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Fbricas de clulas microbianas
Acceso abierto
revisin
Biorreactores en miniatura: prcticas actuales y oportunidades futuras
Jonathan I Betts y Frank Baganz *
Direccin: Centro Avanzado de Ingeniera Bioqumica, Departamento de
Ingeniera Bioqumica, Universidad de Londres, Torrington
Lugar, Londres, WC1E 7JE, Reino Unido
Correo electrnico: Jonathan I Betts - jonathan.betts@genzyme.com; Frank
Baganz * - f.baganz@ucl.ac.uk
* Autor correspondiente
Abstracto
Esta revisin se centra en el campo emergente de los biorreactores en miniatura
(MBR), y examina la
en el que se utilizan para acelerar muchas reas de bioprocesamiento. MBRs
objetivo para lograr esto
aceleracin como resultado de su inherente capacidad de alto rendimiento, que
resulta de su capacidad
para realizar muchos cultivos celulares en paralelo. Hay varias aplicaciones para
MBRs, que van desde
desarrollo de medios y mejora de esfuerzos para optimizar procesos. El potencial
de los MBR para
uso en estas aplicaciones se explicar en detalle en esta revisin. Los MBR se
basan actualmente en
varias plataformas de biorreactores existentes, tales como dispositivos agitadores,
reactores de tanque agitado y burbujas
columnas. Esta revisin presentar las ventajas y desventajas de cada diseo
junto con
una evaluacin de prototipos y dispositivos comercializados desarrollados para
operacin en paralelo. Finalmente nosotros
discutir cmo se pueden usar MBRs en conjunto con sistemas robticos
automatizados y otros
unidades de proceso en miniatura para ofrecer una solucin totalmente integrada,
de alto
desarrollo del proceso de cultivo.
revisin
Introduccin
El advenimiento de la biologa molecular y la manipulacin
tecnologa en el ltimo cuarto de siglo ha tenido
un efecto dramtico en el sector farmacutico / sanitario
industrias, con un gran nmero de las numerosas aplicaciones
de esta tecnologa se basa en la capacidad de crear
lneas celulares recombinantes para el beneficio teraputico humano
[ 1 , 2]. Adems del desarrollo de estos genticamente-
organismos modificados, sigue siendo necesario mejorar
la productividad de tipo salvaje, acelerar la deteccin de recin-
microbios descubiertos y continuar la progresin de
tales como la mejora del medio de crecimiento y la
optimizacin de procesos. Tradicionalmente, los procesos de cultivo celular
desarrollo ha requerido la deteccin de grandes
de lneas celulares en cultivos de matraces agitadores, y de esta
ms pruebas de los candidatos seleccionados en el banco de la parte superior bio-
reactores antes de los estudios a escala piloto [ 3]. La necesidad de llevar
un gran nmero de cultivos de desarrollo ha
result en el avance y cada vez ms
despliegue de sistemas de biorreactores de pequea escala que
miniaturizada, HT para el desarrollo de procesos.
Los principales tipos de clulas utilizadas para producir productos teraputicos
son clulas bacterianas y mamferas, cada una de las cuales
ventajas y limitaciones nicas que influyen en la
tipo de biorreactor utilizado para el desarrollo del proceso. Bacteriano
las clulas son generalmente robustas y no son susceptibles al corte
daos, lo que significa que el sistema de impulsin radial
(por ejemplo, turbinas Rushton) y altas tasas de agitacin
ser empleado. Esto proporciona a tales biorreactores una
capacidad de transferencia de masa, lo que permite metabolizar rpidamente,
cultivos de clulas microbianas de alta densidad celular que
y aumentando la cantidad de producto que
Publicada: 25 de Mayo de 2006
Las fbricas celulares microbianas 2006, 5: 21 DOI: 10.1186 / 1475-2859-5-21
Recibido: 18 de febrero de 2006
Aceptado: 25 de mayo de 2006
Este artculo est disponible en:
http://www.microbialcellfactories.com/content/5/1/21
2006 Betts y Baganz; licenciatario BioMed Central Ltd.
Este es un artculo de acceso abierto distribuido bajo los trminos de la licencia
Creative Commons Atribucin (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0 ),
que permite el uso irrestricto, la distribucin y la reproduccin en cualquier
medio, siempre que la obra original se cita adecuadamente.

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los bioprocesos pueden rendir. Aunque las clulas de mamferos no
tienen una pared celular protectora y, por lo tanto,
sensibles y requieren un manejo ms suave que su
riales, la mayora de las lneas celulares comercialmente
pueden crecer en biorreactores de tanque agitado, aunque con
modificaciones de diseo. Por ejemplo, el cizallamiento de baja cizalladura,
pueden utilizarse impulsores axiales de tipo Rushton tur-
bines para circular suavemente las clulas y nutrientes en un deflector-
ambiente libre; y protectores de cizallamiento tales como suero o
Pluronic F-68 se puede aadir al medio de cultivo celular [ 4] .
Adems del desarrollo de frmacos teraputicos, los MBR pueden
ser utilizados para el desarrollo del medio de crecimiento; mejora de la tensin
mediante la ingeniera metablica o la evolucin dirigida
cin; y la llamada prospeccin biolgica de productos naturales -
todos los cuales son procesos que llevan una gran carga de biorreactores.
den que puede ser aliviado por el uso de HT miniatura
dispositivos. En particular, los MBRs pueden reducir la
costo de la gran cantidad de clulas cultivadas,
necesarias para el desarrollo de los bioprocesos,
nivel de paralelismo y rendimiento alcanzable, y como
tales son de creciente inters [ 5- 7]. Es importante que
cuando se utilizan para el desarrollo de procesos pueden
a fin de imitar con precisin la bio-
reactores para que la cintica del crecimiento y la expresin del producto -
optimizado a escala miniatura - se puede esperar que aumente la escala
cuantitativamente.
Aunque sin duda son ms capaces de operacin HT
que los biorreactores convencionales a escala de laboratorio, MBRs
actualmente estn menos instrumentados y tambin tienen
oportunidad limitada para el muestreo fuera de lnea debido al
volmenes utilizados (que van desde aproximadamente 0,1 ml hasta
aproximadamente 100
ml); esto significa que actualmente existe un compromiso entre
contenido informativo en trminos de calidad y cantidad de datos
disponible en el biorreactor obtenido tanto en lnea
y la medicin fuera de lnea y el rendimiento experimental,
ilustrado en la Figura 1 . Como ningn dispositivo ha resuelto todava
los retos de miniaturizar, es decir, imitar con precisin
condiciones del proceso a gran escala y, sin embargo,
funcionalidad completa de los biorreactores convencionales,
intencin de los autores de revisar la evolucin actual
y luego indicar dnde es probable que la tecnologa
progreso en el futuro para que los actuales beneficios
y la brecha de informacin que existe actualmente
entre las plataformas de biorreactores miniatura y de laboratorio
reducido. Esta revisin ha agrupado los diferentes MBRs
descritos en base a su mtodo de agitacin (es decir, shak-
agitacin o rociado con gas) con referencia al tipo de
biorreactores convencionales que imitan o se derivan
de; las principales especificaciones y caractersticas de los proto-
tipo y cultivo comercializado de clulas en miniatura
dispositivos que pueden funcionar en paralelo se resumen en
Tabla 1 .
Sistemas de biorreactores en miniatura sacudidos
Los sistemas sacudidos se han utilizado en la bioprocesa-
primeros intentos de cultivar microbios productores de antibiticos
culturas en la dcada de 1940. Todava se utilizan ampliamente en la industria
y la academia como una herramienta para el descubrimiento de frmacos;medios
de comunicacin
y optimizacin de productos; y el proceso de desarrollo [ 8 -
11 ]. Comprenden muchos diseos y volmenes diferentes,
que van desde frascos de agitacin de cientos de mililitros derecho
hasta placas de microtitulacin (MTPs) de unos pocos microlitros en
volumen.
