SIEMBRA Y AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS

JOSE DANIEL PINTO RUIZ cdigo: 1650914

PAULA ANDREA ROA VELANDIA cdigo: 1651129

PAULA ANDREA BECERRA PACHON cdigo: 1651130

ANGEL JEAN CARLOS TOLOZA SANCHEZ cdigo: 1651131

UNIVERSIDAD FRANCISCO DE PAULA SANTANDER

FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS Y DEL AMBIENTE

CUCUTA

2017

[1]
 INTRODUCCION

Para estudiar las caractersticas de los microorganismos (forma, estructura,

tamao, consistencia, y otros), es necesario sembrarlos y cultivarlos en medios de
cultivos apropiados segn el tipo de microorganismo, de tal forma que proporcione
los nutrientes necesarios para su crecimiento y desarrollo.

La mayora de las bacterias son de rpida multiplicacin y agotan los nutrientes de

los medios de cultivos en forma acelerada. Las mismas una vez sembrada en los
medios de cultivos (que pueden ser liquidas o solidos) deben incubarse a una
temperatura ptima de crecimiento y al abrigo de la luz.

En esta prctica se realizaron siembras de cultivos bacterianos en cajas de Petri y

en tubos, utilizando los diferentes mtodos explicados en la gua.

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 OBJETIVOS

Conocer los mtodos adecuados de siembra y aislamiento de

microorganismos ya sea en cajas de Petri o en tubos de agar o medios de
cultivo lquidos.

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 MARCO TEORICO

Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porcin de muestra (inculo)

en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su
desarrollo y multiplicacin. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una
temperatura adecuada para el crecimiento.

Las reglas fundamentales para efectuar la siembra exigen:

Que se efecten aspticamente

Que los medios de cultivo y el instrumental a utilizar estn esterilizados
Que se realicen solo los manipuleos indispensables
Que se trabaje fuera de toda corriente de aire. De ser posible utilizando un
mechero o bien Flujo laminar.

Existen diferentes tipos de siembra de acuerdo al medio utilizado y los

requerimientos del microorganismo a estudiar.

Medios slidos:

Siembra por inmersin: se coloca el inculo en una placa o caja de Petri y

sobre el mismo se vierte el medio de cultivo previamente fundido. Este
mtodo se utiliza para microorganismos aerobios.
Siembra en doble capa: se procede de la misma manera que por
inmersin. Una vez solidificado el medio se vierte una cantidad extra de
medio necesaria para cubrir la capa anterior (generalmente 10 ml. aprox.).
Este mtodo se utiliza para microorganismos anaerobios facultativos y
microaeroflicos.
Siembra en superficie: se vierte sobre una placa de Petri el medio de
cultivo fundido, se deja solidificar y se coloca sobre la superficie el inculo.
Con ayuda de una esptula de Drigalsky se extiende el inculo hasta su
absorcin total por el medio de cultivo. Este tipo de siembra se recomienda
para microorganismos aerobios estrictos.
Siembra en estra: se vierte sobre una placa de Petri el medio de cultivo
fundido y se deja solidificar.

Existen distintas tcnicas para la siembra en estras, el objeto es obtener

colonias aisladas.
Tcnica A: Consiste en cargar el asa con la muestra y hacer estras
paralelas en la cuarta parte de la superficie de la placa, se quema el asa, se
enfra, se gira la placa a 90 y se vuelve a estriar tocando 3 o 4 veces el
rea sembrada inicialmente y cubriendo otro cuarto de la placa. Por ltimo,
sin quemar el asa, se estra el resto de la superficie sin sembrar.

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 Tcnica B: Con el asa cargada se hacen 3 o 4 estras; se quema el asa, se
hacen 3 o 4 estras perpendiculares a las anteriores, se quema el asa y se
repite el procedimiento hasta agotar la superficie de la placa.

Siembra en agar en tubo inclinado o bisel: en este caso se colocan 5 ml

de medio de cultivo fundido y estril, se inclina el tubo y se deja enfriar.

[5]
El inculo se siembra, con ayuda de ansa, de la siguiente manera:
o En profundidad con asa de punta: se pica con el asa el cultivo a
sembrar y se introduce mediante puncin en el medio contenido en
la parte inferior del tubo.

o En superficie con asa de aro: se pica con el asa el cultivo a sembrar

y se esparce el mismo sobre la superficie en bisel en forma de
zigzag.

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 MATERIALES

- Asa redonda y asa recta

- Mechero
- 4 medios de cultivo en tubo
- 1 agar con un cultivo de hongos
- 4 agar estriles

PROCEDIMIENTO

Marque cada uno de los medios de cultivo y realice los siguientes repiques:

a. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una

colonia aislada a la caja de agar macConkey estril, realizando una
siembra por agotamiento.

b. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una

colonia aislada a un tubo realizando una siembra de estra.

