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Universidad de Costa Rica - Sede de Occidente.

Revista Pensamiento Actual - Vol 16 - No. 26, 2016


113 - 122 ISSN Impreso: 1409-0112 / ISSN Electrnico: 2215-3586 Medio ambiente y salud 113

Metodologas analticas utilizadas actualmente para la


determinacin de mercurio en msculo de pescado
Analytical methodologies currently used for the determination of mercury in fish muscle

Ingrid Ruiz Chaves1

Recibido: 18/8/2015 / Aprobado: 12/4/2016

Resumen
El mercurio es un metal pesado con tiene efectos txicos, una de las vas de ingreso en los humanos es por el consumo
de pescado, debido al riesgo representado para la salud, existe un gran inters en el desarrollo de tcnicas analticas
sensibles y fiables para su determinacin. Para la determinacin del mercurio total existe una gran variedad de
metodologas que proporcionan informacin parcial acerca de su impacto en la salud humana y el medio ambiente,
como consecuencia se han desarrollado tcnicas capaces de separar e identificar las diversas especies de mercurio para
poder evaluar los distintos grados de impacto. El
presente trabajo realiza una propuesta del principio bsico, ventajas e inconvenientes de las principales tcnicas en
la determinacin de mercurio total y metilmercurio en matrices alimentarias (msculo de pescado) empleadas por
mtodos analticos directos e indirectos, tales como: la espectrometra de absorcin atmica de vapor fro (CV AAS),
vapor fro espectrometra de fluorescencia atmica (CV AFS), plasma acoplado inductivamente-espectrometra de
masas (ICP-MS) y analizador de mercurio. Tambin se presenta un breve texto con el uso de tcnicas cromatogrficas
para el anlisis de especiacin del mercurio orgnico. Se han
desarrollado muchas tcnicas analticas para determinar el mercurio, las cuales han logrado tener un mayor grado
de especificidad y selectividad con equipos muy sensibles, para determinar concentraciones en el de nivel ultratrazas
y lograr la identificacin y separacin de los diferentes compuestos del mercurio, para garantizar el riesgo asociado
al consumo de pescado.

Palabras claves: mercurio, (metil) mercurio, msculo de pescado, tcnicas analticas, espectroscopia, cromatografa.

Abstract
Mercury is a heavy metal that has toxic effects. Fish consumption is one of the main sources of Human exposure to
mercury. There is great interest in the development of sensitive and reliable analytical techniques to determine mercury
levels in humans due to health risks. There are a variety of methodologies that provide partial information about the
impact of mercury levels on human health and the environment. Consequently, techniques to separate and identify
the various species of mercury have been developed to assess the different degrees of the impact. This article presents
a proposal of the basic principle, advantages, and disadvantages of the main techniques for the determination of total
mercury and methylmercury in food matrices (fish muscle) employing direct and indirect analytical methods such
as: Cold Vapor-Atomic Absorption Spectrophotometry (CVAAS), Cold Vapor Atomic Fluorescence Spectroscopy
(CVAFS), Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry (ICP-MS), and Mercury Analyzer. A short text on the
use of chromatographic techniques for speciation analysis of organic mercury is included. There has been a great
development in analytical techniques to determine mercury levels. These techniques have achieved a greater degree
of specificity and selectivity with very sensitive equipment for the determination of ultra-trace level concentrations,
and the identification and separation of the different compounds of mercury in order to confirm the risk associated
with fish consumption.

Keywords: mercury, methylmercury, fish muscle, analytical techniques, spectroscopy, chromatography.

1
Bachiller en Laboratorista Qumico. Analista de Laboratorio SENASA-LANASEVE. Ministero de Agricultura y Ganadera.
Universidad de Costa Rica. Sede de Occidente, Recinto de Grecia. Correo elctrnico imruizch@hotmail.com
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Introduccin determinado que la concentracin de Hg en peces


