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PRESENTADO POR
Johana Lisseth Ortiz Coral C.C. 1.085.315.722
Myriam Marinelda Crdoba C.C.
Mable Yurani Rodrguez C.C
Leidy Viviana Rojas C.C
PRESENTADO A
Tutora
FEDRA LORENA ORTIZ
Soy docente tiempo completo de la escuela de Ciencias Bsicas, tecnologa e ingeniera, soy
Biloga de la Universidad de Nario y Magister en Enseanza de las ciencias, rea Biologa.
GRUPO
305689 A_ 14
En el Actual trabajo de ponencias Cientficas se pretende dar cuenta de la Actividad Etapa 2: consenso
cientfico de la unidad 1 del curso de Biotecnologa ofrecido por la Universidad Nacional Abierta y a
Distancia UNAD
1. Escriba directamente en el foro de trabajo colaborativo la ponencia cientfica realizada en la
etapa anterior y a partir de aqu desarrolle las siguientes actividades.
Hiptesis 3. Las variaciones en la actividad enzimtica se deben a las diferencias del pH final
del medio de cultivo
Garanta: Los inhibidores enzimticos son molculas que se unen a enzimas y disminuyen su
actividad. Las enzimas tienen como hemos visto una importancia fundamental en el
funcionamiento celular. Prcticamente todas las funciones de la clula requieren directa o
indirectamente la presencia de enzimas para que ocurran a una velocidad adecuada las
reacciones qumicas que en definitiva son las responsables de esas funciones. La unin de
un inhibidor puede impedir la entrada del sustrato al sitio activo de la enzima y/u obstaculizar
que la enzima catalice su reaccin correspondiente. Existe una inhibicin competitiva y no
competitiva por lo que puede apreciar que los inhibidores son causantes del cambio
de reaccin en la actividad enzimtica. (Collado Martin Daniel, 2014).
Los inhibidores de -amilasas son glicoprotenas de bajo peso molecular que se acumulan en
vacuolas especializadas en la fase media de desarrollo de la semilla. Al ser protenas de
semillas, son excelentes candidatos para ser expresadas heterlogamente en tejidos
homlogos como la semilla del caf, donde ocurre el desarrollo biolgico de la broca. Esto es
particularmente importante porque inhibidores de -amilasas, como el AI de frjol, para poder
ser activo, es necesario que en la semilla ocurran cambios pos-traduccionales como la
glicosilacin y protelisis, y crear as un sitio de unin a la enzima blanco. Chrispeels (1997)
Los inhibidores de -amilasas son glicoprotenas de bajo peso molecular que se acumulan en
vacuolas especializadas en la fase media de desarrollo de la semilla. Al ser protenas de
semillas, son excelentes candidatos para ser expresadas heterlogamente en tejidos
homlogos como la semilla del caf, donde ocurre el desarrollo biolgico de la broca. Esto es
particularmente importante porque inhibidores de -amilasas, como el AI de frjol, que ha
sido utilizado como como fuente de inhibidores de las -amilasas de la broca del caf
(Valencia et al. 2000). Para poder ser activo, es necesario que en la semilla ocurran cambios
postraduccionales como la glicosilacin y protelisis, y crear as un sitio de unin al enzima
blanco.
Chrispeels (1997) registra que cuando los genes de protenas de semilla son expresados en
plantas heterlogas, los productos de la trang - nesis son correctamente procesados y
transportados hasta las vacuolas especializadas para lo formacin de un inhibidor de amilasas
activo.
Garanta: Los inhibidores son un factor que se destaca mucho en la actividad enzimtica,
anteriormente en el experimento realizado se puede identificar qu; pierden actividad
enzimtica el medio 1, a diferencia del medio 2 ya que se debe a la absorcin de las enzimas
por la celulosa y la lignina (Ibeth RODRGUEZ G,2007), o ser consecuencia de la inhibicin
por presencia de azcares luego de la hidrlisis cida de la celulosa. Algunas investigaciones
han mostrado que la glucosa y la celobiosa inhiben la actividad enzimtica, ya que son los
productos de la actividad celulosa (Ibeth RODRGUEZ G,2007), adems de que Estudios
previos han demostrado mayores actividades de las enzimas celulolticas producidas
por Trichoderma reesei Rut C-30, utilizando como sustrato residuos pretratados con vapor y
celulosa cristalina (Ibeth RODRGUEZ G,2007).
