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Tcnicas espectroscpicas

Licenciatura en Qumica (Plan 1995)

Curso: 3 Tema 1.
Fundamentos de espectroscopa.
La radiacin electromagntica.
The late Kolthoff, one of the great pioneers of analytical chemistry,
used the motto theory guides, experiment decides in his books. Propiedades ondulatorias de la radiacin.
Aspectos mecanocunticos de la radiacin.
Espectroscopa atmica y molecular.

2006 Jos Mara Fernndez lvarez

Tema 2. Tema 3.
Diseo y componentes de los instrumentos espectroscpicos. Espectroscopa UV-visible.
Fuentes de radiacin. Sistemas que absorben en el UV-visible.
Celdas. Ley de Beer.
Selectores de longitud de onda. Instrumentacin.
Detectores. Mtodos y aplicaciones 0.5

Tratamiento de seales 0.4

A bsorbance
0.3

0.2

0.1

0
200 250 300 350 400
Wavelength/nm

Tema 5.
Tema 4. Principios de espectroscopa atmica.
Espectros atmicos de emisin y absorcin.
Trminos espectrales.
Espectroscopa de luminiscencia molecular.
Anchuras de lnea.
Singlet excited states Triplet excited states

Fluorescencia y fosforescencia. Internal


conversion
Vibrational
relaxation
Intersystem
crossing
S2

Quimioluminiscencia. Espectroscopa de absorcin atmica.


Instrumentacin. S1
T1 Atomizacin por llama y electrotrmica.
Aplicaciones. Eleccin de las condiciones ptimas. Instrumentacin. Aplicaciones.
Energy

Internal
and
external
Absorption Fluorescence
conversion
Phosphorescence Espectroscopa de emisin atmica.
Atomizacin por llama. Atomizacin con fuentes de plasma.
S0
Atomizacin con arco y chispa.
Ground
state 2 1 3 4 Aplicaciones.

1
Tema 6.
Espectroscopa IR y Raman. Tema 7.
Fundamentos de la absorcin en el IR.
Aparatos dispersivos y no dispersivos. Espectroscopa de rayos X.
Espectroscopa IR por transformada de Fourier. Generacin de rayos X.
Fluorescencia, Absorcin y Difraccin de RX.
Fundamentos de la espectroscopa Raman. Instrumentacin y Aplicaciones.
Instrumentacin.

Aplicaciones de las espectroscopas IR y Raman.

Tema 1 Introduccin
La Qumica Analtica es la ciencia que identifica los componentes de una
muestra (anlisis cualitiativo) y que determina las cantidades relativas de cada
uno de ellos (anlisis cuantitativo). Generalmente se precisa una separacin
Fundamentos de espectroscopa. previa del analito de inters.

La radiacin electromagntica. Mtodos Clsicos: Qumica por va hmeda (volumetras, gravimetras y


anlisis cualitativo sistemtico)
Propiedades ondulatorias de la
Mtodos Instrumentales: explotan las propiedades fsicas del analito para
radiacin. obtener informacin cualitativa y cuantitativa

Espectroscopa: estudia la interaccin del campo elctrico de la radiacin


Aspectos mecanocunticos de la electromagntica con la materia mediante fenmenos de absorcin,
emisin y dispersin de luz
radiacin.
Espectroscopa atmica y molecular.

Algunas modalidades espectromtricas Regiones del espectro electromagntico

2
Regiones del espectro electromagntico Regiones del espectro electromagntico

Regiones del espectro electromagntico Regiones del espectro electromagntico

Interaccin materia-energa radiante Regiones del espectro electromagntico

3
La luz (radiacin electromagntica) Naturaleza corpuscular

La luz tiene una naturaleza dual: El principio de quantizacin de la energa implica que
Corpuscular (fotones)
slo son posibles ciertos valores discretos de energa.
Ondulatoria (ondas)

Ver Skoog, pag. 135-7

Interaccin materia-energa radiante Onda electromagntica

Frecuencia: nmero de ciclos por unidad de tiempo. Depende de la fuente emisora y permanece
invariante, independientemente del medio que atraviese. [ ]
ciclos
[ ] hertz [ ] s 1
s
Periodo: tiempo empleado en un ciclo completo. T = 1/ [=] s

Longitud de onda, i: distancia entre dos mximos o mnimos sucesivos.

Velocidad de propagacin: vi = i v y son funcin del medio que atraviesan


1 1
Nmero de onda, : nmero de ondas por cm. [ ] cm 1 ; K
i vi

En el vaco, la velocidad de la radiacin se hace independiente de la longitud de onda y alcanza


su valor mximo. c = = 3,00108 ms-1

Onda electromagntica Interferencia


La amplitud de la onda resultante depende del desfase entre las ondas individuales
Potencia, P, es la energa expresada en watios que alcanza un rea determinada
por unidad de tiempo

Intensidad, I, es la potencia de la radiacin por unidad de ngulo slido

h c
E h h c h, constante de Planck = 6,6310-34 J s

La P de un haz es directamente proporcional al nmero de fotones por segundo.

4
Interferencia constructiva Interferencia destructiva

A desfase Para = 180,


cero, =0, se se obtiene la
obtiene la mxima
interferencia interferencia
constructiva destructiva
mxima

Superposicin de ondas Transmisin de la luz: Frenado de una onda

El frenado es funcin de la naturaleza y concentracin de la materia atravesada.

c
ndice de refraccin ni
vi

Animations courtesy of Dr. Dan Russell, Kettering University

Curva de dispersin refractiva Dispersin de la luz (scattering)


Centro dispersante
Lentes, n cte. (p.e.: molcula, partcula
insoluble o coloidal)
vi = f (i) Haz
incidente
Radiacin
ni = f (i) dispersada en
Prismas todas las
direcciones

Rayleigh

5
Dispersin de la luz (scattering) Polarizacin
La mayora de los fotones Se dice que la radiacin electromagntica est
dispersados tienen la misma despolarizada cuando los vectores magntico y elctrico
frecuencia que la fuente alcanzan la misma magnitud en todas las direcciones.
(dispersin Rayleigh); sin
embargo, la frecuencia de
algunos fotones (aprox. 1 en
107) ha variado (dispersin
Raman).

Polarizacin Polarizacin

La luz se dice linealmente polarizada cuando oscila


en un nico plano al moverse por el espacio.

E = Eocost E = Eoe-t = Eocost + Eo sin t

Luz polarizada en el plano Luz polarizada circular

Refraccin de la luz. Ley de Snell Reflexin de la luz


Cambio abrupto de la direccin de una radiacin al pasar de un medio a otro con distinta
densidad, como consecuencia del cambio de velocidad de la radiacin en los dos medios.

c
sen 1 n2 v 2 v1 1 1
Principio de Fermat: la
sen 2 n1 c v 2 2 2
La longitud L de A a B es: luz sigue el camino ms
v1 corto (menos tiempo).

Si el medio 1 es el vaco, n1 = 1 Puesto que la velocidad es cte (mismo medio) la ruta de tiempo mnimo es la de distancia
mnima que se puede calcular igualando a cero la derivada.

nvaco = 1,00027 naire

n1 sen 1 n2 sen 2

6
Reflexin de la luz Reflexin de la luz
Si la rugosidad de la superficie lmite es menor que la longitud de
onda, entonces se produce una reflexin propiamente dicha, para la
cual se cumple la ley de la reflexin (ngulo de incidencia = ngulo de Ir Para un rayo que incida
reflexin). Por lo general se refleja nicamente una parte del rayo perpendicularmente a la superficie,
incidente, pues la otra penetra en el medio y es refractada. la reflectancia viene dada por:
Ii
(n2 n1 )2 Ir
Si la rugosidad de la superficie lmite es comparable a la longitud
y, en general,
de onda del rayo incidente se obtiene una difusin (reflexin difusa)
(n2 n1 )2 Ii
Si el rayo sobrepasa un ngulo lmite
determinado, se produce la denominada
Pasar del aire (n=1) a vidrio (n=1,5) supone una reflectancia de
reflexin total.
= 0,04 = 4%
Ver Skoog, pg 133
Ejemplo 6.2
Si hay muchas superficies en el camino ptico, se producen
muchas prdidas: stray light

Difraccin de radiacin monocromtica por rendijas Difraccin de radiacin monocromtica por rendijas

BCF DOE
Difraccin: todo haz paralelo de radiacin electromagntica se curva al
pasar por un objeto puntiagudo o por una rendija estrecha.

CBF

CF BC sen

m BC sen

m : orden de interferencia

DE OD sen

BC DE BC DE
m
OD OE
Ver Skoog, pg 129-130
La difraccin es consecuencia de la interferencia y fue demostrada en 1800 por Young
Ejemplo 6.1

Radiacin coherente Diagrama de niveles de energa simplificado


Radiacin emitida por una fuente cuando todas las ondas elementales emitidas poseen
una diferencia de fase constante en el tiempo y en el espacio (IUPAC, 1997)

La luz producida por un lser es:


Monocromtica (longitud de onda nica)
Coherente (en fase)
Direccional (cono de divergencia estrechsimo)
E
La lmpara incandescente produce una luz: E = E electr + E vibr + E rot
Cromtica
Incoherente
No direccional

Fuente de luz monocromtica:


Coherente
No direccional

7
Absorcin atmica y espectro Absorcin y resolucin espectral

Los dos picos de absorcin


surgen de la promocin del
electrn 3s a los dos estados 3p

Espectros de absorcin Desactivacin radiacional y no-radiacional

Emisin atmica y molecular Espectro de lneas y bandas

8
Emisin de cuerpo negro Lneas de emisin de RX
1
mx (Wien)
T

W(B ) T 4 (Stefan)

W V 4 (en el VIS)

Tema 2 Instrumentacin general para espectroscopa

Selector
Diseo y componentes de los instrumentos de Celda Detector

espectroscpicos.
Fuente Detector y
Fuentes de radiacin. registrador de la
seal

Celdas.
Selectores de longitud de onda.
Detectores.
Tratamiento de seales.

Instrumentacin general para espectroscopa Instrumentacin general para espectroscopa

Selector Selector
de Celda Detector de Celda Detector

Fuente Fuente

9
Instrumentacin general para espectroscopa Instrumentacin general para espectroscopa

Selector Selector
de Celda Detector de Celda Detector

Fuente Fuente Detector y


registrador de la
seal

M t

Instrumentacin general para espectroscopa Diagrama de bloques para absorcin

Absorcin

Fluorescencia

Emisin

Diagrama de bloques para absorcin Diagrama de bloques para fluorescencia y fosforescencia

10
Fuentes en EAM Fuentes en EAM

Caractersticas relevantes:

1. Distribucin espectral: intensidad a distintas (fuentes de continuo Espectro continuo


vs fuentes de lneas)

2. Intensidad

3. Estabilidad

1. Ruido (fluctuaciones a corto plazo)

2. Deriva (fluctuaciones a largo plazo) Espectro de lneas


discretas
4. Coste

5. Tiempo de vida

6. Geometra

I: Fuentes de continuo I: Fuentes de continuo

A) Radiacin trmica (incandescencia). VIS


Los slidos calentados emiten radiacin prxima a la
radiacin terica del cuerpo negro. 1. Filamento de wolframio encapsulado en un bulbo de vidrio

Comportamiento del Cuerpo Negro: Normalmente funciona a unos 3.000C


Como W~ T4, cuando se usa una Se necesita atmsfera inerte para prevenir la oxidacin del filamento
fuente incandescente se Es til entre 350-2.200 nm (VIS- IR cercano)
precisa una temperatura Por debajo de 350 nm el vidrio absorbe la mayor parte de la radiacin
constante para que la
emisin sea estable. 2. Lmparas halgenas en bulbo de cuarzo
1
mx (Wien) El halgeno sirve para formar haluros voltiles de volframio
T
Al enfriar la lmpara, el W se re-deposita sobre el filamento
Mayor tiempo de vida.
W(B ) T 4 (Stefan)
Pueden funcionar a T ms altas (hasta unos 3.500C)
Proporcionan mayor intensidad lumnica
W V 4 (en el VIS) Elevadas T demandan cuarzo en las paredes de la lmpara.
El cuarzo transmite mejor en el UV.

I: Fuentes de continuo I: Fuentes de continuo

B) Lmparas de descarga de gases B) Lmparas de descarga de gases


Flujo de corriente entre dos electrodos sumergidos en un Flujo de corriente entre dos electrodos sumergidos en un
tubo relleno de gas. tubo relleno de gas.
Los electrones colisionan con el gasexcitacinemisin Los electrones colisionan con el gasexcitacinemisin
Lmpara de Deuterio Lmpara de H2: 3-5 veces menos
intensa que la de Deuterio.
D 2 E elctrica D *2 D' D' ' h D2 ms pesado que H2menores
prdidas por colisiones

Intervalo de . 160 380 nm Intervalo de . 180 370 nm


Muy adecuadas para el UV Muy adecuadas para el UV

11
I: Fuentes de continuo I: Fuentes de continuo

B) Lmparas de descarga de gases B) Lmparas de descarga de gases


Flujo de corriente entre dos electrodos sumergidos en un Flujo de corriente entre dos electrodos sumergidos en un
tubo relleno de gas. tubo relleno de gas.
Los electrones colisionan con el gasexcitacinemisin Los electrones colisionan con el gasexcitacinemisin

Para una ms elevada intensidad: Lmpara de vapor de mercurio


Lmpara de Xenon a 10-20 atm
Ms colisiones: continuo

Inconvenientes: til para cuando se necesitan


unas pocas lneas muy intensas
Vida relativamente corta (Fluorimetra)
Necesita cebado
Arco errante
Potencia dependiente del tiempo

Fuentes en EAM Fuentes en EAM

Para EAM UV-VIS: W para el VIS y H2 o D2 en el UV


(cambio durante el barrido)

Para Espectrofluorimetra con barrido: lmpara de


arco de Xe

Con fluormetros de longitud de onda fija: lmpara de


Hg a baja P

Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation

Excitacin y emisin Excitacin y emisin


espontnea estimulada

12
Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation

Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation

Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation Laser He-Ne

13
Proporcin emisin estimulada / absorcin Mecanismo LASER

R 21(estimulada) N2

R 12 (absorbida) N1

Output
Feedback mechanism
coupler

Conclusin: para lograr


emisin estimulada se Lasing medium
precisa una inversin de la
poblacin: N2 > N1
High Energy Partially
reflectance input transmitting
mirror mirror
Energy pumping
mechanism

LASER en accin LASER: tipos


1) Estado slido

Lasing medium a) Laser de Ruby [Al2O3+Cr(III)]. Opera a 694,3 nm bombeado por


at ground state lmpara de arco de Xe. Pulsante (puede ser CW tambin)
Pump energy
b) Laser de Nd/YAG (granate de Y-Al con Nd): 1.064 nm
Population
inversion 2) Gaseosos
Pump energy
a) tomo neutro: He-Ne: 632,8 nm
Start of stimulated
emission b) Iones: Ar+ o Kr+: 514,5 nm
Pump energy
c) Moleculares: CO2 : 10.000 nm (1.000cm-1); N2: 337,1 nm
Stimulated emission
building up d) Excmeros: gas inerte + F: ArF+ (193 nm); KrF+ (248 nm); XeF+ (351 nm)
Pump energy
3) Colorante (dye laser). Amplia gama de colorantes que pueden proporcionar
Laser in
full operation una variedad de .

4) Diodo semiconductor. Amplia gama de . Continuo.

Limitaciones de los LASER Caracersticas del Laser


La luz producida por un lser es:
Monocromtica (longitud de onda nica)
Coherente (en fase)
Coste elevado (en muchos casos) Direccional (cono de divergencia estrechsimo)
Intensa

Intervalo de en cierto modo limitado La lmpara incandescente produce una luz:


Cromtica
Incoherente
Muchos operan en modo pulsante. Algunos ya operan No direccional

Fuente de luz monocromtica:


como onda continua (CW)
Coherente
No direccional

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Sistema de aislamiento de Sistema de aislamiento de

1. Filtros
Absorcin (vidrio, pelcula o disolucin coloreada:
solucin ms barata)
Corte
Interferencia
Tres enfoques o planteamientos:
1) Bloqueo de la radiacin no deseada: FILTRO 2. Monocromadores
2) Dispersin de la radiacin y seleccin de la banda estrecha de de inters:
MONOCROMADOR
Prisma
3) Modulacin de las a diferentes frecuencias: INTERFERMETRO Red

Surtido de filtros coloreados de vidrio y de cuarzo

El espectro visible
Color de la luz Color visible
absorbida absorbida

400-420 Violeta Verde amarillento


420-450 Violeta-azulado Amarillo
450-490 Azul Naranja
490-510 Azul-verdoso Rojo
510-545 Verde Prpura
545-580 Verde-amarillento Violeta
580-630 Naranja Azul
630-720 Rojo Azul-verdoso

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Filtros de absorcin (filtros de paso de banda) Filtros de corte (cut-off filters)

Muestran muy baja transmitancia

Presentan un perfil de pico muy ancho

Pueden usarse 2 ms filtros en serie

Pueden ser de cuarzo o vidrio

Relativamente baratos

Filtros de corte (cut-off filters) Filtros de absorcin vs de corte. Combinacin


La combinacin de 2 filtros de corte produce el efecto de un filtro de paso de banda

%T

/ nm

Filtro de interferencia Filtro de interferencia


t
Recorrido entre superficies:
cos
Lminas de
Haz incidente vidrio 2t
Reforzamiento: m'
cos

0 cos 1

m ' 2 t

Material dielctrico (CaF, MgF) En el aire: = n

Capas metlicas
semi-reflectantes Radiacin Longitud de onda transmitida: t

transmitida
2tn

m

16
Filtros de absorcin vs de interferencia Filtro de interferencia

Tpicamente, el %T
disminuye con anchuras de
banda decrecientes.

Filtros Cuas de interferencia (wedge)


Dos trminos asociados con los filtros pticos son:
White Radiation
1. Anchura de banda
efectiva medida a la Moveable Slit
mitad de altura de pico.
Glass
2. nominal (450 y 500 Metallic Layer
nm, en estos casos) Dielectric Layer

Monochromatic
Radiation

Son tiles para seleccionar varias bandas de radiacin gracias al


movimiento de la radiacin incidente a lo largo del filtro.

Las anchuras de banda tpicas son 20 nm

Monocromadores: prisma Monocromadores: red


En la red de escalerilla (rejilla) se hacen una serie de hendiduras
paralelas (surcos) en una superficie lisa con espaciado diferente en
funcin de la zona del espectro.

UV_VIS: 500 a 5.000 lneas por mm


IR: 50 a 200 lneas por mm

Se pueden usar desde el UV hasta el IR


El material a emplear depende de la zona del espectro
Vidrio: en el VIS por encima de 350 nm
Cuarzo: en el UV
Sales cristalinas (NaCl, KBr): en el IR

17
Red de escalerilla: interferencia constructiva Red de escalerilla: interferencia constructiva

Una red que contiene 1.450 surcos/mm es irradiada con luz policromtica
No se puede mostrar la imagen en este momento.

con un ngulo incidente de 48. Qu longitudes de onda aparecern a un


ngulo de reflexin de +20 y de -10?

m (CD AB) m d (sen i sen r) d


mm 10 6 nm
1.450 mm
689,7 nm

CD d sen i
Para r = 20: = (689,7/m) (sen 48 + sen 20) = 748,4/m nm (748,4; 374,2; 249,5 nm, etc.)
AB d sen r
Para r = -10: = (689,7/m) [sen 48 + sen (-10)] = 397,9/m nm (397,9; 199,0; 132,6 nm, etc.)
m d (sen i sen r)

Monocromadores: red

Sistemas de aislamiento de Montajes Czerny-Turner y Ebert

18
Monocromador: dispersin Monocromador: poder de resolucin, R
Dispersin angular: cambio en el ngulo de reflexin a medida
que vara la
1 2
1 2 A = dr/d R ; ; 1 2
2
Dispersin lineal: variacin de la en funcin de la distancia
y a lo largo del plano focal.
Red: 103 - 104
D = dy/d = F dr/d = F A
F: distancia focal de la lente de enfoque Prisma: 101 - 102
Dispersin recproca lineal: D-1 = d/dy = 1/F d/dr [=] nm/mm
m d (sen i sen r) Orden de N de rayas
Ej.: Si R = 103 y = 500, entonces = 0,5 nm
interferencia
dr m
d
d d cosr Para r < 20 cos r 1 D 1 Si r es pequeo, D para Rred = mN Ej.: Calcular la resolucin necesaria para
mF una red- es constante
d d cosr observar procesos de absorcin a 599,9 y 600,1
1
D nm sin interferencia.
dy mF
Rprisma = b dn/d R = 600 / 0,2 = 3.000
A menor d le dr dr dn
corresponde una Para un prisma: D NO es constante. D F b
mayor dispersin d dn d
angular
Variable (ver curvas de dispersin)

Monocromador: velocidad, f/nmero Red de escalera


El poder colector de luz es una medida de la cantidad de luz que
alcanza el detector.

F F: distancia focal
f f/nmero: 1 -10
d d: dimetro de la lente

Cuanta ms energa radiante llegue al detector, mayor relacin r i


seal/ruido se obtendr en la medida resultante.

m 2 dsen
El poder colector de luz es ~ f -2

Cuanto menor es el nmero ms luz se recoge. 2 d cos


D 1
Un monocromador con f/2 recoge 4 veces ms de luz que uno con f/4 mF

19
Monocromador de red de escalera

Monocromador doblemente dispersante


Dispersin ms elevada
Mejor resolucin
que un monocromador convencional

Los dos elementos dispersantes son una red de


escalera y un prisma de baja dispersin.

Anchura de rendija y resolucin Monocromadores: red

Anchura de banda

Anchura de rendija y resolucin Anchura de rendija y resolucin

Si la w se ajusta de modo
D 1 que ef = se
y consigue resolucin
Si y w ef espectral completa.
w

ef w D 1

nm
R 1,2 w?
ef
y mm

1
ef (589,6 589) 0,3 nm
2

ef 0,3 nm
w 0,25 mm
D 1 1,2 nm
mm

20
Anchura de rendija y resolucin Anchura de rendija y resolucin

Rendijas estrechas
garantizan mejor
resolucin
P
Rendija estrecha
Mejor resolucin: aptas para anlisis cualitativo
Prdida de potencia del haz: no recomendables para anlisis cuantitativo

Material ptico Celdas para la muestra

Lentes, prismas y celdillas han de ser transparentes a la


radiacin utilizada

En el VIS se puede emplear el vidrio de 350 nm en adelante

En el UV, el cuarzo es el ms adecuado

En el IR: NaCl, KBr


Cuanto ms pesado sea el tomo ms transparente a radiaciones alejadas en
el IR (mayores ).

Su mayor problema es la posibilidad de absorber la humedad ambiente que


hace que se velen.

