Cromatografo

Realizado por:
Luis Barrero
CI: V-24.736.457
Cabimas, Mayo de 2013

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Cromatografo

INTRODUCCION

A pesar de que, como ya se ha indicado, la cromatografa es bsicamente una

tcnica de separacin, su gran capacidad para resolver muestras complejas ha
conducido a utilizarla cada vez mas como tcnica analtica. Esta utilizacin, ha
conducido al desarrollo de una instrumentacin, que utilizando siempre la
separacin por elucin, puede operar en continuo, con mayor eficacia en la
separacin y con un mayor control de las condiciones cromatogrficas para
incrementar la reproducibilidad de los resultados.

Entre las tcnicas cromatogrficas utilizadas con fines analticos, la

cromatografa de gases es probablemente la tcnica de ms amplia utilizacin;
ninguna tcnica analtica puede ofrecer su capacidad de separacin o su
sensibilidad a la hora de analizar compuestos voltiles. Por otra parte, el hecho de
que con esta tcnica las mezclas sean separadas en fase gaseosa, establece los
lmites de su utilizacin, que estarn marcados fundamentalmente por la
estabilidad trmica de los compuestos a separar. Por lo general, la utilizacin de la
cromatografa de gases est restringida a la separacin de compuestos con un
peso molecular menor de 1000 a una temperatura mxima de trabajo de
aproximadamente 400 EC.

Para realizar una separacin mediante cromatografa de gases, se inyecta una

pequea cantidad de la muestra a separar en una corriente de un gas inerte a
elevada temperatura; esta corriente de gas, atraviesa una columna cromatogrfica
que separar los componentes de la mezcla por medio de un mecanismo de
particin (cromatografa gas lquido), de adsorcin (Cromatografa gas slido) o,
en muchos casos, por medio de una mezcla de ambos. Los componentes
separados, emergern de la columna a intervalos discretos y pasarn a travs de
algn sistema de deteccin adecuado, o bien sern dirigidos hacia un dispositivo
de recogida de muestras.

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Cromatografo

Que es un Cromatografo

Es un Equipo que permite la separacin de compuestos orgnicos voltiles, con

detector de ionizacin de llama (FID, "FlameIonization Detector") y detector de
conductividad trmica (TCD, "Thermical Conductivity Detector"). El equipo dispone
de un muestreador automtico con 82 muestras. La medida de las muestras no
puede ser superior a 2 ml.

Tipos de cromatografas

- Cromatografa en Capa Fina: La cromatografa en capa fina (CCF), TLC

(Thin layer chromatography) es una tcnica cromatogrfica. La fase
estacionaria es una capa uniforme de un absorbente mantenido sobre una
placa, la cual puede ser de vidrio, aluminio u otro soporte.

En la cromatografa en capa fina se utiliza una placa cromatogrfica

inmersa verticalmente en un eluyente apolar; La placa cromatogrfica
consiste en una fase estacionaria polar (comnmente se utiliza slica gel)
adherida a una superficie solida con algun agente cementante. El eluyente
debe ser un compuesto lquido apolar, generalmente orgnico. Para realizar
la CCF, se debe apoyar la placa cromatogrfica sobre algn recipiente o
cmara que contenga la fase lquida a aproximadamente 1 cm (la distancia
entre el principio de la placa y la muestra que se desea analizar). La
cromatografa en capa fina es la combinacin de todos los colores en un
papel.

- Cromatografa Liquida: tambin conocida como Cromatografa de

lquidos, es una tcnica de separacin y no debe confundirse con una
tcnica cuantitativa o cualitativa de anlisis. Es una de las tcnicas
analticas ampliamente utilizadas, la cual permite separar fsicamente los

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distintos componentes de una solucin por la adsorcin selectiva de los

constituyentes de una mezcla.

En toda cromatografa existe un contacto entre dos fases, una fija que suele
llamarse fase estacionaria, y una mvil (fase mvil) que fluye permanente
durante el anlisis, y que en este caso es un lquido o mezcla de varios
lquidos. La fase estacionaria por su parte puede ser almina, slice o
resinas de intercambio inico que se encuentran disponibles en el mercado.
Los intercambiadores inicos son matrices slidas que contienen sitios
activos (tambin llamados grupos ionognicos) con carga electrosttica
(positiva o negativa).

De esta forma, la muestra queda retenida sobre el soporte slido por

afinidad electrosttica. Dependiendo de la relacin carga/tamao unos
constituyentes de la mezcla sern retenidos con mayor fuerza sobre el
soporte slido que otros, es decir sern adsorbidos, lo que provocar su
separacin. Las sustancias que permanecen ms tiempo libres en la fase
senil, avanzan ms rpidamente con el fluir de la misma y las que quedan
ms unidas a la fase estacionaria o retenidas avanzan menos y por tanto
tardarn ms en salir o fluir. ste es el principio fundamental de la
cromatografa. Un ejemplo notable es la cromatografa de intercambio
inico. Las columnas ms utilizadas son las de slice.

- Cromatografa de Intercambio Inico: es un proceso que permite la

separacin de iones y molculas polares basadas en las propiedades de
carga de las molculas. Puede ser usada en casi cualquier tipo de molcula
cargada, incluyendo grandes protenas, pequeos nucletidos y
aminocidos. La solucin que debe inyectarse es usualmente llamada
"muestra" y los componentes separados individualmente son llamados
analitos. Es usada a menudo en purificacin de protenas, anlisis de agua
o control de calidad.

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- Cromatografa de Fluidos Supercrticos: La cromatografa de fluidos

supercrticos (SFC) es una tcnica hbrida entre la cromatografa de
gases (GC) y la HPLC, que combina lo mejor de ambas tcnicas. Esta
tcnica es importante porque permite la separacin de mezclas en las que
no es adecuada la aplicacin de la GC ni de la HPLC. En concreto, se
aplica a compuestos no voltiles o trmicamente inestables que no pueden
ser separados mediante GC, o aquellos que contienen grupos funcionales
que imposibilitan su deteccin en HPLC.

- Cromatografa de Gases: es una tcnica cromatografica en la que la

muestra se volatiliza y se inyecta en la cabeza de una columna
cromatogrfica. La elucin se produce por el flujo de una fase mvil de gas
inerte. A diferencia de los otros tipos decromatografa, la fase mvil no
interacta con las molculas del analito; su nica funcin es la de
transportar el analito a travs de la columna.

Existen dos tipos de cromatografa de gases (GC): la cromatografa gas-

slido (GSC) y la cromatografa gas-lquido (GLC), siendo esta ltima la que
se utiliza ms ampliamente, y que se puede llamar simplemente
cromatografa de gases (GC). En la GSC la fase estacionaria es slida y la
retencin de los analitos en ella se produce mediante el proceso
de adsorcin. Precisamente este proceso de adsorcin, que no es lineal, es
el que ha provocado que este tipo de cromatografa tenga aplicacin
limitada, ya que la retencin del analito sobre la superficie es
semipermanente y se obtienen picos de elucin con colas. Su nica
aplicacin es la separacin de especies gaseosas de bajo peso molecular.