Frascos de agitacin
Durante los ltimos cincuenta aos, los cientficos han utilizado el cultivo celular
en frascos de agitacin como medio de desarrollo de
pequea escala, con volmenes que van desde ca. 10 ml a 500
ml [ 12] . Los frascos de la agitacin vienen en una variedad de formas, pueden
ser
hecho de vidrio o plstico y algunos tienen deflectores para ayudar
aireacin y mezcla. Pueden ser agitados usando cualquiera de
agitacin orbital o lineal y puede alojarse en una
ture-controlled cabinet. Los factores que afectan a los cul-
incluyen el tamao del buque, el volumen de llenado,
material, geometra de deflectores, frecuencia y tipo de agitacin
del tapn utilizado para sellar el recipiente. Buchs [ 12] afirma que
se ha estimado que los frascos de agitacin se utilizan para ms del 90%
de todos los experimentos culturales en la industria y el mundo acadmico,
creciendo una amplia gama de microorganismos, por ejemplo bacterias
[ 13 ], hongos [14], y levaduras [15], as como de mamfero
clulas [8 ]. Es fcil ver por qu son tan ampliamente utilizados:
son una forma barata y efectiva de reproducir per-
formando muchos tipos de cultivos de clulas
para el desarrollo de procesos. Adems, son fciles de
Ilustracin del trade off en produccin de informacin versus HT
que existe actualmente para el cultivo de varias clulas
dispositivos a diferentes escalas (adaptado de Doig et al., 2006
[3])
Figura 1
Ilustracin del trade off en produccin de informacin versus HT
que existe actualmente para el cultivo de varias clulas
dispositivos a diferentes escalas (adaptado de Doig et al., 2006
[3]). Esta figura muestra que a medida que los biorreactores aumentan de escala,
normalmente hay ms informacin de proceso disponible debido a
sistemas mejorados de supervisin y control.
Biorreactor completamente instrumentado
1 a 100 l
Frascos de agitacin
25 a 500 ml
Microplacas
0,1 a 5 ml
Vasijas de pequea escala
10 a 100 ml
Rendimiento experimental
PAG
informacin del rocess
rm
atio
norte
AV
aila
ble

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operan y son en gran medida impermeables a las complicaciones
ciones. Durante la mayor parte del largo perodo de uso
hubo poca modificacin significativa de la tecnologa
[ 16 ], sin la supervisin en lnea de las culturas y manual de
adiciones y muestreo. Slo recientemente ha habido
introduccin de frascos de agitacin instrumentados, diseados
medir y potencialmente controlar los niveles de pH y DOT
en lnea [ 15 , 17]. pH y oxgeno disuelto pueden medirse
utilizando un colorante de xido de rutenio que cuantifica fluorescencia
en presencia de iones hidrgeno o oxgeno respectivamente
cuando se excita con una lmpara LED. Este colorante puede ser
incorporado en un parche y adherido dentro de un matraz o
recubierto sobre la punta de una sonda de fibra ptica y
inmerso en la cultura de inters. Otros parmetros
que ahora se pueden medir en lnea incluyen transferencia de oxgeno
(OTR) y tasa de evolucin del dixido de carbono (CER) - y
de estos el cociente respiratorio (RQ) se puede derivar
[ 7 ]. Tener estos parmetros monitorizados en lnea
Tabla 1: Comparacin de los sistemas de biorreactores en miniatura (MBR)
que se ha informado que son capaces de funcionar en paralelo
ilustrando las especificaciones tcnicas y de rendimiento clave.
Dispositivo/
Referencia
Residencia en
Volumen (ml)
Agitacin/
Aireacin
pH, DOT y
sobredosis
instrumento
en
KLa (h-1)

Mtodo
Multiplexing
Fedbatch-Pro,
http: //
www.dasgip.de
Frasco de agitacin
50 - 500
Agitador orbital;
Superficie
pH a travs de
esterilizable
sonda
N/R
N/A
diecisis
MicroReactor,
http: //
www.applikon-
bio.com
MTP +
microfabricatio
norte
3-5
Agitador orbital
(hasta 800
rpm); Gas
rociar
pH y DOT
va ptica
sondas
N/R
N/A
24
SimCell, http: //
www.bioprocesso
rs.com
Microfludico
chip
0,3 - 0,7
Rotacin de
Chips MBR;
Superficie a travs de
membrana
pH, DOT y
OD en lnea va
lectura celular
estacin
Hasta 500
Estimacin CFD
1500
MBR matriz [59]
MTP +
microfabricatio
norte
0,25
Agitador orbital
(175 rpm);
electroqumico
O generacin
2

pH (ISFET
sensor) y OD
pticamente
Desconocido
N/A
8
Polmero-MBR
[41, 56]
Microfabricatio
norte
0,15
Agitador magntico
bar (200-800
rpm), Superficie
va membrana
pH, DOT y
OD va ptica
sondas
20 - 75
Dinmica
gasificacin
8
Agitador-Pro
matraz, http: //
www.dasgip.de
STR
200 - 275
Agitador magntico
barra (10 - 1000
rpm); Sparger
pH y DOT
esterilizable
sondas
N/R
N/A
diecisis
Xplorer, http: //
www.bioxplore.ne
t
STR
Hasta 100
Turbina nica
impulsor (100 -
2000 rpm);
Sparger
pH, DOT y
Sondas OD
400
Dinmica
gasificacin
diecisis
Cellstation,
http: //
www.fluorometrix
.com
STR
Hasta 35
Paleta doble
impulsor (10 -
1000 rpm);
Sparger
pH, DOT y
OD va ptica
sondas
N/R
N/A
12
MSBR [27, 40]
STR
18
Triple turbina
impulsor (hasta
7000 rpm);
Sparger
pH y DOT
va ptica
sondas
Hasta 480
Dinmica
gasificacin
N/R
Bioreactor
bloque [39, 44]
STR
8 - 12
Gas inductor
impulsor simple
(hasta 4000
rpm)
DOT pticamente;
pH y OD va
lector de placas
700 - 1600
Dinmica
gasificacin
48
Paralelo BCR
[52, 53]
Columna de burbujas
200
Rociado de gas
pH y DOT
sondas
Hasta 540
Dinmica
gasificacin
diecisis
MBCR [49, 51]
Columna de burbujas
2
Rociado de gas
pH y DOT
va ptica
sondas
Hasta 220
Dinmica
gasificacin
48
Nomenclatura: SF = matraz de agitacin, MTP = placa de microtitulacin,
MSBR = biorreactor en miniatura agitado, STR = reactor de tanque agitado,
MBCR = miniatura
DOT = oxgeno disuelto, OD = densidad ptica, ISFET = transistor de efecto de
campo selectivo de iones, N / A = no aplicable, N / R =
no reportado.

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estrategias ms sofisticadas de cultivo celular para
ser llevada a cabo como la alimentacin del substrato basada en cambios
en cultivo de caldo de pH debido al metabolismo celular [18 ] . Promover-
ms, Akgn et al. [11 ] han desarrollado recientemente una novela
sistema de frasco de agitacin que es capaz de operacin continua
y por lo tanto aumenta el alcance del bioproceso paralelo
desarrollo utilizando sistemas sacudidos.
Sin embargo, una importante limitacin de los frascos de agitacin es su reli-
aireacin de la superficie, lo que conduce a una reduccin de la trans-
fer con respecto a los reactores de tanque agitado (STRs). Wittmann et al.
[ 17 ] inform de coeficiente de transferencia de masa volumtrica global
(k L a) valores de hasta 150 h -1 en matraces de agitacin. valores k L a de
151 h-1 (600 ml, 200 rpm) a 277 h-1 (100 ml, 200 rpm)
se han registrado en un nuevo frasco de agitacin en forma de caja
sistema desarrollado por Kato y Tanaka [9 ] , que son sufi-
mente alta para realizar la mayora de los cultivos de clulas
inhibiendo el crecimiento microbiano. Estos investigadores
membranas permeables al gas incorporadas en la parte superior
de sus prototipos de frascos, lo que permiti
flujo de gas eficaz en el recipiente durante la agitacin,
problema encontrado en los frascos convencionales de
introduciendo ms aire en el sistema de una manera estril. por
el propsito de los cultivos donde la demanda de oxgeno es
alta, la introduccin de deflectores puede aumentar el OTR a
frecuencias de agitacin [ 19 ]; sin embargo, altas velocidades pueden conducir
a las salpicaduras excesivas que pueden causar la permeabilidad al gas
(a menudo hecho de algodn) en la parte superior del frasco para
se bloquean a travs de la saturacin del lquido. Tal
se ha demostrado que la obstruccin reduce gravemente el
capacidad de transferencia del sistema, lo que podra
LEMS si un aerobe rpidamente-respiran se cultivaba [ 20] .
