LABORATORIO DE BIOTECNOLOGIA

PRESENTADO A: LAURA MARCELA BERNAL ZAENS

PRESENTADO POR:

YURANI CRDENAS YELA C.C 29.314.849

MAIRA ALEJANDRA GALLEGO C.C 1.116.238.414
GLORIA MILENA MUOZ NARVAEZ C.C 29.877.895
BRTTY ALEXANDRA RIVERA C.C. 1.065.097.164
EDWIN MAURICIO LEMUS PALACIO C.C 1.096.034.598

TUTOR VIRTUAL: FEDRA LORENA ORTIZ

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

CEAD PALMIRA
ESCUELA DE CIENCIAS BSICAS TECNOLOGA E INGENIERA
QUMICA E INGENIERA DE ALIMENOS
BIOTECNOLOGA
CALI, 2017
 PRACTICA No. 4. AISLAMIENTO DE MICROORGANISMOS PRODUCTORES

DE AMILASA - ENZIMA

OBJETIVO GENERAL

Aislar y seleccionar microorganismos productores de enzimas amilolticas a

partir

de muestras de suelo.

RESUMEN

Las amilasas son enzimas las cuales hidrolizan molculas de almidn dando como

productos dextrinas y polmeros compuestos progresivamente por unidades de

glucosa. Haremos un a prueba de la accin de un microorganismo que produce

amilasa para lo cual nos dar un halo el cual demostrar como fue desdoblado el

almidn hasta glucosa a causa de la enzima.

INTRODUCCIN

Esta prctica constituye por medio de una muestra de suelo determinar si existen

microorganismos que tengan la capacidad de producir la enzima amilasa. Ya que

esta enzima presenta gran valor industrial puesto que promueven la hidrlisis de

enlaces glucosdicos presentes en almidn, glucgeno y otros polisacridos (Van

der Maarel y col., 2002) y la aplicacin de estas enzimas es muy variada, entre las

cuales se tiene como mejoramiento de las harinas para la industria panadera,

liberacin de azcares a partir de la malta en la industria cervecera, para

desalmidonar telas en la industria textil y como aditivos en detergentes (Prasanna

2005).
JUSTIFICACION

La implementacin de microorganismos en los diversos procesos biotecnolgicos

ha incrementado progresivamente, debido a que stos pueden complementar, y en

algunas ocasiones reemplazar los procesos anteriormente usados, causando un

menor impacto negativo en la naturaleza y proporcionando ms ventajas, ya que

representan una disminucin en los costos de produccin y mayor rendimiento

MARCO TERICO

ENZIMAS

Son molculas proteicas, que actan como catalizadores de una reaccin

bioqumica, es decir aumentan la velocidad cataltica de dicha reaccin sin alterar

los productos que se generen al final de dicho proceso.

Caractersticas De Las Enzimas

Son catalizadores muy activos en medios acuosos y cada enzima acta bajo

condiciones especficas de temperatura. pH, entre otros.

Son catalizadores muy especficos: pueden modificar un nico sustrato en una

mezcla se substratos muy similares.

Son catalizadores muy selectivos: pueden modificar un nico enlace o un nico

grupo funcional en unas molculas que tenga varias posiciones modificables.

FUENTES DE ENZIMAS

Las enzimas pueden ser de origen vegetal, animal y microbiano.

Entre las enzimas de tipo vegetal, se encuentran las proteasas carbohidrasas (las

cuales descomponen residuos de azucares de carbohidratos superiores, a-

amilasas y b-amilasa) Entre las enzimas de tipo animal estn la esterapa (lipasa

se produce en la mucosa gstrica, el pncreas; fosfotasas, que se obtienen de

tejidos animales seo, muscular, tripsina y la

quimitripsina que se produce en el pncreas)

Las enzimas del tipo microbiano proviene de bacterias arqueas y de hongos.

MICROORGANISMOS PRODUCTORES DE ENZIMAS

Los microorganismos adecuados para la produccin de enzimas deben ser

estables y aceptados por las autoridades de control, tener facilidad y rapidez de

crecimiento con nutrientes sencillos y relativamente baratos, producir una enzima

de alto rendimiento, que sea fcil de aislar, purificar y concentrar sin

contaminantes o txicos. Tradicionalmente, el objetivo es maximizar la velocidad

de formacin de la enzima para minimizar los costos de produccin de la enzima.

