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Biologa II
Manual de Laboratorio
Profesor(a):_____________________________________
Monitor(a):_____________________________________
Estudiante:_____________________________________
Matrcula:_____-________ ID: ______________
Reglas a seguir
1. Debe ser puntual a las prcticas de laboratorio. Todas las prcticas iniciaran a la hora
establecida en el horario. No se permitir la entrada a los estudiantes que lleguen 15
minutos despus de iniciar el laboratorio.
2. Todos los estudiantes deben tener la bata de laboratorio. Los estudiantes que no posean la
bata no recibirn la prctica. La bata para el laboratorio de biologa ha de ser blanca.
4. Todo desecho slido debe ser descartado en los basureros y no en los fregaderos del
laboratorio.
7. No ingerir, tocar y oler directamente los reactivos utilizados en el laboratorio. Trate todos los
reactivos como peligrosos, cuidando no derramarlos ni echarlos sobre la piel. Cualquier
incidente reportarlo al profesor o al monitor inmediatamente.
8. Cualquier estudiante que sea encontrado haciendo fraude (material de apoyo, copiarse de
un compaero, etc.) en un examen de laboratorio se le anulara el pruebn sin derecho a
reposicin.
Procedimiento General
Durante el laboratorio
1. Iniciado el laboratorio el profesor o monitor iniciara una evaluacin de contenidos o
fogueo de manuales cerrados en el cual los estudiantes podrn participar para acumular
puntos de participacin. El fogueo incluye todas las preguntas del manual as como
material abarcado en el libro de Biologa.
2. Terminado el fogueo iniciara la prctica con asesora del profesor o monitor.
3. Una vez terminada la prctica se proceder a un pruebn de los contenidos revisados en
el laboratorio.
4. Durante cualquiera de las partes del laboratorio el monitor o profesor revisara los
manuales.
Evaluacin
Los siguientes son modelos estndares de evaluacin. La evaluacin de las prcticas puede
ser modificada por el profesor(a):
Pruebnes bisemanales 24 pts. (6 pts. c/u) Pruebnes bisemanales 5 pts. c/u (20 pts.)
Participacin oral 4 pts. Participacin oral 4 pts.
Asistencia 2 pts. Asistencia 2 pts.
Manual 4 pts.
Importante
Los estudiantes no admitidos al LAB no tienen derecho a recibir el examen.
Una vez concluida la semana de laboratorio no es posible reponer prcticas.
PRCTICA # 1: ADN, Cariotipo Humano, Cromosomas y Mitosis
El ADN fue aislado por Friedrich Miescher en 1869, utilizando el esperma de salmn
y de pus de heridas abiertas, y debido a que lo encontr solamente en los ncleos,
Miescher denomin a este compuesto como nuclena. A posteriori se lo cambi a
cido nucleico y por ltimo a cido desoxirribonucleico (ADN).
Mitosis
La mitosis es la divisin celular a partir de la cual, de una clula se obtienen 2 clulas
hijas (2N), genticamente idnticas a la madre. El hecho es que las clulas somticas
(clulas de un organismo eucaritico que no van a convertirse en clulas sexuales) se
reproducen mediante mitosis, esta garantiza el mantenimiento del estado diploide
(2N) de una generacin a la siguiente, como consecuencia de ello, las clulas que se
reproducen por mitosis tienden a ser genticamente iguales.
Objetivos
- Identificar y explicar las etapas de la mitosis.
- Describir la funcin de las estructuras envueltas en el ciclo celular y la mitosis.
- Utilizar tcnicas sencillas para extraer ADN de clulas animales y vegetales.
Investigue y Estudie
1. De qu est compuesto el ADN?
2. Dnde se encuentra el ADN en la clula?
3. Cuntos cromosomas tenemos?
4. Cuntos genes tenemos?
5. Cul es la funcin que poseen los genes?
6. Las estructuras presentes en la figura 1 se llaman
telmeros. Qu son y cul es su funcin? Figura 1. Telmeros
7. Cmo se pueden utilizar los telmeros en
~5~
medicina forense?