La GC se lleva a cabo en un Cromatografo de lquidos. ste consta de

diversos componentes como el gas portador, el sistema de inyeccin de
muestra, la columna (generalmente dentro de un horno), y el detector.

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Si es un slido, cabe distinguir entre:

Cromatografa de adsorcin: El slido adsorbe al componente que

inicialmente estaba en fase mvil (liquida o gaseosa) (Fuerzas de Van der
Waals)

Cromatografa de cambio inico: el slido es un cambiador de iones

(fuerzas electrostticas)

Cromatografa de exclusin (o de geles), el slido es un gel formado por

polmeros no inicos porosos que retienen a las molculas de soluto segn
su tamao.

Cromatografa de afinidad: es un tipo especial de cromatografa de

adsorcion, utilizada especialmente en bioqumica, en la que un slido tiene
enlazado un llamado ligando de afinidad que puede ser por ejemplo, un
indicador enzimtico o un anticuerpo

Si es un lquido, cromatografa liquida, cabe distinguir:

Cromatografa liquido-liquido (CLL) en la que ambas fases son

liquidas y, por tanto, se trata de una cromatografa de particin.
Cromatografa liquido-slido (CLS) en la que la fase estacionaria es
slida (adsorcin, cambio inica, exclusin, afinidad).

Si es un gas, cromatografa de gases, puede ser:

Cromatografa gas-liquido (CGL), que es una cromatografa de

particin.

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Cromatografa gas-slido (CGS), que es una cromatografa de

adsorcin.

Si es un fluido supercrtico, (fluido calentado a una temperatura superior a la

temperatura critica, pero simultneamente comprimido a una presin mayor que
su presin critica), se trata de la cromatografa de fluidos supercrticos (CFS), que
puede ser de particin o de adsorcin.

Partes de un Cromatografo

El esquema general de un cromatgrafo de gases se muestra en la figura 1. Los

componentes fundamentales de un Cromatografo de gases, son:

.- Fuente de gas.
.- Sistema de inyeccin.
.- Horno y columna cromatogrfica.
.- Sistema de deteccin.
.- Sistema de registro.

Figura 1. Esquema de un Cromatografo de Gases.

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Al margen del efecto que la naturaleza del gas portador puede ejercer sobre la
altura de plato, la eleccin de uno u otro tipo de gas, estar determinada
fundamentalmente por el sistema de deteccin utilizado. Como fuentes de gas
portador se suelen utilizar cilindros de gas comprimido de elevada pureza,
capaces de suministrar una presin de gas adecuada y constante; es de hacer
notar que, en muchos casos, es necesario eliminar las trazas de impurezas que
pueda contener el gas (O2 y H2O fundamentalmente) que pueden afectar al
sistema cromatogrfico, por medio de filtros adecuados. El control de la velocidad
del gas portador a travs de la columna, se realiza por medio de vlvulas que
suministran un caudal constante (columnas empaquetadas) o que mantienen
constante la presin en cabeza de columna (sistemas capilares).

Figura 2. Curvas de AEPT para tres gases portadores de uso habitual

El horno de un cromatgrafo de gases, tiene como misin el mantener la

columna termostatizada a una temperatura fijada con gran precisin (dentro de
unos lmites de 1 EC); por otro lado, es necesario que el control de
termostatizacin del horno permita incrementar la temperatura de ste a una
velocidad prefijada y constante (para trabajar con tcnicas de temperatura

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programada). Evidentemente, el primer requisito es fcil de cumplir, pero cuando

se requiere trabajar con temperatura programada, el horno debe cumplir una serie
de requisitos tales como tener escasa inercia trmica (particularmente si es
necesario realizar rampas de temperatura muy rpidas) y poseer un sistema de
control de temperatura muy sofisticado que incluya la posibilidad de programar las
posibles variaciones de temperatura del horno as como los tiempos a los que han
de realizarse.

Sistemas de Introduccin de muestras

En esencia, los dispositivos de inyeccin de muestras para cromatografa de

gases tienen la misin de vaporizar la muestra a analizar e incorporarla a la
corriente de gas portador que se dirige hacia la columna. La vaporizacin e
introduccin de las muestras en el sistema, debe realizarse cumpliendo una serie
de requisitos:

1.- La vaporizacin de la muestra debe ser lo ms rpida posible.

2.- La vaporizacin debe realizarse sin discriminar ningn componente de la
muestra.
3.- La muestra debe llegar a la columna como una banda lo ms fina posible.
Inyectores para columnas empaquetadas.

La inyeccin de muestras en columnas empaquetadas no presenta problemas

particulares; este tipo de columnas admiten cantidades de muestra relativamente
elevadas, y la inyeccin de unos cuantos microlitros de muestra no conduce a una
merma apreciable de la eficacia de la columna.

La mayora de los Cromatografo comerciales utilizan cmaras de inyeccin

termostatizadas (figura 3).

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Figura 3. Esquema de un inyector para columnas empaquetadas

Bsicamente, un inyector est formado por un bloque metlico, buen conductor

del calor, provisto de un sistema de calentamiento, un termostato capaz de
mantener su temperatura constante y un aislamiento trmico adecuado; en el
interior de este horno, se encuentra alojado el sistema de inyeccin (figura 3).

En ste, el gas portador, previamente calentado, pasa de forma continua por el

sistema; la muestra es inyectada en el interior de la cmara, por medio de una
microjeringa de precisin, a travs de un diafragma perforable (septum) con
capacidad de autosellado en el momento en que se retira la aguja; una vez
inyectada la muestra, sta es vaporizada de forma instantnea, mezclndose con
el gas portador en una cmara de mezcla (liner) construida de un material lo ms
inerte posible (acero) inoxidable, nquel, vidrio ocuarzo). La muestra, una vez
vaporizada, es arrastrada rpidamente por la corriente de gas portador en
direccin a la columna.

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El diseo de la cmara de inyeccin debe ser estudiado minuciosamente. El

volumen de la cmara ha de estar proporcionado con el tipo de columna a utilizar
para evitar mezclas incompletas o bandas de muestra excesivamente anchas; en
lo posible, es preciso evitar la formacin de turbulencias en el paso de la cmara
de inyeccin a la columna; se ha de evitar cuidadosamente la existencia de
volmenes muertos, no barridos por la corriente de gas portador, dentro de la
cmara para evitar deformaciones de la banda de muestra; el volumen existente
entre la cmara de inyeccin y la columna debe ser el menor posible para evitar
ensanchamientos de banda; la temperatura ha de ser homognea en toda la
cmara de inyeccin para evitar la discriminacin de alguno de los componentes
de la muestra, etc.

