CAPACIDADE DE LIGAO DE FERRO
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Instrues de Uso
Finalidade . Sistema para determinao da Capacidade de Ligao de
Ferro em amostra de soro.
[Somente para uso diagnstico in vitro.]
Princpio . Um padro de ferro com concentrao conhecida
(500 mg/dL) incubado com a amostra de soro em um tampo de pH 8,3.
Ocorre, ento, a saturao dos stios disponveis para ferro na protena
transportadora (transferrina).
O excesso de ferro no ligado ento medido atravs da formao de um
complexo magenta brilhante aps adio de Ferrozine , permitindo a
determinao da capacidade de ligao de ferro.
Caractersticas do sistema . Capacidade de Ligao de Ferro da
Labtest proporciona um sistema seguro de ensaio homogneo direto, que
atravs da dosagem do excesso de ferro adicionado a uma amostra,
permite a medida do ferro no ligado. Este resultado possibilita calcular a
capacidade latente de ligao de ferro e juntamente como o valor do ferro
srico pode-se obter a capacidade total de ligao de ferro, dado muito
importante no diagnstico de inmeras patologias hematolgicas.
O mtodo bastante preciso, com uma excelente robustez nos ensaios
do dia a dia e demonstra que no sofre interferncia de valores pouco
elevados da bilirrubina e dos triglicrides.
Os estudos da diluio da matriz e os experimentos de comparao com
um mtodo proposto como tentativa para mtodo de referncia, indicam
que o sistema de medio apresenta especificidade e exatido
adequadas para o ensaio do analito.
O sistema utiliza metodologia manual facilmente aplicvel em
analisadores semi-automticos capazes de medir uma reao de ponto
final entre 540 e 580 nm.
Metodologia . Goodwin modificado.
Reagentes
1. ( - Tampo - Armazenar entre 15 - 25 C.
Contm tampo 500 mmol/L, pH 8,3 e fenoxietanol 7,2 mmol/L.
2. < - Padro 500 g/dL - Armazenar entre 15 - 25 C.
Aps manuseio armazenar bem vedado para evitar evaporao.
3. * - Ferrozine - Armazenar entre 15 - 25 C.
Contm ferrozine 28 mmol/L.
Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies
indicadas, so estveis at a data de expirao impressa no rtulo.
Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos a contaminaes de
natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da
estabilidade.
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Ref.
MS 10009010013
Precaues e cuidados especiais
A vidraria armazenada pode acumular resduos que levam obteno de
resultados falsamente elevados.
O material usado no procedimento deve estar livre da contaminao com
ferro para evitar a obteno de resultados incorretos de CLLF.
Os cuidados habituais de segurana devem ser aplicados na
manipulao dos reagentes.
Os reagentes no abertos, quando armazenados nas condies
indicadas, so estveis at a data de expirao impressa no rtulo.
Durante o manuseio, os reagentes esto sujeitos a contaminaes de
natureza qumica e microbiana que podem provocar reduo da
estabilidade.
Material necessrio e no fornecido
1. Banho-maria mantido temperatura constante (37 C).
2. Fotmetro capaz de medir, com exatido, a absorbncia entre 540 e
580 nm.
3. Pipetas para medir amostras e reagentes.
4. Cronmetro.
Influncias pr-analticas . Os fatores pr analticos de variao
representam a causa mais importante de determinaes incorretas de
capacidade de ligao de ferro e muitos outros analitos. A contaminao
pode ocorrer na coleta, no transporte e processamento da amostra.
Para controle teraputico aconselhvel colher a amostra sempre no
mesmo horrio devido s variaes diurnas do ferro srico.
Idade, sexo, perodo de gestao, uso de contraceptivos orais e
estrognio alteram as concentraes do ferro srico e podem modificar
os valores da capacidade de ligao de ferro.
O uso de detergente inico para limpeza do material outra fonte de
contaminao com ferro.
Amostra
Deve ser criado um Procedimento Operacional Padro (POP) que
estabelea os procedimentos para colheita, preparao e
armazenamento da amostra. Enfatizamos que os erros devidos amostra
podem ser muito maiores que os erros ocorridos durante o procedimento
analtico.
Usar soro (sem hemlise) obtido em jejum. O analito estvel 4 dias