Respaldo: Estudios relacionados reportan actividad similar, estudio realizado por Sukumaran
et al. (2009), reporta una actividad B-G de 0,22 / a partir de Trichoderma reesei RUT
C 30 utilizando como sustrato salvado de trigo, siendo estos resultados comparables con los
obtenidos en este trabajo. Aguiar (2010) afirma que varias especies de Aspergillus sp.,
producen altos niveles de - glucosidasa, la cual se considera muy importante en el proceso
de sacarificacin, debido a que la acumulacin de celobiosa (degradada por la B-G) en el
medio puede causar inhibicin de la EnG y ExG, perjudicando el sinergismo entre estas
enzimas, lo que resulta en una disminucin del rendimiento del proceso de sacarificacin.
Reserva: Cabe resaltar de acuerdo con (Ibeth RODRGUEZ G, 2007) dice que, se pueden
obtener mejores resultados con diferentes fuentes de nitrgeno, ya que puede incrementar la
actividad de algunos cultivos, como fue descubierto por Gutirrez. Ya que la actividad puede
ser afectada por el tipo de sustrato evaluado.
Conclusin: Se puede concluir que las variables sustrato y tiempo de fermentacin, inciden
en la expresin de las actividades enzimticas, obteniendo en este trabajo resultados en los
cuales la presencia de inhibidores en el medio de cultivo uno afecto notoriamente en la
actividad enzimtica, en comparacin con el medio de cultivo 2.
Garanta: Las enzimas microbianas son ms tiles que los derivados de las plantas o
animales por la gran variedad de actividades catalticas de que disponen, y porque
usualmente pueden obtenerse en cantidades abundantes, baratos, de forma regular y de
calidad uniforme, ocasionalmente mediante cultivo de superficie o usualmente mediante
tcnicas de fermentacin aerbica de cultivos profundos, tcnica muy utilizada en la
produccin de antibiticos.
Adems, los enzimas microbianos son en general ms estables que los homlogos de
las plantas o animales, y su proceso de produccin es ms fcil y seguro que el seguido con
plantas y animales. La manipulacin gentica y ambiental para incrementar el rendimiento, o
la actividad enzimtica de las clulas haciendo a ste de inters constitutivo 15. Estas tcnicas
son especial - mente importantes en el caso de la actividad o estabilidad del enzima que sea
la etapa limitante en conversiones multi - enzimas, cuando haya que eliminar los controles de
regulacin normales en la sntesis de la enzima deseada, cuando se desea reducir o eliminar
la inhibicin por el substrato o el producto, mecanismo este ltimo para prevenir
la sobreproduccin del producto de una va metablica, o para obtener algunas otras
caractersticas favorables.
Las plantas tambin han sido fuente tradicional de un cierto nmero de enzimas. A partir del
ltex producido por la papaya, higuera, pia y, en menor grado, otras especies se han aislado,
sobre todo, cistein - proteinasas. Estas plantas tienen la ventaja de que su ltex es fcil de
obtener, principalmente a partir de los frutos y utilizando mano de obra no cualificada.
Se puede decir con seguridad que la hiptesis que nos dice que Las diferencias en la
actividad enzimtica se deben a la presencia de inhibidores en el medio de cultivo, tiene gran
validez por los resultados arrojados, y toda la investigacin en diferentes fuentes bibliogrficas
que se ha venido realizando a lo largo de la actividad a lo cual se le podra darle como
Cualificado modal.
Garantia: Los inhibidores enzimticos son molculas que se unen a enzimas y disminuyen su
actividad. Puesto que el bloqueo de una enzima puede matar a un organismo patgeno o
corregir un desequilibrio metablico. La unin de un inhibidor puede impedir la entrada del
sustrato al sitio activo de la enzima y/u obstaculizar que la enzima catalice su reaccin
correspondiente. Existe una inhibicin competitiva y no competitiva por lo que puede apreciar
que los inhibidores son causantes de del cambio de reaccin en la actividad enzimtica.
