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JUSTIFICACIN
El siguiente trabajo de investigacin tiene el propsito de dar a conocer a la poblacin
de Llallagua sobre la presencia bacteriana Salmonella Spp en muestras de pescado
fresco del criadero del sector aguas calientes del municipio de Llallagua del
departamento de Potos, expendio pblico de Llallagua y expendio pblico de la ciudad
de La Paz las mismas que sern analizadas mediante el medio de cultivo agar ss,
caldo tetrationato, tcnica de tincin Gram y diferentes pruebas bioqumicas.
Con los resultados obtenidos nos servirn para plantear a la poblacin consumidora
propuestas de medidas preventivas necesarias de sanidad e higiene, para as retardar
el deterioro de la muestra de pescado y evitar el desarrollo de la bacteria Salmonella
Spp.
Evitando posibles infecciones y enfermedades que afectaran a la poblacin
consumidora. Puesto que los pescados son un recurso muy consumido por los seres
humanos debido a la presencia de omegas, propiedades nutritivas y aportan un
balance de protenas de alto valor biolgico, vitaminas, minerales como el Fosforo.
Aplicar medidas de inspeccin que garanticen un control eficiente por parte de las
alcaldas a los diferentes puntos de venta as incrementando la confianza del
consumidor.
PLANTEAMIENTO DE PROBLEMA
Cmo realizar el anlisis microbiolgico de los niveles de contaminacin de la
Salmonella spp en pescado fresco en el laboratorio de microbiologa de la carrera
Bioqumica Farmacia durante la gestin 2017?
METODOLOGA DE ESTUDIO:
Es un estudio descriptivo y experimental porque el presente trabajo requiere de una
investigacin-anlisis microbiolgica.
Poblacin: criadero del sector aguas calientes del municipio de Llallagua, expendio
pblico del municipio de Llallagua y expendio pblico de la ciudad de La Paz.
Muestra: pescados frescos.
OBJETIVOS
Objetivo General
Determinar el anlisis microbiolgico de los niveles de contaminacin de la Salmonella
spp en pescado fresco en el laboratorio de microbiologa de la carrera Bioqumica
Farmacia durante la gestin 2017.
Objetivos especficos
Identificar la Salmonella spp en la muestra de pescado fresco del sector aguas
calientes mediante el medio de cultivo agar ss y el caldo Tetrationato.
Realizar la tcnica de Tincin Gram para comprobar la presencia de la bacteria
Salmonella spp en muestra de pescado fresco del expendio pblico de la ciudad
de la Paz.
Emplear las diferentes pruebas bioqumicas para identificar la presencia de la
bacteria Salmonella spp en muestra de pescado fresco del expendio pblico de
la ciudad del Municipio de Llallagua.
Describir el fundamento del Agar ss , Caldo Tetrationato , Tincin Gram utilizados
para la identificacin de la bacteria Salmonella spp en muestra de pescado
fresco.
INTRODUCCIN
El pescado aporta un buen balance de protenas de alto valor biolgico, vitaminas tanto
hidrosolubles como liposolubles, algunos elementos minerales y un contenido calrico
relativamente bajo. Las ventajas que presenta el consumo habitual de pescado estn
bien demostradas pero hay que considerar dos aspectos importantes; uno, su
durabilidad y otro, la posibilidad de que sea vehculo de organismos agentes de
infecciones e intoxicaciones alimentarias. Es bien sabido que los pescados son de los
primeros en las listas de alimentos relacionados con enfermedades de origen
alimentario aunque una gran proporcin corresponde a intoxicaciones por biotoxinas e
histamina (aprox. 80%) o a infecciones por virus. Sin embargo, los productos de la
pesca tambin pueden ser vehculo de muchas de las bacterias patgenas que causan
enfermedades en el hombre va los alimentos. Son las bacterias las que ms influyen
en la vida til del pescado aunque no todas las que estn presentes en el momento de
la captura o recogida van a ser capaces de multiplicarse durante el almacenamiento.