entre 15 - 25 C e 6 dias entre 2 - 8 C.
Como nenhum teste conhecido pode assegurar que amostras de sangue Clculos . Ver Linearidade.
no transmitem infeces, todas elas devem ser consideradas como
potencialmente infectantes. Portanto, ao manuse-las deve-se seguir as Capacidade latente de ligao de ferro: CLLF
normas estabelecidas para biossegurana. Capacidade total de ligao de ferro: CTLF
ndice de saturao da transferrina: IST
Para descartar os reagentes e o material biolgico sugerimos aplicar as
normas locais, estaduais ou federais de proteo ambiental. ( A2 - A1)
CLLF (mg/dL) = 500 - [ x 500]
Absorbncia do Padro
Interferncias
Exemplo
Valores de Bilirrubina at 10 mg/dL e Triglicrides at 750 mg/dL no
produzem interferncias significativas.
A1Teste = 0,023 Absorbncia do Padro = 0,475
Valores de Bilirrubina maiores que 10 mg/dL e Triglicrides maiores que
750 mg/dL produzem resultados falsamente diminudos. A2Teste = 0,384
,
( 0,384 - 0,023)
Procedimento CLLF (mg/dL) = 500 - [ x 500] = 120
0,475
Ver observaes 1, 2 e 3.
CTLF (mg/dL) = Ferro srico + CLLF
O material usado no procedimento deve estar livre da contaminao com
ferro para evitar a obteno de resultados incorretos de CLLF. Ferro srico
IST (%) = x 100
A gua deionizada deve ter uma resistividade 1 megaohm ou uma CTLF
condutividade 1 microsiemens e concentrao de silicatos <0,1 mg/L. Transferrina (mg/dL) = CTLF x 0,70
Tomar 3 cubetas do fotmetro, lavadas como acima e proceder como a
Calibrao
seguir:
Calibrao manuais
Obter o fator de calibrao ao usar novo lote de reagentes ou quando o
Branco Teste Padro controle interno da qualidade indicar.
Tampo (n 1) 1,5 mL 1,5 mL
Padro (n 2) 0,5 mL 0,5 mL
Linearidade
gua destilada ou
1,0 mL 2,0 mL
deionizada O resultado da medio linear at 450 mg/dL. Para valores de
Soro (sem hemlise) 0,5 mL capacidade latente maiores que 450 mg/dL, diluir o soro 1:3 com gua
destilada ou deionizada e repetir a determinao. Multiplicar o resultado
obtido por 3.
Misturar e incubar em banho-maria a 37 C durante 10 minutos. O nvel da
gua no banho deve ser superior ao nvel dos reagentes nos tubos de Controle interno da qualidade . O laboratrio deve manter um
ensaio. Determinar a absorbncia do teste em 560 nm ou filtro verde (540 programa de controle interno da qualidade que defina claramente os
a 580), acertando o zero com o branco. A absorbncia do teste ser A1. regulamentos aplicveis, objetivos, procedimentos, critrios para
especificaes da qualidade e limites de tolerncia, aes corretivas e
registro das atividades. Materiais de controle devem ser utilizados para
Ferrozine (n 3) 1 gota 1 gota 1 gota
avaliar a impreciso e desvios da calibrao. Sugere-se que as
especificaes para o coeficiente de variao e o erro total sejam
7,8
Misturar e incubar em banho-maria a 37 C durante 10 minutos. baseadas nos componentes da variao biolgica (VB) .
Determinar as absorbncias do teste e padro em 560 nm ou filtro verde
(540 a 580), acertando o zero com o branco. A absorbncia do teste ser Intervalo de referncia . Os intervalos devem ser usados apenas
A2. como orientao. Recomenda-se que cada laboratrio estabelea, na
populao atendida, seus prprios intervalos de referncia.
O procedimento sugerido para a medio adequado para fotmetros
cujo volume mnimo de soluo para leitura igual ou menor que 2,5 mL. Capacidade de Ligao de Ferro (mg/dL)
Deve ser feita uma verificao da necessidade de ajuste do volume para o CLLF: Adultos: 140 a 280 mg/dL
9,10
fotmetro utilizado. Os volumes de amostra e reagente podem ser CTLF: Crianas : 150 a 400 mg/dL
modificados proporcionalmente sem prejuzo para o desempenho do Adultos: 250 a 450 mg/dL
teste e o procedimento de clculo se mantm inalterado. Em caso de IST: 20 a 50%
reduo dos volumes fundamental que se observe o volume mnimo Transferrina: 200 a 300 mg/dL
necessrio para a leitura fotomtrica. Volumes da amostra menores que
0,01 mL so crticos em aplicaes manuais e devem ser usados com Converso: Unidades Convencionais (mg/dL) x 0,179 = Unidades SI
cautela porque aumentam a impreciso da medio. (mmol/L).

