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Facultad de Qumica
Laboratorio de Bacteriologa
l. RESUMEN.2
II. INTRODUCCIN 2
III. OBJETIVOS....3
IV. METODOLOGA.3
V. RESULTADOS Y DISCUSIN7
Vl. CONCLUSIN..13
Vll. BIBLIOGRAFA..13
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I. RESUMEN
II. INTRODUCCIN
Mujeres jvenes,
No embarazadas,
Sin condiciones pre-disponentes,
Y sintomatologa de afectacin del Tracto Urinario Inferior (cistitis).
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Diabetes o inmunodepresin.
Con microorganismos multirresistentes.
Ms del 95% de las ITU son monobacterianas. Escherichia coli es el agente causal ms
frecuente (80-90%), Proteus mirabilis y Kelbsiella pneumoniae, en menor frecuencia
Enterococcus y Staphylococcus saprophyticcus. En el caso de las infecciones
polibacterianas se observan en el 16%-25% de ITU complicadas, presentando mayores
resistencias a antibiticos.
III. OBJETIVOS
IV. METODOLOGA
A. Material.
1. Asas bacteriolgicas.
2. Asas bacteriolgicas rectas.
3. Portaobjetos.
4. Mechero.
5. Cajas petri.
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B. Reactivos.
1. Reactivo de oxidasa.
2. Equipo de tincin Gram.
3. Reactivo para prueba de catalasa.
4. Tubos de ensayo para pruebas de:
a) Citrato de Simmons.
b) MIO.
c) SIM.
d) Degradacin de nitratos.
e) TSI.
f) Urea.
g) OF.
h) Lisina.
5. Cajas petri con agar, dos de cada uno:
a) Mueller Hinton sangre 5%.
b) McConkey.
c) Mueller Hinton.
6. Discos de cepazolim.
7. Discos de ceftriaxona.
8. Discos de cefaroxine.
9. Discos de cefepime.
10. Discos de ciprofloxacina.
11. Discos de imipenem.
12. Discos de gentamicina.
13. Discos de Trimetoprim/sulfametoxazol.
14. Discos de amikacina.
15. Discos de amoxicilina con cido clavulnico.
16. Discos de ampicilina.
V. Procedimiento.
A. Toma de muestra.
1. Tomar la muestra con al menos 4 horas de ayuno.
2. Colectar la orina del chorro intermedio.
3. Almacenar hasta el cultivo.
B. Cajas con agar.
1. Por cada uno de los agares preparar dos cajas petri.
2. Sembrar cada muestra en los agares.
3. Incubar a 37C por 24 h.
4. Notar crecimiento, morfologa de colonias y cambios de coloracin.
C. Tincin de Gram.
1. Realizar el procedimiento estndar para tincin de Gram a todas las
cepas.
2. Observar al microscopio e identificar si la prueba resulta negativa o
positiva.
D. Catalasa.
1. Realizar el frotis de las dos cepas en un portaobjetos.
2. Agregar una gota de H2O2 a cada frotis.
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3. Notar si hay efervescencia o no.
E. Oxidasa.
1. Con aplicadores de madera tomar una colonia de cada cepa.
2. Colocar las muestras en una tira reactiva y notar si hay cambio de
coloracin o no.
F. SIM.
1. Tomar una colonia con un asa recta estril.
2. Sembrar por picadura hasta la seccin intermedia del medio.
3. Repetir para cada cepa.
4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Adicionar gotas del reactivo de indol.
6. Notar cambios en crecimiento, coloracin y motilidad de bacterias.
G. MIO.
1. Tomar una colonia con un asa recta estril.
2. Sembrar por picadura hasta la seccin intermedia del medio.
3. Repetir para cada cepa.
4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Notar cambios en crecimiento, coloracin y motilidad de bacterias.
H. Citrato de Simmons.
1. Tomar una colonia con un asa estril.
2. Sembrar por arrastre en la superficie del pico de flauta y por picadura
en la seccin inferior.
3. Repetir para cada cepa.
4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Notar cambios en crecimiento y coloracin.
I. OF.
1. Tomar una colonia con un asa recta estril.
2. Sembrar por picadura hasta la seccin intermedia del medio en dos
tubos.
