedict La ingestin de una pequea cantidad
produce un riego grave para la salud, en
caso de que ocurra se debe enjuagar la
boca, no inducir el vmito y llamar al
centro de informacin toxicolgico o a
un mdico. Adems produce irritacin
ocular grave.
Reactivo de Lugol Contacto con la piel produce irritacin
local.
Por ingestin conduce a trastornos
gstricos e intestinales.
Reactivo de fehling Irritacin ocular grave e irritacin
cutnea.
Tirosina Irritacin en ojos y piel por contacto,
irritacin de las membranas mucosas y
del tracto respiratorio.
Amoniaco Provoca quemaduras graves en la piel
y lesiones oculares graves, puede ser
letal por ingestin.
38
Biuret Irritacin ocular grave e irritacin
cutnea.
Reactivo de milln Irritacin ocular grave e irritacin
cutnea.
Acetato de plomo Por inhalacin produce tos, dolor de
garganta, asfixia, inflamacin de los
bronquios, destruccin de las mucosas
nasales y las vas respiratorias.
Contacto con los ojos produce
enrojecimiento, dolor , visin borrosa,
conjuntivitis y ceguera permanente
Contacto con la piel produce
enrojecimiento, dolor, resequedad de la
piel, dermatitis y alergias.
Ingestin conlleva a calambres
abdominales, estreimiento,
convulsiones, dolor de cabeza,
nuseas y vomito.
Hidrxido de sodio Inhalacin produce irritacin leve y
dao grave del tracto respiratorio
superior.
Contacto con los ojos es corrosivo
causa irritacin, quemaduras que
pueden terminar en ceguera.
Contacto con la piel es corrosivo y
produce irritacin, quemaduras graves
y cicatrices.
Ingestin corrosivo produce
quemaduras severas en la boca,
garganta y estmago.
Acido sulfrico Inhalacin produce quemaduras,
dificultad respiratoria, tos y sofocacin.
Ingestin es corrosivo causa
quemaduras severas de boca y
garganta, perforacin del estmago y
esfago, dificultad para comer,
nauseas, sed, vomito con sangre y
diarrea.
Contacto con la piel causa quemaduras
severas, profundas y dolorosas.
Contacto con los ojos es corrosivo
causa irritacin, lesiones irreversibles y
puede causar ceguera.
Sudan III Produce irritacin al contacto con la piel
y los ojos.
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Glucosa Irritacin en los ojos y puede producir
disturbios gastrointestinales por
ingestin de grandes cantidades.
Glicina En caso de inhalacin puede producir
tos, ahogo e irritacin.
Lisina Irritacin en los ojos y en la piel.
Riegos de los reactivos usados
40
Procure una buena ventilacin
Biuret Llevar guantes
Gafas
Mascarilla de proteccin
Usar prendas adecuadas
Lavarse las manos tras la manipulacin
Procure una buena ventilacin para
evitar vapores
Reactivo de milln Usar guantes apropiados
Gafas
Tapabocas o mascarilla
Bata
Acetato de plomo Traje de proteccin
Mascarilla
Guantes
Gafas protectoras de nitrilo
Botas
Hidrxido de sodio Lentes de seguridad
Bata
Guantes de nitrilo
Siempre debe manejarse en una
campana y no debe utilizarse lentes de
contacto al trabajar con este
compuesto.
Acido sulfrico Gafas de seguridad
Guantes
Botas de caucho
Ropa protectora
Respirador con filtro para vapores
cidos.
Sudan III Gafas de proteccin con un protector en
los costados
Guantes de proteccin qumica
Bata
Glucosa Mascarilla en presencia de polvo
Gafas
Guantes de nitrilo
Sustituir la ropa contaminada lavar las
manos al terminar el trabajo.
Glicina Proteccin para los ojos
Guantes
Ropa adecuada
No se requiere de proteccin
respiratoria.