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Caractersticas do desempenho
11
Exatido . Em duas amostras com concentraes de capacidade de
ligao de ferro iguais a 129 e 254 mg/dL foram adicionadas quantidades
diferentes de uma amostra com capacidade de ligao de ferro igual a
453 mg/dL, obtendo-se recuperaes entre 94 e 100%. O erro
sistemtico proporcional mdio obtido em um valor de 140 mg/dL foi igual
a 4,2 mg/dL ou 3,0%.
Especificidade . O mtodo proposto foi comparado com um mtodo
3
do NCCLS utilizando 80 amostras com valores situados entre 105 e
335 mg/dL. A comparao resultou na equao da regresso:
y = 0,960x - 5,866 e um coeficiente de correlao (r) igual a 0,964.
O erro sistemtico total (constante e proporcional) verificado no nvel de
deciso (140 mg/dL) foi igual a 11,5 mg/dL ou 8,2%.
exclusivamente com leite. J o aumento de demanda caracterstico da
gravidez e das crianas nos primeiros 5 anos de vida. Menstruao
abundante, hemorragias gastrointestinais, hemorroidas, carcinoma de
clon e parasitoses so causas comuns de deficincia de ferro srico por
perda sangunea no adulto. A CTLF mostra-se freqentemente
aumentada na deficincia de ferro.
Transfuses repetidas, hemocromatose idioptica, cirrose, talassemia e
anemia sideroblstica so as causas mais comuns de aumento do ferro
srico e diminuio da CTLF.
A tabela abaixo mostra o comportamento do ferro srico, capacidade
total de ligao do ferro (CTLF), percentual de saturao da transferrina
(IST) e da reserva de ferro da medula (RF), avaliada pela colorao
especfica do esfregao da medula ssea, em vrias situaes
relacionadas com o metabolismo do ferro alterada.