puede ser 10 000 mil a 100 000 mil veces mayor a
El mercurio (Hg) es un metal que en la encontrada en el propio sustrato o alimento. La
concentraciones de traza es altamente txico ingesta de pescado con altas concentraciones de
y daino para los ecosistemas y para los seres Hg produce graves daos en el organismo humano
humanos, de acuerdo con Fernndez et al. (2005), (Wittwer, 2012).
citado en Prez et al. (2012). Este metal es fcilmente Una vez absorbido el mercurio por el
metilado por microorganismos, se bioacumula en organismo, es distribuido uniformemente, pero
la biota y se biomagnifica en la cadena alimentaria. la mayor parte en el cerebro, hgado y rin. Los
(Bustamante et al., 2006, citado en Prez et al., 2012). principales efectos txicos se producen sobre el
Las principales formas qumicas de mercurio sistema nervioso, especialmente en el sistema
son: mercurio elemental (Hg 0), mercurio nervioso central. Hay que destacar la especial
inorgnico divalente (Hg+2 ), metil mercurio (CH3 sensibilidad presentadas en los nios y las mujeres
Hg+ ) y dimetilmercurio ((CH3 ) 2 Hg). (Cornelis et embarazadas, afectados por los mismos efectos
al. 2005, citado en Ferreira et al., 2014). cuando sufren una dosis cinco veces menor
Cabe destacar que los efectos txicos del (Camaren, 2003).
Hg dependern de la forma qumica en la que El Codex Stan 1993-1995, establecido por la
se encuentre, los del metilmercurio (MeHg) son Organizacin para la Agricultura y la Alimentacin
ms txicos que el mercurio elemental y sus sales de las Naciones Unidas (FAO), de la Organizacin
inorgnicas, pues es absorbido eficientemente en el Mundial de la Salud OMS (OMS), establece los
tracto gastrointestinal, pasa de la sangre al cerebro niveles mximos de metilmercurio en el pescado
y traspasa la barrera de la placenta, en el caso de los y los peces depredadores (0,5 y 1 mg kg-1 ,
fetos, por lo cual afecta el sistema nervioso central respectivamente ) (CODEX, 2009).
con daos irreversibles. (Prez et al, 2012). Existe un gran inters en el desarrollo de
En la actualidad, se considera que el consumo tcnicas analticas sensibles y fiables para determinar
de pescado constituye la principal fuente de el contenido de mercurio, debido a los riesgos
exposicin humana al mercurio (EFSA, 2004). Segn para la salud. Diversas tcnicas de deteccin estn
Snchez (2010), el control del Hg se ha increment actualmente disponibles, como la espectrometra de
significativamente desde el primer accidente bien absorcin atmica de vapor fro (CV AAS), plasma
documentado, ocurrido por intoxicacin con este acoplado inductivamente espectrometra de emisin
metal en la Baha de Minamata, Japn, luego del ptica (ICP-OES), espectrometra de absorcin
cual, la Organizacin Mundial de la Salud, agencias atmica electrotrmica (ET AAS), Espectrometra
de proteccin ambiental y entes gubernamentales de fluorescencia atmica (CV-AFS), Espectrometra
de diferentes pases establecieron alternativas de masas (ID-ICP / MS).
para el control y monitoreo de este elemento en el A pesar de los avances instrumentales, algunas
ambiente. Por lo tanto, no solo el seguimiento de tcnicas no tienen la sensibilidad y selectividad
las concentraciones totales de mercurio en el medio adecuada para la determinacin de este elemento
ambiente es suficiente; el anlisis de especiacin en un gran nmero de matrices. Por lo tanto,
proporciona informacin ms til para evaluar los se requieren generalmente antes del anlisis la
riesgos de toxicidad del mercurio en la salud y separacin y el enriquecimiento previo del analito.
adems entender los ciclos biogeoqumicos de los Diferentes materiales y estrategias de anlisis se han
compuestos de mercurio (Gao et al., 2012). desarrollado para este fin (Lemos et al., 2014).
La presencia de mercurio en los peces se El analito, por ser un metal pesado, tiene la
presenta debido a la capacidad de estos de acumular caracterstica de una gran estabilidad, lo cual permite
el metal, por su gran solubilidad en los lpidos. Se ha que la matrices sean fortificadas previamente antes
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de realizar la metodologa, aunque queda sujeto al ser considerada, por tanto, tienen que seguirse
grado de cuantificacin y equipo el utilizar lo que estndares rigurosos para prevenirla siempre que sea
determinar cules materiales utilizar y la forma posible; el instrumental y el equipo en contacto con
de la extraccin. Todas las tecnologas utilizadas la muestra no podrn contener los metales objeto
tienen buena sensibilidad y permiten cuantificar el de la determinacin y debern estar hechos de
mercurio en niveles traza y ultratraza. Sin embargo, materiales inertes, los instrumentos cortantes deben
la eleccin de estas metodologas y tecnologas ser de acero inoxidable de alta calidad y todo el
involucra aspectos que abarcan desde el costo inicial material por utilizar debe limpiarse previamente con
de las herramientas espectroanalticas, la cantidad cido, para minimizar el riesgo de contaminacin,
de reactivos usados en las etapas de apertura hasta esto segn la Comisin Europea en su Decisin
los niveles de interferencias espectrales (de Jess 333/2007/CE.
et al., 2011). El objetivo de esta revisin es explicar las
Segn Rodrguez (2009), en la mayora tcnicas con ms frecuencia, en la Tabla 1 se presentan
de los mtodos, el mercurio en la muestra se los mtodos disponibles para la determinacin de
reduce al estado elemental. Algunos mtodos mercurio con los lmites de deteccin reportados,
requieren la predigestin de la muestra antes de esto como base para la seleccin, de acuerdo con
la reduccin, esto se lleva a cabo con digestiones los niveles mximos permitidos por la legislacin.
en microondas, donde la muestra se trata antes Cabe destacar que los mtodos ms utilizados
para eliminar posibles interferencias. En todas las emplean equipos instrumentales, esto por el nivel
fases de la preparacin y del anlisis de la muestra, de sensibilidad requerido para determinar y el tipo
la posibilidad de contaminacin del mercurio de matriz.
encontrado naturalmente en el ambiente debe