8. En qu consisti el proyecto del Genoma Humano?
9. Describe brevemente las etapas de la mitosis.
10. Si la clula no est en mitosis, en qu puede estar? y haciendo qu?
11. Define y describe brevemente cada una de las etapas del ciclo celular.
12. Cul es la importancia del conocimiento del ciclo celular en medicina?
13. Cuntas veces se divide una clula somtica? (para esto consultar el concepto
del Lmite de Hayflick). Destacar la importancia de esto en la medicina.
14. Qu es la apoptosis?
15. Define: centrmero, centriolo, centrosoma, huso acromtico, citocinesis,
citoplasma, haploide, diploide, cromtide, cromatina y microtbulos.
16. Qu es el tejido meristemtico?
Materiales
- Estudiante: bulbos de cebolla blanca con races (ver Parte 1. Preparacin de las
races), lentejas, cuerda larga (3-5 metros), ablandador de carne.
- Laboratorio: orcena aceto-clorhdrica, agua destilada, NaCl 5%, ablandador de
carne, etanol, 30 ml de solucin de sal al 1%, 5ml de solucin jabonosa al 25%,
30 ml de alcohol etlico fro, cristal de reloj, pinzas, tijera, navaja, papel de filtro,
laminillas, portaobjetos, cubreobjetos, microscopio, plaquitas de mitosis,
probeta, beaker, tubo de ensayo, licuadora, colador, tubo de ensayo con tapa,
taza plstica, barra de madera para mezclar.
Para la casa
~6~
5. Dibuje detalladamente un cromosoma. Cmo los cientficos decidieron cul
cromosoma sera el cromosoma 1, el cromosoma 2, 3, etctera?
En el Laboratorio
Responda:
~7~
divisin celular (interfase y mitosis) y de la mitosis (profase, metafase, anafase y
telofase).
Para esta parte del laboratorio se necesitar una cuerda o hilo para simular la
membrana nuclear y tener a mano unas tijeras. Este debe ser lo bastante largo como
para rodear al menos 6 personas. Ahora todos los integrantes del laboratorio, sin
excepciones, van a actuar o simular el proceso de la mitosis en el aula de laboratorio.
1. Elija a una persona para ser el reportero. El trabajo de esta persona ser el de ir
explicando lo que va ocurriendo.
2. Si pueden graben un video del proceso.
3. Elija al menos, 4 estudiantes para interpretar los cromosomas, 2 estudiantes
para ser los centriolos y un estudiante para manipular la membrana nuclear. Los
dems estudiantes pueden ser la membrana celular.
A medida que vayan actuando todas las fases de la mitosis, debern buscar la
manera de representar cada fase de la clula y cada evento que ocurre durante la
divisin celular.
~8~
Prepare 10 ml de una solucin con ablandador de carne al 10% (1 gramo de
ablandador de carne + 10 ml de agua destilada) y mzclela con el sobrenadante.
Ahora tome un tubo de ensayo y agregue 5 ml de la solucin preparada y
agrguele 5 ml de etanol.
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~9~
Agregue bastante alcohol etlico hasta duplicar el volumen de la solucin que se
tiene hasta el momento (aprox. 8 ml de alcohol etlico). Luego de esto no incline,
ni sacuda, ni mezcle el tubo de ensayo, porque puede que no vea su ADN.
Si usted mira a la lnea de separacin entre la capa de agua y la capa de alcohol
(el interfaz) usted comenzar a ver burbujas adheridas como pelos minsculos
en forma de secuencias o tiritas blancas que se levantan a travs del alcohol.
Estas secuencias o tiras son su ADN.
~ 10 ~
PRCTICA # 2: Meiosis y Gametognesis
Introduccin
La meiosis es un tipo de divisin celular que se realiza exclusivamente en las clulas
sexuales, y mediante la cual se reduce el nmero de cromosomas a la mitad,
formndose los gametos (vulos y espermatozoides).
Antes de considerar los detalles de este proceso debemos conocer ciertos trminos
que describen la constitucin cromosmica en los ncleos de las clulas. A los
cromosomas en el ncleo de una clula sexual (vulo; espermatozoide) se les aplican
el trmino haploide o simplemente n; mientras que aquellos presentes en el cigoto y
en clulas derivados de mitosis se le aplican el trmino diploide o 2n. Por ejemplo,
un vulo humano antes de ser fecundado posee 23 cromosomas (n), mientras que el
cigoto tiene 46 cromosomas (2n). Estos 46 cromosomas existen en 23 pares, donde
los miembros de cada par son similares entre s en cuanto a forma, tamao y
contenido gentico. Cada miembro de un par se considera homlogo del otro y no
homlogo con respecto a otros cromosomas. En el cigoto cada par de homlogos
consiste de un cromosoma que aport el vulo y otro que aport el espermatozoide.