El hambre por oxgeno podra ralentizar la tasa de crecimiento,
produccin y / o generan ndices no deseados de
subproductos txicos por ejemplo, formacin de etilo por Escherichia coli
[ 21] .
Placas de microtitulacin
MTPs (tambin llamadas placas de micropocillos) se introdujeron por primera
vez
en 1951 como una plataforma para pruebas diagnsticas y todava
ampliamente utilizado en las ciencias de la vida [22 ]. Ellos manejan diagnsticos
tic tales como ensayos inmunoabsorbentes ligados a enzimas
que aprovechan la capacidad de realizar muchas identi-
en paralelo ya muy pequea escala. Es esto
ventaja que ha llevado a que los MTP se utilicen como
biorreactores agitados en la etapa de seleccin del proceso
rrollo para la evaluacin de la lnea celular [23 ] . Las placas suelen ser
fabricado en plstico, aunque el vidrio y el metal
existen. La mezcla puede lograrse utilizando una pipeta de aspiracin-
barras agitadoras agitadas magnticamente; sin embargo orbital
agitacin de toda la placa sobre un bloque calentado capaz de
controlar la temperatura del cultivo es, con mucho, la
mon mtodo. El nmero de pozos contenidos en los MTP es
tpicamente 6, 12, 24, 96 y 384, con hasta 1536 y 3456
pozos ahora disponibles para el tamizado de alto rendimiento
(UHTS) [24 ]. Los pozos pueden ser rectangulares o cilndricos.
cal, con geometras cuadradas ayudando a mezclar y oxgeno
transferencia imitando la accin de deflectores. Cuadrado-bot-
las placas de vidrio actan de manera similar limitando el vrtex de
lquido en el interior del pozo y as aumentar la turbulencia
del sistema. Debido al aumento de la superficie
por una mayor disipacin de fluido por los lados de cada micropocillo
y el aumento de la fuerza motriz para el oxgeno causado por una mejor
mezcla, OTR es proporcional a la amplitud de la sacudida y
frecuencia, por lo que el aumento de estos parmetros
beneficioso [23 ]. Adems, Hermann et al. han informado
OTR sea inversamente proporcional al volumen de llenado, particu-
larmente a mayores frecuencias de agitacin [25 ]. Sin embargo, hay
un punto ms all del cual cualquier aumento en la agitacin
derrame del lquido del proceso (a menos que el pozo est tapado -
que tiene sus propios problemas, con reduccin de la transferencia de oxgeno
en el pozo).Al igual que con los frascos de agitacin, el oxgeno relativamente
bajo,
capacidad gen-transferencia de MTP (k L a valores de hasta 200 h -1
en placas de 96 pocillos) se deriva del hecho de que se sacuden
y se basan en la aireacin de la superficie para la transferencia de masa.
En contraste, Kensey et al. [26 ] informaron de valores K L usando el
mtodo de oxidacin de sulfito de hasta 1600 h-1 en un 48 pocillos,
geometra estndar MTP con orbital de 3 mm a 1400
rpm utilizando un volumen de llenado de 300 l, que es comparable
con los STR convencionales. Mediante el uso de una proporcin calculada-
constante, este equipo fue capaz de relacionar el oxgeno
capacidad de transferencia obtenida mediante un mtodo
medios biolgicos.
Tambin hay mtodos disponibles para la determinacin de k L A en
que proporcionan datos que son directamente comparables
con los valores obtenidos en condiciones de proceso. por
ejemplo Duetz et al. [23 ] y Doig et al. [49 ] estimada k L a
por el balance de masa en condiciones de limitacin de oxgeno
desde el crecimiento lineal de Pseudomonas putida en una MTP
y Bacillus subtilis en una burbuja COL- prototipo en miniatura
(MBCR), respectivamente. adems, el
mtodo dinmico de gasificacin a menudo es preferible a la
mtodo de oxidacin de sulfito para la determinacin de k L un Val-
ues como se lleva a cabo normalmente en agua [ 27]. Por consiguiente
este sistema es coalescente y, aunque no idntico a bio-
lgico, es ms representativo del cultivo celular
que las condiciones totalmente no coalescentes de la
el mtodo del sulfito sdico. Sin embargo, esta tcnica
difcil de usar en los MTP, ya que la agitacin tiene que
antes de la medicin de DOT para obtener una lectura exacta,
alterando as el entorno de transferencia de masa a una
momento. Debido a los problemas asociados con el uso
mtodos establecidos para k L una determinacin en MTP nos
han desarrollado recientemente un nuevo mtodo basado en
la bio-oxidacin del catecol por la enzima catecol-2,3-
dioxigenasa [ 28] . Este mtodo produjo valores de A K L similares
en comparacin con el mtodo dinmico de extraccin de gases y
es rpido y no requiere ninguna suposicin sobre el

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cintica creemos que este mtodo es muy adecuado para k L a
evaluacin en MTPs y otros dispositivos de pequea escala.
Los MTP tambin sufren un grado de la misma caracterstica que
los hace atractivos como un dispositivo de alto rendimiento - pequeo
volmenes - porque la evaporacin puede eliminar una
proporcin del fluido en el pozo [ 7]. Memoria transpirable
pueden colocarse en la parte superior de las placas para
evaporacin, pero las capacidades de transferencia de oxgeno
reducido. Zimmermann et al. [29 ] inform sobre un miem-
brano que alcanz un grado moderado de retencin de agua
y transferencia de oxgeno; sin embargo, los valores K L se redujeron
un factor de cinco, lo que exacerba an ms el problema de
capacidad de transferencia de oxgeno inherente a los sistemas sacudidos.
Aunque la evaporacin es un problema potencial en todos los MBR,
Los MTP parecen ser ms susceptibles a esto debido a
utilizando los volmenes de proceso ms pequeos. MTPs de 3456
los pozos ofrecen el rendimiento ms alto de cualquier clula en miniatura
disponibles, y se han mostrado
Titularmente para sostener el crecimiento de ovario de hmster chino
(CHO) [ 24] , aunque una en volumen de proceso tales minsculo
ume (1 - 2,2 l) significa que este dispositivo probablemente no
capaz de imitar los mecanismos por los cuales las grandes sacudidas
funcionamiento de los buques; por ejemplo, los efectos de la tensin superficial
se extienden por todo el pozo, limitando severamente las
tidad. Adems, no se debe eliminar el medio
el muestreo sera posible.
Aunque los MTP se utilizan ampliamente en la investigacin de descubrimiento
han sufrido una falta de instrumentacin en un
manera similar a sacudir frascos, limitando el rango de datos
pueden ser recogidos. Sin embargo, recientemente se han
desarrollado para medir pH y DOT en tales sistemas [ 30 -
32 ]. Por ejemplo Lye y colegas han estudiado la
Efecto del control del pH sobre los rendimientos de la biomasa y la cintica de
crecimiento
de una bacteria filamentosa en una MTP [ 33 ]. A pesar de
de las limitaciones inherentes de MTPs cuando se realiza la
cultivos, se ha avanzado en la caracterizacin de
la mezcla, la transferencia de masa y la instrumentacin de
estos buques, lo que significa que las ventajas nicas de estos
dispositivos en trminos de potencial de automatizacin y HT intrnseco
estn llevando a su creciente uso como
MBRs.
Tubos giratorios
Proceso de cultivo de clulas de mamferos en pequea escala a pequea escala
el desarrollo ha sido tradicionalmente llevado a cabo en matraces T
biorreactores de pequea escala (a menudo frascos
de 500 ml de volumen) [34 , 35 ]. Aunque inicialmente
dispositivos no definidos, el trabajo se ha llevado a cabo
el entorno de ingeniera en los frascos giratorios que
ha hecho ms fciles de usar como recipientes de escala hacia abajo [ 36] .