Slo una parte de stas acabar dominando y ser, en ltima instancia, responsable de
la alteracin. La alimentacin, la poca del ao, el rea geogrfica, la especie de
pescado y el sistema de captura son determinantes del nmero y tipo de bacterias
presentes inicialmente; mientras que las condiciones de almacenamiento van a
seleccionar la flora alterante. Evidentemente, todas las manipulaciones de que sea
objeto la pescadora la captura o recogida van a afectar de forma notable a la calidad
microbiolgica del mismo.
Los riesgos asociados al consumo de pescado y productos de la pesca pueden ser de
naturaleza biolgica o qumica. Entre los primeros se pueden diferenciar los causados
por microorganismos, bacterias y virus, y por parsitos. Las bacterias patgenas
humanas transmitidas por el pescado se pueden dividir en dos grupos: uno constituido
por gneros y especies cuyo hbitat natural es el agua (Vibrio parahaemolyticus, Vibrio
cholerae Plesiomonas shigelloides, Edwardsiella tarda,
Aeromonas mviles, etc.) Y otro que incluye bacterias presentes en el agua pero
procedentes de contaminacin de origen fecal y/o asociadas con el procesado y la
manipulacin posterior del pescado (Salmonella spp, Listeria monocytogenes,
Staphylococcus aureus). Salmonella spp. Se encuentra distribuida a nivel mundial. Es
un agente zoontico importante y ha sido aislada a partir de una gran variedad de
peces y crustceos capturados en aguas contaminadas con heces pueden portar este
microorganismo.
HIPOTESIS:
Alternativa:
Las muestras analizadas de pescado fresco (trucha) mediante el medio de cultivo agar
ss y caldo tetrationato evidentemente dieron un resultado positivo en Salmonella spp
en comparacin al agar TSI, agar SIM analizadas en el laboratorio de microbiologa de
la carrera Bioqumica Farmacia.
Nula:
Las muestras analizadas de pescado fresco (trucha) mediante el medio de cultivo agar
TSI, agar SIM dieron un resultado negativo en Salmonella spp en comparacin del agar
ss y caldo tetrationato analizadas en el laboratorio de microbiologa de la carrera
Bioqumica Farmacia.
7. MARCO TERICO:
Taxonoma
Dominio: Bacteria
Filo: Proteobacteria
Clase: Gammaproteobacteria
Orden: Enterobacteriales
Familia: Enterobacteriaceae
Gnero: Salmonella
Esta composicin tan adecuada para la nutricin humana, lo es tambin para los
microorganismos que normalmente se localizan a nivel de las branquias, mucus que
recubre la piel y contenido abdominal y que, durante su crecimiento tras la muerte del
animal, lo iran descomponiendo progresivamente, si no se le pusiese freno al proceso.
En este proceso de descomposicin tambin intervienen las propias enzimas del
animal que, del mismo modo que los microorganismos, degradan las protenas, grasas,
etc,..
Por todos estos motivos se dice que el pescado (al igual que la carne, leche, etc.) es un
alimento muy perecedero, es decir que se altera rpidamente, lo que requiere que sea
mantenido en las debidas condiciones de conservacin hasta que sea consumido y que
sea adquirido lo ms fresco posible.
El grado de frescura con que el producto llega al mercado y por tanto se pone al
alcance del consumidor, es un factor de gran importancia en relacin con la calidad del
pescado.
Los factores que cooperan en los brotes son principalmente el tiempo de uso
incorrecto de la temperatura y un tratamiento trmico insuficiente.
Tambin en alimentos sin pasteurizar como leche y sobre todo en la cscara de los
huevos frescos de aves de corral ya que contienen heces o materia fecal de la cloaca
de la gallina.