El sistema de inyeccin de un cromatgrafo es un punto extremadamente

crtico, y la utilizacin de una tcnica de inyeccin inadecuada o una mala eleccin
delsistema de inyeccin pueden echar a perder completamente la capacidad de
separacin de una columna. Existen algunos tipos de inyectores que permiten
utilizar uno de los extremos de la columna cromatogrfica como cmara de
mezcla. La introduccin de la muestra por medio de este tipo de inyectores
(inyeccin en columna), est libre de muchos de los problemas mencionados
anteriormente, adems de ofrecer ventajas adicionales tales como permitir la
utilizacin de temperaturas ms bajas para la vaporizacin.

Inyectores para columnas capilares

Los sistemas de introduccin de muestras utilizados para trabajar con columnas

capilares, estn basados sobre los mismos principios de los inyectores utilizados
para columnas empaquetadas, por lo que las consideraciones generales sobre
ellos siguen siendo vlidas.

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La diferencia fundamental entre los sistemas que utilizan columnas

empaquetadas y los que utilizan columnas capilares, radica en que la cantidad de
muestra que estas ltimas pueden separar es mucho menor que en el primer
caso; por otra parte, las columnas capilares son muy afectadas por los
disolventes, de forma que los volmenes que se pueden inyectar en ellas son
extremadamente bajos. Dado que no existen jeringas capaces de medir con
precisin volmenes inferiores a 0,1 l, los inyectores utilizados para trabajar con
este tipo de columnas, adems vaporizar la muestra y mezclarla con el gas
portador, debern ser capaces de introducir en la columna slo una alcuota de la
muestra total inyectada.

Existen muchas ms tcnicas de inyeccin para columnas capilares que para

columnas empaquetadas, y de entre ellas, se comentarn a continuacin algunas
de las ms utilizadas.

1.- Inyeccin con divisin de muestra

Este tipo de inyeccin (ms conocida como inyeccin split), es el ms sencillo

de los que se utilizan en cromatografa capilar. El inyector de split (figura 4),
consta bsicamente de los mismos elementos que un inyector normal, con la nica
adicin de un sistema de divisin de flujo a la salida de la cmara de mezcla. Por
medio de este tipo de inyector, el flujo de gas portador que pasa a travs del
inyector (y por lo tanto tambin la muestra vaporizada), se divide en dos; una parte
es introducida en la columna y la otra escapa fuera del sistema a travs de una
vlvula de aguja que permite regular la proporcin de gas que es introducido en la
columna.

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Figura 4. Esquema de un inyector de split

Dado que en este tipo de inyectores la mayor parte del caudal del gas portador
se dirige hacia la atmsfera, la vlvula de split dispone de un sistema de apertura
y cierre automticos para que nicamente permita la salida de gas hacia la
atmsfera durante el proceso de inyeccin.

El control del flujo de gas portador que pasa a travs de la columna, se realiza
en este tipo de sistemas manteniendo constante la presin en la cmara de
inyeccin, lo que permite que el caudal de gas que pasa a travs del inyector
pueda variar en funcin de que la vlvula de split est abierta o cerrada.

Los inyectores de este tipo presentan dos inconvenientes; en primer lugar la

divisin de la muestra da lugar a que las cantidades de analito que son separadas
y llegan al detector sean muy pequeas, por lo que los lmites de deteccin
aumentan bastante, lo que es un gran inconveniente a la hora de realizar anlisis
de trazas. Por otra parte, los inyectores de split pueden en algunos casos dar
lugar a discriminacin entre los componentes de la muestra.

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2.- Inyeccin splitless

En la tcnica de inyeccin splitless, la totalidad de la muestra inyectada es

dirigida hacia la columna, que se mantiene durante la inyeccin a una temperatura
inferior al punto de ebullicin del componente ms voltil de la muestra. La
totalidad de la muestra inyectada, lgicamente condensa en la cabeza de la
columna, actuando en este caso el disolvente condensado en la columna a modo
de trampa donde se concentran los componentes a analizar (efecto solvente).

Transcurrido un tiempo adecuado, se abre en el inyector una vlvula de purga

con el fin de barrer a la atmsfera el disolvente vaporizado que pudiera quedar en
el inyector; al mismo tiempo, se comienza un programa de calentamiento de la
columna para realizar el anlisis.

La utilizacin de la tcnica de splitless supone dos importantes ventajas. En

primer lugar, dado que no existe divisin de muestra, permite un aumento notable
de la sensibilidad, por lo que es muy adecuada para el anlisis de trazas. Por otra
parte, la reconcentracin de la muestra en la cabeza de la columna origina que las
prdidas de eficacia debidas a una inyeccin inadecuada sean de mucha menor
importancia que en otras tcnicas de inyeccin.

El diseo de un inyector splitless es bsicamente el mismo que el del inyector

de split (figura 4), pudindose realizar la purga del inyector bien a travs de la
vlvula de split, bien a travs de una vlvula de purga adicional situada cerca del
septum. La mayora de los inyectores de split comerciales, estn diseados para
poder trabajar tambin en modo splitless.

3.- Inyeccin en columna

Ya se ha comentado que uno de los principales problemas de los sistemas de

inyeccin utilizados con columnas capilares, es la posibilidad de discriminacin

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entre los componentes de la muestra durante los procesos de vaporizacin de la

muestra y paso de la muestra vaporizada a la columna. Evidentemente, la nica
forma de asegurarse de que la muestra que alcanza la columna se corresponde al
100 % con la muestra inyectada, es realizar la inyeccin directamente en la
columna.

Es evidente que la introduccin de una muestra por medio de una jeringa

directamente en el interior de una columna capilar (de 0,23 mm de dimetro
interno), requiere la utilizacinde agujas extremadamente finas (suelen utilizarse
agujas de slice fundida de 0,15 mm de dimetro) que, en consecuencia, son
incapaces de perforar un septum; la caracterstica bsica de un inyector on-
column (figura 5), es la utilizacin de un sistema de vlvulas y tubos de gua que
permitan la introduccin en el sistema de una aguja extremadamente fina.

Figura 5. Esquema de un inyector on-column

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Cromatografo

El mtodo de trabajo utilizado en la inyeccin on-column recuerda en alguna

forma al utilizado en la inyeccin splitless; la muestra es introducida directamente
en la columna, mantenindose sta a una temperatura inferior al punto de
ebullicin del componente ms voltil de la muestra. Una vez introducida la
muestra, se inicia el programa de calentamiento de la columna para proceder a la
separacin.

La gran ventaja que ofrece el sistema de inyeccin on-column, es que reduce

la discriminacin entre los componentes de la muestra prcticamente a cero,
obvindose adems todos los problemas que presentan las restantes tcnicas de
inyeccin.