Lisina Lentes de seguridad
Guates de proteccin
41
Ropa adecuada
Mascarilla
Vestimenta de seguridad para las sustancias usadas
42
Reactivo de milln Peligroso para la salud produce
irritacin ocular grave e irritacin
cutnea
Toxico por inhalacin
Toxico para organismos acuticos
Acetato de plomo Peligroso para la salud en caso de
ingestin
Estable bajo condiciones de
manipulacin y almacenamiento
recomendadas
Toxico para ecosistemas acuticos
Hidrxido de sodio Altamente corrosivo en los tejidos
Acido sulfrico Vapores txicos
Altamente corrosivo
Peligroso para la salud puede producir
cncer
Altamente reactivo con agua
Sudan III Esta sustancia no rene los criterios
para ser clasificada como peligrosa.
Glucosa Producto no peligroso
Peligro para la salud clasificacin 1.
Inflamacin y reactividad clasificacin
0.
Toxico para los peces.
Glicina Sustancia no peligrosa
Lisina Sustancia no peligrosa
Clasificacin 0 para salud,
inflamabilidad y reactividad.
43
PRACTICA 2. PROPIEDADES BIOQUIMICAS DE LOS AMINOACIDOS
Reaccin de Ninhidrina:
44
Permite identificar la presencia de protenas y aminocidos libres. El grupo -
amino de los aminocidos al reaccionar con la ninhidrina (hidrato de
tricetohidrindeno) forma complejos de color azul-violeta, amarillo para la prolina
e hidroxiprolina y caf para la asparraguina que tiene un grupo amido en la
cadena lateral.
Materiales y mtodos
Resultados
Fue una prueba positiva para la prueba de glicina y lisina debido a que esta
presenta un grupo amino que reacciona con la ninhidrina, el cual es un agente
oxidante fuerte que efecta la descarboxilacin oxidativa de los aminocidos, y
forman dixido de carbono, amonaco y un aldehdo que contiene un tomo de
carbono menos que el compuesto original
45
Tubos Cantidad Reactivo Procedimiento Cada tubo
con 5 ml de NaOH 2,5N
1 solucin de + Preparar los tubos de ensayo. 1 ml de
Leucina al 1% sulfato cprico NaOH 2,5N
con 1.5 mL NaOH 2,5N Agregue a cada tubo de ensayo +
2 de + 1 ml de 3 gotas de solucin de
Albmina1% sulfato cprico NaOH 2,5N de la solucin sulfato cprico al 1%
con 1.5 mL NaOH 2,5N correspondiente.
3 de Tirosina +
1% sulfato cprico Agregue 3 gotas de solucin de
NaOH 2,5N sulfato cprico al 1% a cada
con 1.5 mL
4 + tubo de ensayo.
de Glicina 1%
sulfato cprico
Agite cada tubo de ensayo
con 1.5 mL NaOH 2,5N
5 de Triptfano +
Observar y tomar apuntes de los
1% sulfato cprico 5ml de solucin respectiva
cambios.
Procedimiento reaccin de Biuret
46
Reaccin De Biuret
Materiales y mtodos
Resultados
Los resultados obtenidos indican que la albumina presenta enlaces pptidos por
lo que se observ un color violeta. Las dems muestras como la lisina, tirosina y
glicina al no tener enlaces pptidos sus resultados fueron negativos ya que
dieron una coloracin azul porque los enlaces pptidos fueron eliminados.
47
HNO3 Agregue, 0,5 ml de HNO3
con 1.5 mL de + concentrado en cada tubo, en la
2
Albmina1% NaOH campana de extraccin.
HNO3 Retire los tubos del bao y djelos
con 1.5 mL de + enfriar.
3
Metionina 1% NaOH
Agregue lentamente 1 ml de
Amoniaco (NH4OH) concentrado en 1.5 ml de solucin respectiva
la campana de extraccin o 1.5 mL. +
de NaOH al 40%, Bao de agua hirviente por 10
HNO3 minutos.
con 1.5 mL de + Observar y tomar apuntes de los +
4
Fenilalanina 1% NaOH cambios. Agregue 1 ml de Amoniaco
(NH4OH) 1.5 mL de NaOH al
40%.