Transductores de radiacin (Detectores) Detector ideal: caractersticas


Los primeros detectores fueron el ojo humano y las placas fotogrficas.
Los instrumentos modernos contienen dispositivos que convierten la radiacin
en una seal elctrica
Elevada sensibilidad
Dos tipos habituales: Alta relacin seal/ruido (S/N ratio)
Detectores de fotones
Los detectores fotoelctricos o cunticos poseen una superficie activa capaz de Respuesta independiente de la (o al menos dar
absorber radiacin EM una respuesta constante a lo largo de un intervalo amplio de )
En algunos, la radiacin absorbida produce la emisin de electrones dando
lugar a una fotocorriente Tiempo de respuesta corto
En otros, la absorcin de radiacin promueve electrones a la banda de
valencia de un semiconductor posibilitando la conduccin (fotoconduccin) Ausencia de corriente oscura
Uso comn en instrumentos UV, VIS, IR cercano
Detectores trmicos Seal directamente proporcional a la
Miden el calor inducido por la radiacin incidente potencia radiante incidente
Uso frecuente en espectroscopa IR

21
Clula fotovoltaica Fototubo de vaco

h: rotura de enlaces covalentes; creacin de electrones y huecos conductores

Muy sencillo
S=kP
Poco sensible
Fatiga

Fototubo de vaco Tubo fotomultiplicador (PMT)

Tubo fotomultiplicador (PMT)

22
Tubo fotomultiplicador (PMT) Detector de diodo de silicio

Se origina una corriente


proporcional a la potencia radiante

Muy sensibles a radiacin Vis-UV


Sensibilidad intermedia entre
Factor limitante: corriente oscura refrigeracin
el fototubo de vaco y el tubo
Se usan para medir radiacin de baja potencia fotomultiplicador

Detector de diodo de silicio


Photo-detectors:
Silicon Diode (P-N junction):
I0

I1

+ -

h
R (a. u.)

Depletion layer

190 1100 nm

Serie de Fotodiodos (Photodiode array) Serie de Fotodiodos (Photodiode array)

Diode Array

Multi-channel
Amplifier

Imagen del chip con


una serie de fotodiodos

Los detectores de fotodiodos han revolucionado


el diseo de instrumentos VIS-UV al hacer
posible la miniaturizacin de los espectrmetros

23
Dispositivo de Carga Acoplada Charge-Coupled Devices (CCD) Dispositivo de Carga Acoplada Charge-Coupled Devices (CCD)

Dispositivo de Carga Acoplada Charge-Coupled Devices (CCD) Dispositivo de Carga Acoplada Charge-Coupled Devices (CCD)

Determining the brilliance distribution of an astronomical object (star, planet, galaxie,...) with
CCD Charge-Coupled Device, "dispositivo de cargas (elctricas) interconectadas the help of a CCD is pretty much similar to the measurments of the quantity of infalling rain
on a farm. As soon as the rain stops, collecting buckets are displaced horizontally on
Los primeros dispositivos CCD fueron inventados por Willard Boyle y George Smith en conveyor belts. Then the water content of the buckets is collected in other buckets on a
1969 en los Laboratorios Bell. vertical conveyor belt. The overall content is sent onto a weighting system.

Dispositivo de Carga Acoplada Charge-Coupled Devices (CCD) Dispositivo de Carga Acoplada Charge-Coupled Devices (CCD)

Pixel Output
register

(a) (b)
(a) (b)

Electrons To Output amplification Impurity (doping)

Electrodes (a) By changing in a synchronized way the potential of the electrodes, electrons are
The way a CCD works is illustrated by means of a simplified CCD made of 9 pixels, an output register and an
transfered from pixel to pixel. Charges on the right are guided to the output register
amplifier. Each pixel is divided in 3 regions (electrodes who serve to create a potential well). (a) when an (b) The horizontal transfer of charges is then stopped and charge packages at the output
exposure is made, the central electrode of each pixel is maintained at a higher potential (yellow) than the register are transfered vertically, one by one, to an output amplifier and then read one
others ( green) and the charges collecting process takes place. (b) At the end of the exposure, the electrodes by one. The cycle starts again until all the charges have been read (reading time of about
potentials are changed and charges transferred from one electrode to the other.
1 minute for a large CCD).

24
Dispositivo de Carga Acoplada Charge-Coupled Devices (CCD)

Mosac of 4 CCDs, containing


each 2040 x 2048 pixels. This
composite detector is about 6 cm
large and contains a total of 16
millions pixels (Kitt Peak
National Observatory, Arizona).

Dispositivo de Carga Acoplada Charge-Coupled Devices (CCD) Medida cuantitativa

Todas las medidas instrumentales involucran una seal

Desafortunadamente, todas las seales incorporan ruido

En ocasiones el ruido es grande

Quantum efficiency curves of different types of CCDs as a function of the wavelenght A veces el ruido es tan pequeo que no se percibe.
compared to the one of other detectors. We can see on this plot the large domain of
wavelenghts for the spectral response of CCDs.

Cociente Seal/Ruido (Signal/Noise ratio; S/N) Registro de una seal de corriente

Da una idea de la calidad de las medidas instrumentales

S media de la seal x 1

N desviacin estndar s DER

DER : Desviacin Estndar Relativa

A menudo el ruido es constante e independiente de la seal

25
Estimacin del S/N Cociente Seal/Ruido (Signal/Noise ratio; S/N)

Un cociente S/N
bajo proporciona
muy poca
fiabilidad para la
x = 0.9 x 10-15 A
medida de
Nt = 1.0 x 10-15 A
seales
analticas.

El Lmite de
x = 0.9 x 10-15 Deteccin suele
s = Nt/5 = 1.0 x 10-15/5 = 0.2 x 10-15
tomarse para S/N
~23
S/N = x/s = 0.9 x 10-15/0.2 x 10-15 = 45

Fuentes de Ruido Ruido Trmico (ruido blanco)

Ruido Qumico: temperatura, presin, humedad, etc.


Las variaciones provocan fluctuaciones incontrolables Vrms: raz cuadrtica media o valor eficaz del ruido de la tensin
que est dentro de una
Ruido Instrumental: debido a los componentes de los aparatos f: anchura de banda de la frecuencia del ruido en Hz
- Trmico (Johnson noise): movimiento trmico de los
k: constante de Boltzmann (1,3810-23 JK-1)
electrones en los resistores
- Disparo (Shot noise): movimiento de los electrones a T: temperatura absoluta en K

travs de una unin. R: resistencia en


- Parpadeo (Flicker noise): cualquier ruido que es Tiempo de ascenso, tr, es el tiempo de respuesta expresado en s
inversamente proporcional a la seal: 1/f de un instrumento a un cambio brusco de la seal de entrada.
1
f Se toma como el t necesario para que la seal de salida pase del
- Ambiental (Environmental noise): mezcla de mltiples 3 tr 10% al 90% de su valor final
fuentes de ruido.
Ej.: tr = 0,01 s ancho de banda = 33 Hz

Ruido de Disparo Ruido Ambiental

irms: raz cuadrtica media o valor eficaz de las fluctuaciones


de corriente relacionadas con

i: La corriente continua promedio

e: carga del electrn (1,6010-19 C)

f: ancho de banda de las frecuencias consideradas

Tambin tiene carcter de ruido blanco

26
Mejora del cociente S/N Filtro de paso bajo

Hardware & software Deja pasar las seales de frecuencia baja, eliminando el ruido asociado a
frecuencias altas (ruido trmico y de disparo)
Raw Data Filtered Data
Hardware:
1. Toma de tierra y proteccin (caja de Faraday)
2. Filtracin analgica y RC Low Pass
Filter
3. Modulacin: conversin de la seal DC a AC de alta
frecuencia y posterior demodulacin
4. Chopping de la seal: disco rotatorio, ayuda a
discriminar seales contnuas de las transientes
5. Amplificadores operacionales til para instrumentos que miden seales analticas de baja frecuencia

Filtro de paso alto Filtro de paso de banda

Elimina el ruido de frecuencia baja (parpadeo y deriva) permitiendo el paso


Combinacin adecuada de filtros de paso bajo y alto para dejar
de las frecuencias altas.
pasar solamente la(s) frecuencia(s) de inters
Raw Data Filtered Data

1.0 1.0
Low Pass High Pass Band Pass
0.8 0.8
High Pass

Relative Signal
Relative Signal

i Filter 0 0.6 0.6


Band Pass 0.4
0.4
Filter
0.2 0.2

0.01 0.1 1.0 10 100 1000 10,000 0.01 0.1 1.0 10 100 1000 10,000

Frequency, Hz Frequency, Hz
Time Time

til para instrumentos que miden seales analticas de alta frecuencia

Modulacin-desmodulacin Mejora del cociente S/N


La seal se modula hacindola pasar por un chopper (disco rotatorio) de modo
que pasa de poseer baja frecuencia a ser una seal de alta frecuencia (el ruido Hardware & software
1/f es menos problemtico a frecuencias elevadas)

A continuacin la seal se amplifica y se pasa a travs de un filtro


de paso alto para eliminar el ruido 1/f
Software:
1. Promediado conjunto
La seal se demodula y se pasa por un filtro de paso bajo para
dar lugar a una seal de corriente continua (dc) amplificada 2. Promediado por grupos
3. Filtrado digital

27
Promediado conjunto Promediado conjunto

En este algoritmo, sucesivas series de datos (matrices) se recogen y suman punto Registro de sucesivos espectros, suma punto a punto y promediado
por punto como en una matriz de la memoria de un ordenador (COADICION).
Despus de la coadicin, los datos se promedian dividiendo la suma para cada n n

punto por el nmero de barridos realizados.


S
i 1
i S
i 1
x Si
2

Sx y N(rms noise )
n n
Si la seal en x tiene un valor de Sx,
Donde: Sx = seal promedio (punto)
Al sumar n series de datos, la suma valdr: n Sx. Si = medida individual de la seal
n = nmero de medidas
La seal del ruido, Nx, contenido en Sx, tambin se sumar pero como las seales
de ruido son aleatorias se acumulan como la n
Entonces:
Por tanto la suma del ruido de x despus de sumar n series de datos es: n Nx
Sx Sx Sx
n
S n Sx S N n
S x S i
2
n
S x S i
2
n x i 1 i 1
N n Nx Nx n

Promediado conjunto (ensemble averaging) Promediado conjunto (ensemble averaging)


A Single Spectrum
1,5
S N S/N
0.91 0.289 3.14 Sx S
1,0 n 1
N N1
Signal

0,5

0,0
0 100 200 300 400 500 600
Time (s)
Averageof
Average ofSixteen
Four Spectra
Spectra
1,5
1,5
SS N
N S/N
S/N
0.90
0.90 0.150
0.070 6.02
12.81
1,0
1,0
Signal
Signal

0,5
0,5

0,0
0,0
00 100
100 200
200 300
300 400
400 500
500 600
600
Time
Time (s)
(s)

S
S xx S
nn S11 16
4 33. 14
.14612
. 28.56
N N1
N

Signal averaging improves S/N

0.1 M Na2SO4
0.1 sec* 10 sec

1000 counts

1.0 sec
SO4-2
0.1 sec

30 sec
100 counts

400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000 400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000
Raman shift, cm-1
Raman shift, cm-1
* spectra were accumulated for period indicated Signal averaging is often required to increase signal above noise

28
High Sensitivity does not necessarily lead to low detection limit

Raman spectrum of Glassy Carbon,


514.5 nm, 30 sec
S 10,000 e-
cheap
detector
(high noise)
3000 e-

difference of two runs


sx

good
1000 e- detector glassy carbon, 785 nm
3000 e-
(low noise)

400 600 800 1000 1200 1400 1600 800 1200 1600

For shot noise, sx = S1/2, so larger signal yields larger noise Raman shift, cm-1

Raman spectra of Calcium ascorbate

SNR=17
100 ms, 50 um slit
SNR = 10 100 photons

S/B =
A SNR= 5
10 ms, 50 um

10 ms, 20 um SNR=2.8

SNR ~ 100
10,000 photons SNR < 2
S/B > 1000 B 10 ms, 10 um

400 600 800 1000 1200 1400 1600 1800 2000

Raman shift, cm-1

Promediado por grupos (boxcar averaging) Sensibilidad


a) Calibrado
Suaviza las irregularidades de S = seal o respuesta del instrumento
alta frecuencia en una onda de S = mc + Sbl Sbl = seal del blanco
ms baja frecuencia c = concentracin de la muestra
b) Analtica m = sensibilidad del calibrado (pendiente de la
m curva de calibrado; no tiene en cuenta la precisin
Se hace en tiempo real a de las medidas individuales)
medida que el ordenador sS 100
Signal (S)

registra la seal : sensibilidad analtica


80
m2

sS: desviacin estndar de la 60

medida de la seal
Sm2 40 m1

Se emplea para seales + No depende de los factores de Sm1


complejas que varan
20

amplificacin
rpidamente con el tiempo
Sbl 0

+ Independiente de las unidades de medida 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1

Concentration (c)
de S C

- Depende de la concentracin [ss = f(C)]

29
Lmite de deteccin (LOD) y de cuantificacin (LOQ) Lmite de deteccin (LOD) y de cuantificacin (LOQ)

LOD: mnima concentracin o masa de analito que puede ser detectada por un
mtodo instrumental a un nivel dado de confianza (95%)
LOQ: mnima concentracin que puede ser fiablemente cuantificada

LOD
Seal analtica mnima detectable:
Sm: Seal mnima detectable
Sm = Savg, bl + ksbl Savg, bl: Seal promedio del blanco
k: nmero entero (3)

Concentracin mnima detectable: sbl: desviacin estndar del blanco

Sm Savg,bl k sbl
cm cm
m m

Intervalo dinmico de linealidad y lmite de linealidad (LOL) Tema 3


El intervalo dinmico se extiende desde el LOQ hasta el LOL
Espectroscopa de absorcin molecular Vis-UV.
LOL

Ley de Beer.
Instrument Response

LOQ
Sistemas que absorben en el UV-Visible.
cm
Dynamic Range

Concentration
Instrumentacin.
LOQ
Seal mnima cuantificable: Concentracin mnima cuantificable: Mtodos y aplicaciones.
Sq = Savg, bl + 10sbl 10 sbl
cq
m

Espectroscopa Vis-UV Presupuestos de la Ley de Beer

1. La radiacin es monocromtica

2. Las partculas absorben de modo independiente

3. Seccin recta y uniforme de absorcin

4. Los procesos de absorcin y desorcin de energa han de ser rpidos

5. La degeneracin de la energa absorbida ha de hacerse por va no

radiacional

6. El ndice de refraccin del medio absorbente debe ser independiente de la

160 780
concentracin

30
Ley de Beer dP N (n de partculas absorbentes) P (n de fotones)

dV = S db; dV [=] cm2 cm [=] cm3

mol 23 tomos 3
NC 6,02310 dV (L) 10- 6,02310

20

S db C
L mol
K'

dP = cte N P = cte K db C P = K db C P

S K
dP
K C db
P0 dP = - K db C P;
P

P0 S
P b
dP P

P0
P
K C db; ln
0
P0
K C b

P
db
P log
P
P

K
2,303
b C Abs = a b C Ley de Beer b
db 0

b [=] cm
b a = , absortividad molar; [=] L mol-1 cm-1
c [=] mol/L

Terminologa comn Correccin de prdidas

Correccin de prdidas Ley de Beer


En un medio absorbente, la potencia decae exponencialmente con la longitud
de paso ptico
P Muestra P1
Potencia P P1
P P P1 P1
P P0 P P P0 10 b c b1
Blanco

cuveta

P'1 P1 P'1 P0
Treal ; Tmedida ; Abs logT log
P' P0 P' P1
P1
Experimentalmente se miden slo potencias salientes

b1 b

31
Ley de Beer Ley de Beer
En un medio absorbente, la potencia decae exponencialmente con la longitud En un medio absorbente, la potencia decae exponencialmente con la
de paso ptico concentracin

Potencia P P1 Potencia P P1
P P P0 10 b c b1 P P P0 10 b c C1

P1
P P2 P P2
b2
P1 C2

P2 P2

C1 C2
b1 b2 b C

Ley de Beer Ley de Beer


Parsol 340 (10-4 M in MEOH)
2 Abs b C Se pueden encontrar valores elevados
Absorbancia

1,8
1,6 de hasta 105 L mol-1 cm-1 para la
1,4 constante de proporcionalidad.
Absorbance

1,2
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
220 270 320 370 420 Concentracin
Wavelength/nm

O
0.5
T vs [P340] y = 0,9224e-30498x Beer-Lambert plot for Parsol 340 in ethanol
R = 0,9995
max~45.000
SO 3H

HO 3S 0.4
0,6 1,6 O
y = 13245x + 0,0351
Absorbance

0,5 1,4 R = 0,9995 0.3


UVA UVA
1,2
absorbance

0,4 1 0.2
0,3 0,8
T

0,2 0,6 HO3S


O
0.1
0,4 O
0,1 0,2
SO 3H
0
200 250 300 350 400
0 0
0,00E+00 2,00E-05 4,00E-05 6,00E-05 8,00E-05 1,00E-04 1,20E-04 0,00E+00 2,00E-05 4,00E-05 6,00E-05 8,00E-05 1,00E-04 1,20E-04 Mexoryl SX W avelength/nm

[P340]/M [P340]/M

Ley de Beer Ley de Beer: aditividad

ATotal A1 A2 A3 ...... An

ATotal 1b1c1 2b2c2 3b3c3...... nbn cn

T = P/Po

%T = (P/Po) x 100

A = -log T= abc

%A = 100 - %T
Elucidacin de muestras binarias o ternarias de
componentes absorbentes

32
Mezclas de sustancias absorbentes Ley de Beer: desviaciones

Propias a la Ley Dependencia de respecto de n


Interacciones moleculares
Procesos no absorbentes
Las absorbancias son siempre aditivas

Qumicas Equilibrios en disolucin


': A' M' b [ M ] N' b [ N ] Disolvente
Impureza de reactivos
Presencia de interferencias absorbentes
' ': A' ' M b [ M ] N b [ N ]
'' ''

Instrumentales Radiacin policrmatica


Radiacin parsita o dispersa
Ruido instrumental
Anchura de rendija

Ley de Beer: desviaciones Ley de Beer: desviaciones


Reacciones del compuesto absorbente provocan el
Propias a la Ley A no tiene limitacin con respecto a b incumplimiento de la ley de Beer.
Se pueden emplear celdillas pequeas para analitos
concentrados y celdilla ms largas para muestras ms
diluidas. HIn H In
color 1 color 2
Si A = 0,410 en una celdilla de 1,0 cm, entonces:
Si b = 2,0 cm, A = 0,820 Qumicas
Si b = 0,1 cm, A = 0,041

Concentraciones > 0,01 M alteracin del proceso de absorcin individual


Ley de Beer es una ley lmite
Un aumento de la concentracin del buffer o del disolvente tiene un efecto
similar

Si la modificacin de C implica cambio de n, entonces vara (n) = [n/(n2 + 2)2]

Ley de Beer: desviaciones Punto isosbstico


Se observa un punto isosbstico cuando dos especies absorbentes en equilibrio, X
e Y, tienen la misma absortividad molar a una longitud de onda. Si X e Y estn en
Ejemplo: si Ka = 10-4 HIn H In equilibrio, para la longitud de onda del punto isosbstico, la absorbancia total es
color 1 color 2 independiente de las concentraciones relativas de X e Y.
0,9
A = b ([HIn] + [In-])
0,8

CHIn [HIn] [In-] 0,7


Rojo fenol
0,6

0,5
El punto isosbstico
Absorbance

10-5 8.5x10-7 9.2x10-6 0,4

Expected 0,3 puede llegar a ser una


0,2
longitud de onda
10-4 3.8x10-5 6.2x10-5 0,1

Actual
0
400 450 500 550 600 650
analticamente til ya
que, a esta longitud de
-0,1

10-3 7.3x10-4 2.7x10-4 Wavelangth (nm)

onda, se obtiene una


curva de calibracin
Ver el ej. 13.1 de las pginas 326-7 del lineal sin controlar las
Skoog condiciones de la
C
HIn
disolucin (disolucin no
tamponada).

33
Ley de Beer: desviaciones Ley de Beer: desviaciones
Efecto de la radiacin policromtica Efecto de la radiacin policromtica
En la prctica, el monocromador deja pasar una banda de radiacin.
Dos factores relevantes:
Posicin de la banda
del haz incidente con
respecto al mximo de
absorcin del analito.
Anchura de banda del
haz.

La absorbancia medida Am
es:

Instrumentales Instrumentales
Slo cuando las absortividades molares
son iguales a las dos longitudes de
onda, y , la expresin anterior se
simplifica a: La ley de Beer se cumple cuando la anchura de paso de banda del
monocromador es <1/10 de la anchura de semipico de absorcin.

Ley de Beer: desviaciones Error fotomtrico


Efecto de la radiacin parsita (scattered light)
A b C; - log T b C (1) La indeterminacin en la medida de T afecta
Luz que no habiendo atravesado la muestra aC
0,434 dT
alcanza el detector, incrementando la seal y 0,434 ln T b C; Diferenciando b C (2)
T
produciendo desviaciones negativas en la :
absorbancia. 0,434 dC C 0,434
Dividiendo (2) : (1) dT ;
Escrito en incrementos T
T log T C C T logT
finitos:
El error relativo en la determinacin de C, C/C, es funcin de T
La luz parsita es
ms relevante El error ser mnimo cuando TlogT sea mximo:
cuanto ms
concentrada sea d 1
la muestra y (T lnT) T ln T 0 - ln T 1 2,303 log T 1 2,303 A
dT T
cuanto ms larga
sea la celda, pues
Instrumentales ambas 1 C Abs de 0,2 a 0,8
situaciones A 0,434 100 2%
implican una 2,303 C %T de 65% al
menor P 15%
%T = 36,8%

Error fotomtrico Error fotomtrico


Contribucin de los distintos tipos de ruido
Corriente oscura (%T) 0,01%T
Precisin en la lectura (analgica) 0,5%T (1-3% error en la evaluacin de C)
Ruido de disparo (especialmente por encima del 95%T)
Parpadeo (a altas transmitancias)
Incertidumbre en la posicin de la celda (no es factor relevante)

Category Characterized by Typical Sources Likely to be Important in


Tomadas en conjunto estas
Case I Limited Readout resolution Inexpensive photometers and fuentes de ruido se concluye que
ST = k 1 spectrophotometers having small meter
scales la mejor zona para trabajar es la
Heat detector Johnson noise IR and near-IR spectrophotometers and que corresponde a
photometers
transmitancias intermedias.
Dark current and amplifier noise Regions where source intensity and detector
are low
Case II Photon detector shot noise High-quality UV-visible spectrophotometers
ST k 2 T 2 T

Case III Cell positioning uncertainties High-quality UV-visible and IR


ST = k3T
spectrophotometers
Source flicker Inexpensive photometers and
spectrophotometers

34
Especies absorbentes Especies absorbentes
* y n * alta energa, bajas

- * < 185 nm (UV de Formaldehdo


vaco)
- n * = 150 250 nm
- Difciles de medir

n * y * 200 700 nm

- Son las transiciones ms


importantes y tiles en
espectroscopa Vis-UV

- Absortividades molares ():


n * 10 100 L cm-1 mol-1
* 1000 10000 L cm-1 mol-1

Especies absorbentes Cromforos comunes

Chromophore Example Excitation max, nm Solvent


C=C Ethene * 171 15,000 hexane
CC 1-Hexyne * 180 10,000 hexane
n * 290 15 hexane
C=O Ethanal
* 180 10,000 hexane
n * 275 17 ethanol
N=O Nitromethane
* 200 5,000 ethanol
Methyl
C-X X=Br n * 205 200 hexane
bromide
X=I Methyl Iodide n * 255 360 hexane

Cromforos comunes Cromforos comunes


En la Tabla anterior se puede observar: La mayora de los espectros de compuestos
orgnicos son complejos
1. Las bandas de absorcin intensas ( 104) representan transiciones de mayor
probabilidad (bandas *), mientras que las de baja intensidad
corresponden a transiciones n * (menos probables). Transiciones electrnicas, vibracionales y/o
rotacionales superpuestas

2. Cada grupo funcional posee bandas de absorcin caractersticas, como lo son Bandas de absorcin generalmente anchas
tambin las intensidades de las bandas (medida por el valor de ). La El anlisis detallado e inequvoco no es
absorcin de radiacin Vis-UV es debida a los Cromforos ms que a la
molcula en su conjunto (IDENTIFICACIN DE GRUPOS FUNCIONALES posible, si bien se puede hacer una estimacin
en base a su y ). del tipo de enlaces involucrados
Los efectos del disolvente y de los
3. La conjugacin de cromforos aumenta la intensidad y origina cambios substituyentes complican la situacin (y tambin
drsticos en la max de absorcin del cromforo.
pueden aportar informacin).