Otros sistemas de inyeccin

Hasta el momento, se han descrito los sistemas de inyeccin utilizados

tradicionalmente en cromatografa de gases, utilizado fundamentalmente para la
introduccin de muestras en disolucin. Existen adems otras tcnicas de
introduccin de muestras, algunas de las cuales son de especial inters para el
anlisis de contaminantes ambientales; ejemplos de tcnicas de inyeccin no
convencionales pueden ser:

1.- Vlvulas de inyeccin de gases.

La inyeccin por medio de vlvulas, es muy utilizada para el muestreo

automtico de gases en sistemas dinmicos. Las vlvulas muestreadoras
utilizadas en cromatografa de gases son del tipo de seis vas y pueden estar
provistas de bucles de carga de capacidad variable. El esquema de
funcionamiento de este tipo de vlvulas se muestra en la figura 6.

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Cromatografo

Figura 6. Esquema de una vlvula de inyeccin de gases

2.- Desorcin trmica.

Bsicamente, un equipo de desorcin trmica (figura 7), consta de un horno

donde la muestra es desorbida de los tubos de muestreo a elevada temperatura
bajo una corriente de gas portador; una vez desorbidos los vapores de la muestra,
estos son retenidos en una trampa criognica hasta la finalizacin del proceso de
desorcin, efectundose la inyeccin en este momento por medio de un
calentamiento muy rpido de la trampa fra.

Figura 7. Esquema de un inyector de desorcin trmica

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Cromatografo

Debe mencionarse que, al contrario de lo que sucede con la inyeccin de

espacio de cabeza, la tcnica de desorcin trmica si permite realizar buenas
cuantificaciones, siempre que se fijen unas condiciones adecuadas para
asegurarse de que la desorcin de la muestra es total.

3.- Inyectores de espacio de cabeza.

La tcnica de anlisis por espacio de cabeza es aplicable al anlisis directo de

contaminantes voltiles en muestras slidas o lquidas. El fundamento de esta
tcnica consiste en analizar una alcuota de la atmsfera que se encuentra en
contacto con la muestra con el fin de determinar en ella la fraccin vaporizada de
los componentes que se encuentra en equilibrio con la muestra slida o lquida.

Para realizar un anlisis por medio de esta tcnica, la muestra se introduce en

un vial hermticamente cerrado y se somete a una temperatura previamente fijada
durante un tiempo suficiente para que las distintas fases de los compuestos a
analizar alcancen el equilibrio, es decir, hasta que la presin parcial de cada
componente en la atmsfera del vial sea igual a su presin de vapor a la
temperatura de trabajo.

En esencia, un analizador de espacio de cabeza consta de un horno,

convenientemente termostatizado, donde se mantienen las muestras a una
temperatura generalmente muy elevada, y de un sistema de muestreo capaz de
inyectar en el cromatgrafo una alcuota del vapor de generado por la muestra que
contiene el vial. En la figura 8, se muestran dos tipos de sistemas de muestreo:
una jeringa automtica termostatizada un sistema de desplazamiento por
presurizacin.

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Cromatografo

Figura 8. Sistemas de inyeccin de espacio de cabeza

Detectores

Una vez que los componentes de la muestra han sido separados por la
columna, se hace preciso el disponer a la salida de sta de un sistema de
deteccin, capaz de sealar la elucin de un componente de la muestra y ofrecer,
al mismo tiempo, una seal proporcional a la cantidad de substancia que pasa a
travs de l.

Los detectores utilizados en cromatografa de gases son de tipo diferencial, no

ofrecen seal cuando pasa por ellos solamente el gas portador y responden ante
alguna propiedad que pueda variar cuando ste se encuentra mezclado con
alguna substancia eluida de la columna.

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Cromatografo

Parmetros caractersticos de un detector

Seal del detector

Como ya se ha dicho, el detector mide una propiedad que diferencia el gas

portador de la mezcla gas portador/substancia eluida. El cambio medido por el
detector, denominado seal (S), es proporcional a la magnitud de la propiedad a la
que responde (a), a una constante propia del diseo del detector (k) y al nmero
de molculas de la substancia eluida que en un momento dado estn presentes en
el detector (N); la expresin de la seal del detector ser:

S=kaN

Evidentemente, la seal ofrecida por el detector en un momento dado, ser la

suma de las seales de cualquier substancia eluida, del gas portador y de las
impurezas de ste:
St = Sg + Si + S1 + S2 +

La seal medida por el detector en ausencia de substancias eluidas, se

denomina seal de fondo del detector.

Sensibilidad

La sensibilidad de un detector hacia una substancia eluida, puede definirse

como el cambio en la seal medida, S, originado por un cambio en la
concentracin en el gas portador de la substancia eluida, Ns. Es evidente, a
partir de la ecuacin de definicin de seal, que la sensibilidad de un detector
puede expresarse por medio de la ecuacin:

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Cromatografo

Es decir, la sensibilidad de un detector hacia una substancia estar dada por el

producto de la constante de diseo del detector y el valor de la propiedad
analizada de la substancia eluida.

En consecuencia, la sensibilidad de cada detector ser diferente, dependiendo

de su diseo, y para un detector dado, la sensibilidad ser diferente para
substancias diferentes.

Linealidad

La linealidad de un detector, l, se define como la constante de proporcionalidad

de la relacin entre el logaritmo de la seal ofrecida por el detector y el logaritmo
de la concentracin de la substancia eluida:

Representando esta ecuacin (figura 9) se obtiene una recta cuya pendiente es

l y cuya ordenada en origen es log (k as), es decir, el logaritmo de la sensibilidad.

Es relativamente frecuente encontrar evaluaciones de la linealidad de los

detectores en coordenadas lineales; en estos casos, se denominan detectores
lineales aquellos para los que l =1, denominndose detectores no lineales los
restantes. De cualquier forma, la utilizacin de coordenadas lineales no es
correcta, ya que muchos detectores muestran dependencias de la seal con la
concentracin de tipo exponencial, dejando al margen las desviaciones producidas
por la amplificacin electrnica de la seal; en cualquier caso, es siempre
preferible realizar la evaluacin de la linealidad del detector en trminos de
coordenadas logartmicas.

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Cromatografo

Figura 9. Grfico concentracin respuesta de un detector

El intervalo de concentraciones para el que la linealidad no cambia, es conocido

comoel rango dinmico lineal del detector.

Mnima cantidad detectable

La seal de fondo medida por un detector, flucta con el tiempo debido a la

inconstancia de los parmetros experimentales; estas fluctuaciones pueden ser
consideradas como errores aleatorios de la medida y son denominadas ruido. El
nivel de ruido oscila continuamente alrededor de una seal promedio, dando el
conjunto de sus valores a lo largo del tiempo una distribucin que vendr definida
por su desviacin standard.

El valor de seal correspondiente a la mnima cantidad detectable, podr

calcularse en base al valor del incremento de seal necesario (S) para ser
significativamente diferente del resto de la distribucin. Considerando un nmero
suficiente de medidas de seal de fondo, se puede calcular que una seal es
significativamente distinta del ruido, con un 95 % de probabilidad, cuando su valor
es dos veces superior al intervalo de ruido; de forma anloga, cuando se
incrementa la probabilidad hasta un 99 %, la seal debe ser al menos 2,65 veces
mayor que el nivel de ruido para ser significativamente distinta.