Los ovarios a partir de clulas llamadas ovogonios producen vulos y los testculos a
partir de los espermatogonios producen espermatozoides. Fundamentalmente, el
proceso de meiosis es bien parecido en el testculo y en el ovario, aunque existen
ciertas diferencias en los detalles.
Objetivos
- Explicar el proceso de divisin celular llamado meiosis y el proceso de
gametognesis (ovognesis y espermatognesis).
- Establecer las similitudes y diferencias entre los procesos de mitosis y meiosis.
~ 11 ~
Captulos del Libro de Biologa
Solomon et al., 2013 [9na Edicin]: Captulo 10. Cromosomas, mitosis y meiosis: pgs.
223-236 y Captulo 50. Reproduccin: pgs. 1077-1096.
Investigue y Estudie
1. Describe brevemente las etapas de la meiosis.
2. Cules son las principales diferencias entre mitosis y meiosis?
3. Cul es la importancia gentica de la meiosis?
4. Qu evento importante en el ciclo celular se requiere que ocurra previo a una
meiosis?
5. Cuntas meiosis ocurren en las clulas? Cul es la meiosis reductiva y cul es
la divisin de separacin?
6. Cules son las fases de la Meiosis I y II?
7. Qu es una ttrada o bivalente y cmo se forma?
8. Por qu las especies que se reproducen por meiosis son diferentes?
9. Qu son los gametos?
10. Cuntas cromtides tiene un espermatocito primario humano?
11. Cuntas cromtides tiene un espermatocito secundario humano?
12. Cuntas cromtides tiene un esperma humano?
13. Qu proceso de diferenciacin debe sufrir un espermatozoide?
Materiales:
- Estudiante: cuerda larga (3-5 metros) y lpices de colores.
- Laboratorio: plaquitas de meiosis.
En el laboratorio
1. Elija a una persona para ser el reportero. El trabajo de esta persona ser el de ir
explicando lo que va ocurriendo.
2. Elija al menos, 4 estudiantes para interpretar los cromosomas, 2 estudiantes
para ser los centriolos y un estudiante para manipular la membrana nuclear. Los
estudiantes que sobren sern la membrana celular.
3. Si pueden graben un video del proceso.
~ 12 ~
A medida que vayan actuando todas las fases de la meiosis, debern buscar la
manera de representar cada fase de la clula y cada evento que ocurre durante la
divisin celular.
Parte 2: Llena el siguiente cuadro con las diferencias entre mitosis y meiosis.
Mitosis Meiosis
Nmero de cromosomas
Entrecruzamiento
Apareamiento de
cromosomas homlogos
Nmero de divisiones
celulares
~ 13 ~
Parte 3: Dibuje las etapas de la meiosis e indique el nombre de cada etapa e
incluya las siguientes estructuras: dos cromosomas, centrmero, centrolos,
centrosoma, huso acromtico y microtbulos, citocinesis, entrecruzamiento,
etc.
Profase I Profase II
Metafase I Metafase II
Anafase I Anafase II
~ 14 ~
Telofase I Telofase II
~ 15 ~
PRCTICA # 3: Gentica Mendeliana
Introduccin
Las leyes de la herencia de Mendel fueron derivadas de las investigaciones sobre
cruces entre plantas realizadas por Gregor Mendel, un monje agustino austriaco, en
el siglo XIX. Entre los aos 1856 y 1863, Gregor Mendel cultiv y prob cerca de
28,000 plantas de la especie Pisum sativum (guisante). Sin embargo, la gentica
como ciencia naci en el 1900 cuando los trabajos de Mendel fueron redescubiertos
por tres cientficos europeos de forma separada. Sus experimentos le llevaron a
concebir dos generalizaciones que despus seran conocidas como Leyes de Mendel
de la herencia o herencia mendeliana.
Las unidades descritas por Mendel como Factor Hereditario recibieron el nombre de
genes. Durante los primeros decenios posteriores al redescubrimiento del trabajo de
Mendel, los genetistas empezaron por ampliar los principios de Mendel al
correlacionar la transmisin de informacin gentica de generacin en generacin
con el comportamiento de los cromosomas durante la meiosis (Solomon et al., 2001).