Tabla 1: Mtodos ms frecuentemente utilizados para la cuantificacin de mercurio y sus respectivos


lmites de deteccin

Mtodo Lmite de deteccin


reportado Mercurio total
Mtodo colorimtrico de ditizona 0,01-0,1 mg/g
Espectrometra de absorcin atmica - horno de grafito (GF AAS) 1 ng/g, 0,01-1 ng/g, 0,001-0,01 ng/g
Anlisis por activacin neutrnica- instrumental (INAA) 1-10 ng/g
Radioqumica (RNAA) 0,01-1 ng/g
Cromatografa gaseosa - detector de captura electrnica 0,01-0,05 ng/g
Detector de emisin atmica ~ 0,05 ng/g
Espectrometra de masas 0,1 ng/g
CVAAS / CVAFS 0,01-0,05 ng/g
Cromatografa lquida de alta eficiencia - detector de UV 1 ng/mL
CVAAS 0,5 ng/mL
CVAFS 0,08 ng/mL
Electroqumico 0,1-1 ng/mL
Plasma acoplado inductivamente-espectrometra masas (ICP MS) 0,01 ng/mL
Espectrometra de emisin atmica (ICP AES) 2 ng/mL
Espectrometra foto-acstica 0,05 ng
Fluorescencia de rayos X 5 ng/g - 1 mg/g
Mtodos electroqumicos 0,1-1 mg/g
Fuente: Mesquita et al.,(2000)
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Un factor importante para garantizar la Espectroscopia de absorcin atmica con vapor


