Gua de Prctico laboratorio

Extraccin de DNA desde un pltano.

El material gentico (DNA ) es una de las macromolculas fundamentales de los

organismos, en este molcula se encuentra resguardado toda la informacin del
organismo en cuanto a su constitucin y sus funciones como tal, esta informacin es
guardada como tal en forma de genes. Lo que este experimento pretende es un acercamiento
simple y sencillo a la tcnica de extraccin de DNA que se puede realizar en cualquier hogar con
materiales de la vida cotidiana.

Materiales

200ml de Agua Zumo de pia

Pltanos Etanol (alcohol al 96%).
Cucharadita de Sal Vaso precipitado
Detergente (lavaloza) tubos de ensayo
Batidora Matraz erlenmeyer

1) Trituracin del pltano: Con la ayuda de un cuchillo cortamos unos 100g de pltano y lo
cortamos finamente para luego trituarlo y generar una papilla lo ms homognea posible.
A esta papilla le depositamos una pizca de sal y los 200ml de pltano. Pasamos esto por
la batidora por 5 segundos a velocidad mxima. Esta mezcla luego la pasamos por un
colador y la depositamos esta pasta en un vaso de precipitado.

2) Preparacin de la solucin de extraccin: Primero pesamos con la balanza 3g de sal. Con

una probeta preparamos 100ml de agua (ojal destilada) y 10ml de detergente (lavaloza).
Luego mezclamos todo en un matraz Erlenmeyer (se debe tener precaucin de no generar
burbujas).

3) Detergente + pltano: mezclamos el detergente del matraz Erlenmeyer con el pltano,

mezclamos procurando no generar burbujas.

4) Dejamos reposar esta mezcla por 10 minutos.

5) Preparacin del zumo de pia: Mientras esperamos que pasen los 10 minutos del bao
preparamos el zumo de pia. Troceamos una pia y trituramos la parte central o corazn
en la batidora. Filtramos la pasta con un colador para obtener el zumo.

6) Filtracin de la solucin: Preparamos un erlenmeyer con un colador encima y vertemos el

contenido del vaso de precipitados. A continuacin preparamos un embudo con un papel
de filtro encima y vertemos la solucin obtenida anteriormente recogiendo el lquido en
un tubo de ensayo. Este segundo proceso puede tardar unos minutos.

7) Solucin + zumo de pia: Cogemos 5 ml de nuestro extracto (detergente +pltano) y lo

agregamos a un tubo de ensayo; luego cogemos 1ml de zumo de pia y lo agregamos
a nuestro extracto. Dejamos reposar para que acte en la solucin por 5 minutos.

8) Solucin + alcohol : preparamos en un tubo de ensayo aproximadamente el mismo

volumen de alcohol que de la solucin de inters.

9) Observacin del DNA: Vertemos muy lentamente el alcohol en el tubo de ensayo con la
solucin. Al cabo de pocos segundos seremos capaces de observar tres capas bien
diferenciadas. Encima de todo estar el alcohol, debajo de todo estarn los restos
celulares (membranas, orgnulos) del pltano y los otros componentes de la solucin y, en
la interfase observaremos una especie de hilos blancos rodeados de burbujas. Eso es el
DNA!.

Explicaciones.

El DNA se encuentra en el interior del ncleo de las clulas eucariotas rodeado de

protenas (histonas) que lo mantienen unido y compactado. Para poder aislarlo y
observarlo se deben deshacer la membrana plasmtica y la envoltura nuclear y tambin se
precisa la desnaturalizacin de las protenas.

a) Al triturar el pltano se incrementa el rea superficial del pltano para que sea ms
fcil de disolver.

b) Detergente: Las membranas de las clulas estn formadas por dos capas de lpidos
con protenas transmembrana a travs de estas. El detergente ayuda a romper la
bicapa de fosfolpidos de las membranas plasmticas y la envoltura nuclear. Los
lpidos de la membrana se descomponen debido al detergente que deshace las
 uniones que mantienen la membrana junta. Cuando el detergente se pone en
contacto con los lpidos stos se separan de la membrana rompindola.

c) Extraccin del DNA: La incubacin se utiliza para acelerar el proceso de rotura de las
membranas y para ayudar a disolver la bicapa de fosfolpidos mediante la
desnaturalizacin de las protenas de membrana y rotura de los enlaces que
mantienen los fosfolpidos unidos.

d) Filtracin: Este paso permite separar los restos de los tejidos del pltano y de las
clulas que hemos roto en los pasos anteriores. Ese material no nos interesa y
quedar retenido en el colador (los restos ms grandes) o en el filtro (restos ms
pequeos). El lquido filtrado que conseguimos es el que contiene el DNA libre de la
membrana nuclear.

e) Zumo de pia: Las molculas de DNA estn rodeadas de protenas del tipo histonas, y
para obtener un extracto ms puro de DNA es necesario eliminarlas. Para ello hay que
utilizar enzimas proteolticos. El zumo de pia contiene bromelana, una enzima capaz
de hidrolizar las protenas y por tanto capaz de separar el DNA de las histonas. Este
proceso ayuda a que el DNA se desempaquete y es ms fcil su extraccin.

f) Observacin del DNA : DNA es una molcula polar, pero la reaccin con el etanol a
muy baja temperatura hace que se vuelva apolar e insoluble en el etanol formndose
un precipitado justo entre la capa con etanol lquido y la capa con el extracto. El DNA
es el nico componente de la solucin que no es soluble en el etanol, y se hace visible
porque las diferentes cadenas se van aglutinando entre s al precipitar debido a la
accin de fuerzas fsicas. El alcohol es menos denso que el agua del extracto y por eso
flota sobre la capa del extracto. La sal tambin ayuda a separar el DNA de las
histonas.