3. Hacer lo mismo con otros dos tubos pero en este caso adicionar
aceite de beb en la superficie para generar un medio de
anaerobiosis.
4. Repetir para cada cepa.
5. Incubar a 37C por 24 h.
6. Notar cambios en crecimiento y coloracin.
J. TSI.
1. Tomar una colonia con un asa estril.
2. Sembrar por arrastre en la superficie del pico de flauta y por picadura
en la seccin inferior.
3. Repetir para cada cepa.
4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Notar cambios en crecimiento y coloracin.
K. Urea.
1. Tomar una colonia con un asa recta estril.
2. Sembrar por picadura hasta la seccin intermedia del medio.
3. Repetir para cada cepa.
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4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Notar cambios en coloracin y formacin de gas.
L. Degradacin de nitratos.
1. Los tubos no fueron proporcionados al equipo
M. Lisina.
1. Tomar una colonia con un asa estril.
2. Sembrar por arrastre en la superficie del pico de flauta y por picadura
en la seccin inferior.
3. Repetir para cada cepa.
4. Incubar a 37C por 24 h.
5. Notar cambios en crecimiento y coloracin.
N. Prueba de resistencia.
1. Hacer sembrados de la cepa a identificar por estriado masivo en una
caja de agar Mueller Hinton.
2. Colocar los discos de antibiticos necesarios.
3. Incubar a 37C por 24 h.
4. Notar la formacin o no de halos de inhibicin.
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VI. RESULTADOS Y DISCUSIN
Fig 2. Cepas aisladas de muestra Fig 3. Agar McConkey con muestra
positiva en agar McConkey. problema, no hay crecimiento.
El control positivo muestra una coloracin roscea en colonias del agar MacConkey, esto
seala que la bacteria es fermentadora de lactosa.
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Fig 4. Cepas aisladas de muestra positiva Fig 5. Agar sangre con muestra
en agar sangre. problema. No hay crecimiento.
Una vez registradas las caractersticas macroscpicas de la cepas se realiz una tincin
Gram. Result ser Gram negativa (-).
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Se realizaron las pruebas estndar de oxidasa y catalasa para la cepa roscea aislada en
agar sangre.
Prueba positiva
Presencia de
crecimiento en los
alrededores,
demostrando la
MIO (movilidad) movilidad de
bacterias.
Hay turbidez.
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Prueba negativa
La prueba para esta
cepa result ser
negativa debido a
que la bacteria no
Urea posee ureasa, por lo
cual no puede
metabolizar la urea y
no hay un cambio de
color
TSI
Prueba positiva
El color violeta es
producido por el vire
del prpura de
bromocresol debido a
la descarboxilacin
de la lisina, que
Lisina produce la amina
cadaverina, que
alcaliniza el medio.
Estos slo tiene lugar
en medio cido, por
lo que es necesario
que la glucosa sea
previamente
fermentada.
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Prueba positiva
Se present
movilidad, esto se
peude notar por el
acumulameniento de
microorganismos en
SIM la superficie del
medio, ya que las
bacterias buscan el
O2 de la atmsfera.
Prueba positiva:
Fermentadora. El
uso del hidrato de
carbono, ya sea por
fermentacin u
oxidacin, produce
OF (aerobiosis) acidez en el medio,
con el consecuente
viraje del color verde
al amarillo.
Prueba positiva:
Fermentadora. El
uso del hidrato de
carbono, ya sea por
fermentacin u
oxidacin, produce
OF (anaerobiosis) acidez en el medio,
con el consecuente
viraje del color verde
al amarillo.
El tubo para de
gradacin de nitratos
Nitratos nunca fue N/A
proporcionado al
equipo
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Se realizaron las pruebas de sensibilidad de acuerdo al CLSI.
Cepazolim 26 23 Sensible
Ceftriaxona 30 23 Sensible
Cefaroxine 23 18 Sensible
Cefepime 35 18 Sensible
Ciprofloxacina 35 31 Sensible
Imipinem 30 23 Sensible
Gentamicina 20 16 Sensible
SXT 26 15 Sensible
Amikacina 24 17 Sensible
Ampicilina - 17 Resistente
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VII. CONCLUSIN
VIII. BIBLIOGRAFA
Patrick R. M. (2014). Microbiologa Medica 7. Edicin. Editorial Elsevier. 8.
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