+
observe el cambio de color
Procedimiento reaccin Xantoproteica
Reaccin Xantoproteica
48
Materiales y mtodos
Resultados
49
2.1.8. REACCION DE MILLON
Forma complejos de color rojo ladrillo debido al anillo fenlico de la tirosina y las
protenas que la contienen.
Rojo: Tirosina
Incoloro: Fenilalanina
Reaccin De Millon
Materiales y mtodos
50
Resultados
51
Hidrxido de
Sodio (NaOH
+
con 1.5 mL
4 de Leucina
alfa-naftol
+
hipoclorito de
Sodio
5 ml de solucin respectiva
52
Reaccion De Sakaguchi
Materiales y mtodos
Resultados
53
B. Proponga de acuerdo a la pruebas una clasificacin de los aminocidos
utilizados y relacione la importancia de la aplicacin de algunas de
estas pruebas aplicadas a otras reas del conocimiento como:
microbiologa, qumica de alimentos entre otras.
Fundamento:
54
Detectar la capacidad de la bacteria de hidrolizar el hipurato mediante la enzima
hipuricasa.
La hidrlisis del hipurato dar como resultado glicina, que reaccionar con la
Ninhidrina provocando un cambio de color. Esta prueba se utiliza en la
identificacin de Campylobacter jejuni, Listeria monocytogenes, Gardnerella
vaginalis y Streptococcus agalactiae. (Ana Fernndez Olmos, 2010)
Mtodo:
Reaccin de Biuret en
Determinacin de nitrgeno:
55
que contiene una muestra con relacin al compuesto que se quiera determinar.
Puede analizarse el nitrgeno no proteico mediante el NO2-, NO3-, NH4+, el
nitrgeno proteico mediante absorcin en UV, Reaccin de Biuret, Reaccin de
Lowry, o el nitrgeno total mediante la Digestin de Kjeldah. (Bacteriologa, s.f.).
Reaccin de Ninhidrina
Reaccin de Biuret
56
El Cobre (II) se aade en forma de Sulfato de Cobre. Dado que las soluciones de
Sulfato de Cobre tiene color azul, la cantidad de reactivo aadida debe ser
controlada para evitar positivos falsos. El nombre se proviene del compuesto Biurea
(NH2-CO-NH-CO-NH2) el cual da positiva la prueba. Mediante esta reaccin es
posible seguir el proceso de hidrlisis proteica, la reaccin ser negativa cuando la
hidrlisis sea completa.
La Reaccin Xantoproteica
El nombre de la reaccin se deriva del griego xantos, que significa amarillo, que es
el color caracterstico de la reaccin positiva. El color amarillo se intensifica en
medio alcalino. Esta reaccin es la que provoca el color amarillo cuando se salpica
la piel con cido Ntrico concentrado, las protenas de la piel tienen Tirosina y
Triptfano, los cuales al nitrarse, le dan a la piel un color amarillo caracterstico
Reaccin de Millon
57
Millon. Es especfica para el grupo fenlico por lo tanto, la dan positiva todas las
sustancias que poseen esta funcin, como la Tirosina y todas las protenas que
contengan Tirosina. El primer paso de la reaccin de Millon consiste en la nitracin
del anillo fenlico de la Tirosina, por el cido Ntrico del reactivo. La Tirosina nitrada
forma complejos con los iones Mercurioso Hg(I) y Mercrico Hg(II) del reactivo
produciendo un precipitado rojo o una solucin roja, ambos resultados positivos.
Algunas protenas pueden formar el precipitado rojo desde el inicio, mientras que
otras primero forman un precipitado blanco, que se debe calentar para dar el color
rojo indicativo de la presencia de Tirosina. Cualquier sustancia con un grupo fenlico
dar positiva la reaccin de Millon y puede interferir con la deteccin de Tirosina
(Vargas, s.f.)