Los genetistas estudian no slo la transmisin de genes, sino tambin la expresin
de la informacin gentica.
Objetivo
- Aprender a realizar ejercicios de gentica mendeliana, cruces di-hbridos,
ejercicios de herencia ligada al sexo, de eptasis, de entrecruzamiento y mapeo
de los genes y del pedigr.
Investigue y Estudie
1. Definir los siguientes trminos: gametos, gen, loci, alelo, alelos mltiples, alelos
dominantes, alelos recesivos, dominancia incompleta, codominancia, fenotipo,
genotipo, homocigote, heterocigote, di-hbrido, poli-hbrido.
2. Formule las leyes de Mendel en sus propias palabras.
3. Qu son los genes mitocondriales y cmo se heredan?
4. Qu es el pedigr y cmo se interpreta?
5. Qu es el factor Rh y cmo se hereda?
6. Qu es el cuadro de Punnet y cmo se organiza?
Materiales
- Estudiante: lpiz, goma, sacapuntas.
~ 17 ~
Para la casa
3. En el hombre el color pardo de los ojos es dominante (A) sobre el color azul, el
cual es recesivo (a). Una pareja en la que el hombre tiene los ojos pardos y la
mujer ojos azules tienen dos hijos, uno de ellos es de ojos pardos y otro de ojos
azules. De acuerdo a esto determinar:
~ 18 ~
En el laboratorio
7.1 Cules son todos los posibles genotipos y fenotipos parentales para este
caso?
7.4 Cul ser la probabilidad de que un hijo normal (sano) de estos padres sea
portador de la enfermedad?
8.2 Si se casa con una mujer normal cuya madre era albina.
~ 19 ~
Parte 2: Herencia ligada al sexo
10. Qu patrn de herencia llevara a un genetista sospechar que un trastorno
hereditario del metabolismo celular se debe a un gen mitocondrial defectuoso?
Parte 3: Eptasis
12. El color de pelo de los ratones es determinado por 2 genes que muestran
eptasis. La presencia de pigmento es expresada por medio de un alelo
dominante (NN o Nn) y la ausencia de color es representada por alelos
recesivos (nn). Si el color est presente, un segundo locus determina el color
del pelo (AA o Aa) por pelo agut, y (aa) por pelo negro. Qu proporcin
fenotpica y de genotipos esperan encontrar en las generaciones F1 y F2 como
resultado de un cruce entre un ratn AANN x aann?
~ 20 ~
Parte 4: Pedigr
13. Estos rasgos son dominantes o recesivos? Por qu?
_____________________________ _____________________________
14. Albinismo:
~ 21 ~
Parte 5: Codominancia y alelos mltiples
15. Los grupos sanguneos en los seres humanos (A, B, AB y O) son los resultados
de 3 alelos para un gen en la poblacin humana (IA, IB, i). Cada persona puede
tener solamente ___ alelos. De los siguientes cruces, indique los genotipos
para la generacin F1 y en qu frecuencia se encuentran.
15.1 IA i x IB i
15.2 IA IB x IA i
16.2 Qu pasa si una persona con un grupo sanguneo A recibe sangre tipo B?
~ 22 ~
PRCTICA # 4: Replicacin, Transcripcin y Traduccin
~ 23 ~
Figura 1.
Izquierda: replicacin del ADN. La doble hlice es desenrollada y cada hebra hace de plantilla para la
sntesis de la nueva cadena. El ADN polimerasa aade los nucletidos complementarios a los de la
cadena original. Derecha: proceso de transcripcin del ARN mensajero y sntesis de protenas.
Objetivo
- Modelar la transcripcin y traduccin de una cadena de ADN.
Investigue y Estudie
1. A su criterio, cmo piensa usted que se lleva a cabo la duplicacin del ADN, de
manera conservativa, semiconservativa o dispersiva? Consulte y describa el
experimento de Meselson y Stahl.
2. Explique el proceso de replicacin, incluyendo las enzimas involucradas en este.
3. Qu es una protena? Diga algunos ejemplos de protenas.
4. Qu protena es la encargada de romper los puentes de hidrgenos que unen
las dos hebras del ADN?
a) Primasa b) ADN polimerasa c) ARN polimerasa d) Helicasa
5. Explique el proceso de transcripcin, incluyendo las enzimas involucradas en
este.
