DNA plasmidial Supercoil

Relajado
DNA topoisomerasas
Enrollamientos + (derecha), - (izquierda)

Tipo I: Corte y sellado, Enzima monomrica que solo corta una hebra del
DNA y se mantiene unida a 5 de hebra rota por enlace fosfodiester con OH
(Tyr), extremo 3 queda libre para rotar. Grupo OH del 3 ataca fosfato 5
cerrando el nick.

Tipo II: Enzima tetramerica (homo- o heterodimero) que requiere ATP y

genera ruptura de la doble hebra (Gated, segmento G) y la parte no rota
(segmento T, transportado), atraviesa por el corte creado. Girasa de E.coli
introduce giros (-) y relaja molcula superenrollada.
En E. coli existen 4 topoisomerasas:
Tipo I: Topoisomerasa I y III bacterianas y eucarioticas
Tipo II: topoisomerasa II (girasa) y IV bacterianas y II eucariotica.
*Topoisomerasas II y IV son cruciales para completar ciclo de replicacin,
topo IV es la enzima desencadenadora.
Estructura de cromatina
Modificaciones qumicas de Histonas:
Amino de Lys: Acetilaciones y metilaciones
Arg e His: Metilaciones
Ser e His: Fosforilaciones

Ser10 de H3 es fosforilada cuando los

cromosomas se condensan en la mitosis
Tcnica de marcaje indirecto
Video-1
 Mecanismo de la REPLICACION

Podra ser:

semiconservativo conservativo

disperso

Experimento: Meselsohn Stahl

 Mecanismo de replicacin es

SEMI-CONSERVATIVO

-Una hebra es la pauta de la nueva hebra

-En la F1 hbridos, parental/nueva hebra
-En la F2 parental/nueva, nueva/nueva, nueva/parental
 PROCARIOTA
E.coli UN origen de replicacin

(parecido DNA BIDIRECCIONAL

mitocondrial)
Estructura theta
4.7x107bp
aprox. 20min

DNA encadenado
 Escherichia coli

ORIGEN
de replicacion

4,6x106bp TERMINO
Se duplica en 20min de replicacion
 EUCARIOTA
MULTIPLES orgenes de replicacin

BIDIRECCIONAL

eyestructure

Clula animal en cultivo

3x109bp, aprox. 24 horas
 SINTESIS DE DNA in vivo REPLICACION

- Iniciacin, elongacin, terminacin

- En la fase S del ciclo celular
INICIACION
cuando y
donde
- Una vez el genoma entero PRO EU
- origen de replicacin 1 mltiples
ELONGACION - bidireccional, 53
TERMINACION - terminacin DNA encadenado, telomeros
topoisomerasa telomerasa
Otros genomas:
Ej. retrovirus HIV, 2x RNA, transcripcin reversa, replic.
 SIEMPRE
La cadena nueva crece en direccin 53
porque las nuevas subunidades se unen al 3-OH

Horquilla de la REPLICACION
 Protenas que
estabilizan
hebra simple,
SSB

DNA Pol III

FRAGMENTOS OKAZAKI
GIRASA
HELICASA
PRIMASA
DNA Pol I
DNA Ligasa
Replicon:
Unidad gnica que se replica, en general el numero de replicones depende del
tamao del genoma. Cada replicon posee un origen y un termino.

Genomas virales: 1 replicon

E. Coli: 1 replicon de 4.200 kb 50.000 pb/min

Levaduras: 500 replicones de 40 kb

Drosophila: 3.500 replicones de 40 kb 2.600 pb/min

Xenopus Leavis: 15.000 replicones de 200 kb 500 pb/min

 Circulo Rodante
(Genomas circulares)

Fago T7: primosoma con 1 componente

 Replicones Eucarioticos

Numero varia de acuerdo a especies, 50-300 kpb, cada uno

con su propio origen de replicacin.

Solucin de problemtica de replicon lineal:

a) Convertir replicon lineal en circular (Fago lambda o T4)
b) Formar horquilla terminal (DNAmit lineal Paramecium)
c) Protena terminal que permita iniciacin (Adenovirus)
d) Adicionar unidades repetidas en el extremo (Telmeros).

* Genoma humano con un origen de replicacin demorara >500h

Diferencias y semejanzas entre Pro- y Eucariontes

Ambos son semiconservativos

Continua en una hebra (lder) y discontinua en la otra hebra (retardada)

El tamao de los fragmentos de Okazaki es de slo 135pb en

eucariontes, aprox. el mismo tamao del DNA de un nucleosoma.
 Video-4

Video-3

Video-2
Telomeros:

Extremos de los cromosomas, confieren estabilidad a la molcula lineal

Larga serie de cortas secuencias repetidas en tandem (Cn(A/T)m donde
(n>1, m 1-4)
Secuencia organizada en hairpin para favorecer proteccin por nucleasas
Generados por telomerasa, que es una gran ribonucleoprotena.
La longitud del telmero es variable. En Oxytricha y Euplotes (protozoos) es
apenas de 38 pb mientras en ratones alcanza 150 kb. Cada organismo posee una
longitud media caracterstica.
Las repeticiones del DNA telomrico tienen una distribucin asimtrica de los
pares G:C, pues las G se acumulan en una de las hebras (hebra G) y se
encuentran agrupadas. La hebra G est orientada de 5' a 3' hacia el extremo del
telmero y forma el extremo 3'del DNA cromosmico. En la zona ms extrema
no est apareada formando un segmento final monofibrilar con una longitud
que vara segn la especie
En eucariotas: problema de replicar los terminos del DNA doble hebra, la hebra discontinua

Telomeros
Enzima telomerasa
- protena
- RNA
provee templado RNA para extender la hebra
discontinua y permitir la replicacion entera de la hebra
discontinua
-actividad DNA polimerasa dependiente de RNA =
transcriptasa reversa
-probablemente evolucin a partir de retrotransposon
-Relacionado con envejecimiento
-Relacionado con desarrollo de cancer celulas se siguen
dividiendo
Telomerasas

Existen dos criterios para identificar una

secuencia telomerica:
a) Deben ubicarse al termino del
cromosoma (lineal)
b) Deben conferir estabilidad a la
molcula lineal
Telomerasa:
Ribonucleoprotena:
RNA: 159-192 nt (con secuencia 15-22nt idntica a dos repeticiones ricas
en C), el cual provee el templado para la sntesis de la regin rica en G.
Protena: Provee actividad cataltica de transcriptasa reversa
Otras protenas que regulan el nmero de repeticiones y el largo del
telmero.
La de Tetrehymena puede alargar DNA iniciadores Oxytricha, humanos,
plantas y levaduras. Esto sugiere que la enzima tiene afinidad general por las
secuencias ricas en G ms que por un motivo especfico como sucede con
otras protenas de unin al DNA. Pero en todos los casos, la secuencia
aadida se corresponde con el molde de ARN de la enzima.