Reaccin De Sakaguchi
58
Aminocidos
Protenas
Las protenas son molculas formadas por aminocidos que estn unidos por un
tipo de enlaces conocidos como enlaces peptdicos. El orden y la disposicin de
los aminocidos dependen del cdigo gentico de cada persona. Todas las
protenas estn compuestas por:
Carbono
Hidrgeno
Oxgeno
Nitrgeno
Las protenas suponen aproximadamente la mitad del peso de los tejidos del
organismo, y estn presentes en todas las clulas del cuerpo, adems de
participar en prcticamente todos los procesos biolgicos que se producen.
(Unidad Editorial Revistas, 2016)
Anlisis cualitativo
Anlisis cuantitativo
59
qumica se conoce como anlisis cuantitativo a la determinacin de la
abundancia absoluta/relativa (muchas veces expresada como concentracin) de
una, varias o todas las sustancias qumicas presentes en una muestra.1
Una vez que se conoce la presencia de cierta sustancia en una muestra, la
cuantificacin o medida de su abundancia absoluta o relativa puede ayudar en la
determinacin de sus propiedades especficas.
Por ejemplo, el anlisis cuantitativo realizado por espectrometra de masas sobre
muestras biolgicas puede aportar, por la proporcin de abundancia relativa de
ciertas protenas especficas, indicaciones de ciertas enfermedades, como el
cncer. (Wikipedia, Anlisis cuantitativo (qumica), 2016)
60
PRACTICA 3. BIOQUIMICA DE LAS PROTEINAS
61
Se tomaron seis tubos de ensayo y se les agreg a cada uno 3ml de solucin
diferente de albumina de huevo al 1%, tirosina, leche, carne, aceite y glucosa, luego
se agregaron 5 gotas de reactivo de Biuret.(CuSo4) Luego se observan cambios
que demuestren la presencia de protenas.
62
Agitar y observar los resultados.
63
2.1.11. REACCION DE AMINOACIDOS AZUFRADOS
hidrxido
sdico
con 3 mL de +
5
Glucosa acetato de
plomo
64
Reaccin de color negruzco que reacciona ante la presencia de aminocidos con la
solucin de acetato de plomo para formar el sulfuro de plomo.
Se tomaron seis tubos de ensayo y se les agreg a cada uno 3ml de solucin
diferente de albumina de huevo al 1%, tirosina, leche, carne, aceite y glucosa, luego
se agregaron de reactivo, (hidrxido sdico + acetato de plomo) y se colocan a
calentar hasta ebullicin.
65
Al realizar la prueba con la carne se observ que la muestra toma un color rojo
claro grisceo.
Al realizar la prueba con clara de huevo se observ que la muestra toma un color
negruzco plateado en la parte superior y en el fondo se forma un anillo amarillo.
66
4.3.3 METODO DE BRADFORT
ESPECTOFOTOMETRIA:
RESULTADOS
67
Para las diluciones del problema, interpolar la absorbancia obtenidas sobre
la recta representada para saber la cantidad de protenas presentes en cada
una de ellas. Alternativamente, haga el clculo mediante la pendiente de la
recta.
68
VOLUMEN DE CONCENTRACIN DE
LECHE PROTENA
20 25
25 50
30 75
PREGUNTAS:
Reaccin de biuret.
Reaccin de aminocidos azufrados
Mtodo de Bradford.
69
E. Cmo se manifiesta la desnaturalizacin de la clara de huevo?
Las protenas, debido al gran tamao de sus molculas, forman con el agua
soluciones coloidales. Estas soluciones pueden precipitar con formacin de
cogulos al ser calentadas a temperaturas superiores a los 70 C o al
ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. Si una protena
coagulada podra dar la reaccin de Biuret, porque el reactivo reacciona con
cualquier protena, liquida o slida, por ejemplo cuando haces una
cuantificacin de protenas en suero (liquida) o cuando haces una prueba
cualitativa en huevos, carne, papas, etc.
70
J. Si se realiza la reaccin del Biuret sobre un aminocido como la Glicina
es positiva o negativa? Por qu?