6. Qu es el TATA box? Dnde se encuentra? Para qu se usa?
7. Explique el proceso de traduccin, incluyendo las enzimas involucradas en este.
8. Qu es el ARNm, ARNr y ARNt? Cul es la funcin de cada uno?
9. Qu es el factor de transcripcin?
10. Cul es la funcin de los ribosomas? Cul es la diferencia entre la subunidad
mayor y la subunidad menor de un ribosoma?
~ 24 ~
Materiales
- Laboratorio: tijera, tape transparente.
En el laboratorio
3. Qu es un codn?
Tabla 1. Transcripcin
Nucletido Nucletido
ADN ARN
A
G
C
T
~ 25 ~
Fase No. 2: ________________________
1. Qu tipo de ARN se necesita para esta fase? Dibjelos e identifique las partes
importantes.
2. Qu es un anticodn?
~ 26 ~
5. Para qu sirve la Tabla 3 y cmo se utiliza?
~ 27 ~
Para simplificar, las secuencias de los genes sern mucho ms cortas que la de los
genes reales. Cada gen, tendr 2 alelos.
Snicker Snork
AUG | GUC AGC AAA | UAC CCC GAA GAG AAA | CUC UUA AGU GCG | GCU GUU
GUG | CAU CAU | GUU UUU UAC | GAU AUC UUA CUG CCC ACC | AAU AAC AAU
GCC | UUU UCU CAC | UAA
Snuffle Snork
AUG |GUA UCU AAA | GUU CUC ACU CCA AAG | CUU CUC CUC CCC | GUU GCG GCU
| CAU CAC | GUA UUU UAU | GAC AUU CUU CUG CCC ACA | AAU AAU AAU GCA |
UUC UCG CAC | UAA
Snapple Snork
AUG | GUC AGC AAA | UAC CCC GAA GAA AAA | CUC UUA AGU GCG | GUU GCG
GCU | CAC AUU | UCU CCC GUA | GAU AUU CUC CUC CCC ACC | GUU AAU AAU GCA
| UUC UUU GGU | UAA
~ 28 ~
Snoopy Snork
AUG | GUA UCC CUC | UAC CCC GAA GAG AAA | UUA UUG CUG CCC | GUG GCA
GCU | CAU AUU | UCU CCC GUA | GAC AUU CUU CUG CCC ACA | AAU AAC AAU GCC
| UUU UCU CAC | UAA
ID Snork: _______________________
Gene 2 cuerpo
Gene 3 piernas
Gene 4 cabeza
Gene 5 snork
Gene 6 cejas
Gene 7 ojos
Gene 8 boca
Gene 9 orejas
Snork
Secuencia gen
Secuencia ARNm
(codn)
Secuencia ARNt
(Anticodon)
Aminocido
Rasgo
~ 29 ~
PRCTICA # 5: Reaccin en Cadena de la Polimerasa y Electroforesis
El PCR es una tcnica que posee mltiples aplicaciones para la ciencia y la medicina.
Por medio de esta tcnica se pueden identificar anomalas en la secuencia de
nucletidos que apunten a posibles patologas, se llevan a cabo pruebas de
paternidad, as como pruebas de parentesco entre individuos, se puede determinar la
presencia de microorganismos, lo cual es til para el diagnstico de infecciones y
para probar la eficacia de un tratamiento. Adicional a esto, mediante el PCR se
pueden identificar cepas resistentes a antibiticos, as como identificar virus o
bacterias causantes de alguna enfermedad. Ya en el mbito de las ciencias bsicas el
PCR es una tcnica crucial para el estudio de la gentica de las poblaciones silvestres
de los reinos de vida. Estos usos derivados de la amplificacin han hecho que se
convierta en una tcnica muy extendida, con el consiguiente abaratamiento del
equipo necesario para llevarla a cabo.