calidad y confiabilidad de los resultados es elegir fro (CVAAS)
el tipo de matriz biolgica o ambiental por evaluar
y cmo los niveles de mercurio en esta pueden estar El mtodo ms utilizado para la determinacin
asociados con las especies qumicas que se van a del mercurio en cualquier medio ha sido la
cuantificar a travs de mtodos directos o indirectos. espectroscopia de absorcin atmica (AAS) con la
Algunos tipos de muestras biolgicas y tcnica del vapor fro. (Panichev y Panicheva, 2015).
ambientales presentan mercurio en niveles traza Esta tcnica permite la determinacin directa con
que exigen usar equipos con detectores altamente la nica condicin de que el mercurio contenido en
sensibles, procesos delicados de preconcentracin las muestras lquidas, normalmente en forma inica
y reactivos apropiados con alto grado de pureza como Hg2+, sea reducido al estado metlico Hg0.
(Mailman et al.,2006),(Jia et al.,2011). Posteriormente, el vapor formado se arrastra por
Las metodologas para determinar este metal un gas inerte hacia una celda de cuarzo en la que
deben ser muy selectivas, especficas y sensibles, se produce el proceso de la absorcin atmica. Las
cuyo rango de resultados pueda involucrar muestras slidas se digieren antes para transformar
resultados en niveles muy bajos, por lo tanto se todas las especies de Hg (inorgnicas y orgnicas)
debe garantizar que estas se encuentren validadas a Hg2+, ya que esta es la nica especie capaz de
y acreditadas bajo la norma INTE IEC/17025:2015, generar el vapor de mercurio atmico (Gonzlez
con el fin de garantizar resultados confiables, los et al., 2014).
cuales se puedan usar en la vigilancia ambiental del Dentro de las desventajas se puede citar que
mercurio y garantizar que el alimento (pescado) se el mtodo consume tiempo y es complicado por
puede consumir sin ningn riesgo a la salud. la posibilidad de prdidas por volatilizacin o
digestin incompleta, as como la contaminacin
Mtodos analticos para determinar de las muestras (Kuboyama et al., 2005).
mercurio Se denota que de todas las tcnicas analticas
utilizadas esta es la ms empleada, por realizar
A. Determinacin de mercurio al emplear anlisis etapas muy sencillas de extraccin, adems de
indirecto cuantificar satisfactoriamente el mercurio en
muestras de pescado.
La determinacin de las concentraciones
de especies de mercurio en muestras biolgicas Espectrometra de masas (ICP-MS)
(pescado) es un reto debido a las bajas
concentraciones de este elemento, y la evaluacin de La introduccin del ICP-MS en los laboratorios
la toxicidad es difcil porque se requiere cuantificar permite realizar un anlisis simultneo de casi todos
cada una por separado. Varios estudios en la los elementos del sistema peridico, obtener bajos
literatura describen mtodos para la determinacin lmites de deteccin y la posibilidad de estudiar
de las concentraciones de especies de mercurio al diferentes isotopos para un mismo elemento. Sin
utilizar tcnicas de espectrometra atmicas (Moraes embargo, esta tcnica tiene algunas limitaciones
et al., 2013). importantes para el estudio de muestras, debido a
las altas concentraciones de constituyentes orgnicos
e inorgnicos que producen efectos de matriz e
interferencias espectrales causadas por la formacin
de iones poliatmicos. La introduccin de las celdas
de reaccin dinmica/colisin como sistema para el
control de las interferencias espectrales ha ayudado
a resolver este problema, y esto hace posible que
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actualmente el ICP-MS pueda ser usado en los Otro problema es la posibilidad de prdida de
laboratorios en anlisis de rutina (Gonzlez et al., Hg durante el procedimiento de descomposicin de
2014). la muestra debido a su volatilidad (Lee et al., 2005).
Hoy, el uso de ICP-MS se est volviendo ms
comn en el anlisis de laboratorio de los alimentos Espectrometra de absorcin atmica con horno
(Leblanc et al., 2005). En comparacin con GF AAS de grafito (GFAAS)
o ICP-OES, esta tcnica tiene algunas ventajas, Un aspecto importante del anlisis de
como la capacidad de medicin simultnea con muestreo slido directo de mercurio con atomizador
varios elementos junto con los lmites de deteccin electrotrmico combinado con AAS es la posibilidad
muy bajos (Ammann, 2007 y Parsons y Barbosa, de operar con programas rpidos. Con la aplicacin
2007). Adems, ofrece un rango dinmico lineal de estos programas los tiempos de secado y pirlisis
amplio que permite la determinacin de elementos se minimizan o la etapa de pirlisis se elimina y
mayores y traza en la misma inyeccin de la muestra el tiempo de anlisis general se acorta de manera
(Ammann, 2007 y Parsons y Barbosa, 2007). significativa, con un aumento del rendimiento
Adems, en comparacin con ICP-OES, ICP-MS analtico (Tuzen et al., 2009). En el caso particular
ofrece una interpretacin espectral ms simple y la de anlisis de mercurio, el programa corto tiene
informacin isotpica. una ventaja adicional: la eliminacin de la etapa de
Sin embargo, ICP-MS tiene algunas pretratamiento trmico disminuye la posibilidad
limitaciones. Para el anlisis de muestra de alimento, de prdidas de mercurio. El reto importante en la
la alta concentracin de matriz orgnica a menudo determinacin de las concentraciones de mercurio
resulta en interferencias de la matriz o interferencias con el uso de GFAAS est impidiendo la prdida de
espectrales de iones poliatmicos. Estos efectos mercurio por volatilizacin durante el secado y la
pueden ser eliminados o minimizados mediante pirlisis de la muestra. Esta prdida de analito puede
el uso de istopos alternativos o ecuaciones de prevenirse con el uso de modificadores qumicos
correccin de interferencia (Nardi et al., 2009). estabilizadores del mercurio antes de la atomizacin.
Espectrometra de masas con plasma acoplado Varios tipos de modificadores qumicos para la
por induccin (ID-ICP/ MS) determinacin de las concentraciones de mercurio
han sido reportados en la literatura (Moraes et al.,
Estas tcnicas analticas son adecuadas para 2013).
anlisis de rutina debido a su alta sensibilidad y Esta metodologa tiene un nivel muy alto de
precisin razonable. En general, es bien conocido sensibilidad, se utiliza para monitorizar los niveles
que la dilucin de plasma inductivamente acoplado de mercurio en muestras de tejido de msculo de
istopo / espectrometra de masas (ID-ICP / MS) pescado pues se pueden determinar concentraciones
tiene un alto potencial para anlisis de rutina de a nivel de ppb.
elementos traza si la exactitud de los resultados es
Espectrometra de fluorescencia atmica
de importancia analtica predominante. Aunque
(CV-AFS)
el mtodo ID-ICP / MS ha sido ampliamente
utilizado para la determinacin de elementos traza La cuantificacin de mercurio total en los
en diversas matrices, solo unas pocas aplicaciones productos alimenticios puede ser realizada por vapor
han sido reportadas para la determinacin de Hg. fro espectrometra de fluorescencia atmica (CV-
El problema en el anlisis de Hg es que el efecto AFS). Su sensibilidad inherente ofrece niveles de
de memoria aumenta los recuentos en blanco y deteccin muy bajos y amplio rango dinmico lineal.
empeora el funcionamiento analtico de ICP-MS Esto hace a CV-AFS una poderosa herramienta
(Youshinaga y Morita, 1997). analtica claramente ventajosa sobre tcnicas de
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absorcin atmica. Adems, la instrumentacin c. Cuantificacin del mercurio orgnico