Los productos vegetales como por ejemplo las hortalizas que se utilizan para
preparar ensaladas, han sido relacionados con brotes accidentales de fiebre tifoidea y
salmonelosis, debido a la utilizacin de agua de riego contaminada o de deyecciones
humanas y de estircol de los animales como abono.
COMPOSICION:
SIEMBRA:
INCUBACIN:
CONSERVACIN Y CADUCIDAD
INTERPRETACIN DE RESULTADOS
COMPOSICION:
SIEMBRA
INCUBACIN
La capa de pptido glicano que posee es delgada como para poder retener el primer
colorante el cristal violeta y por lo tanto se pierde la coloracin azul violcea. Pero por
el contrario, las Gram positivas poseen una pared celular gruesa en pptidoglicano, no
son susceptibles a la accin del solvente orgnico, sino que este acta deshidratando
los poros cerrndolos, lo que impide que pueda escapar el primer colorante y mantiene
la coloracin azul violceo.
RESULTADOS
PRUEBAS BIOQUMICAS:
Para identificar el gnero Salmonella spp. Se realiza dos pruebas bioqumicas de
tamizaje:
1. Agar Lisina Hierro (LIA).
2. Agar Simmons Citrato.
3. Agar SIM.
4. Agar Triple Azcar Hierro (TSI).
FUNDAMENTO DE AGAR LISINA HIERRO (LIA).
Medio de cultivo utilizado para diferenciar microorganismos, especialmente Salmonella
spp., basado en la decarboxilacin / desaminacin de la lisina y en la produccin de
cido sulfhdrico.
En el LIA hay glucosa en escasa cantidad y la lisina es la principal fuente de energa.
Para aprovechar la lisina la bacteria necesita tener alguna de las enzimas que la pueda
degradar.
Enzima lisina descarboxilasa (anaerobios).
Enzima lisina desaminasa (aerobios).
En el medio de cultivo, la peptona y el extracto de levadura aportan los nutrientes para
el desarrollo bacteriano. La glucosa es el carbohidrato fermentable, y la lisina es el
sustrato utilizado para detectar la presencia de las enzimas decarboxilasa y
desaminasa. El citrato de hierro y amonio, y el tiosulfato de sodio, son los indicadores
de la produccin de cido sulfhdrico.
El purpura de bromocresol, es el indicador de pH, el cual es de color amarillo a pH igual
o menor a 5.2, y de color violeta a pH igual o mayor a 6.8.
Por decarboxilacin de la lisina, se produce la amina cadaverina, que alcaliniza el
medio y esto produce el viraje del indicador al color violeta.
La produccin de sulfuro de hidrgeno, se visualiza por el ennegrecimiento del medio
debido a la formacin de sulfuro de hierro.
COMPOSICION:
Fundamento
Frmula
Suspender 24,2 g del medio deshidratado por litro de agua destilada. Dejar reposar 5
minutos y mezclar calentando a ebullicin durante 1 o 2 minutos. Distribuir en tubos y
esterilizar en autoclave a 121C durante 15 minutos. Enfriar en posicin inclinada.
Siembra
Incubacin
Resultados
Limitaciones
-Si se usa un inculo denso para sembl medio de cultivo, puede variar el color del pico
del verde al amarillo-amarronado.
Esto no afecta el color verde del resto del medio de cultivo, pero puede afectar la
visualizacin azul de un resultado positivo.
-Cuando se siembra una serie de pruebas bioqumicas a partir del mismo cultivo, se
debe esterilizar la aguja de inoculacin antes de inocular la prueba del citrato o sino
inocularla primero. Cualquier arrastre de materia orgnica puede originar resultados
falsos positivos.
Almacenamiento
PROCEDIMIENTO:
Esquematizacin del procedimiento del agar SS:
PROCEDIMIENTO DE TINCION
GRAM
1.-
2.-
Realizar el frotis bacteriolgico en
COLORANTE PRIMARIO:
forma circular, tomando de la placa
con la ayuda de una asa, de una Cubrir el frotis con violeta de
colonia representativa. genciana por 2 minutos,
luego lavar con agua
Fijar la muestra pasando el
corriente
portaobjetos sobre la llama del
mechero a una temperatura de 38-
40C.