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Cromatografo

Por supuesto, la evaluacin del nivel requerido para que una seal sea
significativamente diferente del ruido, est realizado en base a considerar una
seal instantnea; No obstante, la situacin es extrapolable a medidas reales
haciendo la consideracin de que la seal evaluada corresponde al valor mximo
del pico de elucin (figura 10), siendo evaluable de forma cuantitativa todo pico
que cumpla estas condiciones.

Figura 10. Parmetros de la relacin seal/ruido de dos bandas cromatogrficas

Tipos de detectores

Los detectores usados en cromatografa de gases, pueden dividirse de forma

genrica en detectores universales y detectores especficos; los primeros ofrecen
la ventaja de responder prcticamente ante cualquier compuesto que pueda eluir
de la columna, no obstante, esta misma propiedad puede convertirse en un serio
inconveniente cuando se procede al anlisis de mezclas muy complejas; en este
ltimo caso, la utilizacin de detectores especficos resulta muy ventajosa ya que,
al responder nicamente frente a un grupo limitado de compuestos, los
cromatogramas que ofrecen resultan muy simplificados.

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Cromatografo

Detector de conductividad trmica

Uno de los primeros detectores utilizados para el trabajo de rutina en

cromatografa de gases, ha sido el detector de conductividad trmica o detector de
hilo caliente. Este tipo de detector responde a la diferencia de conductividad
trmica existente entre el gas portador puro y el gas portador mezclado con alguna
otra substancia; la magnitud de la respuesta depender de la diferencia de
conductividad trmica entre el compuesto que eluye de la columna y el gas
portador.

En un detector de conductividad, el gas procedente de la columna pasa a travs

de una cavidad termostatizada que contiene el elemento sensor, un hilo de metal
calentado o un termistor.

Cuando pasa a travs del detector gas portador puro, la prdida de calor del
sensor es funcin de la diferencia de temperatura entre ste y la pared de la
cavidad y de la conductividad trmica del gas portador; cuando eluye una
substancia mezclada con el gas portador, la conductividad trmica vara, y como
consecuencia se produce un cambio de temperatura en el sensor; el cambio de
temperatura, se traduce en una variacin de una seal elctrica (resistencia o
voltaje segn sea el elemento sensor), que es convenientemente amplificada y
registrada. Un esquema de un detector tpico de conductividad trmica, se
encuentra en lafigura 11.

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Cromatografo

Figura 11. Esquema de un detector de conductividad trmica

El detector de conductividad trmica es universal y no es destructivo; por lo

general se utiliza para el anlisis de gases permanentes, hidrocarburos ligeros y
otros tipos de compuestos que ofrecen una respuesta pobre en otros tipos de
detectores. Su sensibilidad oscila entre 10-6 y 10-8 g, con un rango dinmico lineal
de aproximadamente cuatro rdenes de magnitud.

Detector de ionizacin de llama

El detector de ionizacin de llama, es tal vez el ms ampliamente utilizado en

cromatografa de gases. Este tipo de detector es en la prctica de respuesta
universal, ya que es selectivo hacia los compuestos que presenten enlaces C-H,
por lo que son muy pocos los compuestos que no dan seal en l.

En un detector de ionizacin de llama, el gas procedente de la columna se

mezcla con hidrgeno y esta mezcla se quema en una cmara con exceso de aire.
Por encima de la llama, se dispone un colector cilndrico polarizado con el fin de
recoger los iones generados; sobre este dispositivo, se mide la corriente inica

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Cromatografo

que se establece entre la punta del quemador y el electrodo colector. El esquema

de un detector de ionizacin de llama se encuentra en la figura 12.

Figura 12. Seccin de un detector de ionizacin de llama

El mecanismo de generacin de iones en este detector es complejo y no del

todo conocido, ya que la energa de la llama es demasiado baja para explicar la
generacin de iones; generalmente, se cree que stos son generados por medio
de un proceso de ionizacin qumica, en el que la energa liberada por reacciones
fuertemente exotrmicas es retenida por las molculas orgnicas, generndose
iones a partir de las molculas excitadas.

El detector de ionizacin de llama se polariza siempre con un voltaje de

saturacin; bajo estas condiciones, la corriente de fondo es del orden de 10-13 -
10-14 A, que se incrementa hasta un nivel de 10-12 - 10-9 A en presencia de un
vapor orgnico.

Los detectores de ionizacin de llama ofrecen una elevada sensibilidad, gran

estabilidad y un rango dinmico lineal excepcionalmente elevado; todo ello, junto

26
Cromatografo

con una gran sencillez de utilizacin ha hecho que este tipo de detectores, como
ya se ha mencionado, sean con mucho los de mayor utilizacin.

Detector de captura electrnica

El detector de captura electrnica ocupa probablemente el segundo lugar entre

los detectores de ms alta utilizacin, debindose este hecho a su excepcional
sensibilidad (el detector de captura electrnica es probablemente el dispositivo
analtico ms sensible que se conoce). Este hecho junto a su selectividad hacia
compuestos de enorme inters (Fundamentalmente en los campos de medio
ambiente y toxicologa), hacen que sea enormemente utilizado para la deteccin y
cuantificacin de trazas.

En un detector de captura electrnica (figura 13), se utiliza una fuente de

radiacin - para bombardear el gas portador que pasa a travs de una cmara de
ionizacin, generndose de esta forma un plasma de iones positivos, radicales
libres y electrones trmicos.

Figura 13. Detector de captura electrnica de tipo concntrico

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Cromatografo

Por trmino medio, cada partcula puede producir entre 100 y 1.000
electrones trmicos con un rango de energas de entre 0,02 y 0,05 eV; la
aplicacin de un potencial a la clula del detector de captura, permite que los
electrones trmicos sean recogidos en un electrodo colector, establecindose de
esta forma una corriente de fondo, en presencia de gas portador puro, que da
lugar a la lnea de base del detector. Cuando un compuesto activo frente a este
detector, penetra junto con el gas portador en la clula de medida, puede capturar
a los electrones trmicos para generar bien iones negativos de menor movilidad
que los electrones, bien fragmentos neutros por recombinacin con los iones
positivos del plasma generado en el proceso primario; este proceso de captura,
origina una disminucin de la corriente de fondo del detector, que puede
relacionarse de forma cuantitativa con la cantidad de analito que est pasando a
travs del detector.

Las fuentes de partculas utilizadas en este tipo de detectores son emisores

dbiles, 3H, 63Ni, 55Fe, o electrones emitidos por efecto termoelctrico, aunque
en la prctica solamente son asequibles detectores basados en fuentes de 63Ni y
en algunos casos de tritio. Como gases portadores, el detector de captura
electrnica puede utilizar nicamente hidrgeno, gases nobles o nitrgeno, que
deben estar libres, hasta niveles extremadamente bajos de trazas de oxgeno y
vapor de agua.