35
Cromforos comunes Cromforos y auxocromos
H3C H3CO
N Cromforos: Grupos funcionales que absorben radiacin visible o del UV prximo
C
O ( > 200 nm) cuando se hallan enlazados a una cadena orgnica saturada no
absorbente.
Auxocromos: Grupos funcionales que poseen electrones de valencia no-
O enlazantes, n, que no absorben a > 220nm, pero muestran absorcin intensa de
radiacin en el UV lejano (180-200 nm), debido a transiciones n *. Ej. -OH; -
O C
NH2; -Cl, etc.

Cocaine
Compuestose asocia a la cadena
Si un grupo auxocromo max
de.(nm) max el color
un cromforo se exalta
del mismo, lo que en trminos espectroscpicos significa que la banda de
absorcin del cromforo se desplaza a mas largas (Efecto Batocrmico o
Desviacin hacia el Rojo) a la vez que aumenta su intensidad (Efecto
Hipercrmico).
CH3CH2CH2CH=CH2 184 10.000
(Olefina)Cuando disminuye la intensidad de una banda.
Efecto Hipocrmico:
217 21.000
Si se desplaza la del mximo de absorcin de un cromforo a ms cortas (ej.
H2C=CHCH=CH 2
al cambiar a un disolvente ms polar) se ha producido un Efecto Hipsocrmico
(Diolefina Conjugada)
o Desviacin hacia el Azul.
La conjugacin de varios cromforos en una molcula produce un
desplazamiento Batocrmico o Desviacin hacia el rojo de la del mximo de
absorcin. Ej.

Nomenclatura Conjugacin de cromforos

La multiplicidad de La conjugacin produce


grupos cromforos tiene deslocalizacin de electrones ,
escasa influencia en , estabilizando *, por lo que la
pero incrementa seal se desplaza a mayores
notablemente (menor energa)

La importancia de la conjugacin de cromforos Algunos grupos cromforos y auxocromos

Naturaleza del Trmino


desplazamiento descriptivo
A mayores Batocrmico

A menores Hipsocrmico

A mayor absorbancia Hipercrmico

A menor absorbancia Hipocrmico

36
Substituyentes en los compuestos aromticos Efecto del disolvente

Cada banda tiene una estructura fina


asociada a transiciones vibracionales
que se reduce e incluso desaparece-
en disolventes polares.

Un incremento de la polaridad del


disolvente:
n*: desplazamiento hipsocrmico
n*: desplazamiento hipsocrmico
*: desplazamiento batocrmico
Benceno:
Los compuestos aromticos poseen
184 nm ( ~ 60.000)
tres conjuntos de bandas debido a 1,2,4,5-tetracina
Banda E2 a 204 nm ( = 7.900)
transiciones *.
Banda B a 256 nm ( = 200)

Disolventes ms usados. Influencia de la polaridad Pigmentos orgnicos naturales


CH3CHO

LYCOPENO

Disolventes no polares respetan


mejor la estructura fina del espectro -CAROTENO

Pigmentos orgnicos naturales Colorantes de alimentos

C2H5 SO3Na
OCH3 HO
N CH2
NaO3S N N
C
H3C +
SO3- N CH2
SO3Na
C2H5 SO3Na

Allura Red AC Brilliant Blue FCF


max = 506 nm max = 630 nm
= 11.600 L/mol cm = 85.000 L/mol cm

37
Lantnidos y actnidos Color de los iones sencillos

Los metales de las series 4f y 5f absorben


merced a transiciones que involucran a
los electrones f

Apenas se nota efecto alguno por parte


del disolvente y de posibles ligandos,
puesto que se trata de electrones de
capas internas que estn protegidas.

Los espectros de absorcin muestran


seales agudas y bien definidas.

Color de los metales de transicin Efecto del campo ligando


La mayora de los cationes de los metales de transicin presentan color en
disolucin.
La absorcin de radiacin en el visible se debe a transiciones que involucran
electrones d en orbitales d incompletos.

Las capas d son ms externas y estn ms expuestas que las f. Sus espectros
son ms anchos y la mx se ve influenciada por el disolvente y/o los ligandos.

Absorcin por transferencia de carga Instrumentacin


Involucra la presencia de un aceptor (in Cuatro tipos bsicos de diseos instrumentales
metlico) y de un donor (ligando) de e-. Haz simple
Doble haz resuelto en el espacio
Doble haz resuelto en el tiempo
La absorcin de la radiacin hace que se Multicanal
transfiera un e- desde el orbital del donor al
orbital del aceptor.

Haz simple
Se origina un estado excitado en el que ha Puede ser de unicanal o de barrido
tenido lugar una reaccin redox.

Absortividades molares elevadas ( >


10.000)

Ej.: Fe(SCN)2+ + h Fe2+ + SCN0

38
Instrumentacin Instrumentacin
Doble haz resuelto en el espacio Doble haz resuelto en el tiempo

Es el diseo comercial ms
frecuente
Las seales de la celdilla de muestra y de la celdilla de referencia se
miden simultneamente y se sustraen. Ventajas del doble haz frente al monohaz:
Corrige las variaciones en la intensidad de la fuente
Compensa la deriva del detector y del amplificador (resuelto en el
Se precisan 2 detectores coste elevado tiempo)
Compensa la variacin de potencia del haz con la longitud de onda

Instrumentacin Instrumentacin: Fuentes ms utilizadas para el VIS-UV


Multicanal

Puede hacer un registro (barrido) completo del espectro en 0,1 s


Promedia la seal durante 1 s ms, para mejorar la S/N
Pocos componentes pticos: mnima prdida de potencia del haz
Lmpara de D2 y resolucin (ancho de banda) de 2 nm

Instrumentacin: Fuentes ms utilizadas para el VIS-UV Instrumentacin: Celdillas VIS-UV


Lmpara de Deuterio y su
espectro
Un filamento calentado
recubierto de xido proporciona
electrones

Lmpara de
filamento de
Wolframio y su
espectro
b = 10 mm Volumen (L): 160, 100 or 50

39
Instrumentacin: detectores Instrumentos tpicos

Fotmetros
Instrumentos sencillos que usan filtros para seleccionar la
Solo pueden hacer medidas secuenciales a cada
Escasa disminucin de la potencia del haz (ptica escasa) buena S/N
Baratos

Espectrofotmetros
Emplean un monocromador o un elemento dispersivo para seleccionar la
Pueden hacer barridos de registro de espectros
ptica ms compleja peor S/N
Caros

Fotmetro: Visible Fotmetro: UV


Detector muy comn en HPLC

Emplea una lmpara de Hg y con un filtro se aisla la lnea a 254 nm

Prctico para cuantificar sustancias


orgnicas que absorben a 254 nm.

Fotmetro de sonda

Utiliza fibra ptica y un espejo para


proyectar el haz a travs de la muestra.

Es habitual en instrumentos de campo.

Elimina la necesidad de celda.

Espectrofotmetros Espectrofotmetros

Espectrofotmetro para el Visible Espectrofotmetros Visible-UV de haz simple y doble

Econmico: 450 2500


Intervalo: 380 800 nm Normalmente emplean lmparas intercambiables de
Resolucin: 8 20 nm W y D2
Intervalo: 200 900 nm
Coste: 3000 8000 (monohaz); 4000 15000
(doble haz)
Resolucin: 0,5 8 nm (monohaz); 0,1 3 nm (haz
doble)

40
Espectrofotmetro Vis-UV de doble haz Espectrofotmetro Vis-UV de doble haz

Espectrofotmetro Vis-UV de doble dispersin Espectrofotmetro Vis-UV de doble dispersin

La luz pasa dos veces por el sistema dispersante mejorando mucho la resolucin.
Caro: > 10.000
Ancho de banda: 0,07 nm
Luz dispersada o errtica: 0,0008%

Espectrofotmetro Vis-UV con fotodiodos Espectroscopa diferencial. Escala expandida

Pueden llegar a ser muy compactos en tamao


Registro de espectro muy rpido: 0,1 s
Intervalo: 200 820 nm
Ancho de banda: 2 nm
Coste: 3.000 - 20.000

41
Mezclas de sustancias absorbentes Determinacin de estequiometras. Ordenada de Job
Disoluciones del catin y del ligando con idnticas concentraciones
formales se mezclan en distintas proporciones de volumen, de tal
modo que el volumen total de cada mezcla sea igual.
Las absorbancias son siempre aditivas CM + CL = cte

M 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 mL
L 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1 0 mL
': A' M' b [ M ] N' b [ N ]

xmL C
mol
L
10 x mL C mol
L C mol
' ': A' ' M b [ M ] N b [ N ]
'' '' 10mL 10mL L

XM 0........0,1........0,5........0,9........1 XM + XL = 1
XL 1........0,9.......0,5........0,1.........0

Se mide la absorbancia de cada disolucin a una apropiada y se corrige por


cualquier absorbancia de la mezcla si no se hubiese producido reaccin.

Determinacin de estequiometras. Ordenada de Job Determinacin de estequiometras. Ordenada de Job

Kd
[M] [L]n
; K d [ML n ] [M] [L]n En el mximo de Aj:

K d [ML n ] [M][L]n
0

AJ = MLn [MLn] + M[M] + L[L] sin corregir. Introduciendo la correccin:
[ML n ] x x
CM = [M] + [MLn] [L]libre xC n[ML n ]
x : fraccin molar de L
AJ = MLn [MLn] + M[M] + L[L] - (MCM + LCL) = CL = [L] + n [MLn] = 1-x: fraccin molar de M [M]libre (1 x)C [MLn ]

= MLn [MLn] + M[M] + L[L] - M[M] - M [MLn] - L[L] - L n [MLn]



(1 x)C [MLn ]xC n[MLn ]n (1 c) [MLn ] xC n[MLn ]n (1 x)C [MLn ]nxC n [MLn ]n1C n [MLn ] 0
x x x

0 0

AJ = (MLn - M - nL) [MLn] = K[MLn] AJ


C xC n [ML n ] n xC n [ML n ] C (1 x) C [ML n ]
n n 1
xmax n Esteq.

AJ MLn xC n [MLn ] n (1 x) C [MLn ] 0,5 1 ML


0 0 xC n [ML n ] n (1 x) C n [ML n ]
En el mximo: x ; x x 0,66 2 ML2
x n (1 x).Luego en el mximo : n max
0 XL 1 1 x max
0,75 3 ML3
1 XM 0

Continuous Variation Method Mole-ratio method


Determines metal ligand Concentration of one of the components held constant
ratio while other is varied giving a series of [L]/[M] ratios.
Solutions of cation and The absorbance of each of these solutions is measured
ligand with identical formal and plotted against the above mole ratio.
concentrations are mixed The ratio of ligand to metal can thus be obtained from
in varying volume ratios; the plot.
but VT = const.
A plot of A vs volume ratio
(volume ratio = mole
fraction) gives maximum
absorbance when there is
a stoichiometric amount of
the two.
Instrumental Methods of Analysis, Ewing, p. 69.

42
Determinacin de constantes de complejacin. Job Clculo de estequiometras. Relaciones Molares
JOB M + nL MLn
C nC C(1-) Consiste en la medida de la absorbancia de disoluciones con una concentracin
constante de metal y una concentracin creciente de ligando, y su
MLn C 1 1 representacin frente al cociente CL/CM.
Kf
M Ln C ( nC ) n nC n

A
AJ

AM

AS

0 X L 1 n
CL/CM
1 XM 0
Partiendo de disoluciones isomolares, basta con mezclar un volumen
AM AS Lo que se ha disociado
constante de la disolucin de metal y volmenes crecientes de la del
Lo que debera haberse formado
AM ligando, midiendo a la a que absorbe el complejo.

Constantes de complejacin. Relaciones Molares Mezclas. Determinacin de constantes de equilibrio

M + nL MLn Kf
MLn Kd
In H HIn Kd
[H ] [In ]
; pK d pH log
[HIn]
C nC C(1-) M L n Kf [HIn] [In ]

Se miden las absorbancias de una disolucin de concentracin analtica


AM = MLnCMLn = MLn CM; AS = MLn[MLn] Dividiendo: (CT) conocida a tres pH diferentes.
CM
1. pH cido (HIn)
A S ML n
ML n A1 = HIn CT HIn
A AM CM
2. pH bsico (In-)
AM [M] = CM - [MLn] A2 = In- CT In-
Substituyendo,
se obtiene Kf
AS 3. pH intermedio (HIn + In-)
[L] = CL - n [MLn]
CT = [HIn] + [In-] [HIn]
A3 = HIn [HIn] + In- [In-] [In-]
AM AS Lo que se ha disociado
Lo que debera haberse formado
Midiendo el pH de la disolucin
CL/C
AM y sustituyendo se obtiene Kd
M

Mezclas. Determinacin del grado de disociacin Aplicaciones: Valoraciones Fotomtricas



HIn In H
Kd c 2 2 c 2 A (analito) + T (valorante) P (producto)
Kd
c(1 ) c c c(1 ) 1

A3 = HIn[c(1-)] + In- (c) = HInc HInc + In-c

A3 = A1 + (In- c HIn c) = A1 + (A2 A1)

A 3 A1

A 2 A1

43
Aplicaciones: Valoraciones Fotomtricas Aplicaciones: Valoraciones Fotomtricas

Muy apropiado para valoraciones en medios no acuosos


Ej.: determinacin del punto final con verde de
bromocresol

Aplicaciones de la EAM VIS-UV Aplicaciones de la EAM VIS-UV


Anlisis Cualitativo Anlisis Cuantitativo

Anlisis de grupos funcionales (complemento de IR y RMN) A. DIRECTO: Componente absorbente en el VIS-UV: Compuestos orgnicos
Control de calidad: Ciertos productos tienen que ser transparentes al VIS-UV
Ej.: El alcohol etlico de 96 puede contener benceno y debe purificarse hasta no
absorber.
Elucidacin de ismeros. Ej.: bifenilos cis-trans B. INDIRECTO: Mucho ms comn en Inorgnica

H H H B.1) M + R P coloreado (complejacin y redox principalmente)


Ej.: Tautomera ceto-enlica del
acetilacetato de etilo H
M + n L MLn.
O O 280 nm 295 nm
275 nm Eleccin de L condicionada por: Selectividad, Sensibilidad y Solubilidad
H3C C C C OC2H5 = 20 Lmol-1cm-1 = 1,3104 Lmol-1cm-1 = 2,7104 Lmol-1cm-1
H2
B.2) M + Sistema coloreado Decoloracin ~ C

OH O
245 nm Esta forma posee dobles enlaces conjugados
H3C C C C OC2H5
H = 18000 Lmol-1cm-1

Ejemplos: Macrociclos Ejemplos: Aminocidos y nucletidos


A class of biological molecules containing a ring of seven, fifteen, or
any arbitrarily large number of atoms
Important class is porphyrins which include the heme group and
Chlorophyll a Substance pH
max (nm) (L/cmmol)
heme has a -* transiton in the blue region at 400 nm. Chlorophyll a
Phenylalanine 6 257 200
-* transiton in the 650 nm region to give it its green color
Tyrosine 6 275 1.300

Tryptophan 6 280 5.000

Adenosine-5-phosphate 7 259 15.000

Cytidine-5-phosphate 7 271 9.000

Uridine-5-phosphate 7 262 10.000

Guanosine-5-phosphate 7 252 14.000

http://omlc.ogi.edu/spectra/hemoglobin/index.html http://www.biologie.uni-hamburg.de/b-online/e24/3.htm

44
Ejemplos: estudios conformacionales Ejemplos: estudios conformacionales

Muy til para caracterizar la conformacin de cidos nucleicos y protenas

DNA melting: Hypochromism:


Decrease in upon formation of
double helix (H-bond)
Binding of a lanthanide
complex to an oligonucleotide

Changes from
Form I to form
II

Recta de calibrado con patrones o estndares Recta de calibrado por adiciones estndar
Se emplea en los casos en que los analitos se encuentran en matrices
complejas en las que es fcil que surjan interferencias.
1. Preparar varias alcuotas idnticas, de un volumen Vx, de la muestra
desconocida
2. Aadir a cada muestra alcuota un volumen creciente, Vs, de una
disolucin estndar de concentracin conocida, Cs, del analito a medir.
3. Enrasar todas las disoluciones a un volumen idntico, Vt.
4. Hacer la medida instrumental de cada disolucin.
5. Trazar la recta de calibrado
m = y/x
6. Calcular la concentracin del analito, Cx, en la muestra.
Instrument Response (S)

b = y-intercept S mVs b
(Vs)0

Vs
http://www.unav.es/quimicayedafologia/quimanal/monografias/estadisti
ca/

Recta de calibrado por adiciones estndar Recta de calibrado por adiciones estndar

La expresin que nos da la seal analtica para cada adicin estndar Combinado las dos
es: expresiones:
kVsC s kVx C x kVsC s kVx C x
S S mVs b S
Vt Vt Vt Vt

Donde:
S seal analtica
k constante de proporcionalidad
Vs volumen de estndar aadido
Cs concentracin del estndar
Vx volumen de la muestra alcuota
bCs
Cx concentracin del analito en la muestra
Cx
Vt volumen total de las disoluciones diludas mVx

45
Adiciones estndar: ejemplo Adiciones estndar: ejemplo
Ej.: el As presente en una muestra biolgica se determina por el mtodo de Ej.: el As presente en una muestra biolgica se determina por el mtodo de
adiciones estndar. Para ello se pipetearon 10,00 mL de muestra en otros tantos adiciones estndar. Para ello se pipetearon 10,00 mL de muestra en otros tantos
matraces de 100,00 mL. A continuacin, se aadieron volmenes crecientes de un matraces de 100,00 mL. A continuacin, se aadieron volmenes crecientes de un
estndar de 22,1 ppm de As a 4 de los 5 matraces, y finalmente- se llevaron todos estndar de 22,1 ppm de As a 4 de los 5 matraces, y finalmente- se llevaron todos
hasta el enrase con agua desionizada. A partir de las medidas de absorbancia, hasta el enrase con agua desionizada. A partir de las medidas de absorbancia,
calcular la concentracin de As en la muestra problema. Arsenic Standard Addition calcular la concentracin de As en la muestra problema.Adiciones estndar con concentraciones
Muestra (mL) Estndar
Estndar Absorbancia Estndar Estndar Absorbancia
(mL)
(mL) 0,45 (mL) (g/mL)
0,40 0,35
10,00 0,00 0,156 m = 0.00818 0,00 0,00 0,156
0,35 0,3
b = 0.1554
10,00 5,00 0,195 0,30 sm = 0.000119 5,00 1,105 0,195 0,25
Absorbance

0,25 sb = 0.001463 0,2

Abs
10,00 10,00 0,239 0,20
10,00 2,210 0,239 0,15

0,15 0,1
10,00 15,00 0,276 15,00 3,315 0,276 0,05
0,10
0
10,00 20,00 0,320 0,05 20,00 4,420 0,320 0 1 2 3 4 5
0,00
0 5 10 15 20 C (ppm)
Volume Standard (Vs)
5,00 mL 22,1g
1,105 g mL-1
100 mL mL A 0,1554 0,0370 C Para A = 0: C 4,2 ppm

b Cs (0,1554)ua(22,1)g/mL Teniendo en cuenta la dilucin 10:100, la


Cx 41,98 g/mL
m Vx (0,00818)ua/mL(10)mL concentracin en la muestra es: 42 ppm

Standard Addition Method (spiking the sample) (3) Dilute each solution to an equal volume, Vt.

- used for analytes in a complex matrix where interferences in the UV/Vis for
the analyte will occur: i.e. blood, sediment, human serum, etc..

- Method:
(1) Prepare several identical aliquots, Vx, of the unknown sample.

(4) Make instrumental measurements of each sample to get an


instrument response, IR.

(2) Add a variable volume, Vs, of a standard solution of known


concentration, cs, to each unknown aliquot.

Estimacin de la concentracin por adiciones estndar Estimacin de la concentracin por adiciones estndar

Preparar dos disoluciones con alcuotas idnticas del problema. Una alcuota de 25,00 mL de una disolucin acuosa que contiene quinina fue
Hacer una adicin del estndar a una de ellas diluida a 50,00 mL y su absorbancia a 348 nm fue de 0,416 con una celdilla de
Llevar a volumen las dos disoluciones y medir 1,00 cm. A una segunda alcuota de 25,00 mL de disolucin problema se le
aadieron 10,00 mL de una disolucin de 23,4 ppm de quinina. Despus de diluir
a 50,00 mL la absorbancia result de 0,610. Calcular la concentracin de quinina
S S1 m Vs en la celda.
0,65

S La adicin realizada 0,60

2
supone, tras la 0,55
0,50
dilucin, una 0,45
S concentracin de 0,40

1 Quinina
10 mL 23,4de:
g
0,35
348

-1
4,68 g mL 0,30
Abs

50 mL mL 0,25

Vs 0,20
0,15

S1Cs Vs
0,10

Cx
S1Cs Vs (0,416) (23,4)(10) 0,05
Cx 20,07 ppm
S 2 S1 Vx S2 S1 Vx (0,610 0,416)(25) 0,00
-13 -12 -11 -10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3 -2 -1 0 1 2 3 4

[Quinina] / g mL
5
-1

46
Mtodo del estndar interno Mtodo del estndar interno: ejemplo
El Ca puede cuantificarse por espectroscopa de emisin. Al preparar la recta de
Esta metodologa intenta corregir fluctuaciones operacionales e instrumentales
calibrado, se aadi Sr a todos los patrones de Ca y a la disolucin problema, de
modo que todas las disoluciones contienen 2,50 g Sr mL-1. Se midieron las
Se aade una concentracin fija de un estndar (interno) de una sustancia
distinta de la analizada, tanto a los patrones del analito como a la muestra intensidades de emisin del Ca a 422,7 nm y las del Sr a 460,7 nm. En funcin de
problema. los datos, calcular la concentracin de CaCaen
(g la
mL muestra
) I (422,7 problema.
nm) I (460,7 nm)
-1 I(422,7)/ I(460,7)

2,00 16,6 21,5 0,772


El comportamiento del estndar interno debe ser similar al del analito. 4,0
4,00 37,8 24,7 1,53
100
Su seal no debe interferir en la seal del analito. 3,5 6,00 43,2 18,6 2,32

I (422,7 nm) / I (460,7 nm)


La respuesta instrumental debida al estndar interno debera ser constante y las 3,0 8,00
80 68,7 22,3 3,08

posibles desviaciones se asumen que son las mismas que sufre el analito. 2,5 10,00 95,2 24,6 3,87
60
Se representa el cociente de seales analito/estndar interno, como en un 2,0
Muestra
problema
36,3 19,4 1,87

calibrado normal. 1,5 40

1,0 Sin estndar interno


Sanalito/Sest 0,5
20

int
0,0 0
2 4 6 8 10
4,85 2 4 6 8 10
-1
Ca (g L )

Concentracin del analito

Tema 4 Emisin de radiacin

Incandescencia emisin de luz por parte de un cuerpo a elevada T

Espectroscopa de luminiscencia molecular.