2D
3.-
Cubrir el frotis con lugol por 1
minuto, luego lavar con agua
corriente.
4.-
5.-
COLORANTE SECUNDARIO:
PRUEBAS BIOQUMICAS:
En un matraz Erlenmeyer
suspender 0.97g del agar
pesado + 40ml de agua
destilada.
Distribuir inmediatamente en
10 tubos de ensayo a 4ml,
Enfriar en pico de flauta los
tubos.
Realizar el sembrado con la
asa bacteriolgica por picadura
profunda con aguja y luego por
estras. luego incubar 24 a 48
horas. Posteriormente observar
la coloracin.
X
ESQUEMATIZACIN DEL PROCEDIMIENTO DEL AGAR TSI:
40ml
X= 2,5 gr
Mauri #1
Lisina positiva
Expendio Muestra N 15 La muestra N 15 de pescado
pblico (PEJERREY) especie pejerrey del expendio
Llallagua pblico Llallagua dio un resultado
positivo, porque la bacteria
Salmonella spp. utilizo la lisina
como su fuente de energa lo
cual se evidencio mediante la
presencia de la enzima lisina
descarboxilasa dando una
coloracin de pico violeta/fondo
violeta.
Lisina positiva
Expendio Muestra N 4 La muestra N 4 de pescado
pblico de La (QARACHI) especie qarachi del expendio
Paz pblico de La Paz dio un
resultado positivo, porque la la
bacteria Salmonella spp. utilizo la
lisina como su fuente de energa
lo cual se evidencio mediante la
presencia de la enzima lisina
descarboxilasa dando una
coloracin de pico violeta/fondo
Lisina positiva violeta.
Expendio Muestra N 5 La muestra N 5 de pescado
pblico de La (QARACHI) Lisina positiva especie qarachi del expendio
Paz pblico de La Paz dio un
resultado positivo, porque la la
AGAR CITRATO SIMMONS.
MUESTRTA RESULTADO OBSERVACIONES
Muestra 1 negativo La bacteria no consume
La paz(mauri) el citrato como fuente de
carbono
Muestra2 Positivo La bacteria consume el
La paz(Ispi) citrato como fuente de
carbono
Muestra 3 positivo La bacteria consume el
La paz (Ispi) citrato como fuente de
carbono
Muestra4 positivo La bacteria consume el
La paz (Ispi) citrato como fuente de
carbono
Muestra4 positivo La bacteria consume el
La paz(carachi) citrato como fuente de
carbono
Muestra5 positivo La bacteria consume el
La paz(carachi) citrato como fuente de
carbono
Muestra5 positivo La bacteria consume el
Aguas calientes(trucha) citrato como fuente de
carbono
Muestra 15 positivo La bacteria consume el
Mercado ( pejerrey) citrato como fuente de
carbono
Muestra 2
positivo La bacteria consume el
Mercado pejerrey)
citrato como fuente de
carbono
Muestra N 3 Positivo
(PEJERREY)
EXPENDIO
(+) Se produjo el cambio de
PBLICO color negro.
LLALLAGUA
Muestra N 5 Positivo
(QARACHI)
EXPENDIO
(+) Hubo cambio de color a
PBLICO DE color negruzco.
LA PAZ
PRUEBAS BIOQUMICAS.
RESULTADOS DE AGAR LIA:
N de muestras: 45 pescados
Interpretacin de resultados:
Interpretacin de resultados:
AGAR SIM:
N de muestras: 45 pescados
Procedencia de la muestra N de Muestras positivas de salmonella
muestra spp. en Agar LIA
Nmero total 45 7
I
nterpretacin de resultados:
PRUEBAS BIOQUMICAS.
RESULTADOS DE AGAR TSI:
N de muestras: 45 pescados