requerida es mucho ms simple que la necesaria para (especiacin)
las tcnicas de espectrometra de masas (Martnez
et al., 2015). Las fuentes de exposicin y la toxicidad de
las especies de mercurio son muy diferentes. Por
Aunque esta tcnica se utiliza en matrices de
tanto, es de gran importancia el poder disponer
alimentos, en la revisin se encontr la evaluacin
de mtodos analticos capaces de diferenciar las
de diferentes mtodos por CV-AFS para determinar
distintas especies del mercurio (Gonzlez et al.,
Hg en algas marinas (Martinez et al., 2015).
2014).
B. Determinacin de mercurio en matrices En las ltimas dcadas, se desarrollaron
alimentarias con anlisis directo muchas metodologas de especiacin del mercurio
que usaban tecnologas como cromatografa lquida
Analizador de Mercurio (DMA) con espectrometra de masas (LC-MS), cromatografa
gaseosa con espectrometra de masas (CG-MS) y
El uso del analizador de mercurio directo
cromatografa gaseosa con detector de captura de
(DMA) es una de las buenas alternativas propuestas
electrones (GCECD) (de Jess et al., 2011).
para la determinacin de trazas de mercurio en
Tambin se lograron avances significativos en
matrices complejas, como los alimentos (Butala
el desarrollo de sistemas hbridos y sistemas on-line
et al., 2006, Ipolyi et al., 2004,Ikem et al., 2005, en flujo, con nfasis en tecnologas que combinan
Carbonell et al., 2009 ,Torres et al., 2012 y Viera separaciones cromatogrficas y deteccin por
et al., 2014) . Este equipo se puede emplear para mtodos espectroanalticos, como, por ejemplo,
el anlisis de muestras slidas y lquidas y que no LC-CV-AAS, LC-ICP-MS, LC-CV-FAS, CG-FAS
requieren ningn tratamiento previo. Se opera sobre (de Jesus et al., 2011).
una base de muestra de la descomposicin trmica, Se estn perfeccionando los sistemas que
seguido por reduccin cataltica de mercurio y en un usan cromatografa lquida o gaseosa acoplados a
sistema de amalgama oro para la captura de vapor espectrmetros de masa. Estos han demostrado alta
de mercurio para, posteriormente, la desorcin de versatilidad para identificar y cuantificar especies
mercurio y como tcnica analtica espectrometra organomercuriales (metilmercurio, etilmercurio
de absorcin atmica. La eficiencia de un anlisis dimetilmercurio,fenilmercurio, etc) (de Jesus et al.,
qumico al usar DMA depende mucho de la 2011).
homogeneidad de la muestra que se est procesando. Segn Quevauviller et al., 2000, una ventaja
En general, las curvas de calibracin se establecen obvia de los mtodos cromatogrficos es la
utilizando materiales de referencia certificados pero, capacidad de distinguir entre diferentes especies
con el tiempo, se pueden realizar tambin por la de mercurio en las muestras . Sin embargo, una
tcnica de calibracin externa al emplear soluciones desventaja comn en estos mtodos es que implican
acuosas estndares (Carbonell, 2009 y Torres et al., procedimientos de pretratamiento complejos y
2012). De esta manera, el DMA se ha utilizado para tediosos para la separacin de mercurio orgnico
la determinacin de trazas de mercurio en varias (MeHg en muestras biolgicas) de la matriz de
matrices (Hight et al., 2006, Butala et al., 2006). El la muestra por diferentes mtodos, tales como
nico inconveniente del mtodo DMA es la cantidad destilacin, extraccin - digestin disolvente
de muestra que se limita a 100 mg, sin embargo alcalino y la digestin cida -extraccin solvente.
el mtodo DMA ofrece lmites de deteccin y En un estudio realizado por Zhang y Adeloju
cuantificacin ms bajos que el mtodo CV AAS (2012), con esta metodologa se logr extraer y
(Vieira et al., 2014). separar el metil mercurio del mercurio total, para
as establecer las proporciones de cada especie y
su aporte.
Medio ambiente y salud 119