Electroforesis
La electroforesis es una tcnica para la separacin de molculas segn la movilidad
de estas en un campo elctrico. La variante de uso ms comn para el anlisis de
mezclas de protenas o de cidos nucleicos utiliza como soporte un gel,
habitualmente de agarosa o de poliacrilamida. Los cidos nucleicos ya disponen de
una carga elctrica negativa, que los dirigir al polo positivo, mientras que las
protenas se cargan al unirse con sustancias como el SDS (detergente) que incorpora
cargas negativas de una manera dependiente de la masa molecular de la protena. Al
poner la mezcla de molculas y aplicar un campo elctrico, stas se movern y
debern ir pasando por la malla del gel (una red tridimensional de fibras cruzadas),
por lo que los fragmentos pequeos se movern ms rpidamente. La electroforesis
es un procedimiento utilizado en varias reas de la Biotecnologa, y en laboratorios
de investigacin en Biologa Molecular, Biomedicina y Ciencias Forenses.
Objetivos
- Identificar y conocer sobre el funcionamiento del PCR y electroforesis de
agarosa.
- Aprender las distintas aplicaciones que posee la tcnica de PCR en la
biomedicina.
~ 30 ~
Captulos del Libro de Biologa
Solomon et al., 2013 [9na Edicin]: Captulo 15. Tecnologa ADN y genmica: pgs.
323-346.
Investigue y Estudie
1. Qu significa PCR y cul es su funcin?
2. Cmo funciona el PCR? Describa cada uno de los pasos.
3. Qu reactivos se necesitan para realizar la tcnica de PCR?
4. Describa la funcin de cada reactivo necesario para realizar el PCR.
5. Mencione 2 o 3 aplicaciones que tiene el PCR para la medicina.
6. Para qu sirve la electroforesis?
7. Qu es y para qu sirve el gel de agarosa?
8. Por qu se utiliza una solucin amortiguadora (buffer) en la electroforesis y no
agua destilada?
9. Cmo influye el peso molecular del ADN en la electroforesis? Explique la
migracin de acuerdo a la carga.
10. Qu es una micropipeta?
11. Qu es la cmara de rayos UV y para qu se utiliza?
12. Qu es la secuenciacin y qu tipo de informacin obtenemos de la misma?
Materiales
- Laboratorio: gel de agarosa, tinte de carga, escalera, ADN, tips para
micropipetas, micropipetas, guantes, tubitos de PCR, agua destilada, 10X PCR
buffer, cebadores segn la especie, dNTPs (nucletidos), polimerasa Taq.
En el laboratorio
Parte 1: PCR
Se preparar un producto PCR de un volumen total de 20l en cada tubito. En cada
uno de los tubitos se echarn los reactivos en las siguientes proporciones y
siguiendo el orden establecido:
~ 31 ~
Para facilitar este proceso se mezclarn los reactivos 1-5 en un tubo de 2ml, el cual
se va a tabular como PCR Mix. Por ejemplo: si se van a realizar 4 reacciones de PCR
para 4 muestras de ADN se multiplica el volumen de cada reactivo por 4 y con una
micropipeta se hace la mezcla en el orden establecido. Una vez la mezcla est hecha,
el tubo PCR Mix se mezcla en el vortex y se echa 15l de PCR Mix en cada tubito
de PCR. Luego, se echa 5l de ADN para completar el volumen de 20l.
Una vez colocado todos los reactivos en el tubito de PCR, el mismo se coloca en el
equipo de PCR y se programa la corrida de la siguiente manera:
Parte 2: Electroforesis
Preparacin gel de agarosa: tomar el molde para hacer los geles y cerrar los
extremos con los topes de goma. Despus colocar el peine para formar los pocillos
una vez se eche el gel de agarosa caliente (Figura 1 Izquierda).
Figura 1.
Izquierda: molde para echar gel de agarosa caliente con topes de goma en cada extremo y peine para
la posterior formacin de pocillos. Derecha: gel de agarosa se echa caliente y lquido en el molde y
luego se espera a que se solidifique.
~ 32 ~
Enfriar la solucin de agarosa ms o menos a 55C (para acelerar el proceso se
puede enfriar colocando el envase debajo de un grifo de agua y agitar). Si se
produce mucha evaporacin del lquido, aadir ms buffer o tampn de
electroforesis (1X TAE Buffer). Finalmente, aadir la solucin de agarosa al molde
(Figura 1 Derecha).
Despus que el gel se ha solidificado con mucho cuidado sacar los topes de goma y
colocar el gel en la cmara de electroforesis correctamente orientado con los pocillos
hacia el polo negativo (color negro).
