Purificacin de la protena 6 de una mezcla predeterminada.

Salinas Angel Jocelyn (Equipo 4)

Departamento de Bioqumica, Facultad de Qumica, Universidad Nacional Autnoma de Mxico,
Av. Universidad 3000, 04510, Mxico.

Resumen
Existen diversos mtodos para la purificacin de protenas, todos basados en alguna de sus
propiedades fsicas, tamao, forma, solubilidad, etc. Para purificar la protena 6 del
programa virtual se realizaron una serie de ensayos para determinar cul o cules de las
diversas tcnicas de separacin eran las ms eficientes y de menores costos, se parti de
que la actividad enzimtica de la protena 6 es estable por varias horas a una temperatura
de hasta 40 C y a valores de pH entre 5 y 11, con dichos datos se comenzaron a realizar
las ensayos. Los resultados de purificacin de la protena fueron satisfactorios ya que se
obtuvo un rendimiento de % 89.8 as como un costo de 2.326 (h/100U), as mismo por
medio de un Western blot que es una tcnica de biologa molculas la cual se utiliza a
menudo en la investigacin para separar e identificar las protenas, nos indic en una
electroforesis en gel de poliacrilamida que se tena nicamente a la protena de inters.
Introduccin
En muchas aplicaciones experimentales
es necesario disponer de protenas Si no se tiene las caractersticas
purificadas, incluyendo estudios suficientes de la protena que se quiere
estructurales y ensayos bioqumicos in purificar, pero se sabe que la actividad
vitro. Las protenas pueden ser obtenidas enzimtica de la protena 6 es estable por
de tejidos o, ms comnmente, varias horas a una temperatura de hasta
sobreexpresndolas en algn organismo 40 C y a valores de pH entre 5 y 11 as
modelo como pueden ser las bacterias, como la informacin y las caractersticas
las levaduras o las clulas de mamfero de los mtodos disponibles de
en cultivo. La purificacin de protenas separacin, entonces se podrn realizar
implica aislarlas a partir de su fuente en ensayos para determinar las tcnicas de
base a diferencias en sus propiedades purificacin ms eficientes y menos
fsicas. costosas.
Las protenas son molculas cargadas. Los objetivos de esta experimentacin
Muchas cadenas laterales de los fueron obtener la protena 6 pura a partir
aminocidos son ionizables, (ej. Lisina o de una mezcla predeterminada.
cido glutmico), como tambin los RESULTADOS
extremos amino y C terminal de un Imagen 1. Western blot de la protena
polipptido. Esta caracterstica puede ser
utilizada para separar diferentes protenas
por cromatografa de intercambio inico.
Las dos resinas ms utilizadas son
carboximetilcelulosa (CM-cellulose) y
dietilaminetilen-celulosa (DEAE-cellulose).
Un amplio rango de molculas biolgicas
pueden ser separadas en base a
diferencias en tamao y forma, estas
caractersticas afectan su habilidad de
penetrar matrices porosas. El
procedimiento de separacin se conoce
como cromatografa de filtrado por gel o purificada.
cromatografa de exclusin por gel. Se Imagen 1. En la imagen se observa el
puede emplear una variedad de matrices resultado de la purificacin de la protena 6
porosas, dependiendo de la naturaleza de con las diversas tcnicas de separacin y
las molculas a separar. purificacin de protenas.

Imagen 2. Tcnicas empleadas en la
purificacin de la protena 6.
En la imagen se observan las tcnicas que se
emplearon para la purificacin de la protena
de inters, se observa el porcentaje de
rendimiento as como el costo por cada
tcnica empleada.
Anlisis de resultados y discusin.
Para obtener la protena 6 pura se
realizaron diversos ensayos con las
caractersticas que se proporcionaron las
cuales fueron que la actividad enzimtica
de la protena 6 es estable por varias
horas a una temperatura de hasta 40 C y
a valores de pH entre 5 y 11 , la primera
tcnica que se utilizo fue la de
fraccionamiento por sulfato de amonio se
eligi esta tcnica ya que dicho
procedimiento tiene la ventaja de reducir
en gran manera la cantidad total de
protena en la muestra comparado con los
procedimientos cromatogrficos, despus
de realizar dicho procedimiento se
observ que se tenan varias protenas,
de diversos tamaos , por lo que
posteriormente se eligi la tcnica de
filtracin en gel debido a que un amplio
rango de molculas biolgicas pueden ser
separadas en base a diferencias en
tamao y forma, estas caractersticas
afectan su habilidad de penetrar matrices
porosas. El procedimiento de
separacin se conoce como
cromatografa de filtrado por gel o
cromatografa de exclusin por gel. Se
puede emplear una variedad de matrices
porosas, dependiendo de la naturaleza de
las molculas a separar, sabiendo esto y
con los resultados del PAGE de dos
dimensiones se determin que la columna
que podra separar la mayor parte de
impurezas de la mezcla es la de Ultrogel
AcA 54 2 poliacrimida/agarosa ya que su
rango aproximado de separacin es de
6.00 70.000, con dicha tcnica se
lograron eliminar muchas de las protenas
que se tenan de impurezas,
posteriormente se utiliz la tcnica de
cromatografa de intercambio inico
tomando en cuenta los valores de pH en
los que la protena de inters se
encuentra estable.
Realizar la determinacin de un esquema
de purificacin de alguna protena es
bastante complejo ya que se requiere
realizar ensayos y modificaciones de los
parmetros de los diversos mtodos hasta
obtener los ideales y poder lograr un
resultado satisfactorio, gracias a la ayuda
del software Protein Purification se
realizaron infinidad de ensayos hasta
obtener la protena deseada.
Conclusiones
En la determinacin de un esquema de
purificacin para una protena de inters,
es importante el realizar ensayos con los
diversos mtodos, hasta determinar cul o
cules son los ms eficientes y menos
costosos para la purificacin de la
protena deseada.
Referencias bibliogrficas
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