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 c. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una
colonia aislada a un tubo realizando una siembra en picadura.

d. Del cultivo de agar bacteriano, realice el ejercicio de pasar una

colonia aislada a un tubo realizando una siembra en medio lquido en
tubo.

Incube todos los cultivos durante 24 48 horas a 37 C.

Coordine con el asistente del laboratorio y realice la visualizacin de cada

medio tomando apuntes al respecto.

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[9]
 CUESTIONARIO

1. Qu es un cultivo puro y que es un cultivo mixto?

Respuesta: Se denomina cultivo puro (o axnico) al que contiene slo un

tipo de microorganismos. Los cultivos puros se inician a partir de colonias
aisladas, de manera que todos los individuos del mismo tengan la misma
composicin gentica. Los cultivos puros son esenciales para poder
estudiar las caractersticas de los microorganismos y para poder
identificarlos con seguridad.

Un cultivo mixto es realizado cuando dos o ms especies de

microorganismos, se desarrollan en su conjunto en un solo medio. Es
comn este tipo en la naturaleza.

2. Qu ocurri con el agar antes de hacer la inoculacin y como se torn

este despus de cumplido el periodo de incubacin?

Respuesta: Antes de hacer la inoculacin no se presentaban

microorganismos en el medio de cultivo. Ya despus de haberlos sembrado
e incubado se not el desarrollo y multiplicacin del microorganismo.

Antes Geotrichum Despus Geotrichum

3. Cmo se comportaron las bacterias en el caso de los tubos de agar?

Respuesta: Solo se pudieron observar ciertas caractersticas de la bacteria

en los tubos, en el tubo que contena citrato Simons se observ el cambio
de color especifico, en el tubo SIM solo fue posible observar la motilidad, en

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 el tubo que contena TSI se ferment sacarosa o lactosa y el ultimo tubo,
LIA, contena lisina descarboxilada.

4. Qu errores siente usted que cometi su grupo o usted en el momento de

hacer los procedimientos? Qu puede hacer para corregirlos?

Respuesta: Principalmente, a la hora de sembrar en cajas de Petri y tubos,

se presentaron rupturas del medio de cultivo debido a la alta presin de las
asas hacia el medio. Para corregir este error se debe tener cuidado en la
presin ejercida a la hora de sembrar.

[11]
 DISCUSION

Una vez realizado el montaje de cada uno de los microorganismos facilitados en el

laboratorio de microbiologa, se logr observar los cambios presentados despus
de la incubacin, y as identificar su crecimiento.

Durante la siembra se cometieron los errores de hacer demasiada presin a la

hora de hacer los mtodos y esto dao un poco el medio, pero no fue impedimento
para que se desarrollaran y multiplicaran cuando se estaban encubando.

Para las siembras en cajas de Petri, nos entregaron la bacteria E. coli y el hongo
Geotrichum. La E. coli se sembr en 4 cajas de Petri con agares Manitol, EMB,
Nutritivo y Mac Conkey, de los cuales se observ notablemente su crecimiento en
los agar Mac Conkey, Manitol y nutritivo. El hongo se sembr en medio rosa
bengala y creci notablemente.

Para las siembras en tubos, nos entregaron la bacteria Arizona, la cual se sembr
en 4 tubos con Citrato Simons, SIM, TSI y LIA. El Citrato Simons se sembr en
estra y se not el cambio de verde a azul. En SIM solo se pudo observar
claramente su motilidad. En el TSI se observ amarillo en la parte de arriba, lo que
indica que se ferment sacarosa o lactosa, no se observ gas ni presencia de
H2S. Para ltimo tubo, LIA, se not el color purpura, as que solo contiene Lisina
descarboxilada.

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 CONCLUSIONES

Se logr conocer los mtodos adecuados de siembra y aislamiento de

microorganismos.

Se sembraron microorganismos en cajas de Petri y en tubos de agar.

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 REFERENCIAS

Tomado de web.

https://www.frro.utn.edu.ar/repositorio/catedras/quimica/5_anio/biotecnologi
a/practicoIII.pdf

http://meplunesr.blogspot.com.co/2011/05/universidad-nacional-
experimental-simon.html

http://www.unavarra.es/genmic/microgral/Tema%2002.-
%20Cultivo%20de%20microorganismos.pdf

https://es.slideshare.net/guest70b2d6/microbiologia

http://www.medioscultivo.com/lysine-iron-agar-lia/

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