Figura 2.
Aparato de electroforesis. Polo negativo (negro), polo positivo (rojo).
Figura 3.
Cargando en los pocillos del gel de agarosa el producto PCR utilizando una micropipeta.
~ 33 ~
Correr el gel a 120 V (voltios), 400 A (amperes) durante 45 minutos como se ve en la
Figura 4:
Figura 4.
Aparato de electroforesis listo.
Por ltimo, se coloca el gel de agarosa en la cmara de rayos ultravioletas para poder
visualizar la banda de ADN amplificada. Debido a que el fragmento que vamos a
amplificar es de unas 740pb (pares de bases), vamos a ver la banda bien abajo en el
gel, ya que este fragmento de ADN es bastante pequeo.
~ 34 ~
PRCTICA # 6: Reproduccin
Introduccin
La reproduccin es un proceso biolgico que permite la creacin de nuevos
organismos, siendo una caracterstica comn de todas las formas de vida conocidas.
Las modalidades bsicas de reproduccin se agrupan en dos tipos, que reciben los
nombres de asexual o vegetativa y de sexual o generativa. La capacidad de
reproducirse y perpetuar a sus especies es una caracterstica fundamental de los
seres vivos.
Objetivos
- Identificar las partes de los aparatos reproductores masculinos y femeninos.
- Llevar a cabo una diseccin animal e identificar las estructuras sexuales.
~ 35 ~
Investigue y Estudie
1. Qu ventajas y desventajas tiene la reproduccin sexual?
2. Cul consideras que es la diferencia ms grande entre la produccin de
gametos en los hombres y las mujeres?
3. Explica la relacin entre el ciclo menstrual y las hormonas. Qu funcin tiene
cada hormona, en qu momento actan y de dnde son producidas?
4. Una pareja quiere tener hijos, y quiere saber en qu momento del ciclo
menstrual sera mejor tener relaciones sexuales. Qu les aconsejaras?
5. Un hombre tiene problemas de infertilidad (produce muy pocos
espermatozoides) y quiere saber a) la causa y b) si hay alguna solucin. Qu
explicaciones le daras y qu soluciones?
6. En qu se diferencian los aparatos reproductores masculinos y femeninos de
los ratones y el humano?
7. Cul estrategia de reproduccin emplea el humano en su ciclo de vida? Y los
ratones?
Materiales
- Laboratorio: un ratn de laboratorio Mus musculus, pinzas, bistur, porta bistur,
tijeras, guantes, bandeja de diseccin, alcohol, anestsico y materiales de
demostracin.
Para la casa
~ 36 ~
En el laboratorio
Figura 1.
Lneas de diseccin de ratn blanco de laboratorio.
~ 37 ~
Figura 2.
Segundo paso de la diseccin de ratn blanco de laboratorio.
~ 38 ~
PRCTICA # 7: Microbiologa
Introduccin
La microbiologa es la ciencia encargada del estudio de los microorganismos. Es la
rama de la biologa dedicada a estudiar los organismos que son solo visibles a travs
del microscopio como los virus, procariontes y eucariontes simples. Son
considerados microbios todos los seres vivos microscpicos, estos pueden estar
constituidos por una sola clula (unicelulares), as como pequeos agregados
celulares formados por clulas equivalentes (sin diferenciacin celular); estos pueden
ser eucariotas (clulas con ncleo) tales como hongos y protistas, procariotas
(clulas carentes de ncleo) como las bacterias, y archaebacterias.
El medio de cultivo puede ser lquido como los caldos, semislido o slido
dependiendo de la consistencia que adquiere el medio lquido al agregar diferentes
concentraciones de un solidificante como el agar, que es un extracto de algas
marinas. El agar no es utilizado como nutriente por la mayora de las bacterias, as
pues, acta solamente como solidificante. Se funde alrededor de 100 C y permanece
lquido hasta que se enfra de 42 a 43C. La gelatina se puede usar tambin, pero
~ 39 ~
con el inconveniente de que funde a 25C y puede ser hidrolizada por muchas
bacterias.
Medios de cultivo diferencial: este tipo de medios es usado para distinguir entre
diferentes tipos de bacterias. Usualmente contienen colorantes o indicadores de pH
que darn un color caracterstico a las colonias o virarn el color del medio de cultivo
de acuerdo al microorganismo que se trate.