En los microorganismos, el rendimiento es igual a la masa de clulas obtenida,

multiplicada por el volumen, por ello, lo adecuado es combinar de la mejor manera

la cepa seleccionada, las condiciones de recuperacin y fermentacin y el equipo

ms apropiado; habitualmente los microbios se sumergen en fermentadores bien

agitados y aireados o en fermentadores slidos o semislidos, por ejemplo, los

que producen lactasa, a-amilasa, proteasa, entre otros. Lo ms adecuado es usar

enzimas termostables, que a mayor temperatura, producen mayor velocidad de

reaccin, menor viscosidad del sustrato, mayor solubilidad del reactivo y menor

contaminacin. Adems, para liberar ms rpido la enzima se aaden surfactantes

al medio de cultivo que aceleran la liberacin. Las reacciones enzimticas se

llevan a cabo por numerosas enzimas con distintas funciones, por ello, una

pequea cantidad de enzimas son necesarios, inclusive a escala industrial; los

preparados enzimticos necesitan poco espacio de almacenamiento y las

reacciones son controladas de forma sencilla y pueden detenerse cuando se ha

alcanzado el grado deseado de conversin de sustrato.

Las enzimas microbianas se consideran seguras porque son extractos naturales,

adems las enzimas txicas son muy raras. La introduccin de nuevas enzimas

requiere una Demostracin de que no son txicas. Los microorganismos ms

comunes usados en el sector comercial son los hongos y bacterias, entre ellos se

destacan los aspergillus niger, a. oryzae y bacillus subtilis.

LAS AMILASAS ENZIMAS QUE CATALIZAN EL ALMIDN

Las amilasas son enzimas que catalizan la hidrlisis de glicoslicos presentes en el

almidn, glicgeno y otros poliscardiso. El almidn est compuestos por dos

polmeros de glucosa la amilosa y la amilo pectina. La industria del almidn es una

de las principales usuarias de amilasas para la hidrlisis y modificacin de esta

materia prima con el fin de obtener glucosa, maltosa y oligosacridos, que pueden

ser convertidos en jarabes de fructosa y dextrosa. La glucosa obtenida tambin

puede ser fermentada para producir etanol, aminocidos y cidos orgnicos (Kirk,

O., y col. 2002). Las amilasas son producidas por animales, plantas y

microorganismos, pero los rendimientos en los dos primeros son muy bajos, ya

que para la obtencin de esta enzima implica pasos como bioseparacin, puesto

que estas enzimas son de carcter intracelular, por lo cual ser necesario grandes

cantidades de materia prima. Por lo tanto, las mejores fuentes productoras de

amilasas son las bacterias y hongos, porque sus amilasas son de carcter

extracelular sino adems porque presentan altos niveles de expresin (Pandey y

col., 2000). Se tiene caracterizado que los microorganismos productores de

amilasas son Bacillus subtilis, B. stearothermophilus, B. licheniformis, B.

amyloliquefaciens y Aspergillus sp. (Vihinen y Mantsala, 1989, Pandey y col.,

2000). Segn bibliografa, estos microrganismos han sido aislados principalmente

de residuos agroindustriales (Ramachandra y col., 2004; Francis y col. 2002),

semillas en descomposicin (Boyer y Shannon, 1987), compostas y suelos

(Quintero y col., 2009; Devi y col., 2010).

MATERIALES Y EQUIPOS

50 ml de agua destilada previamente esterilizada o agua peptonada 0.1%

(p/v).

Pipeta de 10 ml.

Pipetas de vidrio 1 ml estril.

1 gr de tierra seca recogida 1 cm por debajo de la superficie, de diferentes

sitios o tambin a diferentes alturas o se pueden tomar muestras de

diferentes tipos de suelo (Se debe colocar en bolsas estriles y rotular).

Mnimo utilizar tres muestras.

Una solucin de yodo.

Bastoncillos de algodn estril.

Cajas de Petri estril con 15 a 20 mm con nutriente de agar preparado con

0,2 de almidn soluble.

Rotulador.
 Diluir en 99
AISLAMIENTO DE Tomar 1 g ml y de esta
MICROORGANISMOS
INICIO PRODUCTORES DE
de muestra hacer
AMILASA de suelo diluciones
 10

Sembrar de cada Hacer

Tuvo en una placa
De agar Rotular la Incubar a 30 recuento de
Nutriente/ caja de Petri por 48 h. todas las
Almidn AL 2% colonias

VerCr en las placas solucin de Hacer recuento de Medir con

Yodo. Las zonas en que todava colonias que Tomar datos y
quede almidn se teirn de
presentan halos de
regla el Llenar tabla.
Color entre azul y negro y s han
Degradado el almidn aparecern
hidrlisis alrededor dimetro de
Zonas de color marrn claro
De las mismas. Cada halo.
RESULTADOS

Se realizan diluciones de tierra de 0,1ml; 0,5ml; 1,0ml; 1,5ml.