71
PRACTICA 4. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS
Los carbohidratos son molculas formadas por carbono, hidrgeno y oxgeno (C,
H, O) e incluyen algunas de las molculas ms relevantes en la vida de los
organismos, como son la glucosa, que es universalmente utilizada por las clulas
para la obtencin de energa metablica, el glucgeno contenido en el hgado y el
msculo, que forma la reserva de energa ms fcilmente accesible para las clulas
del organismo y la ribosa y desoxirribosa que forman parte de la estructura qumica
de los cidos nucleicos.
72
2.1.12. IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS
73
2.1.12.1. PRUEBA DE BENEDICT: Identifica azcares reductores (aquellos
que tienen su OH libre del C anomrico), como la lactosa, la glucosa,
la maltosa, y celobiosa. En soluciones alcalinas, pueden reducir el
Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita de la solucin alcalina
como Cu2O de color rojo-naranja. El reactivo de Benedict consta de:
Sulfato cprico; hidrato de sulfato de sodio y o cloruro, Carbonato
Anhidro de Sodio, adems se emplea NaOH para alcalinizar el medio.
74
Glucosa: positivo
Fructosa: positivo
Maltosa: positivo
Sacarosa: Negativo
Almidn: Negativo
La glucosa, fructosa y maltosa presentan un
precipitado de color anaranjado denominado xido
cuproso (Cu20) es decir que se trata de azcares
reductores.
La sacarosa no presenta evidencia de precipitado
color rojo ladrillo con la reaccin de oxidacin de
Benedict, por lo que se confirma, que no es un azcar
no reductor.
CONCLUSIN
75
Glucosa: positivo
Fructosa: positivo
Maltosa: positivo
Sacarosa: Negativo
Lactosa: positivo
Almidn: Negativo
Por otro lado, refirindonos a los que dieron negativos (que no nos dio coloracin),
esto se da porque es una azcar constituida por una molcula de glucosa y de
fructosa, tiene un enlace entre el primer carbono de la glucosa y el segundo carbono
de la fructosa, y no queda grupos reductores disponibles. Al no ser reductor, la
prueba de Fehling es negativa, y por lo que se intuye, no posee el grupo carbonilo
apto y libre, necesario como para reaccionar con el reactivo Fehling, y a ebullicin,
no se observ ningn cambio.
CONCLUSIN
Podemos concluir que las muestras de glucosa, fructosa, maltosa y galactosa son
azcares reductores, ya que se form un precipitado de color rojo ladrillo (xido
cuproso).
76
2.1.12.3. REACCION DE MOLISCH: La prueba de Molish permite detectar la
presencia de hidratos de carbono en una muestra; est basada en la
formacin de furfural o derivados de ste (originado por los cidos
concentrados que provocan una deshidratacin de los azcares) a
partir de los carbohidratos para obtener el furfural que se combina con
el -naftol sulfonato originando un complejo prpura. Es una reaccin
muy sensible puesto que soluciones de glucosa al 0.001% y sacarosa
al 0.0001% dan positiva la prueba. Tambin sirve para el
reconocimiento general de carbohidratos donde polisacridos y
disacridos se hidrolizan formando monosacridos formando un color
prpura violeta.
77
Glucosa: positivo
Fructosa: positivo
Maltosa: positivo
Sacarosa: Negativo
Lactosa: positivo
Almidn: Negativo
78
Glucosa: Negativo
Fructosa: positivo
Maltosa: positivo
Sacarosa: Negativo
Lactosa: Negativo
Almidn: Negativo
79
El almidn es coloreado de
violeta negruzco positivo,
debido a que se juntan las
molculas de yodo,
introducindose en las
espiras de la molcula del
almidn.
CONCLUSIN
Se identific mediante la Prueba de Yodo la presencia de almidn
(polisacridos).
PREGUNTAS
1. Explique por qu el monosacrido gliceraldehido da negativa la prueba
Molish.
81
6. Escriba las funciones: aldehdica, cetnica, alcohlica, cida, colquelas en
orden de reactividad y explique el porqu de ese orden.