Sin embargo, el hecho es que sus relativamente grandes
volumen hace que no sea viable como una tecnologa HT,
lo que significa que existe un requisito real para
biorreactores para ser utilizados conjuntamente con mamferos
para cultivos celulares paralelos. Recientemente se han
sido desarrollado y utilizado como un proceso a pequea escala
herramienta para el cultivo de clulas de mamferos. El giro
tubos descritos por primera vez por De Jesus et al. [37 ] parecen ofrecer
varias ventajas sobre los frascos de centrifugado, como
volumen del proceso. Desde entonces han sido comercializados por
ExcellGene SA (Valais, Suiza) con el nombre
TubeSpin Satellites. Estos recipientes de cultivo consisten en modi-
tubos de centrifugacin de 50 ml montados sobre un
agitador orbital colocado en una incubadora. Los volmenes culturales son
5 ml a 35 ml por reactor y se lleva a cabo anlisis fuera de lnea
utilizando tubos enteros sobre una base sacrificial. Este sistema
no tiene la instrumentacin necesaria para llevar a cabo
cultivos de clulas de mamferos completamente caracterizados; sin embargo,
es una herramienta til para la optimizacin de los medios y la productividad
y da al desarrollo del cultivo celular un
rendimiento, con los desarrolladores de este sistema
reportando la capacidad de procesar 1000 culturas diferentes por
semana. El volumen relativamente grande y la baja evaporacin
las tasas encontradas en este dispositivo son activos al
clulas de mamferos de crecimiento lento, donde las
muchos das de duracin, pero hay que sealar que
ninguna caracterizacin de ingeniera de mezcla y trans-
se ha llevado a cabo en este sistema y por lo tanto los tubos
se utilizan en gran medida para las aplicaciones de cribado.
Sistemas de biorreactores con agitacin en miniatura
Biorreactores con agitacin en miniatura (MSBRs) basados en
se han desarrollado como una alternativa a la
sistemas MBR agitados para el desarrollo de procesos en etapas tempranas
y caracterizacin celular. Tpicamente estos dispositivos son
biorreactores a escala de laboratorio y, por lo tanto, permiten
un mayor potencial de vigilancia y control que otros
plataformas de biorreactores en miniatura. Por lo general, son
volumen intermedio entre los MTP y los frascos de agitacin
[ 38 , 39] y los materiales de construccin variar ampliamente, con Per-
spex [ 38 ], Pyrex [40], poli-metacrilato de metilo (PMMA)
[ 39, 41] y acero inoxidable [40,42] todo siendo utilizado. Figura 2
ilustra nuestro prototipo de volumen de trabajo de 18 ml MSBR
que se construye de acero inoxidable y Pyrex y
equipado con sondas pticas para medir pH y DOT
en lnea. Este buque se ha caracterizado en trminos de su
eficiencia de mezcla y oxgeno transferencia de la capacidad de [40 ] . Eso
ha demostrado ser capaz de imitar las tcnicas convencionales
STRs en cultivos celulares de diferentes reologa, sensibilidad al corte
la demanda de oxgeno (es decir, la bacteria filamentosa
Saccharopolyspora erythraea que produce la eritromicina y
E. coli recombinante que produce ADN de plsmido y anti-
fragmento de cuerpo, respectivamente [ 40 ]). El dispositivo podra
crecimiento de una variedad de organismos debido a su
altos valores de k L a (480 h -1 a 7000 rpm utilizando el dinmico
gaseamiento) y tiempos de mezclado cortos (4,8 s al
7000 rpm - ms de dos veces ms rpido que un buque de 7 l basado en
entrada de potencia especfica). Altas tasas de transferencia de oxgeno

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crecimiento portado de organismos que respiran rpidamente (E. coli),
mientras que la mezcla efectiva permiti al buque mantener
condiciones homogneas cuando se trata de
caldos mentales - a menudo encontrados cuando el crecimiento filamen-
todos los organismos. La velocidad de agitacin tambin podra ser muy
fuertemente controlados, lo que ayud a prevenir
microorganismos sensibles al cizallamiento a travs de
entrada de alimentacin. Adems, el consumo de energa gaseada
del buque, lo que ha dado como resultado el clculo
la potencia del impulsor en una amplia gama de
las condiciones de funcionamiento y, por lo tanto,
ciones a reducirse fiablemente sobre la base de la igualdad de
entrada de alimentacin CIFIC [27 ]. Aunque este MSBR es un prototipo,
sera posible multiplexar dicho dispositivo con el fin de
obtener un mayor rendimiento.
Proporcionando agitacin y aireando activamente el recipiente,
las tasas de transferencia de masa cerca de un convencional,
han sido reportados para otros MSBRs en el litro-
atura Por ejemplo, Lamping et al. [38 ] Valores una reportado K L
de 360 h -1 a 1 VVM y 3000 rpm utilizando el gas dinmico
en un prototipo MSBR similar en diseo a
que se muestra en la Figura 2 . Adems, el mismo equipo
la transferencia de oxgeno en un prototipo de minia-
bioreactor de ture usando la dinmica de fluido computacional
(CFD), que se basaba en el anlisis de los
parmetros del campo de velocidad, tamao de la burbuja,
y las tasas de disipacin de energa dentro del MBR
[ 38] .
Puskeiler et al. [39 ] Valores K L inform recientemente de ms de
700 h-1 (12 ml de volumen) y tan alto como 1,600 h-1 (8 ml VOL-
ume) para un MSBR agitado a 2300 rpm. Este sistema utiliza
un nuevo impulsor inductor de gas que da como resultado una
capacidad de transferencia de oxgeno. En ese estudio,
Se emple el mtodo sing-a cabo para medir k L a, aunque
Ilustracin tcnica de un 18 ml volumen de trabajo en miniatura agit biorreactor
(MSBR) prototipo [40]
Figura 2
Ilustracin tcnica de un 18 ml volumen de trabajo en miniatura agit biorreactor
(MSBR) prototipo [40].
Motor
Cmara
Chaqueta
Entrada de aire
Salida de aire
23mm
62 mm
24mm
10mm
10mm
12mm
Sparger
Deflector
Impulso
8,5 mm
Puertos
ptico
sonda de pH
ptico
Punta de prueba

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se utilizaron condiciones no coalescentes, lo que
comparado con los valores de los medios de cultivo celular o
lescing fluidos difcil. En el mismo trabajo, la capacidad del
para mantener los cultivos de clulas alimentadas
descrito, que ilustra el potencial de la miniatura bio-
tecnologas de reactores para apoyar las tecnologas
estrategias ms importantes. Adems, la viabilidad de
monitorizacin y control. El dispositivo descrito
en ese informe, diseado en asociacin con H + P
Labortechnik AG (Oberschleissheim, Alemania) es un
rada ("Bloque Bioreactor") capaz de soportar
48 celulares cultivos simultneamente [ 6 , 43]. Un integrado
el sistema de manejo de lquidos permiti medir el pH en lnea
con una frecuencia de una hora dispensando muestras de 20
l en MTP comercialmente disponibles que contienen
parches de pH. Ocho minutos ms tarde, el mismo muestreo de lquido
luego se ajust el pH usando NaOH 4 M. Mientras que el
el manejo automatizado de lquidos para controlar el pH es una
solucin, los autores reconocieron que esto puede ser
no es prctico si se utiliza con organismos sensibles que
ajuste del pH ms sensible. Sin embargo, el informe
establece que se est desarrollando un sistema mejorado de
con socios industriales para proporcionar una mayor
monitorizacin, lo que puede aumentar el nmero de
fermentaciones capaces de ser monitoreadas efectivamente. PUNTO
se midi en el sistema utilizando un prototipo de sensor
bloque con sondas pticas, aunque slo 8 reactores del
Se monitorearon 48 recipientes de cultivo simultneamente
[ 44 ]. Este dispositivo tambin se puede integrar con
equipo robtico para realizar tareas de manipulacin de
como la inoculacin, la alimentacin y muestreo [ 6] .