Sembrar de cada tubo en una placa de agar nutriente/almidn AL 2%

Se revisa si las cajas petry tienen

colonias, para continuar con el

conteo. Anexos
ANALISIS DE LOS RESULTADOS

Cuando se requiere investigar el contenido de microorganismos viables en un

alimento, la tcnica comnmente utilizada es la cuenta en placa. Esta tcnica no

pretende detectar a todos los microorganismos presentes, pero el medio de

cultivo, las condiciones de temperatura y la presencia de oxgeno, permiten

seleccionar grupos de bacterias cuya presencia es importante para los diferentes

anlisis. Se considera que las colonias puedan contarse de manera confiable, ya

que se hacen las diluciones decimales necesarias de la muestra que en este caso

van desde, antes de ponerla en el medio de cultivo Se considera que las colonias

puedan contarse de manera confiable, ya que se hacen las diluciones decimales

necesarias de la muestra que en este caso van desde 100 ug/l, 70 ug/l, 50 ug/l, 25

ug/l, 10 ug/l, y 5ug/l. Se pudo verificar que la seleccin de las cajas que se toman

en cuenta para los clculos es muy importante para la confiabilidad de los

resultados; aunque en nuestro caso las colonias no se presentarn ya que no

haba crecimiento de las mismas.La razn de esto puede ser que el medio de

cultivo estaba vencido o no se almaceno de la manera correcta, tambin pudo

pasar que no se controlarn de la manera correcta la temperatura.

CUNCLUSION

El mtodo permite numerosas fuentes de variacin, algunas de ellas controlables,

pero sujetas a la influencia de diversos factores por lo que es muy importante

apegarse a la tcnica y controlar cuidadosamente las condiciones.

El almidn en contacto con el reactivo de Lugol (disolucin de yodo y yoduro

potsico) toma un color azul-violeta caracterstico. Esa coloracin producida por el

Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molcula de

almidn. Por lo tanto, no es una verdadera reaccin qumica, sino que se forma un

compuesto de inclusin que modifica las propiedades fsicas de esta molcula,

apareciendo la coloracin azul violeta.

En los anexos se puede apreciar como lucirin las colonias si hubiern proliferado.
Anexos
BIBLIOGRAFA

http://www. Unas.edu.ar/matbib/micagri/micagricap3.pdf Produccin

de amilasa, Facultad de Ciencias Qumicas, Argentina.

Universidad Autnoma de Guadalajara. Enzimas. Recuperado de

genesis.uag.mx/edmedia/material/quimicaII/enzimas.cfm
PRACTICA No. 1 NORMAS GENERALES DE BIOSEGURIDAD
Propsito:

Conocer los principales equipos con los cuales se trabaja en un laboratorio de

microbiologa y conocer y aplicar las normas de bioseguridad que se deben tener en un
laboratorio.

Objetivo:

Establecer normas y principios bsicos de comportamiento en el laboratorio.

Fundamentacin Terica

La bioseguridad es un conjunto de medidas preventivas encaminadas a reducir el

riesgo de transmisin de enfermedades infecciosas, las plagas de cuarentena, las
especies exticas invasoras, organismos vivos modificados.
Cuando se trabaja en laboratorio con microorganismos se deben poner en prctica
varias normas de bioseguridad para evitar accidentes y adquirir enfermedades.

Descripcin de la prctica

A continuacin encuentra las normas de bioseguridad bsicas de cualquier laboratorio y

los cuidados que se deben tener al lavar material del vidrio. Por favor realice una buena
lectura pero principalmente ponga en prctica todas las recomendaciones.

Normas generales de bioseguridad.