Conclusiones Referencias bibliogrficas


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de vapor fro (CV AAS) ha sido el mtodo ms Science of The Total Environment. (368), 585-
utilizado, debido a su velocidad y simplicidad, 96.
relativa libertad de interferencias, y alta sensibilidad.
Butala S.J.M, Scanlan L.P., Chaudhuri S.N. (2006).
Otras de las tcnicas citadas tienen un grado
A detailed study of thermal decomposition,
muy alto de sensibilidad, pero presentan algunas
a m a l g a m at i o n / at o m i c a b s o r p t i o n
limitaciones como alta volatilidad del mercurio y
spectrophotometry methodology for the
sus compuestos, etapas previa de mineralizacin
quantitative analysis of mercury in fish and
y el uso de modificadores qumicos entre otros.
hair J. Food Prot., 69, 27202728
La determinacin del mercurio total ya no es
una metodologa completamente aceptable, ya Camaren, (2003). Foro de los Recursos Hdricos.
que proporciona informacin parcial acerca de Segundo encuentro nacional, Quito, Ecuador.
los niveles de metil mercurio en pescado y no se
logra evaluar el impacto en la salud humana y el Campbell M, Vermeir, G . (1992) Dams Influence
medio. Como consecuencia, se han desarrollado of chemical species on the determination of
tcnicas que son capaces de separar e identificar las mercury in a biological matrix (cold muscle)
diversas especies de mercurio. Se han desarrollado using inductively coupled plasma mass
equipos y metodologas tan selectivas y especficas spectrometry. J. Anal. At. Spectrom., 7, p. 617
para garantizar que el pescado consumido no tiene
ningn tipo de riesgo a la salud, pues logran con Carbonell G., Bravo J.C., Fernandez C., Tarazona
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