Luminiscencia
Fluorescencia y fosforescencia.
Fotoluminiscencia previa absorcin de luz IR, UV-Vis

Quimioluminiscencia. Quimioluminiscencia NO + O3 NO2* + O2


NO2* NO2 + h (= 600 - 2800 nm)

Instrumentacin. Bioluminiscencia

Aplicaciones. Electroluminiscencia descarga elctrica en un gas ionizado

Fluorescencia y fosforescencia Transiciones involucradas en la fluorescencia

47
Reglas de seleccin Mecanismos de excitacin y relajacin

Singlet excited states Triplet excited states

Internal Vibrational Intersystem


conversion relaxation crossing
S2

S1
T1

Energy
Internal
and
external
conversion
Absorption Fluorescence Phosphorescence

S0

Ground
state 2 1 3 4

Procesos y escala de tiempos Bandas de absorcin y de emisin

Transiciones y energa Procesos y escala de tiempos

48
Diagrama de energa Franck-Condon Franck-Condon principle
Excitacin vibracional: Principio clsico de Franck-
Condon
De acuerdo con este principio, la absorcin de un fotn es un proceso

instantneo. James Frank se dio cuenta de lo obvio: los ncleos son


La transicin
tiene lugar con el
ncleo enormemente pesados en comparacin con los electrones. Durante la
estacionario.

absorcin de la radiacin, los que se pueden mover son los electrones, pero
Las transiciones
ms probables
tienen lugar
cuando la lnea no los ncleos. El ncleo atmico, mucho ms pesado, no tiene tiempo de
vertical toca la
curva superior.
reajustarse durante la absorcin misma, pero s lo puede hacer despus, y

esto es lo que produce las vibraciones.

Bandas de absorcin y emisin electrnicas Desplazamiento de Stokes

Es la diferencia de energa entre el pico de absorcin de


menor energa y el de emisin fluorescente ms
energtico.
Fluorescnece Intensity

Stokes Shift is 25 nm
Fluorescein
molecule
495 nm 520 nm

Wavelength

Espectros de absorcin y de emisin de la Quinina Reglas generales del Espectro de Fluorescencia

Para una substancia pura presente en disolucin en una


nica forma, su espectro es invariable e independiente de
la fuente de excitacin

El espectro de fluorescencia se encuentra a longitudes


de onda superiores al de absorcin

El espectro de fluorescencia viene a ser la imagen


especular de la banda de absorcin de menor energa
(especialmente si la molcula es rgida y no sufre equilibrios de disociacin en el estado excitado)

49
Transiciones fluorescentes Rendimiento cunticco

fotones emitidos kr
= fotones absorbidos
= kr + knr
* rara vez conduce a
fluorescencia pues Eexc es tan kf
elevada que favorece Kd y Kpd
k f k isc k ec k ic k pd k d
*: ms probable y til para
fluorescencia. El cruce Tiempo de vida de la fluorescencia ()
intersistema S*1 T*1 no es
muy probable debido a una
diferencia notable de energa. Tiempo que transcurre entre la absorcin y la
emisin
1

n* tambin pueden
originar procesos
fluorescentes.
= k +k
r nr

Rendimiento cuntico Factores que afectan la fotoluminiscencia

Proceso de absorcin eficiente (elevada absortividad)

Fluorescencia

Diferencias elevadas de energa entre el singlete y triplete excitados

Diferencias energticas relativamente altas entre el singlete fundamental


y el excitado como para prevenir desactivaciones por va no radiacional

Fosforescencia

Pequeas diferencias energticas entre singlete y triplete excitados


Baja probabilidad de transicin no radiacional entre el triplete excitado y el
singlete fundamental

Fluorescencia y aromaticidad Estructuras fluorescentes


Las molculas No
con alto grado fluorescen
de aromaticidad
tienden a Cruce intersistema muy favorecido
presentar
fluorescencia

La rigidez
estructural Fluoresce
previene la n
prdida de
energa por
desactivaciones
rotacionales y Fluorescena
vibracionales

50
Efecto de la rigidez estructural Efecto de la rigidez estructural

La rigidez molecular tiende a inhibir la Reacciones que incrementan (o disminuyen apagan-) la


conversin interna y por tanto favorece la
fluorescencia pueden tener utilidad analtica, como por ejemplo las
fluorescencia
reacciones de complejacin de metales con ligandos orgnicos

Fluoreno Bifenilo

O
N Zn
Fluorescena Fenolftalena 2

Fluorescencia: heterotomos y substituyentes Efecto del tomo pesado

Compuesto Frmula F (nm) IF relativa


Benceno C6H5 270-310 10
Tolueno C6H5CH3 270-320 17
Propilbenceno C6H5C3H7 270-320 17
Fluorobenceno C6H5F 270-320 10
Clorobenceno C6H5Cl 275-345 7
Bromobenceno C6H5Br 290-380 5
Yodobenceno C6H5I --- 0
Fenol C6H5OH 285-365 18
Fenolato C6H5O- 310-400 10
Anisol C6H5OCH3 285-345 20
Anilina C6H5NH2 310-405 20
Anilinio C6H5NH3+ --- 0
cido benzoico C6H5COOH 310-390 3
Benzonitrilo C6H5CN 280-360 20 Probabilidad de pre-
Nitrobenceno C6H5NO2 --- 0 disociacin
Substituyentes deslocalizadores de e- incrementan F
Substituyentes de primer orden (dirigen a o-p-) donan e- al anillo: F crece (-OH, -OCH3, -CH3)
Substituyentes de segundo orden (dirigen a m-) retiran e- del anillo: F disminuye (-NO2, -COOH)

Amortiguacin (quenching) de la Fluorescencia Ecuacin de Stern-Volmer


Disminucin de la Fluorescencia por favorecimiento del cruce
M* M + h Fluorescencia
intersistema o conversiones externas
M* + Q M + Q + Calor Quenching
Efecto del tomo pesado
La concentracin del quencher est relacionada con la intensidad
Los tomos pesados favorecen un fuerte acoplamiento fluorescente por medio de la ecuacin de Stern-Volmer
spin/orbital y por tanto un cambio de spin.
F0
1
F
Especies paramagnticas
El O2 disuelto es un fuerte inhibidor de
F0
1
la fluorescencia por favorecer el cruce F

intersistema (al igual que cualquier substancia [NaI


paramagntica) ]
Amortiguacin de la Fluorescencia del triptfano 0,1 mM en
presencia de concentraciones crecientes de NaI

51
Amortiguacin (quenching) de la Fluorescencia Efecto de la T y del disolvente

Un incremento de la T provoca una disminucin de IF.

Un disolvente menos viscoso disminuye la IF.

En ambos casos se acenta la posibilidad de una conversin externa

CBr4, C2H5I: disolventes que desactivan la fluorescencia


y favorecen la fosforescencia

Efecto del disolvente Efecto del pH


Estado
excitado E
Franck-Condon Geometra de equilibrio del pK = 10
estado excitado OH O + H+

A F max: 285-365 nm 350-400 nm


F : 0,18 0,09
Estado fundamental
Franck-Condon
E
Geometra de equilibrio
del estado fundamental
El pH afecta tanto a la max como al F
Es = f (polaridad de los estados fundamental y excitado)

n*: estado fundamental ms polar. polaridaddisolvente:


F
*: estado excitado ms polar: polaridaddisolvente: F

Efecto del pH Efecto de la adsorcin (inmovilizacin)

H H H + H H H H
N N N+ Anilina: tres formas resonantes Colorante ANS (8-anilin-naftalen sulfonato)
:
- * ms bajo, menor E, mayor : SO3-
F ~ 0 en disolucin acuosa
-
se ve fluorescencia en el F = 0,98 cuando est enlazado a regiones
VIS hidrofbicas de proteinas y membranas
NH
F = 16 ns, max = 454 nm
H
H + H
N
In anilinio: una sola forma resonante Bromuro de etidio
No se observa fluorescencia en el VIS
H2 N NH2 F ~ 0 En disolucin
+ acuosa
N
CH2CH3
Necesidad de tamponar disoluciones patrn y muestra Unido a cidos
Br- nucleicos
F ~ 1, F = 26,5 ns

52
Efecto de la concentracin Autoabsorcin

P Auto-amortiguacin
F K' (P0 P) Beer : 10 bc F K' P0 (1 10 bc ) * (self-quenching)
P0
Colisiones entre las
molculas excitadas.

(2,303 b c) 2 (2,303 b c)3 Desactivacin no-radiacional


F K' P0 (1 10 bc ) serie Maclaurin K' P0 2,303 b c aumentada
2! 3!

Si 2,303 b c < 0,05 Si b c > 1,5 Auto-absorcin


(inner cell effect, inner filter
F K' P0 2,303 b c 10 bc 1 F K' P0 K P0 effect)
Solapamiento de las bandas
Si P0= cte.
de absorcin y de emisin:
radiacin fluorescente que no
FKc Existe un valor lmite
superior para la F
abandona la celda.
Trabajar con muestras
diluidas (absorcin mx:
0,1)

Fluorescencia retardada Fluorescencia retardada

Tipo E Tipo P Fluorescencia de Recombinacin

S1* 2
3 T1* 1A + h1 1A* 3A*
A h 1 A *



2 3A* 1A + 1A*
1 4
+ h 2

A *


h 2 A e fotooxidacin

1A* 1A

S0
A e A * paso lento

IF tipo p I02
2: Cruce intersistema
A *
A h 3
3: reexcitacin trmica

S1 y T1 muy prximos

Fluorescencia retardada Excmero de Pireno

Emisin excmera

Tiene lugar a concentraciones muy elevadas

1A + h1 1A*

1A* + 1A 1A *
2 dmero excitado

(excmero)

1A *
2 2 1A + h 2

53
Fluorescencia retardada
O O
R2
Luciferase Spontaneous
Luciferin + O2 O C C R2 CO2 + O C* Light
R1
R1

Fluorescencia retardada Fluorescencia retardada

Extincin de la luminiscencia Extincin de la fluorescencia


La F sigue una cintica de primer orden (en ausencia de
otros procesos)
Fluorescencia
Se puede definir el tiempo de vida de
Rpida (10-8s) la fluorescencia, f , como el tiempo
que ha de trancurrir, desde que se
apaga la fuente de excitacin, para
que la F se reduzca a 1/e (0,368) de la
Fosforescencia F original k t
F F0 e f

Lenta (mss). Los procesos


colisionales competitivos
F0
pueden eliminarla f : F0 /e; F0 e k f f ; e e k f f
completamente a no ser e
que se eviten totalmente 1
ln e k f f f
(p.e. en un vidrio) kf
f

54
Time-resolved Fluorometry Propiedades de los compuestos lantnidos de coordinacin
Tiempo de vida elevado >500 s
Las medidas fluorimtricas estn limitadas por los blancos.
Gran desplazamiento Stokes
Disolventes e impurezas presentan corrientes de fondo de
2 ns o menos. Se puede discriminar la seal del analito Perfiles de picos de emisin finos
midiendo a tiempos ms largos. La F est basada en procesos de transferencia de energa del ligando
al catin central.

Propiedades de los compuestos lantnidos de coordinacin Seguimiento de una reaccin enzimtica

naftilamina

Marcadores fluorescentes Fluorforos tpicos

Green Fluorescent Protein (GFP) O N O

+
-O S
N
procedente de las medusas es la SO3- N O
3

ms utilizada para seguir la TDI


N N
+
O
expresin de genes. = 630 nm O
Cy5 HN
O N O O = 630 nm
NH2 S TMR
= 514 nm
O
HN
H2N C N
N
N NH

eGFP DAPI C NH2


tryptophane
= 280 nm = 488 nm = 355 nm

55
Compuestos naturales fluorescentes Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET)
Compuesto (nm) Compuesto (nm)
Hidrocarburos aromticos Esteroides
Naftaleno 300-365 Aldosterona 400-450
Pireno 370-460 Colesterol 600
Antraceno 370-400 Cortisona 570
1,2-benzopireno 400-450 Testosterona 580
Compuestos Heterocclicos Vitaminas
Quinolina 385-400 Riboflavina (B2) 565
Sulfato de quinina 410-500 Cianocobalamina (B12) 305
7-hidroxicumarina 450 Tocoferol (E) 340
3-hidroxi-indol 380-460 Frmacos
Tintes Aspirina 335
Fluorescena 510-590 Codena 350
Rodamina B 550-700 Estrgenos 546
Azul de metileno 650-700 LSD 365
Coenzimas, cidos nuclicos, pirimidinas Fenobarbital 440
Adenina 380
Adenosina trifosfato (ATP) 390
Molculas cercanas pueden transferirse energa entre ellas.
Dinucletido de la nicotinamida adenina 460
(NADH) Esto sucede cuando el espectro de emisin de una solapa con el de
absorcin de la otra.

Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET) Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET)
FRET es una interaccin dependiente de la distancia entre los estados
excitados de dos molculas. La transferencia resonante de energa
tiene lugar cuando las molculas donora y aceptora estn a menos de
100 una de la otra.
FRET vara con la potencia 1/6 de la separacin intermolecular, por lo
que funciona muy bien a distancias similares a las dimensiones de
macromolculas biolgicas.
FRET puede utilizarse para desplazar espectralmente la emisin
fluorescente de una combinacin molecualr.
El espectro de absorcin del aceptor debe solaparse con el espectro
de emisin del donor.
La transferencia de energa es por va no radiacional, es decir, el
donor no emite un fotn que es captado por el aceptor.

Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET) Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET)

La transferencia de energa de resonancia puede tener lugar


cuando los compuestos donor y aceptor estn prximos (< 100 )

Molecule 1 Molecule 2
Fluorescence Fluorescence
DONOR ACCEPTOR

Absorbance
Absorbance

D* + A D + A* Wavelength
Donor Aceptor

La FRET puede ser til para lograr un Molculas cercanas pueden transferirse energa entre ellas.
espectro de fluorescencia desplazado a Esto sucede cuando el espectro de emisin de una solapa con el de
superiores. absorcin de la otra.

56
Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET) Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET)

R = 1 - 10 nm La velocidad de transferencia est predicha por la teora de Frster

1
h FRET h 1 R0
6
2QD J ( ) 6
kT R0 9.78 10 3
~ 1/R6 D r
n
4

Punto crtico: encontrar la pareja donor-aceptor adecuada

Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET) Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET)

triptfano - max F = 350 nm dansilo - max Abs = 340 nm


El grupo max F = 510 nm
dansilo es
muy
apropiado Ensayo de ruptura peptdica
para
medidas
FRET con
protenas
que
contienen proteasa
triptfano.

Puede unirse
La ruptura del pptido supone la
+
covalentemen
prdida de FRET, desapareciendo la
te a la
F del aceptor
proteina.

Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET) Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET)

57
Fluorescence Resonant Energy Transfer (FRET) Luminiscencia en medios micelares

Sodio dodecil sulfato, SDS

Luminiscencia en medios micelares Luminiscencia en medios micelares

Concentracin micelar crtica (CMC) Concentracin micelar crtica (CMC)

58
Solubilizacin micelar Solubilizacin micelar

Fosforescencia Fosforescencia y cruce intersistema

Espectros de absorcin y de emisin Fosforescencia a temperatura ambiente (RTP)

59
Quimioluminiscencia Qumica fornsica

A + B C* C + h

Deteccin de sangre con luminol


NH2 O NH2

C COO-
NH
O2/OH-
+ h + N2 + H2O
NH
C
COO-
O

Barras luminosas con ester fenil oxalato

Quimioluminiscencia Quimioluminiscencia

Determinacin de agentes oxidantes

Cl2, HOCl, OCl-, H2O2, NO2

Quimioluminiscencia Quimioluminiscencia

Aplicaciones emergentes

Determinacin de reactivos gaseosos en reactores

Anlisis de contaminantes en el aire

Estudios atmosfricos

Indicacin del punto final en valoraciones en fase gas

Determinacin de metales traza

Determinacin de reactivos orgnicos y bioqumicos

60
Bioluminiscencia Bioluminiscencia
O O
R2
Luciferase Spontaneous
Luciferin + O2 O C C R2 CO2 + O C* Light
R1
R1

N
S

510-670 nm
S
HO
N
O

HO

Plantas emisoras
Gen luciferasa clonado en plantas

Instrumentacin: esquema general Instrumentacin: fluormetro

sencillo, robusto, compacto, bajo coste


el haz se divide en uno de referencia y
en el que pasa por la muestra
haz de referencia se atena
proporcionalmente a la IF

Instrumentacin: fluormetro de filtros simple Instrumentacin: fuentes

Buena estabilidad Buena estabilidad


Haz espacialmente difuso Continuo desde 300 1.300 nm
Baja intensidad Alta intensidad

61
Instrumentacin: espectrofluormetro Instrumentacin: espectrofluormetro

Emission

Instrumentacin: celdillas Instrumentacin: celdillas y anlisis de superficies

Catodoluminiscencia Catodoluminiscencia

62
Catodoluminiscencia Catodoluminiscencia

Medida de fosforescencia Money (helps?) world go round!

Tema 5 Espectrometra Atmica


Principios de espectroscopa atmica.
Emisin Atmica (EA, AE)
Espectros atmicos de emisin y absorcin.
Kirchoff y Bunsen pioneros, s XIX
Trminos espectrales. 1957: Ramrez Muoz y Burriel Mart, Flame Photometry. A Manual of Methods
Anchuras de lnea. and Applications primer libro sobre fotometra de llama

Espectroscopa de absorcin atmica.


Absorcin Atmica (AA)
Atomizacin por llama y electrotrmica.
60: Walsh (Australia) publica los primeros trabajos en absorcin atmica
Eleccin de las condiciones ptimas. apoyado por Alkemade y Milatz en Holanda
Instrumentacin.
Aplicaciones. Fluorescencia Atmica (FA, AF)
1964: West y Winefordner comienzan a trabajar en FA con Zn, Hg y Cd
Espectroscopa de emisin atmica.
Atomizacin por llama. Atomizacin con fuentes de plasma.
Atomizacin con arco y chispa.
Aplicaciones.

63
Alan Walsh y Fernando Burriel Mart Diagramas de energa atmico y molecular

E2 E2

E1 E1
UV-VIS UV-VIS

E E v2

v1
IR
v0
r2
r1
r0
E0 E0

Tipos de espectroscopas atmicas Niveles de energa de Na atmico e in Mg(I)

Atomic Emission
Spectroscopy (AES) Modelos similares entre tomos, pero
diferente espaciado

Atomic Absorption El espectro inico es diferente al


Spectroscopy (AAS) atmico

Las separaciones se miden en eV


Atomic Fluorescence
Spectroscopy (AFS) 1eV =1.602x10-19 J
= 96. 484 kJ mol-1

A medida que crece el nmero de


electrones, el nmero de niveles se
incrementa
Na Mg+
Los espectros de emisin se hacen
ms complejos

Li 30 lneas, Cs 645 lneas, Cr 2277 lneas

Niveles de energa de Mg atmico Espectro del Na

64
Espectros atmicos Espectros de lneas
Espectros de lneas: transiciones electrnicas puras
Las posiciones de las lneas estn bien definidas y son
Anchura de pico:
caractersticas para cada elemento
Anchura expresada en unidades de frecuencia cuando la magnitud de
En espectroscopa atmica es factible hacer anlisis cualitativo
la seal es la mitad de la mxima
Valores tpicos: centsimas de

Ejemplos:
carbono

oxgeno

nitrgeno

Espectro de emisin de salmuera Ensanchamiento de las lneas atmicas


1. Incertidumbre (ensanchamiento natural de lnea)
1 h
t ; t 1; t h h; t E h; E
t
h h 1
t E ; t h
2 2 N
Relativamente pequeo (~10-4 )
2 t

2. Efecto Doppler
The more(agitacin
precisely trmica de los tomos que varan su posicin respecto del
the positionobservador)
is
determined, the less
precisely the 0 : frecuencia de la radiacin observada
momentum is u
1 cuando la fuente se mueve respecto al
cknownin this V detector
;
instant, 0and 1/ 2 V=c/n : velocidad de la radiacin en un medio
nviceversa. u 2
1
dado
Heisenberg, uncertainty paper,
1927
V u : velocidad del movimiento de la fuente
lumnica (tomo) hacia el detector

Efecto Doppler Ensanchamiento de las lneas atmicas


u
D 0 u Temperatura, masa-1
Si los tomos se c
mueven hacia el
detector, las ondas
estn ms T
compactas, mayor D 0 ; D T1/2 ; D 100 N
frecuencia, ms
m
corta. Buena aproximacin para explicar la zona central de la lnea

Si los tomos se 3. Ensanchamiento Lorentz (efecto de la presin; colisiones entre los tomos
alejan del detector, emisores y otras partculas presentes)
las ondas se
descomprimen, L P P: presin total del gas en cuyo seno se hallan los tomos del analito
frecuencia ms baja,
ms larga. Buena explicacin de lo que sucede en las alas de la lnea

4. Efecto de los campos magnticos (Zeeman) y elctricos (Stark)

65
Espectros de bandas de especies moleculares Espectroscopa de absorcin atmica
Fuente
P0 P
Selector de Procesador de la seal
Detector

Chopper

Tipo Mtodo de Atomizacin Fuente de radiacin

atmica (llama) aspiracin de la muestra Lmpara de ctodo


Muestra a la llama hueco (LCH, HCL)

atmica (sin llama) disolucin de muestra HCL


evaporada y calcinada

absorcin R-X no es necesario tubo de RX

Espectroscopa de emisin atmica Espectroscopa de fluorescencia atmica


P P0 P
Fuente Monocromador Detector Procesador de la seal Selector de Procesador
Detector
de la seal

90o
Tipo Mtodo de atomizacin Fuente de
Radiacin Tipo Mtodo de Atomizacin Fuente de
Fuente
arco arco elctrico radiacin
Muestra
muestra

chispa arco de alto voltaje muestra atmica (llama) muestra disuelta muestra

plasma de Ar muestra calentada en un plasma de Ar Muestra aspirada a la llama


muestra

llama disolucin de la muestra aspirada a la llama atmica (sin llama) muestra disuelta muestra
muestra evaporada y calcinada

emisin de RX no es necesario; muestra bombardeada con e- muestra fluorescencia RX no es necesario muestra

Mecanismos de fluorescencia Radiaciones fluorescentes resonante y normal de Tl


Resonancia Lnea directa Por etapas
normal normal

a f a f a f

Resonancia Lnea directa Anti-Stokes


activada activada activada
trmicamente trmicamente trmicamente
t
Desactivacin no-radiacional
a f a f a f

t t

66
Componentes instrumentales bsicos Absorcin atmica de una lnea de resonancia

Para que se cumpla la ley de Beer, la


Sistema de Sistema de anchura de la lnea de la fuente ha de ser
Fuente de Sistema menor que la anchura de la lnea de
seleccin deteccin absorcin por parte del vapor atmico
excitacin atomizador
espectral electrnica

Absorcin atmica de una lnea de resonancia Atomizadores utilizados en espectroscopa atmica

Introduccin de la muestra Introduccin de la muestra


Nebulizadores neumticos: convierten la muestra en una niebla de finas gotculas
Add
(spray) que son portadas por el gas hacia el atomizador.
NaBH4
a) Nebulizadores
Tubo concntrico: gas a elevada la disolucin es nebulizada sobre una superficie
ultrasnicos:
presin que arrastra
piezoelctrica la muestra
produciendo una niebla densa y homognea.
que sale del capilar
SbH3 + Q Sb + 3/2 H2
b) Vaporizadores
Flujo cruzado: el aerosol se
electrotrmicos:
produce por un flujo transversal al
depsito de la muestra slida o lquida sobre la superficie de un resistor
final del capilar SbH3,produce la evaporacin de la muestra
el paso de corriente a travs del resistor
AsH3
c) Frita un Sample
cermica:
gas (Ar)bombeo
fluye adel
travs del resistor y porta la muestra gaseosa hacia el
lquido sobre un disco de frita
atomizador
cermica a travs
la seal del cual
obtenida fluye el en lugar de contnua
es transiente
gas; produce una niebla ms
fina.
d) Babington: el lquido incide
Generacin de hidruros:
sobre la superficie esfrica hueca
quecontiene
til para un
As,orificio
Sb, Sn, Se,
por el Bi,
quePb
fluye Reaccin
el gas. modelo:
3 BH4- + 3 H+ + 4 H3AsO3 3 H3BO3 + 4 AsH3 + 3 H2O

67
Introduccin de la muestra Nebulizadores neumticos

a) Tubo concntrico: gas a


elevada presin que arrastra la
muestra que sale del capilar
b) Flujo cruzado: el aerosol se
produce por un flujo transversal
al final del capilar
c) Frita cermica: bombeo del
lquido sobre un disco de frita
cermica a travs del cual fluye
el gas; produce una niebla ms
fina.
d) Babington: el lquido incide
sobre la superficie esfrica
hueca que contiene un orificio
por el que fluye el gas.