El detector de captura electrnica, responde de forma muy selectiva frente a

compuestos que presenten grupos con elevada afinidad electrnica, en particular
halgenos y grupos nitro, ofreciendo frente a este tipo de compuestos una
respuesta 106-107 veces superior a la que muestra frente a los hidrocarburos.

En conclusin, el detector de captura electrnica ofrece unas caractersticas

muy buenas tanto por su sensibilidad como por su especificidad, no obstante, hay
que resaltar que el manejo de estos detectores no es sencillo, ya que su respuesta

28
Cromatografo

puede ser muy variable en funcin de las condiciones experimentales (potencial

de polarizacin, temperatura, caudal de gas portador,etc.), vindose afectadas no
slo su sensibilidad sino tambin su selectividad y su rango dinmico lineal, que
en ocasiones puede llegara a quedar muy reducido; a estas dificultades hay que
aadir su sensibilidad hacia cualquier tipo de contaminacin y la gran dificultad
que representa su limpieza, por lo que en el trabajo con este tipo de detector
deben tomarse siempre las mayores precauciones.

Detector de nitrgeno-fsforo.

El detector de nitrgeno-fsforo (tambin conocido como detector termoinico o

detector de llama alcalina), est basado en el hecho de que la adicin de una sal
de metales alcalinos a la llama de un detector de ionizacin aumente la respuesta
de ste hacia determinados elementos (fsforo, nitrgeno, azufre, etc.). La
selectividad de este tipo de detectores es muy dependiente de parmetros tales
como la temperatura, la forma y el tamao de la llama, la composicin de la sal
alcalina, geometra del detector, etc.; debido a esta dependencia de muchos
parmetros experimentales, el manejo de este tipo de detector es difcil, la
optimizacin de la respuesta es tediosa y su estabilidad, debido a prdidas por
vaporizacin de la sal alcalina, es muy escasa.

Parte de los problemas mencionados, han sido solucionados en muchos

detectores comerciales en base a substituir la perla de sal alcalina del detector por
un vidrio o una cermica alcalina calentada elctricamente de forma
independiente. En un detector de este tipo (figura 14), una perla de un silicato de
metal alcalino, calentada elctricamente, se coloca entre el jet del detector y el
electrodo colector, mantenindose la perla a un potencial negativo para reducir las
prdidas de metal alcalino.

En la regin de la perla, se genera un plasma por medio de una mezcla

aire/hidrgeno, utilizndose un flujo de hidrgeno muy bajo (normalmente entre 1 y

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Cromatografo

5 ml/min), insuficiente para mantener una llama pero suficiente para mantener un
plasma en el que puedan darse los fenmenos de ionizacin.

El detector de nitrgeno fsforo ofrece una sensibilidad de aproximadamente

10-13 g/s de nitrgeno y 5 x 10-14 g/s de fsforo, con una especificidad de 104
sobre compuestos que no presenten estos tomos y su rango dinmico oscila
entre 104 y 105. El detector NPD es muy utilizado en el campo de medio
ambiente, fundamentalmente para la determinacin de residuos de plaguicidas,
debido a su sensibilidad y a su especificidad, lo que permite minimizar la limpieza
de las muestras. El principal problema que presenta este detector es la
inestabilidad de su respuesta, debida fundamentalmente a contaminacin o
prdida de actividad de la perla alcalina, por lo que es necesario realizar
calibraciones con relativa frecuencia.

Figura 14. Detector de nitrgeno-fsforo

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Cromatografo

Detector fotomtrico de llama

El detector fotomtrico de llama (FPD), utiliza una llama de hidrgeno para

excitar a un estado electrnico elevado fragmentos de molculas que contengan
tomos de azufre o fsforo.

Estos dos elementos son excitados de forma ptima por la llama de hidrgeno,
y cuando retornan a su estado fundamental emiten las lneas caractersticas de
sus espectros; las lneas analticas de inters son seleccionadas por medio de un
filtro (392 nm para determinar azufre y 526 nm para fsforo) y la intensidad de las
radiacin emitida es medida por medio de un fotomultiplicador (figura 15).

Figura 15. Esquema de un detector fotomtrico de llama

En este tipo de detector, el gas portador procedente de la columna es mezclado

con aire y quemado en una atmsfera de hidrgeno; la emisin de los tomos de
azufre o fsforo se da fundamentalmente en la zona superior, rica en hidrgeno de
la llama, por lo que en ocasiones se utiliza un diseo de doble quemador (figura

31
Cromatografo

16) con una segunda llama para producir la excitacin; este diseo, ayuda a
adems a evitar el fenmeno de apagado de llama, que se da en este tipo de
detectores, cuando eluye de la columna un compuesto en gran cantidad
(bsicamente el disolvente de inyeccin).

Figura 16. Detalle de un doble quemador

La sensibilidad y selectividad de este tipo de detectores son variables,

dependiendo de su diseo y de las condiciones de trabajo, pero un valor de
sensibilidad tpico es 10-13 g/s para fsforo y 10-12 g/s para azufre, con un rango
dinmico lineal de aproximadamente 1.000. La selectividad de estos detectores
oscila entre valores de 5 x 105 para el caso del fsforo y 103 para el caso del
azufre.

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Cromatografo

Detector de fotoionizacin

Los detectores de fotoionizacin estn basados en la utilizacin de los fotones

generados en una lmpara de descarga para ionizar los compuestos orgnicos
que emergen, junto con el gas portador, de una columna cromatogrfica.

Este tipo de detectores, utilizan para generar la radiacin un tubo de descarga

que contiene una mezcla de gases a baja presin; stos son excitados por medio
de una diferencia de potencial elevada que se mantiene entre dos electrodos. La
variacin en las proporciones de la mezcla de gases de la lmpara, permite
obtener radiacin ultravioleta de diferentes energas, aunque la ms utilizada es la
lmpara de 10,2 Ev.

En este detector (figura 17), el gas portador pasa a travs de una cmara de
ionizacin, separada fsicamente del tubo de descarga por medio de una ventana
transparente a la radiacin (generalmente de MgF2).

Figura 17. Detector de fotoionizacin

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Cromatografo

Prcticamente la totalidad de los compuestos orgnicos dan algn tipo de

respuesta con estos detectores. La sensibilidad del detector de fotoionizacin es
dependiente del potencial de ionizacin del compuesto de que se trate; la
respuesta del detector frente a los compuestos orgnicos sigue el orden general:

Compuestos aromticos > alquenos > alcanos > alcoholes > steres
>aldehidos> cetonas.

En general, el detector de fotoionizacin es entre 5 y 10 veces ms sensible

que el detector de ionizacin de llama frente a los alcanos, y del orden de 35
veces ms sensible frente a los hidrocarburos aromticos; su rango dinmico
lineal es, por trmino medio, de cuatro rdenes de magnitud.