Esto se debe a que los productos resultantes en cada caso son energticamente
ms estables que el reactivo que les dio origen. Es decir, el alcohol rinde productos
energticamente ms inestables que los cidos orgnicos.
Los azcares reductores son aquellos azcares que poseen su grupo carbonilo
(grupo funcional) intacto, y que a travs del mismo pueden reaccionar con otras
especies. Los azcares reductores provocan la alteracin de las protenas mediante
la reaccin de glucosilacin no enzimtico tambin denominada reaccin de
Maillard o glicacin.
azcares reductores
82
El monosacrido ms importante y el azcar reductor es glucosa. En el cuerpo, la
glucosa se conoce como azcar en la sangre, porque es esencial para la funcin
cerebral y la energa fsica. La fructosa es otro azcar reductor y es conocido como
el ms dulce de todos los monosacridos. La galactosa, otro azcar reductor, es un
componente de la lactosa que se encuentra en los productos lcteos. La maltosa no
se encuentra a menudo en la naturaleza, sino que se produce durante la digestin
cuando las molculas de almidn se descomponen.
Azcares no reductores
83
PRACTICA 5. CARACTERISTICAS DE LOS ACIDOS GRASOS
3.1.2. SOLUBILIDAD
Tomamos dos tubos uno para poder comparar y determinar la reaccin, luego de
seguir los pasos anteriormente mencionados obtenemos la siguiente reaccin:
84
En la imagen podemos ver en el primer tubo que no se produce una mezcla al
contrario se ve perfectamente la divisin entre las dos sustancia el agua y el aceite
debido a que el aceite subir debido a su menor densidad, pero en el segundo tubo
vemos como se mezclan las dos sustancias el aceite y el hexano, debido a que las
grasas son solubles en disolventes orgnicos.
3.1.3. SAPONIFICACION
85
Procedimiento ensayo de Saponificacin
Para esta prctica tomamos dos tubos y los preparamos segn los pasos anteriores
dndonos como resultado la siguiente reaccin:
En la siguiente imagen podemos observar la formacin de tres capas las cuales son
ms visibles en el segundo tubo el cual contiene NaOH, una capa inferior clara que
contiene la solucin sobrante junto con la glicerina que se form, una capa
intermedia semislida que es el jabn formado, y por ultimo una capa superior que
contiene el aceite que no sufri ninguna reaccin aunque no se ve en la imagen en
esta reaccin la mezcla se solidifico mientras que en el primer tubo que contiene
KOH la mezcla es lquida. Esta reaccin se da porque los cidos grasos reaccionan
con bases fuertes en este caso el NaOH y el KOH dando lugar a los jabones ya sea
solidos o lquidos.
Por ultimo realizamos la Reaccin con el Sudan III, para la cual seguimos estos
pasos:
86
con 3 mL de
2 Aceite Tinta roja Agregar 3mL de aceite vegetal.
vegetal
Agregar 8 gotas de Sudan III
Podemos observar como en el primer tubo al que se le aplica Sudan III se forma un
anillo en la parte superior sobre el aceite cambiando de color de rojo a un anaranjado
debido a que el sudan III detecta especficamente las grasas y se va disolviendo y
tiendo las grasas de anaranjado, en el segundo tubo el cual contiene tinta roja
podemos observar que la mezcla se tie del color rojo y se forma un sobrante en el
fondo sin mostrar ningn cambio en su color.
87
A. Qu son los jabones?
Los jabones son sales sdicas o potsicas de los cidos grasos, solubles en agua.
Se fabrican a partir de grasas o aceites que son mezclas de triacilgliceroles o de sus
cidos grasos, mediante tratamiento con un lcali o base fuertes es decir de
hidrxido sdico, que dar jabones duros, o hidrxido potsico, que dar jabones
blandos ms adecuados para jabones lquidos y cremas de afeitar. Por sus
caractersticas, los jabones son surfactantes aninicos.