Introduccin de muestras slidas Descarga luminiscente como fuente de plasma inico

Directa
Vaporizacin electrotrmica
Ablacin por Arco o Chispa
Ablacin por Lser
Descarga luminiscente

100g min-1

Introduccin de la muestra Instrumentacin bsica tpica en AA de llama (FAA)

Chopper

68
Sistema atomizador (llama) Sistema atomizador (llama)
Nebulizador: transforma la muestra aspirada en una neblina de
gotas finsimas (spray)
Mechero: genera la llama en cuyo seno se vaporiza, atomiza y
excita la muestra.

Dos tipos fundamentales de llamas:


TURBULENTAS
Es el componente ms importante y crtico LAMINARES O PREMEZCLA (Premix)
El spray de muestra que llega a la llama sufre :
vaporizacin, atomizacin y excitacin de los tomos
El atomizador de llama consta de 2 componentes:
NEBULIZADOR Y MECHERO

Mecheros Mechero de premezcla


Consumo total Premezcla Velocidad de
aspiracin:
~5 mL/min

Eficienica de
nebulizacin:
~5%

Llama turbulenta, ruidosa Llama laminar, silenciosa


Gran sensibilidad Gran selectividad
Pobre selectividad Poca sensibilidad (3% aspirada)

Aspiracin de la muestra Procesos durante la atomizacin en llama

69
Procesos durante la atomizacin en llama Composicin de las llamas

Estructura y temperatura de una llama Distribucin de metales en llama rica y pobre (lean) en combustible

Max
temperature
Location about
1 cm above
the primary
combustion
zone.Optical
focus to this
region

Zona primaria: 2 C2H2 + 2 O2 4 CO + 2 H2


Zona secundaria: 4 CO + 2 H2 + O2 4 CO2 + 2 H2O

Efecto de la altura de observacin en la llama Efecto de la altura y de la velocidad de flujo

Ag (no fcilmente oxidable)


Crecimiento contnuo con la
altura de la llama
Cr (forma xidos estables)
Seal contnuamente decreciente
Predomina la formacin del xido
Mg
Compromiso entre atomizacin y
formacin de compuestos
moleculares
Eleccin juiciosa de la altura
de llama adecuada en cada
caso Perfil de la llama para la lnea del Ca en una llama
ciangeno-oxgeno para diferentes caudales de muestra.

70
Lmpara de ctodo hueco Seccin transversal de una LCH (HCL)

nodo: W, Ni, Zr

V 300 V; I = 5 20 mA

A mayor V, se obtiene intensidades ms elevadas

Inconveniente: autoabsorcin

Lmparas mixtas: Cr, Co, Cu, Fe, Mn, Ni


Ca, Mg, Al
Fe, Cu, Mn
Cu, Zn, Pb, Sn

Compartimento para las lmparas Lmpara de descarga sin electrodos (EDL)

0,1 5 torr
2450 MHz til en Fluorescencia Atmica

Tiempo de vida > 50 h Disponible para:


10 veces ms intensa que HCL
As, Bi, Cd, Cs, Ge,
Inconveniente: inestabilidad Hg, K, Pb, Rb, Sb,
requiere enfriamiento Se, Sn, Ti, Tl, Zn

Lmpara de gradiente de temperatura (TGL) Interferencias en espectroscopas atmicas

Interferencias comunes a las tres


Intensidad:
TGL EDL > HCL Espectrales
Fsicas
Qumicas
1/ 2 TGL 0,001nm 1/ 2EDL
Variaciones en la T
Ionizacin

Corriente relativamente elevada: 0,5 A Interferencias en AA y FA:


Dispersin de luz incidente (scattering)
TGL y EDL :
V 30 V
se usan para As y Se
Ar: 1-5 torr < 200 nm Interferencia tpica de FA:
Amortiguacin de la fluorescencia (quenching)
Filamento recubierto de xido de Ba, Ca, Sr

71
Interferencias Interferencias espectrales

Espectrales: solapamiento de lneas.


Ms crtico en EA. Casi inexistente en AA y poco comn en FA
Interferencia espectral : proximidad de lneas < 0,1
Interferencia espectral : proximidad de lneas < 0,1
Fsicas: variacin de viscosidad y tensin superficial que afectan a la nebulizacin.
Afectan por igual a las tres tcnicas
Anlisis de Al: 3 082,15 , 3 092,7
Anlisis de Al: 3 082,15 , 3 092,7
Variacin de T en el atomizador: supone una modificacin del nmero de tomos
excitados.
Afecta especialmente a la EA El V tiene una lnea a 3 082,11 interfiere la cuantificacin del Al?
El V tiene una lnea a 3 082,11 interfiere la cuantificacin del Al?

Ionizacin: disminucin de la seal analtica por produccin de iones en lugar de tomos


Ciertamente, NO
M0 M+ + e- (especialmente en alcalinos y alcalinotrreos y en llamas calientes)
Ciertamente,supresores
Alternativa: NO de ionizacin

Interferencias espectrales: correccin con dos lneas Interferencias espectrales: correccin con fuente continua
Se usa como referencia una segunda lnea procedente de la fuente que
est muy prxima a la lnea de absorcin del analito. El analito no debe
absorber a la longitud de onda de la lnea de referencia.

Cualquier absorbancia observada para la lnea de referencia se asume que se


debe a la dispersin/absorcin de especies moleculares (fondo). Restando este
valor del obtenido en la lnea del analito, obtenemos la absorbancia corregida
debida nicamente a la especie atmica de inters.

La lnea de referencia puede ser:


Impureza de la lmpara
Lnea del gas de relleno de la lmpara
Lnea no resonante del propio elemento constitutivo de la lmpara

Esta modalidad de correccin no se usa con mucha frecuencia debido a la


dificultad de encontrar una lnea de referencia adecuada.

Efecto de la T en la espectrometra atmica Efecto de la T en la espectrometra atmica


La temperatura modifica el nmero de tomos en los estados fundamental y excitado La absorcin atmica se produce en La emisin atmica tiene lugar al
la transicin desde el estado pasar de un estado excitado al
fundamental a un estado excitado fundamental
Boltzmann Equation: (E* - E0)
=
-E
N* = g* e kT La emisin estar ms afectada por variaciones de la temperatura, pues el
g0 porcentaje de tomos en el estado excitado depende fuertemente de la T
N0 Temperature
in K

Number of 1.38x10-23 J/K Ej.: Calcular el cociente N*/No para un tomo que tiene 2 niveles de energa (ambos
atoms at each Boltzmann
energy Number of constant monodegenerados) que se diferencian en 3,9710-19 J/tomo que est expuesto a
levels at each
energy una llama a 2.500 , 2.510 y 6.000 K.
(degeneracy)

2.500 K: N*/N0 = 1.01x10-5

2.510 K: N*/N0 = 1.05x10-5 (4% ms en el estado excitado para un incremento de 10 K en la T)

6.000 K: N*/N0 = 8.27x10-3

72
Interferencia de ionizacin Interferencia de ionizacin

Este problema se puede minimizar por la adicin de supresores de


ionizacin, que son sustancias ms fcilmente ionizables y que
producen una elevada concentracin de electrones en la llama que
retrotraen o impiden la ionizacin del analito.
Ej.: el K es un buen supresor para la determinacin de Sr.

Interferencias qumicas Interferencias qumicas


1. Formacin de compuestos poco voltiles Ciertos componentes de la muestra perjudican
Ca (PO43-, SO42-); Mg (Al) la eficiencia de la atomizacin del analito
Alternativas: T
agentes liberadores y protectores
Ej.: PO43- y SO42- dificultan la atomizacin del Ca2+
Ciertos componentes de la muestra perjudican
la eficiencia de la atomizacin del analito
2. Equilibrios de disociacin Solucin: aadir un agente liberador o protector
MO
Ej.: M la+atomizacin
PO43- y SO42- dificultan O del Ca2+
Alcalinos: xidos poco estables: lneas atmicas
Alcalinotrreos: xidos relativamente estables: bandas AEDT: se une preferentemente al Ca2+, pero
Solucin: aadir un agente liberador o protector
no impide la atomizacin (protector)
NaCl Na + Cl
AEDT: se une preferentemente al Ca2+, pero La3+: reacciona preferentemente con el PO43-,
no
VOximpide la atomizacin
V + Ox(protector ) combustible
Llamas ricas en liberando el Ca2+ (liberador)
AlOx Al + Ox
TiOx
La 3+ Ti + Ox
: reacciona preferentemente con el PO43-,
liberando el Ca2+ (liberador)

Scattering (AA y FA) Efecto de la concentracin (EA)


V S h wat
Una nebulizacin deficiente puede permitir que lleguen gotas gruesas a la B N 2 A 20 b 2
llama, que producen dispersin de radiacin, que resulta en: 4 m st
Disminucin de la potencia del haz radiante
Seales falsas (espreas): absorciones inespecficas h
N 2 g 2 kT
N2 at*/m3
e
N0 g0
h
h g 2 kT wat
d B A 20 b e N0 2
4 g0 m st
Quenching (FA) b
F
N 0 3 1021 C Winefordner
Desactivacin por va colisional con las molculas de los gases que se queman en la TQ
llama. Ar, N2 y gases nobles no quenchan la fluorescencia.
Zona de medida
B d I (wat/m ) C 2
F: Flujo de muestra lquida aspirada (mL/s)
: eficiencia en la vaporizacin
: eficiencia en la atomizacin
Alternativa: purga con Ar y separacin de Q: flujo de desaparicin del vapor en la llama
T: temperatura absoluta
zonas en la llama: fondos muy bajos. C: concentracin analtica de la disolucin
Ar

73
Efecto de la concentracin (AA) Instrumentacin: monohaz
En AA tanto la luz procedente de la LCH como de la llama alcanzan el detector
- medida de una seal pequea en el seno de un fondo grande
- necesidad de restar el fondo (continuo) de la llama para recoger slo la seal
analtica procedente de la lmpara (P/P0)
0 , I0 I Modulacin de la fuente
Lmpara Abs = K b N0 = K b C Doble haz

Efecto de la concentracin (FA)


V S d
IF I F I 0 f F b N 0 C
4
f: fuerza del oscilador de la transicin implicada
I0 : depende de la geometra del atomizador (llama, filamento..)
d F: rendimiento cuntico de la fluorescencia. Marcada
dependencia de los gases de la llama (pueden quenchar) La corriente oscura se anula con un obturador
b El 100%T se ajusta con un blanco aspirado a la llama

Instrumentacin Instrumentacin: doble haz


En AA tanto la luz procedente de la LCH i. Chopping de la seal:
como de la llama alcanzan el detector
- medida de una seal pequea en
el seno de un fondo grande
- necesidad de restar el fondo de la
llama para recoger slo la seal
analtica procedente de la lmpara (P/P0)

ii. Modulacin de la P de la fuente:


Llama + fuente
P Llama + fuente

El haz de referencia corrige las posibles variaciones en la intensidad de la lmpara

El haz de referencia no atraviesa la llama. Posibles prdidas de potencia causadas por


Llama sola absorcin o dispersin de la llama quedan sin compensar.
tiempo
Llama sola

Ventajas de la llama Desventajas de la llama: 1. Prcticas

Sistema dinmico de altas T Volumen mnimo de muestra lquida relativamente elevado (1,5 2 mL)

Tremendamente estable, reproducible, fiable Hay que mantener la cmara de premezcla llena para garantizar un
rgimen estacionario
Pocos efectos memoria
En disolucin acuosa la menor tensin superficial hace que el
Combinando adecuadamente combustible y comburente se logran
rendimiento de la nebulizacin sea bajo (se prefieren disolventes orgnicos;
intervalos de T muy amplios y se logran elevados grados de atomizacin adems se mejora la combustin y se aporta calor a la llama con la consiguiente
mejora en sensibilidad)
Atomizador barato y duradero Gotas gruesas que llegan a la llama: absorciones inespecficas

Elevadas prestaciones en cuanto a sensibilidad y selectividad para ms de


Necesidad de trabajar con gases embotellados (riesgo relativo)
70 elementos medidos entre 200 - 800 nm

74
Desventajas de la llama: 2. Intrnsecas Ventajas de los atomizadores sin llama
Disolucin y expansin de la muestra en el caudal grande
1. Incremento de la sensibilidad. (>103)
(hasta 10 L/min) de gases que pasan por la llama: dilucin y
prdida de sensibilidad Los tomos no se expanden

Ausencia de O2 (purga con Ar)


Escaso rendimiento de atomizacin para los elementos que
muestran avidez por el O2 para formar xidos refractarios, que 2. Posibilidad de usar micromuestras (5, 10, 20 L)
se suma al escaso tiempo de residencia del analito en la llama
3. Anlisis de muestras slidas, sin ataque previo
Existe un margen de maniobra para modificar la proporcin de 4. Disminucin de absorciones inespecficas, facilitado por la purga con
oxidante, pero siempre habr necesidad de comburente
gas noble, aunque no siempre es as
No se pueden introducir slidos
5. Seales transientes

Primeras alternativas a la llama alternativas a la llama: generacin de hidruros


Apropiado para grupos IV, V, VI B:
Navecilla de Tntalo Tantalum boat (1968) : abandonado por falta de Ge, Sn, Pb, As, Sb, Bi, formadores de
reproducibilidad Add hidruros gaseosos y muy voltiles a T
NaBH4 ambiente

3 BH4- + 3 H+ + 4 H3AsO3 3 H3BO3 + 4 AsH3 + 3 H2O

Copa de Delves (Ni) Delves cup: primer intento de confinamiento del vapor
atmico en el paso ptico. Determinacin de Pb en sangre
SbH3 + Q Sb + 3/2 H2

Atom trap: cilindro de cuarzo


refrigerado (recoge tomos)-calentado SbH3, AsH3
(desorbe tomos) LCH D
Sample
Estos elementos en la llama tienden a formar
compuestos, no tomos
Ruta alternativa
Sus lneas de resonancia (190 nm) caen en la
fuerte absorcin del fondo de la llama (<200 nm)
bioinorgnica : no se pierde
Gran sensibilidad
Gran importancia
nada de analito. Mtodo absoluto

Vapor fro de Hg Relevancia de la generacin de hidruros


Hg: nico metal conocido que a T ambiente tiene una tensin de Estos elementos en la llama tienden a formar
vapor tan elevada que forma vapor monoatmico como los gases
compuestos, no tomos
nobles (ni siquiera N2 u O2 lo hacen)
Sus lneas de resonancia (190 nm) caen en la fuerte
absorcin del fondo de la llama (<200 nm)
No hace falta llama: el Hg0 se arrastra en estado atmico
Gran importancia bioinorgnica
Sensibilidad mejorada: fluorescencia
Vapor fro de Hg
Hg: nico metal conocido que a T ambiente tiene una tensin de
vapor tan elevada que forma vapor monoatmico como los gases
Hg0 ascarita nobles (ni siquiera N2 u O2 lo hacen)

No hace falta llama: el Hg0 se arrastra en estado atmico

75
Sensibilidad mejorada: fluorescencia Atomizadores electrotrmicos
Fundamentados en trabajos
iniciales de Lvov
Massmann: primer modelo con Introduccin de la muestra
posibilidades de comercializacin (solido, lquido, gas, lodo -slurry-)

Hg0 ascarita

Temp

Seal de tiempo
absorcin

Atomizadores electrotrmicos Atomizadores electrotrmicos: horno de grafito

Mediante purga con Ar se evita la oxidacin del C.


Necesidad de refrigeracin.

Atomizadores electrotrmicos: horno de grafito Operaciones en el horno de grafito

Introduccin muestra
Secado (~ 100 oC)
Pirlisis (hasta cenizas)
(500 - 700 C)
Paso de Ar

Atomizacin
(2000 - 2800 C)

0
50 A, 20 s

76
Etapas de calentamiento Atomizadores electrotrmicos: horno de grafito


0-20 L muestra (disolucin o lodos); mg de slido (anlisis directo de slidos)
Es comn utilizar un modificador de matriz que estabiliza el analito o induce la volatilidad de la
3600 w; 10-12 V; 400-500 A
matriz


Las muestras estn habitualmente acidificadas (para minimizar la adsorcin sobre los recipientes;
Para muestras lquidas:
Rampas de calentamiento: hasta 1000C/s
30-45 s secado suave


30-60s pretratamiento trmico(charring)
5 s (rampa vertical de temperatura)
Vida limitada: 200-300 firings
10 s ciclo de limpieza (eliminacin de cualquier resto de la matriz)
Atomize
Atomize analyte Posibles efectos memoria
Temperature (CO)

2500-2700C

Thermal
pretreatment, ash Automatizacin sencilla:
or Char 1,000-2000 K/s
automuestreadores
Remove matrix or promote reactions in ETA
500-700C
Reproducibilidad exige usar
Dry
110C Desolvate tandas de tubos

10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Sensibilidad: LOD >103 AA


Time (s) typical

Automatizacin Equipo de AA en el Departamento de Qumica y Edafologa

Filamentos Filamentos

Filamento de West Mini-Massmann.


Nube atmica no confinada (Geometra cerrada)
Filamento con cpsula para lograr confinamiento del vapor atmico

LCH
LCH

Paso ptico
Donega & Burgess
Navecilla de Ta +
-
(Geometra abierta)

vaco

Son, por su geometra, ms adecuados para Fluorescencia que para Absorcin.

77
Atomizadores electrotrmicos: horno de grafito Atomizadores electrotrmicos vs. llama
Composicin tpica del horno: Grafito + Sensibilidad: mejores lmites de deteccin (elevados tiempos de residencia
GFAAS: Graphite Furnace Atomic Absorption Spectroscopy del vapor atmico en el atomizador)
Longitud: 18 - 28 mm + Menor volumen de muestra
Volumen de muestra: 5 - 100 L + Amplia gama de estados de muestra.
Vida del horno: 200 - 1000 ciclos + Menor dependencia de la seal de las caractersticas fsicas de la
Temperatura mxima: 3000C para evitar descomposicin del grafito muestra (viscosidad, tensin superficial y densidad)
El C puede actuar como reductor de iones metlicos + La purga con Ar disminuye la probabilidad de formacin de xidos y
Flujo de Ar: evita oxidacin del C graftico facilita una mayor poblacin de vapor atmico
- Serios efectos de matriz, de formacin de compuestos interelementales
Otros materiales: Ta, W, Pt y de memoria
Se requiere alto punto de fusin - Reproducibilidad inferior ( 5- 10%)
No debern emitir radiancia a alta temperatura (desventaja del W y Ta) - Tiempo de anlisis ms largo
- Elevado coste; necesita ms mantenimiento

Comparacin de atomizadores Horno de grafito: interferencias


Qumicas
Causadas por la muestra
Volatilizacin de analito como sales voltiles
Disminucin de la eficiencia de atomizacin
Causadas por el aparato o por el mtodo
Formacin de carburos
Condensacin
Formacin de nitruros
Efectos memoria
Espectrales (Fsicas)
Emisin de luz por parte del grafito incandescente
Absorciones no especfica:
Dispersin de la radiacin
Formacin de especies moleculares
Formacin de haluros estables

Efectos de matriz detectados por adiciones estndar Eliminacin de los efectos de matriz
1. Adicin de modificadores de matriz
Sustancias que ayudan a que el proceso de atomizacin tenga lugar del modo
ms homogneo posible y en el momento adecuado.
Aditivos que modifican las propiedades fsico-qumicas de la muestra para
favorecer la vaporizacin y atomizacin
Recetas especficas para elementos y matrices particulares

Ej.: NH4NO3, voltil, facilita la eliminacin de la matriz durante la calcinacin y


ayuda a homogeneizar la nube atmica
NH4H2PO4, retenedor de sustancias que pueden irse en la etapa de charring
O2 se adsorbe en las paredes del tubo y favorece una buena atomizacin
(adems de ayudar a quemar la materia orgnica restante)
2. Superficie del horno
Uso de grafito piroltico, menos poroso, que facilita atomizaciones ms
reproducibles

78
3. Horno de grafito con plataforma de Lvov (1982) Horno de grafito con plataforma de Lvov

Calentamiento de la
muestra por radiacin
y no por contacto.

Horno de grafito con plataforma de Lvov Horno de grafito con plataforma de Lvov

Corte transversal del horno y plataforma Tatomizacin


La muestra se coloca en la plataforma

La plataforma se calienta ms lentamente que la


pared del tubo de grafito

La vaporizacin de MX
colocado en la plataforma Tpirlisis
se retrasa hasta que la
pared y el gas estn tiempo
suficientemente
calientes para atomizar MX
La muestra situada en la plataforma solo se atomiza cuando
la pared se calienta suficientemente para producir tomos

Horno de grafito con plataforma de Lvov Correccin de fondo con lmpara de Deuterio

La dispersin o absorcin por parte de la matriz (fondo) ser el principal


causante de la disminucin de la potencia radiante cuando se ilumina con
la fuente de continuo.