Utilizando un enfoque diferente Fluorometrix Corporation
(Stow, Massachusetts, EE.UU.) ha desarrollado un sistema de
sel MSBR construccin denominada Cellstation . Este MBR utiliza
tecnologa ptica para permitir in situ la monitorizacin en lnea de
hasta 12 cultivos paralelos para pH [45 ], el DOT [46] y
densidad ptica (OD) y la agitacin es proporcionada por
impulsores de tipo paleta. Cada recipiente tiene un volumen de trabajo
de hasta 35 ml y est unido a un carrusel que gira
permitiendo que todos los buques sean muestreados y
tamente. El sistema de sensores pticos ha sido validado por
mostrando la consistencia de los sensores de pH y DO durante un
perodo de 70 horas en un proceso de cultivo de clulas de mamfero
[ 47] . Adems, el grupo de investigacin de Rao en la
Maryland, que tiene estrechos vnculos con la empresa, ha
recientemente publicado detalles de dos prototipo de 24 pozos MSBR
sistemas que mejoren an ms el rendimiento de este
nology [ 48] .
Paralelamente a estos desarrollos de MSBR, Dasgip AG
(Jlich, Alemania) han introducido el Frasco Agitador-Pro,
parte de su serie de clulas-cultivo por cargas alimentado-Pro , que
comprende hasta 16 recipientes de cultivo (volumen de trabajo 200 -
275 ml) y ofrece una transferencia de oxgeno por agitacin
capacidad y una capacidad de lote alimentado. El pH y el DOT pueden ser
monitorizados utilizando sondas esterilizables estndar y control-
conducido independientemente para cada recipiente por el cido / la base
automticos
adiciones lquidas y variacin de la velocidad de flujo de aire / agitacin
respectivamente. La adicin de sustrato se puede vincular a
DOT o puntos de activacin de pH que permiten una alimentacin totalmente
automatizada,
capacidad de lote. La combinacin de agita-
(entre 10 - 1000 rpm) y el rociado de gas indica
que este sistema es capaz de soportar el crecimiento rpido
a una elevada densidad celular y, por lo tanto,
ser tiles en el desarrollo de tales bioprocesos. Cmo-
el volumen de trabajo utilizado es relativamente grande
comparado con la mayora de los otros sistemas discutidos y
se complica por la presencia de un gran nmero de
tubos y alambres para adiciones y medidas. Una vari-
hormigas de este sistema que contienen hasta 16 matraces
equipado con sondas de pH tambin se ha desarrollado
ing alimentacin intermitente y el control de pH paralelo [ 6] .
Como una alternativa ms pequea a los STRs a escala de laboratorio que
operacin LEL tal como los Sixfors sistema desarrollado por
Infors AG (Bottmingen, Suiza), los investigadores de Uni-
Universidad de Londres, en asociacin con el Grupo HEL
El negocio de biorreactores BioXplore (Barnet, Reino Unido)
un sistema MBR de 4 - 16 cmaras
con un control totalmente integrado y automatizado de DOT y
pH. Aunque cada buque tiene un volumen de trabajo
ume de 100 ml, estando as hacia el extremo superior de
La tecnologa MSBR, el desarrollo de soft-
ware para monitorear estos biorreactores es un paso hacia la
MBR con el mismo grado de control y automatizacin
que existe con los biorreactores convencionales.
Reactores miniatura de columna de burbuja
Las columnas de burbujas utilizan burbujeo de gas en vez de agitacin como
un medio para promover la mezcla y la transferencia de masa de oxgeno
para el cultivo celular. Como alternativa a la agitacin o sacudida
devices we have developed a miniature bubble column
reactor (MBCR) that is based on an MTP with porous
membranes (frits) acting as the entire base to each indi-
vidual well [ 49 ]. Air permeates the frit and flows up
through each well, providing oxygen for each growing cul-
tura Provided that each frit is manufactured to a high
specification and has an identical degree of porosity, the
flow rate to each column is equal and can be calculated.
This prevents air-flow rate variance artificially affecting
resultados.
Doig et al . [49 ] detail the construction and characterisa-
tion of a prototype 12-well MBCR that is capable of sup-
porting the aerobic cultivation of Bacillus subtilis cultures
con cada columna que tiene un volumen de trabajo de 2 ml. k L una
valores se informaron hasta 220 h -1 utilizando el gas dinmico
cantar-a cabo el mtodo a una velocidad superficial del gas de 0,02 ms -1 .
Una de las ventajas de este tipo de dispositivo es que, a diferencia de una

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MTP, la aireacin se realiza mediante burbujeo directo. Esto tiene el efecto de
el aumento de la capacidad de transferencia de masa de oxgeno del sis-
TEM con relacin a un MTP porque burbujeo aumenta el sur-
rea de la cara disponible para la transferencia de masa gas-lquido con relacin a
aireacin superficial solo. Aunque algunos k L a Los datos de MTP
detallado en esta revisin son sustancialmente ms alta que la
MBCR valores medidos, hay que sealar que muchos
de los valores de MTP fueron derivadas bajo con- bastante artificial
diciones diseado para maximizar la transferencia de oxgeno, mientras que la
k L valores de A para la MBCR se muestra ms arriba seran reproduc-
Ible en condiciones de cultivo celular.
Adems de una gran rea de superficie disponible para el oxgeno
transferencia, la falta de agitacin en MBCRs significa que el poder
de entrada, y por lo tanto la transferencia de oxgeno es ms fcil de modelar
que en los RTS, ya que hay un menor nmero de parmetros a tener en cuenta,
con velocidad superficial del gas y la distribucin de tamao de burbuja
siendo los principales parmetros de ampliacin / escala reducida de la burbuja
columnas [50 ]. Adems, el dispositivo est parado, como
en contraposicin a sacudidas, lo que permite una instrumentacin ms fcil
cin como la agitacin de la mayora de los sistemas de MTP tiene que ser
detenido
antes de la medicin en un lector de placas puede tener lugar. los
simplicidad mecnica junto con la posibilidad de alta oxi-
transferencia de gen y la facilidad de muestreo hace MBCRs adecuado
para el cultivo de clulas en paralelo. Esto podra ser con el propsito
de media o mejora de la cepa, y en etapa temprana proc-
ess el desarrollo, entre otros. MBCRs podran ser tambin
utilizado para imitar y predecir el rendimiento de gran escala
reactores. En este sentido, hemos demostrado recientemente una
buena correlacin de la tasa de transferencia de oxgeno con volumtrica
el consumo de energa (P / V) para miniatura (2 ml) y labo-
ratorio escala (100 ml) columnas de burbujas utilizando difusores de gas
Diagrama del reactor de columna de burbujas en miniatura (MBCR) prototipo
diseado y desarrollado en la UCL
figura 3
Diagrama del prototipo reactor de columna de burbujas en miniatura (MBCR)
diseado y desarrollado en la UCL.
Entrada de aire
Flujo de aire
de entrada de agua caliente
ptico de oxgeno
y sensores de pH

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con el mismo tamao de poro que permite la prediccin de k L una
como funcin de P / V [51 ]. En el mismo trabajo tambin mostramos
un comparable rendimiento cultivo celular utilizando el
MBCR con relacin a un STR a escala de laboratorio basado en igual
k L valores a. Estos resultados indican el potencial de la
MBCR como un dispositivo a escala reducida. Este prototipo MBCR
dispositivo no se instrument, aunque en posteriores
trabajo que hemos equipado con este dispositivo ptico fluores-
cencia parches y lo utiliz para medir el DOT durante cul- celular
tivations. La temperatura era capaz de ser controlado por
que une el dispositivo a un bao de agua y circulacin tem-
agua Ature controlado a travs del espacio cerrado
entre las columnas (vase la figura 3 ). MBCRs similares tienen
ha desarrollado previamente por otros [ 52 , 53]; sin embargo,
estos barcos utilizan volmenes de ca. 200 ml y son por lo tanto
dos rdenes de magnitud ms grandes que el dispositivo descrito
por Doig et al . [49 ], lo que limita el grado de opera- paralelo
cin alcanzable.