Mantener una actitud responsable, no se permite hacer bromas, jugar, correr o

gritar.
No se permite el ingreso de personas ajenas al laboratorio y/o que no porten sus
implementos de bioseguridad adecuados.
No se permitir el ingreso de personas bajo efectos de bebidas alcohlicas o
sustancias psicoactivas.
Para el ingreso a los laboratorios, prstamo de material o equipo se debe
presentar el carnet vigente.
Todas las superficies de trabajos se limpiaran y desinfectaran diariamente y
siempre que se produzca un derrame.
Usar bata de manga larga con puos, la cual debe estar completamente cerrada.
Usar guantes de nitrilo, tapabocas, gorro, gafas de seguridad y todos los
elementos de seguridad solicitados dependiendo del riesgo.
Evitar tocar sus ojos o piel con las manos enguantadas.
Usar cabello recogido, calzado cerrado y bajo, no usar falda, joyas, manillas,
reloj o elementos que puedan entorpecer la manipulacin de los materiales o
equipos.
Bajo ninguna circunstancia se permitir comer, beber o fumar en el laboratorio.
 Bajo ninguna circunstancia, se debe tocar, oler o probar las sustancias qumicas
o biolgicas utilizadas en el desarrollo de las prcticas.
No trabajar nunca solo en el laboratorio.
No pipetear sustancias con la boca.
Cuando en el desarrollo de las prcticas se utilice cido y agua en diluciones,
agregue el cido sobre el agua.
No devolver reactivos a los frascos, as no hayan sido utilizados.
Siga fielmente todas las recomendaciones dadas por el docente responsable del
laboratorio.
Al calentar los tubos de ensayo en el mechero dirija la boca donde nadie corra
peligro de quemarse.
Los residuos y muestras de procedimientos de microbiologa que van a ser
incinerados fuera del laboratorio deber ser sometidos a desactivacin en
autoclave.
Como norma general no se podr verter ninguna sustancia peligrosa para el
medio ambiente por el desage.
Al culminar el trabajo, dejar limpio y ordenado el mesn, devolver los elementos
y materiales perfectamente limpios, asegrese de dejar cerrado el gas, agua y
lavarse las manos.
Para la eliminacin de los residuos se deben utilizar los recipientes destinados
para este fin siguiendo las indicaciones del docente responsable del laboratorio.
Cualquier accidente por pequeo que sea debe comunicarse al docente
responsable del laboratorio.
Trabajo con material de vidrio
No se debe calentar recipientes de vidrio comn.
No calentar directamente al mechero de gas ni colocar recipientes de vidrio
vacos o hmedos por fuera en la parrilla elctrica.
Cuando utilice cubreobjetos, se deben revisar los mesones y evitar que queden
sobre ellos.
Comprobar la temperatura del material de vidrio.
No forzar el cierre del material.
Comprobar cuidadosamente la temperatura de los recipientes que hayan estado
sometidos a calor antes de tomarlos directamente con las manos.
No lavar los elementos de vidrio de laboratorio con medios abrasivos que al
rayar la superficie debilitan el vidrio.
Al lavar el material utilice guantes y gafas de seguridad y no deje residuos.
Al lavar la vidriera de laboratorios no se debe someter a cambios brusco de
temperatura.

Recursos a utilizar en la prctica (Equipos / instrumentos)

Folleto de normas de bioseguridad, folleto de disposicin de residuos slidos.

Metodologa

Deben llevar al laboratorio un pre informe donde resuelvan las siguientes preguntas:

Qu es bioseguridad?

Son las normas y medidas preventivas, destinadas a minimizar o evitar posibles

contaminaciones procedentes de agentes biolgicos, fsicos o qumicos; de esta
manera evitamos poner nuestra integridad o al medio ambiente en riesgo o peligro.
Estas normas debemos observarlas en todas las actividades que desarrollemos en
nuestro quehacer diario y especialmente cuando manipulemos unos expongamos a
sustancias o ambientes de alto riesgo.

Cules son las normas bsicas de bioseguridad en el laboratorio de microbiologa?

Ingresar al laboratorio con los elementos de proteccin como la bata, los guantes, los
tapabocas, los gorros entre otros. (Solo ingresa el personal autorizado y con los
elementos necesarios para el buen desarrollo de la actividad.)

No consumir alimentos ni llevarnos elementos a la boca.

Tener siempre presente las indicaciones de los diferentes reactivos o sustancias

que usemos.

Darle uso adecuado a los diferentes instrumentos; recordemos que para cada
necesidad hay uno que la suple.

Estar atento a las instrucciones de la persona encargada de dirigir las diferentes

actividades.

No mezclar sustancias sin consultar, podramos desencadenar reacciones con

efectos lamentables.

Dejar los instrumentos utilizados perfectamente limpios, sin restos desustancias,

podramos causar accidentes a la siguiente persona que lo utilice

En el laboratorio seguir claramente las instrucciones dadas por el docente.

6. BIBLIOGRAFA
 BROWN, T., LeMAY, H. & BURSTEN, J. Qumica la Ciencia Central. Novena edicin.
Pearson Education.
GARZN G. 1995. Qumica General. Segunda edicin. McGraw-Hill. Colombia. 472
pp.
http://hernan.sulekha.com/blog/post/2007/03/normas-de-seguridad-en-el-laboratorio-
de-quimica.htm