Approx
gas temp
seen by
analyte

Appearance
temperature

79
LCH + abs Recuerde: ~35%T Correccin de fondo con efecto Zeeman
atmica Anchura de lnea ~ 5 pm
Paso banda ~100-1.000 pm
Zeeman normal: el
Lneas difieren ~0,01 nm campo magntico
produce
desdoblamientos

D2 + abs
~100%T idnticos en los
estados
atmica fundamental y
excitado
Niveles
energticos
Transiciones
LCH +
fondo
~55%T

Espectros
D2 +
~55%T - +
fondo Sin Campo magntico Con Campo magntico
A

Ingle and Crouch,
Spectrochemical Analysis

Correccin de fondo con efecto Zeeman Correccin de fondo con efecto Zeeman

DC en atomizador

AC en atomizador

1. Luz no polarizada procedente de la LCH (A) pasa a travs del polarizador rotatorio (B)
2. El haz se desdobla en componentes perpendiculares y paralelos (C)
3. La luz entra en el horno sometido a un campo magntico, dando 3 picos de absorcin (D) DC en fuente
4. El analito solamente absorbe radiacin polarizada paralela al campo magntico, mientras que el fondo
molecular absorbe siempre (E)
5. El resultado es un modelo cclico de absorcin (F)
6. La diferencia entre la absorbancia durante el semiciclo paralelo y el perpendicular proporciona el valor
corregido con respecto al fondo.

Efecto Zeeman ANMALO Zeeman vs Deuterio


El campo magntico produce modelos de desdoblamientos diferentes segn
la multiplicidad del estado.
+ Corrige muy bien el fondo por realizar la correccin prcticamente a la misma del analito

B=0
2P
1/2 + Corrige absorciones de fondo de hasta 2 unidades de absorbancia

+ Corrige interferencias espectrales cuyas lneas estn separadas al menos 0,02 nm


B0
+ No requiere alineamiento ni ajuste entre las dos fuentes de radiacin

2S
1/2
+ Es particularmente til en el anlisis de muestras slidas
B=0 B 0 Solo absorben

radiacin polarizada
paralela al campo

80
Zeeman vs Deuterio Correccin de fondo Smith-Hieftje

- Puede presentar lecturas dobles (para concentraciones altas puede dar la misma absorbancia que para concentraciones bajas)
Auto-inversin con
auto-absorcin
- Prdida de energa del sistema ptico debida a los polarizadores (prdida de sensibilidad)

- Coste elevado y manejo complicado

- El sistema de introduccin de muestras en la cmara debe estar automatizado

- Hay elementos que presentan efecto Zeeman normal (Cd, Zn), pero la mayora presentan

Zeeman anmalo, con muchos componentes, reducindose la sensibilidad en la determinacin del

elemento en un 10 - 50%

Cualquier absorbancia observada durante el pulso de corriente elevada se


asume que es debido al fondo y se resta de la seal analtica

Smith-Hieftje vs Deuterio Anlisis de muestras slidas


+ Puede trabajar en la zona del VIS-UV sin necesitar otro tipo de + Se elimina -o minimiza- el tratamiento de las muestras
lmpara
+ No tiene lugar la retencin de analitos en los residuos insolubles
+ Corrige hasta tres unidades de absorbancia
+ El equipo es ecnomico y de sencillo manejo + Se minimiza la posibilidad de contaminacin de la muestra
- Peor sensibilidad (30 - 40% menos) + Se evita el uso reactivos qumicos
- Posibles prdidas de muestra y/o contaminacin durante la
transferencia al atomizador
- Hay que pesar cada rplica independientemente
Smith-Hieftje vs Zeeman
- Calibracin ms complicada
+ No proporciona lneas dobles de los calibrados - La accin de los modificadores no es tan eficaz debido a la menor
+ No pierde energa por el empleo del polarizador interaccin entre modificador y analito ocluido en el slido
+ Es mucho ms econmico
+ Puede utilizarse en llama y en cmara de grafito - Es prcticamente imposible diluir la muestra slida
+ Presenta muy buenos lmites de deteccin

Introduccin de muestras slidas Descarga luminiscente como fuente de plasma inico

Directa
Vaporizacin electrotrmica
Ablacin por Arco o Chispa
Ablacin por Lser
Descarga luminiscente

100g min-1

81
Ejemplo de determinacin cuantitativa por AA
V. Atomic Fluorescence Spectroscopy
A. Instrumentation
Atomizer
Source Needs to be high intensity; Wavelength
usually EDL or laser. Selector
Detector

Chopper modulation used the


remove source beam Chopper

scatter.
Source
Atomizer most commonly flame;
also ETA, glow
discharge, or ICP.
Wavelength Selector grating monochromator (Dispersive) but not always
necessary (Nondispersive).

Detector Photomultiplier tube or a diode array

Emisin atmica
V. Atomic Fluorescence Spectroscopy
The fluorescence signal can be saturated so that it no longer depends upon the Comienzos S XIX: llama de alcohol (Brewster, Herschel, Talbot, Foucalt)
source intensity.
Mediados S XIX: Descubrimiento de Cs, Tl, In, Ga por espectroscopa
This is the desired situation because source fluctuations will not affect the
fluorescence signal. atmica (Bunsen, Kirchoff)

B. Interferences same as AAS 1877: Gouy disea el nebulizador neumtico

C. Applications 1920s: Uso de arcos y chispas para AES


Commonly used for metals in complex matrices such as oils, seawater,
1930s: Primer espectrmetro comercial (Siemens-Zeiss)
biological systems, etc..
Detection limit normally 1 50 ppm. 1960s: Fuentes de plasma (comercializados en los 70)

Emisin atmica Espectros de emisin atmica


La relajacin casi instantnea de las especies excitadas viene
acompaada de la emisin de radiacin UV-Vis a longitudes de onda
discretas (lneas) tiles para el anlisis cualitativo y cuantitativo.

La fuente de excitacin para promover las especies


qumicas a sus correspondientes estados excitados puede
ser:
Plasma
Llama
Descarga elctrica (arco y chispa)
Descarga luminiscente (glow discharge)
Ablacin por lser

En Emisin Atmica (EA, AES), medimos la emisin de luz procedente de


la desactivacin radiacional de los tomos excitados, cuya intensidad es
proporcional a la concentracin de los tomos en el estado excitado
alcanzado, que a su vez- es proporcional a la concentracin de tomos
en el estado fundamental.

82
Emisin atmica en llama (FAES) LOD en llama (FES, FAES)

Barato
Limitado en prestaciones
Muy til para alcalinos y
alcalinotrreos
Temperaturas bajas para lograr
la atomizacin de otros muchos
elementos
Numerosas interferencias espectrales Claramente desplazada por la
absorcin atmica
Lneas: Bandas:

Reacciones de recombinacin

Arcos y Chispas Arcos y Chispas


Arco: Descarga elctrica entre dos electrodos conductores (1-30 A)
Chispa: Descarga intermitente de alto voltage (pocos s)

Funda negativa (e-)


Funda negativa (e-)
alrededor del nodo alrededor del nodo

Plasma neutro V Plasma neutro


I, V entre los entre los
electrodos Rarc electrodos
Ar o aire
Funda positiva
alrededor del ctodo Funda positiva
alrededor del ctodo
Muestra Muestra

Arcos y Chispas: espectros de emisin Potenciales de ionizacin


A) Contnuo, procedente de la radiacin trmica

B) Bandas: grupos de lneas muy prximas entre s, que se acumulan en una zona
de mxima intensidad (cabeza de banda), causadas por emisin radiacional de
molculas excitadas elctricamente (ej.: OH, ciangeno CN, SiO, CaF2)

C) Lneas. Emisin por parte de tomos elctricamente excitados.

Potencial de resonancia de arco: potencial que es necesario aplicar para


alcanzar el primer estado excitado: E1 E 2 /h
Potencial de excitacin (en eV) es el potencial que hay que comunicar a un
electrn para que por choque con el tomo lo lleve al primer estado excitado.
Lneas ms intensas: lneas persistentes o rayas ltimas

83
Arcos y Chispas: espectros de emisin Arcos y Chispas: espectros de emisin

lneas de arco: todas las comprendidas entre el potencial de Conclusiones prcticas


resonancia y el potencial de la primera ionizacin. Son las que Los espectros obtenidos dependern de:
A) Naturaleza de la especie excitada
corresponden al espectro atmico (tomo neutro)
B) Naturaleza de la fuente de excitacin elctrica

lneas de chispa: todas las comprendidas entre el potencial de la


primera ionizacin y el de la segunda ionizacin. Son las que
corresponden al espectro inico monovalente (M+)
Pionizacin, Presonancia arco, riqueza de lneas

Bunsen: Li, Na: 2 lneas; K: 3 lneas; Rb: 4 lneas; Cs: 6 lneas


Atomizador Tipo de espectro
Arco y chispa (10 eV): capacidad de excitar tomos con potencial de
Llama Atmico (alcalinos y excitacin inferior a 10 eV (70 elementos)
alcalinotrreos)
Arco Atmico
Chispa Inico
Plasma Inico

Emisin con Arco Emisin con Chispa


Elevado voltaje (~kV)
Muestra en polvo situada en la copa de grafito Baja Intensidad (~mA)
Seal intermitente (s - ms)
Temperatura hasta 40.000 C
Bajo potencial (~ 40 V)
Alta intensidad (~ 10 A)

Arco continuado hasta consumicin de la muestra El potencial elevado origina un espectro


fundamentalmente inico
La baja energa de excitacin origina espectros atmicos
El movimiento de la chispa sobre la
superficie de la muestra proporciona
un muestreo representativo con
buena precisin (0,1-1% RSD), pero
pobre sensibilidad (LD ~0,01%)
Precisin baja debida al movimiento errtico Mucho ruido elctrico
La volatilizacin de diferentes metales tiene lugar de modo La seal ha de integrarse a lo largo
diverso, luego la cuantificacin mltiple es difcil del tiempo

Emisin con Arco y Chispa: instrumentacin Emisin con Arco y Chispa: instrumentacin

84
Mtodo del patrn interno Comparativa de caractersticas analticas
Sensibilidad
300 nm 400 nm
AA, FA EA, AA, FA EA

seal AA ruido AA
103 103 Fuentes principales de ruido:
seal FA ruido FA sputtering de la lmpara
oscilaciones de la llama
Selectividad shot noise del detector

AA FA > EA

FA: Hg, Zn, Cd, Pb, Pt, Ta, txicos y En FA no se percibe el ruido de la lmpara.
los ms voltiles El ruido limitante es el shot noise. Se
EA: Alcalinos y alcalinotrreos puede incrementar la potencia de la
AA: el resto lmpara lo que se desee: mejor
sensibilidad.

Aplicabilidad Emisin atmica en un plasma

Plasma: mezcla gaseosa neutra a elevada temperatura con gran densidad de


partculas cargadas positivamente (cationes) y negativamente (electrones) cuyas
propiedades estn fuertemente afectadas por su ionizacin.

Generacin de plasmas:
Acoplamiento inductivo (ICP)
AA: Precisin < 1% a nivel de trazas (ppm) Corriente continua (DCP)
EA: Precisin 2 - 5 % Microondas (MIP)
FA: Precisin 2 -3 %

Inductively Coupled Plasma (ICP) Inductively Coupled Plasma (ICP). Ventajas


Tiempo de residencia ~largo (2-3 ms) desolvatacin y volatilizacin eficientes
Una chispa de una bobina Tesla ioniza el gas Ar
Iones forzados a
moverse en un
y produce electrones libres Elevadas temperaturas atomizacin ms completa y excitacin ms efectiva
espacio cerrado; la
resistencia al
Los electrones son acelerados por el campo de
moviemiento radio-frecuencia Atmsfera inerte de Ar previene la formacin de xidos, alargando el tiempo de vida del analito
produce el
calentamiento Los electrones acelerados colisionan con los
tomos transfiriendo su energa a toda la mezcla Pequea zona de emisin intensidad ms elevada y ausencia de autoabsorcin
gaseosa
Ionizacin relativamente grande susceptible de acoplamiento con MS
El plasma se mantiene a unos 6 000 10 000 K
gracias a la absorcin por parte de los iones y
electrones de la energa de la bobina de
induccin
Los iones y electrones interaccionan con el
campo magntico fluctuante y describen
recorridos anulares cerrados
El flujo tangencial de Ar enfra las paredes
interiores de cuarzo y centra radialmente el
plasma

85
Inductively Coupled Plasma (ICP). Consumo de Ar Introduccin de muestra en el plasma

Zona analtica (azul)

Zona de radiacin inicial (roja)

Fuente de RF: 1-2 kW a 27 MHz

Bobina Zona de induccin


1 mL min-1
refrigerada
por agua

Antorcha
de cuarzo Ar que forma y sostiene el plasma (10-20 L min-1)

Flujo de gas auxiliar (0,5 L min-1)


Flujo axial del aerosol que arrastra la muestra (1 L min-1)

Antiguo ICP-OES del Dpto. de Qumica y Edafologa Prestaciones del ICP


Puede identificar y cuantificar todos los elementos (excepto Ar)
Capaz de un verdadero anlisis multielemental simultneo en poco tiempo (30 s) en
unas condiciones de atomizacin-excitacin uniformes para todos los elementos
Permite la determinacin de elementos que tienden a formar xidos refractarios
(altamente resistentes a la descomposicin trmica) como B, P, W, U, Zr y Nb
Se pueden determinar elementos no-metlicos como Cl, Br, I y S (aunque <180 nm)
Amplios intervalos lineales de calibracin (hasta 6 rdenes de magnitud) gracias a una
T relativamente uniforme en la seccin del plasma que evita el fenmeno de
autoabsorcin
Interferencias qumicas mnimas gracias a las altas T
Interferencias espectrales evitables con uso de lneas alternativas
Diferentes posibilidades para la introduccin de la muestra
Ms sensible que la FAA y comparable a GFAAS
Diversos grados de automatizacin posibles
Cubre intervalos espectrales mayores (190 900 nm)

Modus operandi Interferencias fsicas del Plasma

Preparacin de la muestra: similar a AAS Asociadas a los fenmenos de nebulizacin y transporte de la muestra

Determinacin de elementos: se pueden determinar casi todos los elementos Cambios de viscosidad y tensin superficial pueden originar resultados muy imprecisos, especialmente en
muestras con slidos disueltos
Sin embargo, hace falta un espectrmetro de vaco para medir B, N, P, S y C, muestras con elevada concentracin de cidos
Formacin de sales en la punta del nebulizador, que afecta a la nebulizacin y al flujo del aerosol
pues sus lneas de emisin caen por debajo de 180 nm donde absorben los

componentes del aire.

Las condiciones ptimas para la mayora de los metales no sirven para los Remedios

alcalinos: las lneas ms prominentes de Li, K, Rb y Cs estn en el IR cercano


Dilucin de la muestra
Seleccin de lnea: no siempre la lnea ms intensa es la ms apropiada Uso de una bomba peristltica
Recurrir a un patrn interno
Precisin: 0.3 3% LOD: ppt Usar un nebulizador mejor (ultrasonidos)

86
Modus operandi Desventajas del Plasma

Espectros complejsimos (cientos a miles de lneas)

Elevado nmero de variables experimentales a optimizar

(mtodo simplex)

Componentes pticos de alta resolucin y calidad

Instrumentacin cara y personal muy especializado

Instrumentacin: secuencial Instrumentacin: secuencial

2400 surcos/mm: 160-380 nm


1200 surcos/mm: 380-850 nm

Instrumentacin: simultneo Instrumentacin: simultneo

La curvatura corresponde a la Crculo de Rowland


curva focal de la rejilla cncava
Las diferentes frecuencias son
dispersadas por la rejilla y
enfocadas hacia las rendijas y los
PMT posicionados a lo largo del
crculo de Rowland
Las rendijas se configuran de
modo que transmitan lneas de un
elemento especfico

87
Instrumentacin: multicanal con PMT Monocromador de red de escalera

Y
PMT

Monocromador doblemente dispersante


Dispersin ms elevada
Mejor resolucin
que un monocromador convencional

Los dos elementos dispersantes son una red de


escalera y un prisma de baja dispersin.

Instrumentacin: multicanal con CCD Sensibilidad comparada

Caractersticas analticas Caractersticas analticas: LODs

88
Caractersticas analticas: LODs Caractersticas analticas

GF-AAS ICP-AES

Nmero de elementos detectados a concentraciones Bajo coste Coste moderado-alto


de:
Mtodo < 1 ppb 110 ppb 11100 ppb 101500 ppb > 500 ppb

Emisin ICP 9 32 14 6 0 Monoelemental Multielemental


Emisin atmica de llama 4 12 19 6 19
Fluorescencia atmica de llama 4 14 16 4 6 Interferencias de Interferencias
Absorcin atmica de llama 1 14 25 3 14 atomizacin espectrales
Bajo procesamiento Elevado procesado
de muestras de muestras
Las tcnicas de absorcin atmica y de emisin por ICP son
mas bien complementariasque competitivas. Entre las dos tcnicas se pueden determinar unos 70
elementos por debajo de las ppb

Plasma DCP Plasma MIP

Se alcanzan temperaturas de 10 000 K Continuous Emissions Monitoring (CEM) analysis por la


Environmental Protection Agency (EPA)

El plasma se forma tambin con Ar

Consume menos Ar y la fuente DC es


ms simple y menos cara

Hay que cambiar los electrodos de grafito


cada pocas horas; comparativamente, el
ICP requiere menos mantenimiento

Acoplamiento ICP-MS ICP - MS

89
ICP MS. Control de calidad ICP-AES, ICP-MS whats next?

Its up to you!

Tema 6 Regiones del espectro electromagntico. IR


Espectroscopa IR y Raman

Fundamentos de la absorcin en el IR.


Anlisis cualitativo: identificacin de grupos funcionales
Aparatos dispersivos y no dispersivos. X-RAY ULTRAVIOLET INFRARED MICRO- RADIO FREQUENCY
WAVE
Espectroscopa IR por transformada de Fourier.
Anlisis cuantitativo
Vibrational
infrared
Fundamentos de la espectroscopa Raman.
2.5 m 15 m
Instrumentacin.

1 1
Aplicaciones de las espectroscopas IR y Raman. [ ] cm 1 ; K
i vi

Regiones del espectro electromagntico: IR Regiones del espectro infrarrojo


Regin Intervalo (m) Intervalo , cm-1 Intervalo (Hz)

Cercano 0,78 - 2,5 12.800 4.000 3,81014 1,21014

Medio 2,5 50 4.000 200 1,21014 6,01012

Lejano 50 1.000 200 10 6,01012 3,01011

Ms usada 2,5 15 4.000 670 1,21014 2,01013


1 1
[ ] cm 1 ; K
i vi

90
Absorcin en el IR Absorcin en el IR
La absorcin de radiacin en el IR se
produce por parte de molculas con
pequeas diferencias de energa
entre los distintos estados
vibracionales.

m1 m2
req

Molcula absorbente: aquella que sufre


un cambio neto en su momento dipolar
al tensionarse o al flexionarse.

Absorcin en el IR Grupos fuertemente absorbentes en el IR


-
Entre los enlaces que no absorben en el IR se incluyen: El grupo carbonilo es uno de los O
absorbentes ms fuertes
+
Alquenos y alquinos simtricamente sustituidos C
R R
R C C R
Tambin los enlaces O-H y C-O O H C O
R R
Haz IR
Muchos tipos de enlaces C-C El acoplamiento de los C C
dipolos oscilantes + + O
+
Molculas diatmicas simtricas posibilita la absorcin
O
de la energa IR
H-H Cl-Cl
- - -

Molcula absorbente: aquella que sufre Molcula absorbente: aquella que sufre
un cambio neto en su momento dipolar un cambio neto en su momento dipolar
al tensionarse o al flexionarse. al tensionarse o al flexionarse.

Modos de vibracin Modos de vibracin


N: n de tomos en la molcula
3N: n total de coordenadas necesarias para especificar la localizacin de los N tomos
3: coordenadas necesarias para especificar la posicin de la molcula

2: ngulos necesarios para especificar la orientacin de una molcula lineal


Tensin: modificacin de la distancia Flexin: modificacin del ngulo
interatmica a lo largo de entre dos enlaces
3: ngulos necesarios para especificar la posicin de una molcula no lineal los ejes de los enlaces

Molcula de N tomos: 3N-6; lineal: 3N-5 modos normales de vibracin simtrica asimtrica simtrica

Ejemplos:

O2, N2, Cl2: (3N)-5 = (32)-5 = 1 modo de vibracin

CO2: (3N)-5 = (33)-5 = 4 modos de vibracin

H2O: (3N)-6 = (33)-6 = 3 modos de vibracin

91
Vibraciones de flexin Modos de vibracin del CO2

(a) Las tensiones no son independientes, y si un


C-O se excita, el otro empieza a vibrar tambin.
(b) Las tensiones simtrica y asimtrica son
independientes, pudiendo ser una excitada sin
que la otra se vea afectada: son modos
normales
(c) Los dos modos de flexin perpendiculares son
tambin modos normales

Balanceo Tijereteo en Aleteo fuera Torsin fuera


en el plano el plano del plano del plano

Modos de vibracin del CO2 Modos de vibracin del H2O

El H2O tiene 3 modos normales de


vibracin: tensin simtrica y
asimtrica y flexin de tijereteo, que
tiene lugar a un nmero de onda
inferior a los otros dos

Magnitud de los desplazamientos Seales tpicas de tensin y flexin de enlaces

Tensin
154 pm
Para un enlace C-C con una
longitud de 154 pm, la variacin es
10 pm
de ~10 pm.
Flexin

Para un ngulo C-C-C un valor


4o 10 pm tpico es 4o que mueve al tomo de
C unos 10 pm.