Respaldo: Los inhibidores buscan fijar al centro de la enzima libre en este caso se trata de
inhibicin competitiva y cuando el inhibidor no impide la fijacin del substrato a la enzima, pero
si impide la accin cataltica a esto se le conoce como inhibicin no competitiva.
Por otro lado, las enzimas digestivas como las - amilasas constituyen una familia de endo -
amilasas, que catalizan la hidrlisis de almidn.
Los inhibidores de - amilasas son glicoprotenas de bajo peso molecular que se acumulan
en vacuolas especializadas en la fase media de desarrollo de la semilla.
La unin del inhibidor puede ser reversible o irreversible. Normalmente, los inhibidores
irreversibles reaccionan con la enzima de forma covalente y modifican su estructura qumica
a nivel de residuos esenciales de los aminocidos necesarios para la actividad enzimtica.
En cambio, los inhibidores reversibles se unen a la enzima de forma no covalente, dando lugar
a diferentes tipos de inhibiciones, dependiendo de si el inhibidor se une a la enzima, al
complejo enzima-sustrato o a ambos.
2. Realice la Contra argumentacin. De las ponencias personales enviadas por sus compaeros,
escoja una de ellas y realice una contra argumentacin. Es decir realice argumentos en contra
de la hiptesis enviada por uno de sus compaeros. Recuerde acompaar la contra
argumentacin con evidencias y datos empricos. Cmo se muestra a continuacin:
Hiptesis a refutar Argumento que respaldan la Hiptesis Contra argumentos que refutaran la
Hiptesis
Hiptesis 2: La diferencia en Evidencia
la actividad enzimtica se Estudios demuestran que los inhibidores de - La diferencia en la actividad enzimtica,
debe a la presencia de amilasas se encuentran en semillas de ocurre a un pH ptimo, la cual
inhibidores en el medio de leguminosas y gramneas (Richardson 1991). generalmente se observa entre los valores
cultivo. de 5 y 9 de pH, de esta manera las
Los inhibidores de -amilasas son glicoprotenas enzimas son protenas, por lo
de bajo peso molecular que se acumulan en que cualquier cambio brusco de pH puede
vacuolas especializadas en la fase media de alterar el carcter inico de los grupos
desarrollo de la semilla. Al ser protenas de amino y carboxilo en la superficie proteica,
semillas, son excelentes candidatos para ser afectando as las propiedades catalticas
expresadas heterologamente en tejidos de una enzima. A pH alto o bajo se puede
homlogos como la semilla del caf, donde producir la desnaturalizacin de la enzima
ocurre el desarrollo biolgico de la broca. Esto y en consecuencia su inactivacin. La
es particularmente importante porque
fosfatasa cida es ms activa a pH 5,0,
inhibidores de -amilasas, como el AI de frjol,
mientras que la fosfatasa alcalina lo es a
que ha sido utilizado como fuente de inhibidores
pH 9,0. Muchas enzimas tienen mxima
de las -amilasas de la broca del caf (Valencia
actividad cerca de la neutralidad en un
et al. 2000). Para poder ser activo, es necesario
rango de pH de 6 a 8.
que en la semilla ocurran cambios pos-
traduccionales como la glicosilacin y Por otra parte Un aumento en la
protelisis, y crear as un sitio de unin al temperatura provoca un aumento de la
enzima blanco. velocidad de reaccin hasta cierta
Chrispeels (1997) registra que cuando los genes temperatura ptima, ya que despus de
de protenas de semilla son expresados en aproximadamente 450 C se comienza a
plantas heterlogas, los productos de la producir la desnaturalizacin trmica.
transgnesis son correctamente procesados y (Rubn Hernndez Gil, PhD, 2007).