Detector de conductividad electroltica

La utilizacin del detector de conductividad, est basada en la medida de las

variaciones de la conductividad que presenta una disolucin de electrolitos; estos
electrolitos se forman por disolucin en agua de los productos de las substancias
eluidas; por supuesto, solo las substancias que contengan grupos capaces de
comportarse como electrolitos sern detectables por este medio.

La descomposicin de las substancias eluidas se lleva a cabo por medio de

pirlisis o de reacciones catalizadas en un horno de flujo de bajo volumen,
formado normalmente por un tubo de nquel o cuarzo de pequeo dimetro
mantenido a una temperatura de 500 a 1.000 EC. Las reacciones catalizadas de
oxidacin o reduccin, se realizan mezclando el gas portador con oxgeno, aire o
hidrgeno a la salida de la columna y haciendo pasar esta mezcla por un
catalizador (normalmente un hilo de nquel) contenido dentro del tubo reactor.

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Cromatografo

En ocasiones, a la salida del horno de pirlisis se sita un filtro qumico con

objeto de retener de forma selectiva alguno de los productos de pirlisis con objeto
de aumentar la selectividad del detector. El esquema de un detector de
conductividad se encuentra en la figura 18.

Figura 18. Diagrama de funcionamiento de un detector de conductividad

El detector de conductividad electroltica ms ampliamente utilizado es el de

Hall; la clula de medida de este detector (figura 19), mide la conductividad del
lquido en su primera parte, y la conductividad del lquido ms la de los productos
de la pirlisis en la segunda, sumndose despus de forma diferencial las seales
de las dos medidas, con lo que se minimizan las fluctuaciones de respuesta
debido a factores que puedan afectar a la medida (conductividad de base del
lquido, variaciones de temperatura, etc.).

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Cromatografo

Figura 19. Esquema de la clula de conductividad de un detector Hall

Los lquidos de base utilizados en estos detectores estn formados

normalmente por alcoholes (metanol, isopropanol, etc.) solos o mezclados con
agua; la utilizacin de este tipo de disolventes en lugar de agua permite mejorar
notablemente la sensibilidad, la selectividad y el rango dinmico lineal del detector.

Los detectores de conductividad ofrecen una buena sensibilidad (entre 10-12 y

10-13 g/s del elemento con el que se est trabajando), una buena selectividad
(entre 104 y 109 segn elementos) y un rango dinmico lineal que oscila entre 103
y 105. De todas formas, la utilizacin de este tipo de detectores no es fcil, ya que
cualquier tipo de contaminacin, un catalizador desactivado, un filtro qumico
agotado, etc. se traducen con mucha facilidad en deformaciones de los picos,
ruido elevado y falta de linealidad en la respuesta.

Columna Cromatogrfica

Al igual que sucede en todas las tcnicas cromatogrficas, la columna es el

corazn del cromatgrafo de gases. Es necesario tener siempre presente que la
columna es el autntico elemento de separacin de los componentes de la
muestra; as, una mala eleccin de la columna, una columna deteriorada o unas
condiciones de trabajo inadecuadas, nunca permitirn obtener buenos resultados

36
Cromatografo

aunque se disponga del mejor equipo en el resto del cromatgrafo, siendo adems
las causas citadas las responsables de la inmensa mayor parte de los problemas
que se encuentran a la hora de realizar un anlisis por cromatografa de gases.

Una columna para cromatografa de gases, est formada por un tubo, que
puede ser de diversos materiales (preferiblemente inertes), dentro del cual se
encuentra la fase estacionaria. Esta puede ser un slido activo (cromatografa gas
slido), o con mayor frecuencia un lquido depositado sobre las partculas de un
slido portador (columnas empaquetadas o de relleno) o sobre las propias
paredes del tubo (columnas tubulares abiertas).

Columnas empaquetadas

Las columnas empaquetadas consisten, como ya se ha mencionado, en un tubo

(normalmente de vidrio o acero inoxidable) con un dimetro interno que vara entre
2 y 5 mm y de una longitud que oscila entre 1 y 15 m, arrollado de una forma
adecuada para poderse introducir en el interior del horno del cromatgrafo (figura
20).

Figura 20. Columnas empaquetadas para cromatografa de gases

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Cromatografo

En el interior del tubo, se dispone la fase estacionaria bajo la forma de un

lquido soportado sobre un material adecuado finamente pulverizado; el dimetro
de las partculas del relleno debe ser, al menos, 10 veces inferior al dimetro del
tubo, con el fin de conseguir una buena uniformidad en su distribucin. El relleno,
se encuentra confinado en el interior del tubo por medio de tapones del algn
material poroso (generalmente lana de vidrio o lana de cuarzo) situados en los
extremos.

La longitud, y consecuentemente la eficacia, de las columnas empaquetadas se

encuentra limitada fundamentalmente por la cada de presin del gas portador
entre cabeza y salida de columna.

Columnas tubulares abiertas

Las columnas tubulares abiertas (conocidas normalmente como columnas

capilares) fueron descritas inicialmente por Golay en 1957, y se encuentran entre
las ms ampliamente utilizadas debido a la gran eficacia de separacin que
proporcionan.

Bsicamente, una columna tubular est formada por un tubo (normalmente de

vidrio o slice fundida) de un dimetro comprendido entre 0,2 y 0,8 mm, en cuya
pared interna se dispone la fase estacionaria. Segn sea la forma en que se
dispone la fase estacionaria sobre la pared del tubo, se distinguen bsicamente
dos tipos de columnas (figura 21).

a) Columnas WCOT (Wall Coated Open Tubular). En este tipo de columnas

(que son las de uso ms frecuente), la fase estacionaria se encuentra depositada
formando una pelcula lquida directamente sobre las paredes del tubo.

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Cromatografo

b) Columnas PLOT (Porous Layer Open Tubular. En estas columnas la

pared interna del tubo est recubierta por una capa de un soporte adsorbente; si a
su vez el soporte est impregnado con una fase estacionaria lquida, las columnas
son denominadas SCOT (Support Coated Open Tubular.

Figura 21. Tipos de columnas tubulares abiertas

Es evidente que la permeabilidad de las columnas tubulares hacia los gases es

mucho mayor que la de las columnas empaquetadas (del orden de 100 veces
mayor), por lo que este tipo de columnas pueden tener una longitud bastante
grande (son muy frecuentes columnas de 50 m) sin provocar presiones
excesivamente elevadas en cabeza de columna.

El enorme uso que se hace de este tipo de columnas es debido

fundamentalmente a que la elevada eficacia que ofrecen (son frecuentes valores
de 30.000 a 50.000 platos frente a los 2.000 - 4.000 de una columna
empaquetada) permite la separacin de mezclas muy complejas con relativa
facilidad; por otra parte, la gran eficacia de este tipo de columnas permite
conseguir buenas resoluciones sin recurrir a fases estacionarias de gran
selectividad, lo que simplifica mucho el problema de la eleccin de la fase
estacionaria (prcticamente todas las separaciones se pueden realizar con tres o
cuatro columnas diferentes).