92
Espectro IR de la respiracin de Fernndez Algunos regiones tpicas de absorcin en el IR (tensin)

100 (m)
2.5 4 5 5.5 6.1 6.5 15.4
80 O O
H H H H O-H C-H C N C=O C=N C-Cl
Muy C-O
60 N-H C C pocas C=C
C-N
%T

bandas
X=C=Y C-C
40 O C O (C,O,N,S) N=O N=O *

20 4000 2500 2000 1800 1650 1550 650


O C O O C O (cm-1) * nitro tiene 2
bandas
0
4000 3500 3000 2500 2000 1500 1000 500
wavenumber/cm-1

Oscilador armnico. Modelo mecnico: energa potencial Oscilador armnico. Modelo mecnico: frecuencia
Hooke: F = - k y; Newton: F = m a
Ley de Hooke: F = - k y
d2 y d2 y
a m ky
dt 2 dt 2
Un desplazamiento implica una
variacin de la energa potencial: d2 y
y A cos 2 m t; 4 2 m2 A cos 2 m t
dt 2
dE F dy; dE k y dy 4 m m
2 2
A cos 2 m t A cos 2 m t
k

E y
0
dE k
0
y dy m
1 k
2 m
m f (E )

1 m1 m2 1 k 1 k (m1 m 2 )
E k y2
m1 m2
; m
2 2 m1 m2
2

Oscilador armnico. Modelo cuntico Oscilador armnico. Modelo cuntico


1 k 1 h k 1 Mayor K
m E ; E h m
2 2 2 2 frecuencia ms alta
1 K
1 3
0 : E 0 h m ; 1 : E1 h m = 2c Masas atmicas mayores,
2 2 frecuencias inferiores
3 1
Eradiacin h m h m h m constantes K creciente
2 2

h k
=
C=C > C=C > C-C
E radiacin h E h m
2 2150 1650 1200
1 k
m
2 Regla de creciente
seleccin:
= 1 C-H > C-C > C-O > C-Cl > C-Br
1 k k
5,31012 3000 1200 1100 750 650
k[=] N/m; c[=]cm/s; m[=]kg 2 c

93
Oscilador armnico. Influencia de la masa Espectros IR de cloroformo y deuterocloroformo

Para un nmero de onda de 4111 cm-1 (tensin del H2)


cuntas vibraciones
1 tienen lugar por segundo?
K
= 2c Masas atmicas mayores,
frecuencias inferiores
1201012 vibraciones /s, 1 vibracin cada 810-15 s Desplazamiento del pico
debido a la sustitucin de
un H por D (doble masa)
H2 I2
Modo de vibracin CHCl3 CHCl3 CDCl3
Calculado* Medido Medido
C-H tensin 3002 3020 2256
C-H flexin 1120 1219 912
C-Cl tensin 701 773 737
C-Cl flexin 418 671 652
* Spartan 02 AM1 minimization

Oscilador armnico. Influencia de la fortaleza del enlace Efecto de la masa, de la fuerza de enlace y de la conjugacin

1 K
= 2c
Wavenumber vs. Bond Energy
5000
Wavenumber (cm-1)

4000

3000

2000

1000

0
200 300 400 500 600
Bond energy (kJ/mole)

Vibracin de tensin C-C Espectroscopa IR: Alcanos

La conjugacin reduce la frecuencia:


C=C aislado 1640-1680 cm-1
C=C conjugado 1620-1640 cm-1
C=C aromtico aprox. 1600 cm-1
Enlaces con mayor carcter s absorben a frecuencias ms altas:
sp3 C-H justo por debajo de 3000 cm-1
sp2 C-H justo por encima de 3000 cm-1
sp C-H a 3300 cm-1

94
Espectroscopa IR: Alquenos Espectroscopa IR: Alquinos

Vibracin de tensin O-H y N-H Vibracin de tensin: Alcohol

Ambos ocurren a ~3300 cm-1 pero muestran aspecto


distinto
Alcohol O-H: ancho con panza redondeada
Amina secundaria (R2NH): ancho con un pico
puntiagudo
Amina primaria (RNH2): ancho con dos picos
agudos
Amina terciaria (R3N): no da seal

Vibracin de tensin: Amina Vibracin de tensin del C=O

El enlace C=O de cetonas simples, aldehidos y cidos

carboxlicos absorbe a ~1710 cm-1.

Tpicamente, es la seal ms fuerte en el IR.

Los cidos carboxlicos tambin dan la tensin O-H.

Los aldehdos poseen 2 seales C-H a 2700 y 2800 cm-1.

95
Vibracin de tensin: Cetona Vibracin de tensin: Aldehdo

Vibracin de tensin: Aldehdo y cetona Vibracin de tensin: cido carboxlico


Este O-H absorbe en una banda muy ancha, 2500-3500 cm-1, debido
a la fuerza de los enlaces de hidrgeno.

Benzaldehdo

Ciclohexanona

Ejemplos de espectros IR Alteraciones en la vibracin de tensin del C=O


cido propanico
La conjugacin de C=O con C=C baja la frecuencia de tensin
a ~1680 cm-1.

El C=O de una amida absorbe a una frecuencia an ms baja,


1640-1680 cm-1.

El C=O de un ester absorbe a una frecuencia ms alta, ~1730-


1740 cm-1.

Los C=O en anillos pequeos (5 C o menos) absorben a una


frecuencia superior.

96
Vibracin de tensin: Amida Vibracin de tensin C-N

C - N absorbe a alrededor de 1200 cm-1.

C = N absorbe a unos 1660 cm-1 y es mucho ms fuerte


que la absorcin C = C en la misma regin.

C N absorbe fuertemente justo por encima de 2200 cm-1.


La seal del C C es mucho ms dbil y est justo
por debajo de 2200 cm-1.

Vibracin de tensin: Nitrilo Frecuencias de los grupos orgnicos

Intensidad de absorcin de los grupos orgnicos Frecuencias de los grupos orgnicos


Dependiendo de la polaridad del enlace involucrado: Enlace Tipo de compuesto -1 Intensidad
Los enlaces polares (dipolos fuertes) absorben fuertemente
O-H
C=O, CN
C-O

Los enlaces no polares absorben dbilmente


C C, C=C

Dependiendo del nmero de bandas solapantes:


Las bandas C-H tienden a solaparse
Las molculas orgnicas contienen muchos C-H
Las absorciones C-H tienden a ser fuertes

97
Anlisis cualitativo Matching de espectros: identificaciones
La interpretacin de espectros IR requiere requiere un cierto juicio, fcilmente
adquirible con la prctica.
La asignacin de seales en la regin 1660-3600 cm-1 es factible con ayuda de
tablas y bases de datos (paquetes informticos). Es necesario indicar tanto el
enlace involucrado como el tipo de tensin, e.g. tensin O-H flexin C-H
Las regiones ms tiles suelen ser:
1680-1750 cm-1: las tensiones C=O producen seales muy intensas en los
espectros IR, y puede determinarse el tipo de carbonilo por la
posicin exacta de la banda.
2700-3100 cm-1: diferentes tipos de vibraciones de tensin C-H.

3200-3700 cm-1: varios tipos de vibraciones de tensin O-H y N-H.

La regin 600-1600 cm-1 presenta demasiadas seales como para realizar una asignacin
cmoda y fiable. Sin embargo esta regin es la denominada huella dactilar de una
molcula, de modo que si el espectro coincide (casi) exactamente con el de una sustancia
pura de referencia, se le puede asignar esa identidad.

La ausencia de una seal es una prueba definitiva de la inexistencia de un determinado


grupo funcional

Matching de espectros: identificaciones Anlisis de ismeros

O OH

O
HN CH2CH3
O
HN
O

Oscilador armnico. Modelo cuntico Oscilador no armnico


vara con: la constante de fuerza del enlace
inversamente con la masa reducida
Los enlaces ms fuertes (k grandes) muestran transiciones con mayor nmero de onda
Tipo de C2HX H/ KJ mol-1
enlace cm-1
C-C 1.100 368
C=C 1.650 699 = 1, 2, 3
CC 2.200 962 Sobretonos, baja intensidad
Los nmeros de onda varan con las masas atmicas. As, a enlaces con tomos de
H les corresponden vibraciones con nmeros de onda muy elevados. Los tomos
pesados aumentan la masa reducida y disminuyen el nmero de onda.
Tipo de C3H-X H/ KJ mol-1
enlace cm-1
C-Cl 700 452
C-Br 600 293
C-I 500 243

98
Modos de vibracin Acoplamientos
Molcula de N tomos: 3N-6; lineal: 3N-5 modos normales de vibracin
Acoplamiento de tensin: tomo comn.

N seales inferior a lo esperado:


vibracin que no vara el dipolo Acoplamiento de flexin: enlace comn entre los grupos vibrantes.

vibraciones con energas idnticas o casi idnticas


intensidad de absorcin no detectable Acoplamiento tensin-flexin: el enlace forma parte del ngulo que flexiona.

energa fuera del intervalo del detector


Energas prximas de grupos acoplados favorecen la interaccin.
N seales superior a lo esperado:
sobretonos: 20 , 30 Grupos alejados por 2 ms enlaces apenas sufren acoplamiento.
bandas de combinacin: dos modos de vibracin son excitados
simultneamente por un mismo fotn.
Las vibraciones han de pertenecer al mismo grupo de simetra.

Matching de espectros: identificaciones Matching de espectros: identificaciones

O OH

O
HN CH2CH3
O
HN
O

Ensanchamiento de lasIRlneas atmicas


Fuentes Fuentes IR

IR cercano: Lmpara de wolframio Emisor de Nerst (Nernst glower): barra cilndrica o tubo compuesto por una mezcla
de xidos (ZrO2, Y2O3, Er2O3, 90:7:3 en peso) que precisa calentamiento inicial a 2000
C (aislante a temperatura ambiente). Mejor para cortas. Bajo consumo de energa.
IR medio: Emisor de Nernst, Globar, Filamento de Nicromo
Globar (glow bar): SiC Funciona a 1100 C. Buen conductor a cualquier T.
Slidos inertes que se calientan elctricamente a 1.500-2.220 K. Mejor para grandes . Ms estable. Su resistencia cambia con el uso.
Radiacin continua. Cuerpo negro.
Se consumen (queman al aire) si la temperatura sube mucho: refrigeracin Filamento de Nicromo: espiral empaquetada de alambre de nicromo elctricamente
calentada. Posee menor intensidad, pero su tiempo de vida es mucho ms largo. Es la
fuente ms barata

1
mx (Wien)
T
W(B ) T 4 (Stefan)

Longitud de onda ( m)

99
Fuentes IR Detectores IR

Lmpara de arco de Hg: Se usa el el IR lejano, donde las otras fuentes no Trmicos:
proporcionan potencia radiante suficiente. Termopares
Termistores (bolmetros)
Lser de CO2: Se usa para la cuantificacin de contaminantes gaseosos
Piroelctricos
Emite una banda entre 900 y 1100 cm-1, que es donde suelen absorber los
Neumticos
contaminantes

Su potencia radiante es varios rdenes de magnitud superior a la de las


Fotoconductores
fuentes de continuo de cuerpo negro
Semiconductores,

Termopar Termopar y preamplificador

Soldadura entre dos metales (Bi + Sb)


IR ennegrecida cuya diferencia de
temperatura respecto a otra unin de
referencia provoca una variacin de
potencial.
Elevado tiempo de respuesta (~60 ms): no
son adecuados para FTIR

Llega a detectar 10-6 K

Mejora de la sensibilidad: termopila (batera de


termopares acoplados en serie)

Bolmetro Detectores piroelctricos (PIR)


Del griego bole- haz, y metro-medida
Construidos a partir de capas monocristalinas de materiales piroelctricos como el sulfato
Instrumento para medir la radiacin merced al incremento de temperatura que sufre una
lmina de metal, cuya resistividad se ve afectada y medida. de triglicina (TGS), (NH2CH2COOOH)3H2SO4
Muy sensible radiacin Los materiales piroelctricos son dielctricos: al aplicar un campo elctrico se polarizan
termistor
Los piroelctricos, una vez que se retira el campo elctrico, retienen una elevada
Absorbente (1 mm2)
absorbente conexiones polarizacin que es fuertemente dependiente de la temperatura

Termistor de silicio La radiacin IR cambia la T del TGS y se altera la distribucin de carga a lo largo del cristal,
dopado (no visible) que se puede detectar como una corriente en un circuito elctrico externo
Bao frio a temperatura fija
Patilla: unin trmica y
enlace elctrico La radiacin es absorbida, el absorbente se
calienta, y el cambio de temperatura es medido
por el termistor

Ruido Johnson importante


Requiere una fuente estable de alimentacin

El de Ge, a 1,5 K, es ideal entre 5 y 400 cm-1


Tiempos de respuesta, tr, muy bajos Muy apropiados para FTIR

100
Detectores neumticos (Golay cells) Detectores fotoconductores
Semiconductor: PbS (NIR 10.000-333 cm-1), T ambiente
CdTe/HgTe (M,FIR), 77 K (minimizar ruido trmico) HPLC-FTIR
tr ~ 4 ms
Transferencia de calor en h
fase gas ms rpida que en
slidos Promocin de e- a bandas de
conduccin, disminuyendo R.
semiconductor
vidrio (no conductor)

(Xe)

vaco

Instrumentacin IR Instrumentacin IR

1. Espectrofotmetros dispersivos de red

(anlisis cualitativo)

2. Instrumentos mltiplex con transformada de Fourier

(anlisis cualitativo y cuantitativo)

3. Fotmetros no dispersivos

(aplicaciones cuantitativas especficas)

4. Fotmetros de reflectancia

(anlisis de slidos en industria y agricultura)

Monohaz vs. haz doble Espectrofotmetro dispersivo de doble haz


Ventajas:

Menos exigente en cuanto a tipos de


lmparas y detectores (las fuentes de IR
tienden a ser de baja intensidad y los
detectores de poca sensibilidad)

Compensa la absorcin del CO2 y del H2O

Limitaciones de un sistema atenuador del haz de referencia

Lentitud del atenuador a cambios rpidos de transmitancia


Probabilidad de que el registro no entre en escala
Dificultad en fijar la posicin nula

101
Superposicin de ondas Dominios de tiempo y de frecuencia

P(t) k [cos (2 1 t) cos (2 2 t) ]

Dominios de tiempo y de frecuencia Dominios de tiempo y de frecuencia

FTIR: consiste en recoger los datos en el dominio de tiempo y convertirlos al FTIR: consiste en recoger los datos en el dominio de tiempo y convertirlos al
dominio de frecuencias mediante la transformada de Fourier dominio de frecuencias mediante la transformada de Fourier

Los detectores no son lo suficientemente rpidos para responder a Los detectores no son lo suficientemente rpidos para responder a
fluctuaciones de la potencia radiante a altas frecuencias (1012 1015 Hz) por lo fluctuaciones de la potencia radiante a altas frecuencias (1012 1015 Hz) por lo
que la seal se modula con un interfermetro de Michelson a una frecuencia que la seal se modula con un interfermetro de Michelson a una frecuencia
mucho ms baja que es directamente proporcional a la alta frecuencia. mucho ms baja que es directamente proporcional a la alta frecuencia.

P(t) k [cos (2 1 t) cos (2 2 t) ]

Dominios de tiempo y de frecuencia Interfermetro de Michelson


Retardo: = 2 (M F)

102
Interfermetro de Michelson Interferogramas y espectros pticos

Interfermetro de Michelson Transformada de Fourier


1
P P( ) cos2 f t
2

VM: velocidad constante del


P B( ) cos 2 f t f 2 VM B( ) cos 2 2 VM t VM B( ) cos 2

espejo mvil
VM 2t
2 P B1 ( ) cos2 1 B 2 ( ) cos2 2

: tiempo en que recorre 1 V 2 VM


/2 cm f M
2 P B( ) cos 2 d

f: frecuencia del
B( ) P cos 2 d
interferograma 2 VM

f
: frecuencia ptica de la c Resolucon de un 2 1
espectrofotmetro con 2 1 1
radiacin Transformada de Fourier
1 1
2 1 ; 2 1

Transformada de Fourier Transformada de Fourier

103
Interferogramas Interferogramas y espectros pticos

Interferogramas y espectros pticos Interferogramas y espectros pticos

Dominio de tiempo. Fuente policromtica


GLOBAL WARMING
See Atkins Box 19.1, p 500
The intensity of infrared
radiation that would be lost
from the Earth in the
absence of greenhouse
gases is shown by the
smooth line. The jagged
line is the intensity of the
radiation actually emitted.
The maximum wavelength
of radiation absorbed by
each greenhouse gas is
indicated.

Atkins & de Paula 2005

104
Ventajas de la espectroscopa de Fourier Espectrmetro FTIR

1. Ventaja Jaquinot o rendimiento


Ausencia de rendijas y pocos elementos pticos mejor relacin S/N

2. Elevada exactitud y precisin en el posicionamiento


y medida de la longitud de onda

Posibilita el promediado de seales mejor relacin S/N

3. Ventaja Fellgett o multiplex

Todos los elementos llegan al detector a la vez


espectro completo en < 1s

Seales en el dominio de tiempo Registro de un espectro


Realizar m medidas individuales de transmitancia

Elevada claridad espectral m grande

Ejemplo: Registrar un espectro que cubra el intervalo 500 - 5.000 cm-1

Si queremos hacer medidas cada 3 cm-1 (elemento de resolucin, e.r.) m = 1.500

Si registrar cada e.r. lleva 0,5 s 1.500 0,5 s = 750 s = 12,5 min

Para un e.r. de 1,5 cm-1 25 min

Mejora del cociente S/N : Promediado de espectros


S nS x S
Si se llevan a cabo n espectros, se demuestra que: n x
N n Nx Nx

Ventaja Fellgett Ventaja Fellgett


Mejora del cociente S/N :

Promediado de espectros

Si se llevan a cabo n espectros:

S nS x S
n x
N n Nx Nx

Mejora en un factor 2 2 n n4

Tiempo : 4 12,5 min = 50 min !!!


En espectroscopa con transformada de Fourier, todos
los e.r. se miden a la vez:

Espectro : 0,5 s en 12,5 min: 1.500 espectros !

S S S
1.500 x 39 x
N Nx Nx

105
Espectrmetro FTIR monohaz Espectrmetro FTIR monohaz

reas de inters para el FTIR Fotmetro IR porttil no dispersivo para anlisis de gases

Mezclas de gases (se precisa alta resolucin)

Muestras de elevada absorbancia

Sustancias con bandas de absorcin dbiles (estudio de

catalizadores)

Estudios cinticos
Fuente: alambre de nicromo
Deteccin cromatogrfica Detector: piroelctrico
Filtros intercambiables (3.000 - 750 cm-1)
Aplicaciones ms comunes: CO, COCl2 , acrilonitrilo, HCN

Fotmetro no dispersivo sin filtros para medir CO Anlisis cuantitativo automtico

Chopper: seal alterna menos sensible a la deriva y al ruido 1/f

106
Disolventes para el IR Materiales para las ventanas transparentes al IR
Los materiales se escogen atendiendo
a:
coste
intervalo de transparencia
solubilidad en el disolvente
reactividad con la muestra y con el
disolvente.

Ms usados y
menos caros

Tratamiento de muestras en el IR Cubeta desmontable para muestras lquidas


Gases
Celda cilndrica
Pasos pticos desde pocos cm a 10 m gracias a superficie reflectante interna
Disoluciones
Problemas nicos debido a la falta de buenos disolventes que sean transparentes a lo largo de todo el IR
H20, alcohol, raramente empleados
Absorben fuertemente en el IR
Atacan a los materiales comnmente usados para las celdillas (NaCl)
Celdas
Anchura: 0,01 1 mm; son mucho ms estrechas para minimizar la absorcin por parte del
disolvente
Intervalo de cuantificacin: 0,1 10%
Lquidos puros
Lminas finsimas (0,01 mm o menos)
Una gota se comprime entre dos placas de KBr
Reproducibilidad baja herramienta cualitativa
Slidos
Dispersar el slido en una matriz slida o lquida
Formacin de un pellet con KBr
Matriz lquida con aceite mineral o hidrocarburos fluorados

Cubeta desmontable para muestras lquidas Cubeta desmontable para muestras lquidas

Las Deben
ventanas estar
son de sal secas y
(KBr),

107
Cubeta desmontable para muestras lquidas Aplicacin de muestras lquidas

Libres de
defectos.

Aplicacin de muestras lquidas Lavado y pulido de ventanas

Disolvente
orgnico

Clculo experimental del espesor b de una cubeta Interference Fringes

Interferencia constructiva:
= 2b/N

2b 2b
N 2 b 1 2 b 2
1 2

b: 0,003 0,6 mm

Thanks to
Jos Antonio Daz Navas
Catedrtico de Escuela Universitaria
Departamento de ptica
Facultad de Ciencias
Avda. Severo Ochoa S/N
18071-Granada Spain
email: jadiaz@ugr.es
web: www.ugr.es/~jadiaz

108
Medidas cuantitativas Registros con un aparato dispersivo de doble haz

Pdisolvente P0
A log
Pmuestra Ps

P0 Ps
T0 ; Ts
Pr Pr

Ts P
T
T0 P0

Absorcin en el IR medio: aplicaciones cuantitativas Anlisis de gases


En general, los datos cuantitativos obtenidos con un sistema dispersivo en
el IR son de calidad inferior a los obtenidos en UV-VIS Compuesto Exposicin L.O.D.
Las desviaciones instrumentales de la ley de Beer son ms frecuentes que permisible
en el UV-VIS: (ppm) (m) (ppm)
Las bandas de absorcin IR son ms estrechas 1977 1993
4
Se emplean rendijas ms anchas en el monocromador debido a (a) baja intensidad de
10
la fuente de luz IR, (b) baja sensibilidad de los detectores IR
0,1
Las anchuras de banda empleadas suelen ser de la misma magnitud que las anchuras 10
de los picos de absorcin 4,7
Con instrumentos FTIR, las desviaciones de la ley de Beer no son tan serias como 0,5
con los instrumentos dispersivos 1
5
Medida de la absorbancia: 2
Paso ptico de la celda estrecho dificultad en medidas reproducibles 1

Las celdas son muy susceptibles a contaminantes presentes en el aire y /o en el


disolvente

Anlisis de contaminantes en el aire Reflexin y Reflectancia

Especular

Contaminante Conc. Conc. Error Difusa (DRIFTS)


real hallada relativo Interna
ppm ppm % Total atenuada (ATR)

(1 R ' )2 k I reflejada muestra


f(R ' ) R ' :
2 R ' s I reflejada patrn no absorbente (buen reflector; NaCl)
Kubelka-Munk (1948)
Fuller y Griffiths (1978)

k : Coeficiente de absorcin molar del analito Para muestras diluidas:

s : coeficiente de dispersin
k 2,303 C

109
Espectros normal (de absorcin) y de reflectancia difusa Reflectancia difusa

Reflectancia difusa Reflectancia difusa

Reflectancia difusa Reflectancia interna


Especular Reflectancia interna total de un haz de radiacin,
(1 R ' )2 k I reflejada muestra mostrando un cierto grado de penetracin en la muestra.
f(R ' ) R ' :
I reflejada patrn no absorbente (buen reflector; NaCl) Difusa (DRIFTS)
2 R ' s El prisma ha de tener un ndice de refraccin mayor que
la muestra (n1 > n2)
Interna
k : Coeficiente de absorcin molar del analito
Total atenuada (ATR)
s : coeficiente de dispersin

n 1 sen 1 n 2 sen 2 ; n2 0,2


n1 y n2 = f () i 3 sen 1
n1
Para muestras diluidas:
n2
n1 sen c n2 sen 90 ; c sen 1 AgBr 330 - 2,0104 cm-1
n1
k 2,303 C AgCl
CdTe
500 - 2,5104 cm-1
430 - 1,0104 cm-1
Ge 830 - 5,0103 cm-1
ZnSe 670 - 2,0104 cm-1

Reflectancia interna mltiple

110
Reflectancia interna Reflectancia Total Atenuada (ATR)

Espectros similares.

Mismos picos pero diferentes intensidades relativas

Absorbancias independientes del grosor de la muestra

Aplicabilidad general a gran tipo de muestras

Espectros de Reflectancia Reflectancia Total Atenuada (ATR)

The Reflectance Spectra of Paper Measured by


Diffuse Reflectance (top),
In-Line Diffuse Reflectance (middle),
and ATR (bottom).