Otros dispositivos en miniatura
Utilizando el concepto de una placa de sensor integrado, Micro-
Tecnologas de reactores (Mountain View, CA, EE.UU.) tienen
desarrollado un sistema de cultivo de clulas hbridas basada en una
sacudido, desconcertado a MTP de 24 pocillos con una configuracin bien
que permite la transferencia de calor uniforme a travs de la placa. la suge-
congestionadas de volumen de trabajo de cada rango bien de 3 a 5 ml
y el aire se introduce en la fase lquida por burbujeo
a travs de sinters situados en la base de cada pocillo, impulsando
capacidad de transferencia de oxgeno en comparacin con parecida diseado
sistemas sacudido. Este cultivo comercializado recientemente
dispositivo (con licencia en Europa por Applikon Biotecnologa
AB, Pases Bajos) se instrumenta usando fibra ptica
sondas para supervisar DOT y pH en lnea en todos los pozos simul-
neamente. El dispositivo tambin permite el control independiente de
la temperatura, DOT, pH (a travs de burbujeo de gas) y caudal de aire
para todos los 24 pocillos. El dispositivo supera uno de los funda-
problemas mentales cuando se trata de HT basados en MTP
dispositivos - es decir, cmo se adaptan a todos los pocillos de instrumentacin
contenida dentro de la placa - uniendo todo sensor
parches a la base de cada pocillo y despus la colocacin de la
toda placa sobre una plataforma incubadora de agitacin que tiene
circuitos de instrumentacin integrada, permitiendo de ese modo
cada pocillo para ser controlado de forma independiente. El principal
aplicacin es probable que sea de las primeras etapas del proceso de
desarrollo (por ejemplo, la seleccin de cepas y optimizacin medio
cin). No hay datos disponibles pblicamente sin embargo, en la ingeniera
caracterizacin de la mezcla y la transferencia de oxgeno y com-
preforma del rendimiento de cultivo con bioreac- a escala de laboratorio
datos de Tor.
Se han producido avances recientes dirigidas a reducir
la escala de los MBR a volmenes de proceso sub-mililitro.
Aunque estos sistemas en miniatura como la gran apuesta
para la aplicacin HT, hay un lmite prctico a lo pequeo
volmenes de cultivo pueden llegar a ser. Los dispositivos que utilizan
demasiado
pequea un volumen de proceso puede resultar inviable para llevar a cabo
cultivos con monitoreo y muestreo suficiente.
Aunque OD, DOT y pH son capaces de ser controlados
lnea, otros parmetros crticos tales como concen- sustrato
tracin y de productos rendimientos no son con frecuencia; De todos modos, eso
puede ser posible eludir este problema con certeza
procesos por los marcadores que incorporan tales como fluores- verde
ciento de protenas en el producto [30 , 54]. La evaporacin puede
convertido en un problema importante en tales extremadamente pequeo cul-
volmenes tura si se trabaja con mucho bacteriana y mamma-
procesos de cultivo celular Lian; Tambin, dada la extremadamente
volumen de proceso pequea sera tcnicamente difcil
para controlar con precisin el pH mediante la adicin de lquido. Nevada-
ertheless, la escala de operacin representa un radical
avanzar en el diseo de los MBR y aumenta significativamente
su uso potencial para el cultivo de clulas HT en paralelo.
En este sentido, el grupo de investigacin de Jensen en el MIT tiene desa-
OpEd un sub-mililitro MBR prototipo [ 55 ] que ha sido
modificado [ 56] y se extendieron a una capa- sistema multiplexado
ble de llevar a cabo ocho cul- de clulas micro instrumentado
ciones con volmenes de trabajo de 150 l [ 41] . Utilizando
mtodos de microfabricacin estndar, los pocillos de cultivo
hecha de PMMA y poli (dimetilsiloxano) (PDMS) estn
inmovilizado sobre una base de aluminio que contiene toda sensor
elementos y la transferencia de oxgeno est activado a travs de la difusin
a travs de una membrana y magnticos agitadores permeables a los gases
capaz de controlar la agitacin individualmente a cada reac-
tor respectivamente. DOT, pH y OD se pueden monitorizar
lnea utilizando sondas pticas. El grupo inform que la
dispositivo puede sostener E. coli lote cultivos, sin embargo, cay DOT
a 0% despus de 2-3 horas, resultando posiblemente en LIMITA- oxgeno
tacin [ 41 ]. Esto es probable teniendo en cuenta que el mximo. k L una
valor medido en este MBR fue de slo 75 h -1 . Sin embargo,
los autores demostraron que el comportamiento de crecimiento fue
comparable con la obtenida usando un intervalo de celda ms grande
dispositivos de cultivo [56 ]. El mismo grupo de investigacin tambin
anlisis de expresin gnica de microarrays detalle de ADN de E. coli
crecido en un 50 l MBR [57 ] . Este trabajo marca un verdadero
avanzar en el desarrollo MBR ya que no slo muestra la prueba
de principio, sino que tambin permite anlisis altamente paralela de
la expresin de genes y podra ser utilizado para mejorar la sub
de pie de la fisiologa celular durante el cultivo utilizando un sis-
enfoque tems de nivel [ 58 ]. Maharbiz et al . [59 ] inform
el desarrollo de un dispositivo basado en la combinacin de matriz
reactores de micropocillos con tecnolo- microfabricacin de silicio
ga que es capaz de soportar E. coli cultivo en ocho
250 pozos l simultneamente. Al igual que en el reactor del MIT
(Descrito anteriormente), los pocillos se sitan en una placa de base
que contiene sensores para mediciones de pH y OD (DOT
no se midi, pero los autores afirman que esto sera
factible). El oxgeno se genera electroqumicamente en cada
cultura y la agitacin fue proporcionada por un acero inoxidable
taln que se mezcla la cultura, dispersar oxgeno y
ruptura de la espuma de la superficie. Sin embargo, este equipo de investigacin

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proporcionado datos comparativos a escala de banco con el cual
determinar si escalado sera factible a partir de tal
dispositivo.
Otro sistema comercial para ser utilizado HT ha sido
desarrollado por Bioprocessors Corp. (Woburn, MA, EE.UU.).
Este dispositivo de cultivo de clulas (llamado SimCell ) es capaz de
operar y controlar independientemente hasta 1500 culturas
permitiendo as el uso de la plena diseo experimental factorial
mtodos para la optimizacin del proceso [60 ]. Esta 'del reactor-on-a-
dispositivo de chip' se basa en un diseo de microfluidos con un gas
membrana permeable que permite la transferencia de oxgeno y mix-
ING se proporciona mediante la rotacin de la matriz de micro-biorreactor
chips en incubadoras controladas ambientalmente utilizando
aire humidificado para minimizar la evaporacin. Este sistema puede
ser altamente automatizado y est integrado con un robot para
la transferencia de placas a partir de una incubadora a una estacin de deteccin
para la medicin de pH, el DOT y la densidad celular y una a los fluidos
estacin ics donde adiciones de medios de comunicacin para fed-batch opera-
cin y cido / base para el control de pH se pueden hacer. volmenes
en cada rango de reactor a partir de ca. 300 l a ca. Dependiendo 700 l
ing en la aplicacin (microbiano o de clulas de mamfero)
y cada reactor puede operarse en lotes, por lotes alimentados o
modo de perfusin. El dispositivo se ha demostrado que el apoyo E.
coli y levaduras cultivos, dando la cintica de crecimiento empre-
rable a los obtenidos utilizando los RTS convencionales. los
compaa tambin ha descrito el crecimiento de las clulas CHO sin
la limitacin de oxgeno a alta densidad celular y computacional utilizado
cionales dinmica de fluidos (CFD) simulaciones para mostrar cmo el
entorno fsico se ve en gran escala lanz palas
biorreactores ha sido re-creado. k L A en el sistema ha sido
modelado por CFD y estimada entre 60 y 500 h -
1 , los valores similares a los encontrados en matraces de agitacin y sub-
STRs ptimas [ 61] .