transportados hasta las vacuolas especializadas
para lo formacin de un inhibidor de amilasas La actividad enzimtica en la obtencin de
activo. esterasa se detect una vez que se
Mientras que, Valencia et al. (2000) encontraron agotaba la fuente de carbono, obteniendo
mediante ensayos espectrofotomtricos y niveles muy bajos. Este resultado
zimogramas de inhibicin, que inhibidores de - corresponde a la produccin constitutiva de
amilasas de frijol (P. vulgaris y Phaseolus la enzima, tal y como se encuentra descrito
coccineus L.) bloquean la actividad de las - para otras esterasas (Ohnishi et al., 1994).
amilasas de la broca del caf. Estos genes En tales condiciones, los mayores valores
actualmente estn siendo clonados y se est de actividad se alcanzaron a los tres das
evaluando su expresin en semillas de tabaco de incubacin, para posteriormente
transgnico, por ser una especie de rpido descender bruscamente. Este patrn de
desarrollo vegetativo (Acua 2004, com. per.) produccin se ajusta al obtenido en otros
microorganismos (Samad et al., 1990;
Christakopoulos et al., 1992; Ohnishi et al.,
1994; Gao y Breuil, 1995). El rpido
descenso en la actividad enzimtica podra
deberse a la coexistencia de la esterasa
con proteasas producidas por el propio
hongo durante su crecimiento (Abraham et
al., 1993; Ohnishi et al., 1994) o a una
bajada del pH del cultivo (Gao y Breuil,
1995).
Efecto de la temperatura:
Adems, los enzimas microbianos son en En los ltimos aos existen muchas
general ms estables que los homlogos de las investigaciones encaminadas a explicar los
plantas o animales, y su proceso de produccin mecanismos de activacin de las cisteno
es mas fcil y seguro que el seguido con plantas proteasas in vivo. Se ha demostrado
y animales. claramente que la activacin de estas
enzimas depende del . 19 Los autores
La manipulacin gentica y ambiental para sugieren un predominio de molculas de
incrementar el rendimiento, o la actividad enzima activa a pH cido y est claro que
enzimtica de las clulas haciendo a ste de las variaciones de pH neutro a pH cido en
inters constitutivo 15. las vacuolas provocan cambios en la
conformacin nativa de la enzima inactiva,
Estas tcnicas son especialmente importantes lo que permite el procesamiento y
en el caso de la actividad o estabilidad del plegamiento de la enzima activa.
enzima que sea la etapa limitante en
conversiones multi-enzimas, cuando haya que
eliminar los controles de regulacin normales en
la sntesis de la enzima deseada, cuando se
desea reducir o eliminar la inhibicin por
el substrato o el producto, mecanismo
este ltimo para prevenir
la sobreproduccin del producto de una va
metablica, o para obtener algunas otras
caractersticas favorables.
3. Evaluacin de las Hiptesis. Realicen un consolidado con las ponencias personales, analicen
los argumentos y los contra argumentos. Cmo se muestra a continuacin.
5. Escriba el texto cientfico: Una vez, el grupo identifique la Hiptesis mejor argumentada,
redacten un texto cientfico en el cual se encuentre explcito: Hiptesis, garanta, respaldo,
excepcin, cualificador modal y conclusin.
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
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web: http://www.cva.itesm.mx/biblioteca/pagina_con_formato_version_oct/apalibroarticulo.html
Ohnishi, K., Yoshida, Y. y Sekiguchi, J. (1994) Lipase production of Aspergillus oryzae. Journal of
Fermentation and Bioengineering 77, 490-495.
Tesis Olga (s.f.) [PDF], Discusin: Esterasa. Produccin de la Esterasa Pginas 138 167. Sito
web: http://digital.csic.es/bitstream/10261/40203/6/TESIS_OLGA_4.pdf
G., Maas Juan Manuel. (N/A). Regulacin de la Actividad Enzimtica. 09 de Octubre de 2017, de
Euskal Herriko Humbertsitatea, Universidad del Pais Vasco Sitio web:
http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz22.htm#ph
Andrea J. Baez-Suarez, N. O.-d.-B.-M. (2006). Efecto de Temperatura, pH, Concentracin de Sustrato
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