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Cromatografo

El principal inconveniente de este tipo de columnas es su pequea capacidad

de carga, lo que obliga a utilizar sistemas de inyeccin especiales para introducir
pequeas cantidades de muestra y detectores de muy alta sensibilidad. No
obstante, tanto las columnas SCOT como las WBOT de dimetros mayores de 0,5
mm (columnas Wide Bore) ofrecen una capacidad de carga suficiente como para
poder inyectar cantidades del orden de 1 l sin utilizar un splitter con una prdida
de eficacia relativamente pequea. Las columnas de este tipo tienen una
utilizacin potencial muy alta en el campo del anlisis de trazas.

Soporte slido

La misin de los soportes slidos utilizados en algunos tipos de columnas es la

de proporcionar una superficie sobre la que se deposita la fase estacionaria lquida
en forma de pelcula uniforme.

Los soportes utilizados en cromatografa de gases deben reunir una serie de

cualidades, como son:

1.- Deben presentar una superficie especfica relativamente elevada, con el fin
de que la fase estacionaria pueda distribuirse de manera uniforme y ofreciendo la
mxima superficie de contacto con la fase mvil para facilitar los procesos de
intercambio.

2.- Deben ser porosos, con el fin de no provocar cadas excesivas de presin.

3.- Deben ser relativamente duros para que sus partculas no se rompan
durante los procesos de impregnacin y llenado de las columnas.

4.- Deben ser trmicamente estables.

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Cromatografo

5.- La superficie de los soportes debe ser qumicamente inerte y no debe

provocar fenmenos de adsorcin que puedan influir en la separacin
cromatogrfica.

Ninguno de los materiales probados hasta este momento cumple todas las
condiciones expuestas por lo que, en la prctica, es necesario elegir de entre los
soportes existentes el que mejor se adapte a cada separacin concreta aunque
sea a costa de sacrificar alguna de las propiedades deseables.

Como soportes, se han utilizado slidos inertes de todo tipo, microbolas de

vidrio, carbn grafitizado, metales, slices, fluoropolmeros, polmeros porosos, etc.
aunque los ms utilizados son los soportes preparados a base de tierras de
diatomeas sinterizadas (Chromosorb, Gas Chrom, etc.); la superficie de estos
materiales se somete a diversos tratamientos qumicos (lavados cidos o bsicos,
silanizacin de grupos silanol libres, ligado de pequeas cantidades de fases
estacionarias, etc), con el fin de eliminar, en la mayor medida posible, los puntos
activos de la superficie del soporte que pudiesen interaccionar con los compuestos
a separar.

La fase estacionaria

Las propiedades necesarias para una fase estacionaria lquida inmovilizada son:

1. Caractersticas de reparto (factor de capacidad ' y factor de selectividad )

adecuados al analito.
2. Baja volatilidad, el punto de ebullicin de la fase estacionaria debe ser al
menos 100 C mayor que la mxima temperatura alcanzada en el horno.
3. Baja reactividad.
4. Estabilidad trmica, para evitar su descomposicin durante la elucin.

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Cromatografo

Existen como mucho una docena de disolventes con estas caractersticas. Para
elegir uno, debe tenerse en cuenta la polaridad del analito, ya que a mayor
polaridad del analito, mayor polaridad deber tener la fase estacionaria. Algunas
fases estacionarias utilizadas son:

Polidimetilsiloxano, fase no polar de uso general para hidrocarburos,

aromticos, polinucleares, drogas, esteroides y PCB.
Poli (fenilmetildifenil)siloxano (10% fenilo), para steres metlicos de cidos
grasos, alcaloides, drogas y compuestoshalogenados.
Poli (fenilmetil) siloxano (50% fenilo), para drogas, esteroides, pesticidas y
glicoles
Poli(trifluoropropildimetil)siloxano, para aromticos clorados,
nitroaromticos, bencenos alquilsustituidos.
Polietilenglicol, sirve para compuestos polares, tambin para compuestos
como glicoles, alcoholes, teres, aceites esenciales.
Poli (dicianoalildimetil)siloxano, para cidos grasos poliinsaturados, cidos
libres y alcoholes.

Generalmente, en columnas comerciales, la fase estacionaria se presenta

enlazada y entrecruzada para impedir su prdida durante las operaciones de
elucin o lavado. De esta forma se obtiene una mono capa adherida
qumicamente a la superficie de la columna, la reaccin implicada suele ser la
adicin de un perxido al lquido a fijar, inicindose una reaccin por radicales
libres que tiene como resultado la formacin de un enlace carbono-carbono que
adems incrementa su estabilidad trmica. Otra forma es la irradiacin con rayos
gamma.

Otro tipo de fase estacionaria son las quirales, lo cual permite resolver
mezclas enantiomricas. Este tipo de fases suelen ser aminocidos quirales o
algn derivado adaptado al trabajo en columna.

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Cromatografo

El grosor de la pelcula vara entre 0,1 y 5 m; el grosor depende de la volatilidad

del analito. As, un analito muy voltil requerir una capa gruesa para aumentar el
tiempo de interaccin y separar ms efectivamente los diferentes componentes de
la mezcla. Para columnas tpicas (dimetros internos de 0,25 o 0,32 mm) se
emplean grosores de 0,25 m, y en las columnas macrocapilares el grosor sube
hasta 1 m. El grosor mximo suele ser de 8 m

Aplicacin

La cromatografia de gases tiene dos importantes campos de aplicacin. Por una

parte su capacidad para separar mezclas orgnicas complejas, compuestos
organometlicos y sistemas bioqumicos. Su otra aplicacin es como mtodo para
determinar cuantitativa y cualitativamente los componentes de la muestra. Para el
anlisis cualitativo se suele emplear el tiempo de retencin, que es nico para
cada compuesto dadas unas determinadas condiciones (mismo gas portador,
rampa de temperatura y flujo), o el volumen de retencin. En aplicaciones
cuantitativas, integrando las reas de cada compuesto o midiendo su altura, con
los calibrados adecuados, se obtiene la concentracin o cantidad presente de
cada analito.

La cromatografa de gases constituye el mejor mtodo analtico ideado para la

separacin de gases, lquido o slidos que pueden pasar fcilmente al estado de
vapor o transformndolos previamente en otros estados voltiles Ej. Metilacin de
cidos grasos en el anlisis de aceite y a resuelto problemas de muy difcil
solucin para la qumica analtica empleada hace una dcada. Por eso su
utilizacin es indispensable en anlisis industriales, forenses bromatolgicos,
toxicolgicos, clnicos y de contaminacin ambiental.

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BIBLIOGRAFA

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cos

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