MBR como una herramienta de escala descendente
Cabe sealar que no todos miniatura de clulas-cultivo
Los sistemas estn diseados para scale-up / escala descendente de existir
bioprocesos; se ha mencionado en esta revisin de cmo
tales dispositivos se pueden utilizar para muchas aplicaciones tales como
etapa temprana evaluacin / de tipo salvaje recombinante organismo,
mejora de la cepa y el desarrollo medio de crecimiento.
Sin embargo, los sistemas miniatura utilizados en las etapas posteriores de
el desarrollo del proceso, por ejemplo, para la optimizacin de la operacin
y condiciones de cultivo deben ser escalable. Por esta rea-
hijo es vital que bien establecido "regla de oro" met-
SAO utilizadas con frecuencia en la industria a escala de sobremesa
procesos de produccin a los buques se exploran para ver si
puede ser utilizado a escala-up de los MBR [62 ]. estos demostrado
mtodos incluyen la ampliacin de la base del poder por gaseado
unidad de volumen; velocidad de la punta del agitador; DOT constante; oxgeno
capacidad de transferencia de masa (k L a); o tiempo de mezclado. Sin embargo,
hay
hay "una talla nica para todos" y por lo tanto hay que subrayar
que hay una base nica para la equivalencia puede ser universalmente
se aplica a todos los MBR. Ninguno de los sistemas detallados en esta
revisin podra utilizar toda la escala de aumento / escala- establecida
metodologas abajo descritos anteriormente. Por ejemplo, una
constante valor DOT es difcil de lograr en sis- sacudido
TEMS en comparacin con los RTS convencionales, como la falta de
agitacin mecnica (y burbujeo - en el caso de MTP
sistemas basados) significan que el control de los niveles de punto sobre una
nivel crtico en estos dispositivos es tcnicamente muy desafiante
En g. Esta caracterstica particular no es en s mismo un problema tan
siempre que las clulas cultivadas son suficientemente crecimiento lento
(Ya sea naturalmente o mediante el uso de un crecimiento dbil
medio y / o operando a una temperatura no es propicio
a mxima tasa de crecimiento), pero se restringe el uso de
tales sistemas para llevar a cabo muchos procesos de alta densidad celular
la participacin de rpido crecimiento microorganismos con alta de oxgeno
demanda.
Una indicacin de cul es el criterio a escala reducida debe ser
utilizado para un bioproceso en particular (y por lo tanto una indicacin
cin de que es preferible para la plataforma de la miniaturizacin
ese proceso) se puede obtener mediante el examen de la clula ca-
tersticas y condiciones de proceso de la bioproceso en cues-
cin. Para un organismo de crecimiento rpido tales como E. coli o Bacillus
subtilis por lo general es la transferencia de oxgeno que se hace limitante,
mientras que la tensin de cizallamiento no es probable que sea un problema
importante; ah-
proa escala descendente de un cultivo de tales clulas podra ser
diseado sobre la base de la entrada de energa especfica igual, o en
la base de la igualdad de k L a. Sin embargo, un requisito de choos-
ing igual k L a es ser capaz de estimar la entrada de energa a la
biorreactor en miniatura con precisin. El trabajo llevado a cabo en la UCL
en un ml MBR 10 [27 ] confirma trabajo anterior de Bujalski et
al . [63 ] mostr que la cantidad de potencia del impulsor para disminuir
concomitante con el dimetro del vaso. Por lo tanto, es impor-
No Tant de utilizar a gran escala convencional de potencia del impulsor n-
bras para la estimacin de entrada de energa en los MBR, ya que esto podra
conducir a la limitacin de oxgeno de microbios rpidamente-que respiran por
sobrestimar la potencia transferida al sistema.
Un desafo particular es el crecimiento de orga- filamentoso
ismos debido a su morfologa compleja. Fermentacin
caldos que contienen tales organismos tienen un relativamente alto
viscosidad y requieren la entrada de energa adicional con el fin de mante-
tain mezcla adecuada y la transferencia de masa. Adems, filamento en las
mentous organismos son mucho ms grandes que unicelular
bacterias y pueden ser ms susceptibles a daos de cizalla. por
ejemplo Heydarian et al . inform que el promedio de las hifas
longitud de la bacteria productora de eritromicina Saccha-
ropolyspora erythraea super la microescala Kolmogorov
de turbulencia en un estndar de 7 L biorreactor sobre una gran
gama de condiciones de funcionamiento [64 ]. En el caso de S. eryth-
Raea se ha demostrado que si los micelios son excesivamente
esquilada, resultando en demasiado corta una longitud de las hifas, a
continuacin, eryth-
formacin de producto romycin puede verse afectada [65 ] . Para esto
razn, puede ser aconsejable elegir la velocidad punta como base
para la escala hacia abajo cuando se utilizan organismos filamentosos. Mientras
que
los mecanismos que gobiernan la formacin de grnulos en filamen-
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culturas tous no se entienden bien, Vecht et al . tener
reportado una correlacin entre la disminucin de OTR y una
reduccin en el tamao medio de grnulo en Streptomyces tendae [ 66] .
Concluyeron la formacin de grnulos en ese organismo es
principalmente debido a las interacciones hidrofbicas controlados por
PUNTO. Dada la formacin perjudicial efecto pellet puede
tener en la produccin de metabolitos secundarios en muchas fil-
organismos amentous - debido a la inhibicin de la captacin de oxgeno
en el centro de la pastilla aumenta con dimetro de las pastillas
[ 65] - es claro que para la escala hacia abajo de clulas filamentosas
procesos de cultivo, los MBR deben mantener disuelto oxi-
niveles gen que se encuentran en el proceso a gran escala en los que la
escalar hacia abajo se basa en el fin de mantener el rendimiento del producto.
Igualdad k L a es difcil de utilizar para la escala hacia abajo, ya que es por lo
general
calculada en sistemas modelo que tienen poca semejanza con
caldos de fermentacin reales. Adems, k L una se ve afectada
por los cambios en la coalescencia caldo de cultivo y reologa durante
el curso de un proceso de cultivo - cambios que son muy
difcil de medir y explicar. La clave cuando choos-
ing una base para biorreactor a escala reducida es de no exponer el
clulas a tensiones por encima de las que se encuentran en general
escala.
De los dispositivos en miniatura discutidos en esta revisin, es evidente
que algunos tratan de replicar biorreactores a gran escala en su
geometras. Por ejemplo, la mayora de MSBRs y MBCRs son
facsmiles geomtricas de biorreactores a gran escala. Mantener-
ing similitud geomtrica tiene ventajas para escala eficaz
la comparacin, ya que permite que algunos supuestos clave que permanecen
vlido; por ejemplo, el mantenimiento de una relacin de aspecto igual ayuda a
pre-
presin hidrosttica dict y por lo tanto la solubilidad del oxgeno
en diferentes escalas de operacin. Esto le da a tales dispositivos una
beneficiarse como sus mecanismos para lograr la transferencia de oxgeno
y el mezclado y para el clculo de entrada de potencia puede basarse
en los mismos principios establecidos a gran escala. Fluido
dinmicas sern similares, aunque es importante tener en cuenta
que algunos nmeros adimensionales que describen fluido
dinmica, por ejemplo nmero de Reynolds en agit ves-
seles, parecen tener menos influencia en escalas tan pequeas
[ 67 ]. Ms fundamentalmente, hay una cuestin de cmo effec-
MBR tivos pueden ser cuando alcanzan un tamao tan pequeo que
sus propiedades de flujo y los mecanismos de transferencia de masa
y mezcla son diferentes a los encontrados en la gran escala
biorreactores que estn tratando de imitar. MTP son parti-
larmente vulnerables a este respecto ya que su falta de mecnica
agitacin significa que los efectos de tensin superficial son ms
importante que en MSBRs, donde impulsores pueden disminuir
este efecto y ayudar a mantener la mezcla de fluidos eficaz. Pelaje-
Thermore, existe el peligro cuando se utiliza condi- extrema
ciones con MTP (en trminos de la frecuencia de agitacin y llenar
volumen) que todo el lquido de proceso forma una pelcula delgada
a lo largo de la superficie interior del pozo, por lo tanto gravemente limi-
iting de mezcla y exacerbando el efecto perjudicial de
tensin superficial. Diferentes regmenes de flujo en los MBR causadas por
diferentes mtodos de agitacin pueden tener un impacto en el
capacidad de tales sistemas para llevar a cabo de forma reproducible culti- clula
vaciones; si las condiciones son diferentes a pequea y gran escala
en trminos de la mezcla y la transferencia de masa gas-lquido esto podra
conducir a problemas, por ejemplo la seleccin de los clones no adecuados
para la produccin o las diferencias en la calidad del producto espe-
cialmente para las protenas recombinantes. Por otro lado, el trabajo
por Micheletti et al . indica que la traduccin de la escala
sacudido a los sistemas de agitacin es factible si los criterios de escalado son
cuidadosamente elegido [ 68] . Utilizando una correlacin recientemente
introducido
cin para k L a predicciones en MTP [ 69] fueron capaces de Suc-
cessfully ampliar el cultivo de E. coli que sobreexpresan
una enzima transcetolasa de un sistema de micropocillos (1 ml
volumen) a un STR 1,4 L sobre la base de la constante k L a. los
mismo grupo tambin proporcionar datos iniciales sobre escala- satisfactoria
de un proceso de cultivo de clulas de mamfero utilizando una constante
significa velocidad de disipacin de la energa [ 68] .