Wikipedia. Jabn. Tomado de: https://es.wikipedia.org/wiki/Jab%C3%B3n
88
compuestos tienen la particularidad de ser anfipticos, es decir tienen una parte
polar y otra apolar (o no polar), con lo cual pueden interactuar con sustancias de
propiedades dispares. Por ejemplo, los jabones son sales de cidos grasos y
metales alcalinos que se obtienen mediante saponificacin
Un lpido saponificable sera todo aquel que est compuesto por un alcohol unido a
uno o varios cidos grasos (iguales o distintos). Esta unin se realiza mediante un
enlace ster, muy difcil de hidrolizar. Pero puede romperse fcilmente si el lpido
se encuentra en un medio bsico. En este caso se produce la saponificacin
alcalina. En los casos en los que para la obtencin del jabn se utiliza un glicrido
o grasa neutra, se obtiene como subproducto el alcohol llamado glicerina, que
puede dar mayor beneficio econmico que el producto principal.
Blog. (2010) Cavidad bucal. Enzimas de la cavidad oral. Tomado de: http://cavidad-
bucal.blogspot.com.co/2010/06/enzimas-de-la-cavidad-oral.html
Lipasa gstrica: La lipasa gstrica acta sobre todo en los recin nacidos
modificando los triglicridos de cadena media contenidos en la leche materna. Este
proceso favorece la digestin de estos triglicridos particulares as como el aporte
de lpidos.
89
principal y primario de la lipasa srica. La lipasa pancretica humana es una
glucoprotena, con un peso molecular de 45.000 daltons.
E. Indique lo que ocurre con las mezclas de aceite Sudan III y aceite
tinta y explique a que se debe la diferencia entre ambos resultados.
Aceite Sudan III: se form el anillo de color naranja y se fue tiendo toda la
mezcla. Este resultado se debe a que le aceite y las grasa son un compuesto
orgnicos que existente en la naturaleza los cuales consiste en esteres formados
por tres molculas de cidos grasos y un molcula de alcohol glicerina, por lo tanto
el sudan III reconoce estas molculas y las tie del color anaranjado.
Aceite tinta roja: la tinta se precipit al fondo de la mezcla, esto se debe a que la
tinta solo se dispersa ya que no es especfica para grasas por lo que no reacciona
con las molculas de este.
La diferencia de las dos reacciones se debe a que el Sudan III es especfico para
teir aceites mientras que la tinta es solo para diferenciar.
Lo que podemos observar despus de unos minutos entre el agua y el aceite es que
el aceite sube y el agua se encuentra abajo debido a que el agua es ms densa que
el aceite, en el aceite y hexano se observa que hay una disolucin entre los dos ya
que son solubles uno con el otro.
En el caso del aceite y el NaOH o KOH se forman tres capas, la inferior que contiene
sobrante junto con glicerina, una media que es el jabn y una superior que
90
constituye el aceite inalterado la diferencia entre las dos reacciones es que en la de
NaOH la mezcla se solidifica mientras que en la de KOH se torna liquida.
CONCLUSIONES
Los cidos grasos reaccionan con bases fuertes como el NaOH y el KOH,
formando sales solidas conocidos como jabones, y dependiendo de la base
se tornaran solido o lquidos.
91
Aprendimos a diferenciar que el Reactivo de Biuret, es de color azul, y que
cambia a violeta en presencia de protenas y segn la cantidad de estas se
da la tonalidad del color. +protena + violeta.
4. BIBLIOGRAFIA
92
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TEINAS
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c766d27abb874b794b9715e61897a72e464729c6/main/files/Glicina____cid
o_aminoac__tico_.pdf
33. Blog. (2010) Cavidad bucal. Enzimas de la cavidad oral. Tomado de:
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oral.html
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robiologia/seimc-procedimientomicrobiologia37.pdf
37. Evaluacin del mtodo del Biuret para la cuantificacin de las protenas
totales en el lquido cefalorraqudeo. Tomado de
http://www.binasss.sa.cr/revistas/rccm/v15n3-4/art4.pdf
96