Como as amostras foram selecionadas aleatoriamente em pacientes de Alteraes do Ferro

CTLF IST RF
ambulatrio e pacientes hospitalizados, pode-se inferir que o mtodo tem Metabolismo Srico
uma especificidade metodolgica adequada. Deficincia de ferro D E D A
Infeces crnicas D D D E
Doenas malgnas D D D E
Repetitividade - Impreciso intra-ensaio Atransferrinemia D D S E
Perodo menstrual D S D S
N Mdia DP CV (%)
Gravidez (3 trimestre) D E D S
Amostra 1 20 278 5,62 2,0 Hemosiderose pulmonar D S D A
Nefrose D D E E
Kwashiorkor D D S S
Reprodutibilidade - Impreciso total Contraceptivos orais S/E E S S
N Mdia DP CV (%) Intoxicao com ferro E D E E
Amostra 2 20 281 8,33 2,96 Anemia hemoltica E S/D E E
Hemocromatose E S/D E E
Deficincia de piridoxina E S E E
Sensibilidade metodolgica . Utilizando-se a absorbncia do Anemia sideroblstica E S/D E E
Talassemia major E D E E
padro como parmetro, o limite de deteco fotomtrica 0,001 mg/dL,
correspondendo a uma absorbncia igual a 0,001.
D = diminudo E = elevado
Efeitos da diluio da matriz . Duas amostras com valores S = sem alterao A = ausente
iguais a 357 e 394 mg/dL foram utilizadas para avaliar a resposta do
sistema nas diluies da matriz com NaCl 150 mmol/L (0,85%). Usando Observaes
fatores de diluio que variaram de 1 a 8 foram encontradas
recuperaes entre 100 e 106%. 1. A limpeza e secagem adequadas do material utilizado so fatores
fundamentais para a estabilidade dos reagentes e obteno de resultados
Significado clnico . O ferro essencial para a maioria dos corretos.
organismos vivos, pois participa de numerosos processos vitais, desde
os processos oxidativos celulares ao transporte de oxignio para os 2. O laboratrio clnico tem como objetivo fornecer resultados exatos e
tecidos. A hemostasia do ferro regulada principalmente pela absoro e precisos. A utilizao de gua de qualidade inadequada uma causa
no pela excreo. O ferro transportado no sangue por uma protena, a potencial de erros analticos. A gua deionizada ou destilada utilizada no
transferrina, e armazenado nos tecidos ligado outra protena chamada laboratrio deve ter a qualidade adequada a cada aplicao. Assim, para
ferritina. Normalmente, devido a somente um tero dos stios de ligao preparar reagentes, usar nas medies e para uso no enxge final da
para o ferro da transferrina estar ocupado pelo ferro, a transferrina do vidraria, deve ter resistividade 1 megaohm.cm ou condutividade
soro tem considervel reserva de capacidade de ligao do ferro, que a 1 microsiemens/cm e concentrao de silicatos <0,1 mg/L. Quando a
capacidade latente de ligao do ferro (CLLF). A capacidade total de coluna deionizadora est com sua capacidade saturada ocorre produo
ligao do ferro (CTLF) no soro a medida da concentrao mxima de de gua alcalina com liberao de vrios ons, silicatos e substncias
ferro que a transferrina pode transportar. A deficincia de ferro com grande poder de oxidao ou reduo que deterioram os reagentes
conseqncia de suprimento inadequado, aumento da demanda, perda em poucos dias ou mesmo horas, alterando os resultados de modo
sangunea ou a combinao destes fatores. imprevisvel. Assim, fundamental estabelecer um programa de controle
O suprimento inadequado caracterstico das crianas alimentadas da qualidade da gua.

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3. Para uma reviso das fontes medicamentosas de interferncia nos
resultados e na metodologia sugere-se consultar. Young DS. Effects of
Drugs on Clinical Laboratory Tests , 3 edio, 1990, Washington: AACC
Press, 1990.
10. Soldin SJ, Brugnara C, Wong EC: Pediatric Reference Intervals, 5a.
edio, Washington: AACC Press, 2005. p.132-133.
11. Labtest: Dados de arquivo.

Referncias Apresentao
1. Goodwin J, Murphy B, Guillemette M. Clin Chem 1966; 12:47. Produto Referncia Contedo
1 1 X 60 mL
2. Henry RJ, Cannon DC, Winkelman JW. Clinical Chemistry, Principles Capacidade de
and Technics, 2 edio. New York:, Harper & Row, 1974. 41-40 1 X 20 mL
Ligao de Ferro
3 1 X 2,5 mL
3. Determination of Serum Iron and Total Iron-Binding Capacity. NCCLS
Document H17-P, Vol 10 No.4
Informaes ao consumidor
4. Stookey L. Anal Chem. 1970;42:779.

5. Tonks DB. Quality Control in Clinical Laboratories, Warner-Chilcott
Laboratories, Diagnostic Reagents Division, Scarborough, Canada,
1972.
6. Westgard JO, Barry PL, Hunt MR, Groth T. Clin Chem 1981;27:493-
501.
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A Labtest Diagnstica garante o desempenho deste produto dentro das
especificaes at a data de expirao indicada nos rtulos, desde que os
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instrues sejam seguidos corretamente.

7. Sociedad Espaola de Bioqumica Clnica y Patologa Molecular,

B a s e d e D a t o s d e Va r i a c i n B i o l g i c a . D i s p o n v e l Labtest Diagnstica S.A.
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8. Basques JC. Especificaes da Qualidade Analtica. Labtest
Diagnstica 2005. Servio de Apoio ao Cliente 0800 031 34 11 (Ligao Gratuita)
e-mail: sac@labtest.com.br
9. Burtis CA, Ashwood ER. Textbook of Clinical Chemistry, 2a. edio,
Philadelphia: W.B. Saunders, 1986:2175-2211. Reviso: Agosto, 2013 Copyright by Labtest Diagnstica S.A.
Ref.: 041114 Reproduo sob prvia autorizao

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