La automatizacin de los MBR
La automatizacin de los MBR es la clave para la expansin de capa- HT
bilidad. Varios de los sistemas desarrollados recientemente en miniatura
utilizar una MTP modificado como punto de partida (por ejemplo [49 , 59]
y la Applikon microrreactor ). Estos sistemas actualmente
parecen ofrecer una gran promesa debido a su facilidad de
integracin con plataformas de automatizacin robtica existentes.
MTP sobre la que estn diseados dichos sistemas se basan en una
huella estndar, son mecnicamente simple y la muy
estandarizacin de su diseo los hace ideales para construir
en plataformas automatizadas, robotizadas que realmente toman tales
tecnologas en el dominio HT, confirindoles
la capacidad de realizar cientos de telfonos-cultivos en parti-
alelo, utilizando una huella no mucho ms grande que la de un con-
biorreactor convencional a escala piloto. La alternativa es
desarrollar un sistema de biorreactores en miniatura que es en s amena-
ble a la automatizacin. Las tecnologas que Weuster-Botz de
grupo en colaboracin con H + P Labortechnik [ 43 , 44]
y Bioprocessors Corp. han desarrollado son ejemplos de
Este enfoque. Tales dispositivos ofrecen un grado de capacidad de HT
as como sofisticados robtica incorporado en el caso de Bio-
de procesadores Corp SimCell sistema.
dispositivos robticos utilizados en conjuncin con los MBR generalmente
cabezas funcin mltiple de pipeteado montadas sobre brazos que se
son capaces de moverse en tres dimensiones a travs de la totalidad
rea de trabajo. Las cabezas de pipeteado tambin pueden hacer frente a dife-
geometras rentes MBR y los brazos robticos pueden recoger por separado
y coloque el equipo auxiliar en cualquier lugar de la obra
espacio. Esta capacidad de recogida y colocacin significa que un robot
puede inocular, pH-control, la muestra y hacer adiciones a
un MBR, que ofrece una solucin verdaderamente integrada. en adicin
robots pueden enlazar plataformas de cultivo celular con analtica
instrumentos (por ejemplo, sistemas de HPLC) y complejo realizar
ensayos tales como ELISA para los productos de anticuerpos utilizando en
tiempo real
muestras - Los ensayos que se aprovechan de la capacidad del robot
para llevar a cabo miles de operaciones de manipulacin de lquido en una
corto periodo de tiempo. condiciones clulas de cultivo asptico

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puede ser mantenida por que aloja el robot dentro de un adaptado para el cliente
construido cabina de bioseguridad.
Conclusin
Esta opinin ha descrito muchos de los enfoques Cur-
tualmente ser llevado hacia el desarrollo de los MBR y
ha puesto de relieve varios retos que superar en el
diseo de tales sistemas. La mayora de estos se derivan de la variabilidad
la capacidad de las tareas de haber a realizar, lo que hace
que es difcil encontrar un nico sistema capaz de satisfacer todas requisito
mentos. Por ejemplo, si se utiliza una plataforma en miniatura para
el desarrollo de un medio de crecimiento, la necesidad de paralelismo
tomara precedencia, mientras que la cepa detallada carac-
zacin y optimizacin de las condiciones de proceso hara
requieren un mayor grado de instrumentacin de cada biore-
actor. En este caso, la capacidad de TH no sera para-
montar. Adems, los dispositivos que agitan culturas a travs
agitacin (por ejemplo, MTP y matraces de agitacin) tpicamente muestran una
menor capacidad de OTR en relacin con MSBRs, haciendo que estas
dispositivos de agitado mecnicamente ms prometedores para el cul-
tivacin de microorganismos de crecimiento rpido o cul- clula
ciones que alcanzan una densidad de clulas de alta; Sin embargo, hay
normalmente no es el mismo grado de paralelismo disponible en
MSBRs. Aunque ambos MSBRs y MTP son capaces de estar
integrado con los sistemas robticos, el hecho de que la mayora existente
lquido robots de manipulacin se construyen para manejar placas significa que
es probable que sea aquellos dispositivos que basan su diseo sobre una
MTP que ser capaz de ofrecer el ms alto rendimiento.
En vista del desarrollo de bioprocesos toda
secuencias sobre la cubierta de un robot como propuso por primera vez por leja
et al . [ 5] y demostrado recientemente por tres pasos de una
biocataltica proceso [70 ], tambin hay que considerar cmo
MBR se integran con el procesamiento aguas abajo miniaturizado
tecnologas. Esto es de particular relevancia cuando los MBR
se utilizan como herramientas de desarrollo para la produccin de bio-
molculas tales como protenas recombinantes que tienen que estar
posteriormente purificado y analizado con el fin de evaluar su
actividad biolgica. A este respecto, Jackson et al . tener
desarrollado un prototipo de dispositivo en miniatura microfiltracin
que realiza varias operaciones simultneamente [ 71] .
Existe el peligro de ser capaz de llevar a cabo cientos de
simultneas celulares cultivos todava no tener comple-
mentaria tecnologa desarrollada para la recuperacin del producto y
purificacin; es la opinin de los autores que para apli-
cationes donde el procesamiento adicional del cultivo (caldo o
clulas) se requiere, algunos sistemas miniaturizados actuales
emplear cantidades de cultivos que pueden ser demasiado pequeos para la eva-
acin de las etapas subsiguientes.
El mensaje clave de esta revisin es que no hay una sola
MBR que satisface todos los requisitos de la misma. principalmente esto
es porque hay una necesidad de diferenciar sis- microescala
tems y las ventajas que cada uno confiere dependiendo
en la solicitud. Por lo tanto se puede utilizar diferente sis-
TEMS para las diferentes etapas del proceso de desarrollo tak-
ing en cuenta la naturaleza de las clulas y la complejidad
del proceso de cultivo - especialmente los requisitos para
seguimiento, control y muestreo.
Conflicto de intereses
El autor (s) declaran que no han de competir inter-
TER.
Contribuciones de los autores
JB llev a cabo la revisin de la literatura y elabor el fabri-
guin. FB revisin crtica y editado el manuscrito.
Ambos autores leyeron y aprobaron el manuscrito final.
Expresiones de gratitud
Los autores desean agradecer al Fondo de Infraestructura Comn de Reino Unido
(JIF), la
Fondo de Ciencias de Investigacin de Inversiones (SRIF) y la Fun- Gatsby
dacin de fondos para establecer la UCL Centro de Micro Bioqumica Inge-
niera. El apoyo financiero para la investigacin UCL presentadas en esta
revisin es
reconocido desde el Reino Unido de Ingeniera y Ciencias Fsicas de
Investigacin
Consejo (EPSRC), el Reino Unido de Biotecnologa y Ciencias Biolgicas de
Investigacin
Consejo (BBSRC) y de F. Hoffmann-La Roche Ltd
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