Reflectancia Total Atenuada (ATR) Reflectancia Total Atenuada (ATR)


Calcular el ngulo crtico entre un prisma con ndice de refraccin de 2,03 y una
muestra con un ndice de refraccin n = 1,34. Estimar el ngulo de la radiacin
incidente que debera usarse para obtener un espectro de reflectancia total atenuada.

c = arc sen n2/n1 = arc sen 1,34/2,03 = 41,3

1,34 0,2
i 3 arc sen 49,3 i = 49,3 - 3 = 46,3
2,03

Los prismas suelen disearse con i = 45 60

En esta situacin sera preferible el de 45 que ya ofrece un i > c

111
Disolventes en el IR cercano Campos de aplicacin en todas las regiones del IR

Espectroscopa Raman Dispersin de la luz (scattering)


El efecto Raman (descubierto en 1928) es El efecto Raman (descubierto en 1928) es la dispersin inelstica de
la dispersin inelstica de la luz por parte la luz por parte de una molcula.
de una molcula.

Dispersin Rayleigh: producida por molculas o Dispersin Rayleigh: producida por molculas o agregados de molculas de
agregados de molculas de dimensiones dimensiones bastante menores que la de la radiacin.
bastante menores que la de la radiacin.

La mayora de los fotones dispersados tienen La mayora de los fotones dispersados tienen la misma frecuencia que la
la misma frecuencia que la fuente (dispersin fuente (dispersin Rayleigh); sin embargo, la frecuencia de algunos fotones
Rayleigh); sin embargo, la frecuencia de (aprox. 1 en 107) ha variado (dispersin Raman).
algunos fotones (aprox. 1 en 107) ha variado
(dispersin Raman).

Chandrasekhra Venkata Raman

Premio Nobel, 1930

Nov 7, 1888 - Nov 21, 1970

Dispersin Rayleigh y Raman Dispersin Rayleigh y Raman

La radiacin incidente induce un dipolo


La radiacin incidente induce un dipolo oscilante en las molculas. oscilante en las molculas.

El dipolo oscilante re-emite de un modo prcticamente instantneo toda la energa El dipolo oscilante re-emite de un modo
incidente por va radiacional con una frecuencia idntica a la incidente (dispersin prcticamente instantneo toda la energa
Rayleigh) incidente por va radiacional con una
frecuencia idntica a la incidente
(dispersin Rayleigh)

La radiacin incidente puede llegar a interaccionar en un pequeo grado con


movimientos moleculares, como las vibraciones. Como consecuencia, en este
caso, el dipolo oscilante re-emite la energa incidente a distinta frecuencia que La radiacin incidente puede llegar a interaccionar en un pequeo grado con
la incidente (dispersin Raman) movimientos moleculares, como las vibraciones. Como consecuencia, en este
caso, el dipolo oscilante re-emite la energa incidente a distinta frecuencia que
la incidente (dispersin Raman)

112
Espectroscopa Raman Espectroscopa Raman: Transiciones involucradas
La espectroscopa Raman puede detectar enlaces
simtricos, complementado as a la espectroscopa IR
En esta tcnica la molcula se irradia con luz UV a
la vez que se recoge su espectro IR
La radiacin UV promueve electrones de orbitales enlazantes a los
antienlazantes. Esto causa la formacin de un dipolo en grupos que
inicialmente eran inactivos en el IR y que ahora absorbern en el IR

* . -
+ Dipolo inducido
.. C h .C R
R C R R C
UV
transicin absorbe IR
Simtrica: no dipolo *

Espectroscopa Raman: Transiciones involucradas Dispersin Rayleigh y Raman


Lneas Stokes: la transicin Raman se
origina desde el nivel vibracional ms bajo
del estado electrnico fundamental

Lneas anti-Stokes: la transicin Raman se


origina desde un nivel vibracional excitado
del estado electrnico fundamental

El desplazamiento de la en la dispersin
Raman se corresponde con la energa
involucrada en la vibracin del analito, es
decir, en Raman es igual a la de
absorcin en IR.

La magnitud del desplazamiento Raman


es independiente de la de la fuente de
excitacin

Dispersin Rayleigh y Raman Espectroscopa Raman

La luz incidente causa la excitacin a un estado virtual excitado, que luego reemite un
fotn de menor (Stokes) o mayor (anti-Stokes) energa

E 16 4 4 2
I
3 c3
Como consecuencia de la pequea magnitud de las frecuencias dispersadas, la espectroscopa
Raman slo resulta factible cuando se usa una fuente monocromtica intensa (lser).

113
Espectros IR y Raman Espectros IR y Raman
La frecuencia de
absorcin en el IR
y el
desplazamiento
Raman coincide
exactamente para
varios picos.

El tamao relativo de
los picos
correspondientes
difiere bastante.

Algunas seales
que aparecen en
uno de los
espectros estn
ausentes en el
otro.

Polarizabilidad de la molcula de CO2 Modos normales del acetileno y su actividad en IR/Raman

Despolarizacin y simetra Despolarizacin y simetra

Cociente de despolarizacin:
I
p
III
Una lnea est despolarizada si p > 0,75

Vibraciones simtricas:
baja despolarizacin.

Asimetra:
despolarizacin creciente.

Pmax vibracin no simtrica: 6/7

114
Condiciones para generar espectros Raman normales Instrumentacin
El fotn incidente tiene que poseer una
energa sustancialmente mayor que la
requerida para excitar el modo de
vibracin.

El fotn incidente debe tener una


energa inferior a la necesaria para
producir una excitacin a un estado
electrnico superior.
IR cercano: a) se puede trabajar con potencia radiante elevada (50 W) sin causar
fotodescomposicin de la muestra

Ambas condiciones se cumplen con b) no es lo suficientemente energtico como para poblar significativamente
estados electrnicos excitados que pudieran producir emisiones
en la zona VIS-IR cercano. fluorescentes.

Instrumentacin Instrumentacin

IR cercano: a) se puede trabajar con potencia radiante elevada (50 W) sin causar
fotodescomposicin de la muestra
b) no es lo suficientemente energtico como para poblar significativamente
estados electrnicos excitados que pudieran producir emisiones
fluorescentes.

Sistema de iluminacin de la muestra Detectores

Ms simple que la espectroscopa IR


Se puede usar el vidrio en los componentes
UV_VIS:
pticos
La fuente lser puede enfocarse fcilmente
PMT refrigerado, CCD, PDA
sobre una pequea rea de la muestra.
La radiacin emitida se enfoca
eficientemente en la rendija de salida
IR cercano:
Ejemplo:
Bolmetro de Germanio
muestras lquidas radiacin
termistor

1 mm dimetro absorbente conexiones


5 cm longitud

Bao frio a temperatura fija

115
Instrumentacin Instrumentacin

Variantes sensibilizadas Dispersin Raman de Resonancia (RR)

a) En la espectroscopa Raman
Raman resonante (RRS) 102-106 (L.D. :10-8 vs. 10-1 M)
convencional, la radiacin incidente
no coincide con una frecuencia de
Raman de superficie aumentada (SERS) 103-106 (L.D. 10-8-10-12 M)
absorcin de la molcula, y
solamente se da una transicin
virtual a un estado excitado no
Tcnicas espectroscpicas Raman no lineales cuantizado.

Raman estimulada (SRS)


b) En el caso de la resonancia Raman,
Raman antistokes coherente (CARS)
la radiacin incidente posee una
Raman de superficie resonante (SERRS)
frecuencia que coincide con una
transicin molecular.

Dispersin Raman de Resonancia (RR) Dispersin Raman de Resonancia (RR)


El empleo de una fuente excitatriz con una frecuencia muy El empleo de una fuente excitatriz con una frecuencia muy parecida a la de una
parecida a la de una transicin electrnica provoca un aumento transicin electrnica provoca un aumento de 102-106 en las intensidades de los
procesos Raman:
de 102-106 en las intensidades de los procesos Raman:
Mayor sensibilidad que la Raman normal
Mayor sensibilidad que la Raman normal
Espectros RR: sencillos con pocas lneas
Espectros RR: sencillos con pocas lneas Selectividad mejorada: puede seleccionarse una de excitacin apropiada para
determinados grupos absorbentes
Selectividad mejorada: puede seleccionarse una de
excitacin apropiada para determinados grupos absorbentes

En RR la relajacin al estado fundamental NO est En RR la relajacin al estado fundamental NO est


precedida por relajacin al nivel
< 10vibracional
-14 s ms10-6 - 10-8 s precedida por relajacin al nivel vibracional ms
bajo del estado electrnico excitado bajo del estado electrnico excitado

Los procesos fluorescentes son potenciales Los procesos fluorescentes son potenciales
interferentes interferentes

116
Dispersin Raman de Resonancia (RR) Surface Enhanced Raman Spectroscopy (SERS)

Surface Enhanced Raman Spectroscopy (SERS) Surface Enhanced Raman Spectroscopy (SERS)

Surface Enhanced Raman Spectroscopy (SERS) Surface Enhanced Raman Spectroscopy (SERS)

117
Surface Enhanced Raman Scattering (SERS) Spectroscopy
Applications of Reproducible SERS Substrates for Trace Level Detection
Netti and Stanford
(sic 300 ppm should read 300 ppb)

Applications of Reproducible SERS Substrates for Trace Level Detection Applications of Reproducible SERS Substrates for Trace Level Detection
Netti and Stanford Netti and Stanford

Stimulated Raman Spectroscopy Coherent Anti-Stokes Raman Spectroscopy (CARS)

Lser con pulsos de 109 V/cm

118
Coherent Anti-Stokes Raman Spectroscopy (CARS) Coherent Anti-Stokes Raman Spectroscopy (CARS)

Tema 7

Raman not widely used until 1960s when


lasers became available Espectroscopa de rayos X.
Raman lines are 0.001% of intensity of source Generacin de rayos X.

Raman spectra can be obtained from aqueous Absorcin, Fluorescencia y Difraccin de RX.
solutions Instrumentacin y Aplicaciones.
Main advantage over IR

Los rayos X fueron descubiertos por


Wilhelm Conrad Rntgen en 1895
(Premio Nobel de Fsica en 1901)

Premios Nobel por investigacin relacionada con RX Regiones del espectro electromagntico: RX

1901 W. C. Roentgen in Physics for the discovery of x-rays.


1914 M. von Laue in Physics for x-ray diffraction from crystals.
Claves:
1915 W. H. Bragg and W. L. Bragg in Physics for Crystal structure derived from x-ray diffraction. Intervalo de :
1917 C. G. Barkla in Physics for characteristic radiation of elements.
1924 K. M. G. Siegbahn in Physics for x-ray spectroscopy. 0,1 10 nm
1927 A. H. Compton in Physics for scattering of x-rays by electrons.
1936 P. Debye in Chemistry for diffraction of x-rays and electrons in gases. Proceso caracterstico:
1962 M. Perutz and J. Kendrew in Chemistry for the structure of hemoglobin.
excitacin de electrones de capas internas
1962 J. Watson, M. Wilkins, and F. Crick in Medicine for the structure of DNA.
1979 A. McLeod Cormack and G. Newbold Hounsfield in Medicine for computed axial tomography. Espectro tpico:
1981 K. M. Siegbahn in Physics for high resolution electron spectroscopy.
1985 H. Hauptman and J. Karle in Chemistry for direct methods to determine x-ray structures. lneas electrnicas puras, independientes del
1988 J. Deisenhofer, R. Huber, and H. Michel in Chemistry for the structures of proteins that are estado qumico de los tomos
crucial to photosynthesis use of synchrotron radiation.
2003 Peter Agere and Roderick MacKinnon in Chemistry for discoveries concerning channels in Energas involucradas en las transiciones:
cell membranes use of synchrotron radiation
~1,2105 kJ/mol (1,2 keV/mol)

119
Regiones del espectro electromagntico. RX Obtencin de RX con fines analticos

Claves:
1. Bombardeo de un blanco metlico con un haz de electrones
Intervalo de :
0,1 10 nm de elevada energa

Proceso caracterstico:
2. Exposicin de una sustancia a un haz primario de RX, que
excitacin de electrones de capas internas
genera un haz secundario de fluorescencia de RX
Espectro tpico:
lneas electrnicas puras, independientes del 3. Utilizacin de una fuente radiactiva: desintegracin y captura
estado qumico de los tomos
electrnica (rayos )
Energas involucradas en las transiciones:
~1,2105 kJ/mol (1,2 keV/mol) 4. Por partculas aceleradas en un sincrotrn

Radiacin Bremsstrahlung (frenado) Excitacin de un tomo de Na para originar RX


Siempre que una partcula cargada en movimiento se frena de repente, (a) Un electrn incidente de alta
cede su energa cintica y la transforma en un fotn. energa expulsa un electrn de
la capa K, 1s (2S)
Cuando se aceleran electrones hacia un objetivo metlico, producen un
continuo de energa en la zona de los rayos X que es manifestacin (b) El electrn K puede ser
de las diferentes energas cinticas que poseen esos electrones. tambin expulsado por un fotn
incidente
mx 1,5 0
Desaceleracin instantnea:
(c) Un electrn de la capa LIII
Mxima energa del fotn
(2P3/2) LII (2P) llena el hueco
hc vacante dando lugar a una
h 0 eV emisin de RX (K)
0

eV: energa cintica de los e del haz 0 Cuando se usan fotones de RX


para la excitacin, la radiacin
0: frecuencia mxima al potencial V
resultante se llama secundaria
0 depende del V de aceleracin, pero o Fluorescencia de RX.
0 = 12.398 / V DUANE-HUNT
es independiente del blanco metlico

Excitacin de un tomo de Ti (z=22) para originar RX Excitacin de un tomo de Na para originar RX


(a) Un electrn incidente de alta
energa expulsa un electrn de
la capa K, 1s (2S)

(b) El electrn K puede ser


tambin expulsado por un fotn
incidente

(c) Un electrn de la capa LIII


(2P3/2) LII (2P) llena el hueco
vacante dando lugar a una
emisin de RX (K)

Cuando se usan fotones de RX


para la excitacin, la radiacin
resultante se llama secundaria
o Fluorescencia de RX.

120
Transiciones tpicas que dan lugar a emisin de RX Transiciones involucrados en los RX del Au
Serie K: transiciones electrnicas desde
niveles energticos ms elevados hacia la
capa K

Serie L: transiciones electrnicas entre


niveles superiores y la capa L

La diferencia de energa entre los niveles L


y K es mucho mayor que la que hay entre
los niveles M y L
Las lneas K aparecen a ms
cortas que las lneas L

K1 y K2 poseen energas muy prximas


normalmente slo se observa
una lnea.

De igual manera, slo se observa una lnea


para K1 y K2

Emisin de RX Ley de Moseley


Existe una proporcin lineal entre
Longitudes de onda () de las lneas de emisin ms intensas la raz cuadrada de la frecuencia y
de algunos elementos tpicos el nmero atmico.

Fuentes de RX Perfiles de absorcin


Un haz de RX es absorbido
cuando su energa coincide
exactamente con la energa con
la que un electrn est ligado a
su tomo.
A energas superiores, la
absorcin todava se produce,
pero en una extensin mucho
menor.
El exceso de energa se
comunica como energa
cintica al fotoelectrn emitido.
Los espectros de absorcin de
RX se caracterizan por los
bordes o cantos de absorcin
(absorption edges).

121
Coeficiente de absorcin
La ley de Beer se cumple tambin en espectroscopa de absorcin de RX.
Suele escribirse con una notacin ligeramente diferente:

Coeficiente de absorcin lineal x: grosor de la muestra [=] cm


ln (P0/P) = x : coeficiente de absorcin lineal
: densidad de la muestra [=] g/cm3
Coeficiente de absorcin msico
ln (P0/P) = m x m: coeficiente de absorcin msico [=] cm2/g

El coeficiente de absorcin msico (m) es independiente del estado qumico o


fsico de la muestra, pero es preciso conocer la densidad () de la muestra.

Para un muestra compleja, el m es la suma ponderada de los distintos


componentes absorbentes (es aditivo). m = wa a + wb b +

Los efectos matriz suelen dificultar muchsimo el anlisis cuantitativo. Sin embargo,
en condiciones especficas se pueden obtener resultados fiables (por ej.:
cuantificacin de impurezas azufradas en hidrocarburos).

Fluorescencia de RX Difraccin de RX
Es el modo ms prctico de determinacin cuantitativa Quizs es el uso ms comn, despus de las aplicaciones mdicas.

Basta con usar una fuente de excitacin con una energa que exceda a un
canto de absorcin del analito, y medir la fluorescencia correspondiente. Requisitos:

La fuente excitatriz por va lumnica puede ser cualquiera espaciado entre capas de tomos
aproximadamente igual a
centros de dispersin regularmente
distribuidos en el espacio

AP + PC = n
AP = PC = d sen

n = 2 d sen Bragg (1912)

La interferencia constructiva tiene lugar cuando la diferencia de camino


recorrido es un mltiplo entero de la longitud de onda.

Tubo Coolidge Tubo Coolidge

Es la fuente ms comn de RX Es la fuente ms comn de RX

Las colisiones entre los Las colisiones entre los


electrones del haz y los tomos electrones del haz y los tomos
del material andico producen del material andico producen
un continuo de radiacin, sobre un continuo de radiacin, sobre
el que se superponen las lneas. el que se superponen las lneas.

La eficacia de produccin de RX La eficacia de produccin de RX


es muy pequea (<1% de la es muy pequea (<1% de la
potencia elctrica se convierte en potencia elctrica se convierte en
potencia radiante) potencia radiante)

Factores crticos: Factores crticos:


Potencial de aceleracin
(determina la del RX) Potencial de aceleracin
(determina la del RX)
Corriente del circuito de
calentamiento (controla la Corriente del circuito de
intensidad de RX) calentamiento (controla la
intensidad de RX)

122
Seleccin de : filtros Filtros para los elementos blanco ms comunes

Elemento Canto de absorcin K Grosor* Porcentaje de


K1 () K () Filtro
diana del filtro () (mm) prdida de K
Mo 0,709 0,632 Zr 0,689 0,081 57
Cu 1,541 1,392 Ni 1,487 0,013 45
La interposicin de lminas de Cr 2,290 2,085 V 2,269 0,0153 51
ciertos materiales con un perfil de
absorcin adecuado puede servir
L1 () L1 () L1
para la seleccin de determinadas
lneas de emisin. Pt 1,313 1,120 Zn 1,283 ---- ----
W 1,476 1,282 Cu 1,380 0,035 77

* Para reducir la intensidad de la lnea K a un 0,01 de la intensidad de la lnea K1

Seleccin de : monocromacin de cristal Propiedades de los cristales de difraccin tpicos


Giro del cristal: Intervaloa de
Dispersin
d/d Dispersin d/d
()
Movimiento del detector: 2 (grados/ ) Intervaloa de ()
(grados/ )
Espaciado de
Cristal la red, mx min a mx a min
d () Espaciado de la red,
Cristal d () mx min a mx a min
Topacio 1,356 2,67 0,24 2,12 0,37
LiF 2,014 3,97 0,35 1,43 0,25 Topacio 1,356 2,67 0,24 2,12 0,37
NaCl 2,820 5,55 0,49 1,02 0,18 LiF 2,014 3,97 0,35 1,43 0,25
EDDTb 4,404 8,67 0,77 0,65 0,11
NaCl 2,820 5,55 0,49 1,02 0,18
ADPc 5,325 10,50 0,93 0,54 0,09
EDDTb 4,404 8,67 0,77 0,65 0,11
ADPc 5,325 10,50 0,93 0,54 0,09
aBasado en el hecho que el intervalo medible de 2 va desde 160 para mx hasta 10
para min
b -tartrato de etilendiamina
c Dihidrgeno fosfato de amonio
Cristales con espaciados a Basado en el hecho que el intervalo medible de 2 va desde 160 para mx hasta 10 para min
mayores pueden cubrir un d n -tartrato de etilendiamina

b

intervalo de ms grande, pero d 2d cos c Dihidrgeno fosfato de amonio


con menor dispersin.

Detectores

Gas (diferentes condiciones de funcionamiento conducen a tres tipos distintos)


Cmara de ionizacin
Contados proporcional
Contador Geiger

Contador de centelleo
Semiconductores

123
Detector de gas Detector de cmara de gas
Cada fotn ioniza un tomo de Ar, expulsando un fotoelectrn.
El fotoelectrn, a su vez, ioniza otros tomos de gas, produciendo ms electrones.
Los electrones son atrados hacia el nodo.
Los cationes son atrados hacia la pared circundante que hace de ctodo.

Tiempo muerto:
Geiger: 50-200 s
Proporcional: 1 s

Detectores de centelleo

ANLISIS DISPERSIVO DE ENERGA


Consiste en la medida de la radiacin secundaria de RX emitida por una muestra
una vez irradiada por RX primarios, mediante un analizador de altura de
impulsos.
Proporciona el n de cuentas en funcin de la energa de RX dando informacin
cualitativa y semicuantitativa de los varios elementos presentes en la muestra.
Los discriminadores de altura de impulsos pueden emplearse siempre y cuando la
amplitud del pulso sea proporcional a la energa incidente.
RESOLUCIN : Nmero de fotones producido por cada
Detector de centelleo : Z = 10 destello es proporcional a la energa de la
Detector proporcional : Z = 4-6 radiacin incidente
Detector semiconductor : Z = 1-2
Tiempo muerto:
0,25 s

Detectores semiconductores Detectores semiconductores


El detector ms moderno es un El detector ms moderno es un
dispositivo de estado slido que se dispositivo de estado slido que se
comporta en muy buena medida como un comporta en muy buena medida como un
contador proporcional. contador proporcional.

Una estructura de Si con regiones n y p Una estructura de Si con regiones n y p


tiene Li embebido en una zona central del tiene Li embebido en una zona central del
Si intrnseco. Si intrnseco.

Un fotn de RX produce un fotoelectrn Un fotn de RX produce un fotoelectrn


de muy elevada energa, que a su vez de muy elevada energa, que a su vez
produce cientos de electrones produce cientos de electrones
secundarios. secundarios.

Esto incrementa la conductividad entre Esto incrementa la conductividad entre


los dos terminales y se mide un pulso. los dos terminales y se mide un pulso.

El pulso es proporcional a la energa del El pulso es proporcional a la energa del


RX RX

124
DETECTOR DE SEMICONDUCTOR Li depositado sobre el Si(p), difunde hacia el seno del cristal (400-
500C)
Si tipo p Si(Li) tipo n
El Li (electropositivo) cede e- al cristal convirtindolo en tipo n
Por cada fotn incidente, se promocionan gran n de e- a la banda de
conduccin
Lmina de Al Energa para formar un par electrn-agujero: 3,65 eV(Si) ; 2,95
eV(Ge)
Lmina de Au Energa para formar un par inico en un detector de gas : 30 eV
Energa para formar un fotoelectrn en un escintilador NaI(Tl) : 500
eV
Proporcionan mejor resolucin que los contadores proporcionales y
que los de centelleo
La seal de salida es directamente proporcional a la energa del fotn
Regin intrnseca
RX Seal al amplificador
de RX incidente
+ Opera a 77K y al vaco
- Si(Li)
Es el detector ms usado en instrumentos dispersivos de energa
Si(Li) >0,3; Ge(Li)<0,3

Detectores discriminadores de energa

XRF Detectors
Energy-dispersive
XRF
Semiconductor
Wavelength
dispersive XRF
Scintilation
Counter

125
XRF Analysis
Samples can be in
any form
Solid
Powder
Liquid

Los fotones de rayos X ionizan el gas que hay


en el tubo y los electrones libres producto de
la ionizacin crean una corriente que se puede
medir. Como gas se emplea argn y otros
gases nobles como kriptn o xenn porque no
interfieren con los electrones liberados.

126
127