~ 40 ~
Agar EMB (eosina azul de metileno): mediante el azul de metileno y la eosina
inhibe los organismos grampositivos. Al mismo tiempo, al igual que el Agar de
MacConkey, permite diferenciar bacterias que fermentan la lactosa y/o a la sacarosa
de las que no lo hacen.
El agar de sal y manitol: por su alto contenido de NaCl (7.5%) inhibe a las bacterias
que no lo toleran, al mismo tiempo con el indicador rojo de fenol sirve para detectar
la fermentacin del manitol. Se utiliza para el aislamiento y diferenciacin del gnero
Staphylococcus.
Ajuste del pH
Si se utiliza agua neutra y un medio deshidratado de buena calidad el pH del medio
usualmente quedar dentro de los lmites adecuados, an as es conveniente ajustar
el pH lo que se puede hacer con un potencimetro o en su defecto con papel pH
4.0-7.0.
~ 41 ~
Esterilizacin
Los medios que van en tubo se pueden esterilizar directamente en los tubos; en el
caso de los medios en cajas de Petri se pueden esterilizar en tubos con el volumen
para vaciar una placa (aprox. 20 ml cada uno) o bien matraces para varias placas. Si
en las instrucciones del medio no se indica otra cosa, la esterilizacin se lleva a cabo
en autoclave a 121 grados Celsius por 15 minutos.
Objetivos
- Observar en preparaciones fijas microorganismos representativos de diferentes
reinos.
- Aprender aspectos bsicos de la microbiologa mdica.
Investigue y Estudie
1. Qu es un microorganismo?
2. En cules reinos se encuentran los microorganismos?
3. Mencione 2 o 3 caractersticas de los siguientes reinos: protistas, hongos,
bacterias, archaebacterias, animal, planta.
4. A qu se le denomina tincin? Qu tipos de tincin existen y para qu se
utilizan?
5. Por qu se deben de esterilizar los medios de cultivo?
6. Quin rompi con el paradigma de la generacin espontnea y cul otro
descubrimiento realiz?
7. Cules son los principales microorganismos que afectan la salud humana?
8. Cul es la diferencia entre una bacteria y una archaebacteria?
Materiales
- Laboratorio: beakers, levadura, azcar, plaquitas preparadas de
microorganismos, dos portaobjetos, asa bacteriolgica, aceite de inmersin,
microscopio, mechero, papel filtro, lmpara de alcohol, cepa de Bacillus
subtilis, cido actico al 5%.
En el laboratorio
Parte 2: Cultivo
En cada una de las mesas de laboratorio encontrarn 3 placas de Petri con diferentes
medios de cultivo. A cada una de estas placas de Petri se les sembrar con un agente
diferente (como, por ejemplo, agua del bao, frotis de la meseta de la cafetera, frotis
de la meseta del bao, frotis del piso, entre otros). Una vez sembradas, estas placas
sern incubadas a temperatura ambiente en un rea donde las condiciones
ambientales sean lo ms estables posibles y cada 2 das se tomarn notas sobre lo
observado. Deben determinar si existe o no crecimiento de algn microorganismo y
describir lo observado.
Complete la tabla:
~ 43 ~
II. Composicin:
Posteriormente se trata con una disolucin de yodo, que a su vez forma un complejo
con el cristal violeta insoluble en agua y slo medianamente soluble en alcohol o
acetona. Las clulas se tratan despus con alcohol para diferenciarlas: las clulas
Gram positivas retienen el complejo colorante-yodo, por lo que las vemos de color
morado-azules; y las clulas Gram negativas son decoloradas por el alcohol, por lo
que se hacen visibles mediante la coloracin de contraste, en este caso la fucsina.
~ 44 ~
Figura 1.
Preparacin de un frotis bacteriano.
Descripcin:
________ X
~ 45 ~
PRCTICA # 8: Embriologa y Desarrollo Embrionario
Introduccin
La embriologa o biologa del desarrollo, es la rama de la biologa que se encarga de
estudiar la morfognesis, el desarrollo embrionario y nervioso desde la
gametognesis hasta el momento del nacimiento de los seres vivos. La formacin y
el desarrollo de un embrin son conocidos como embriognesis.
Objetivos
- Observar, describir y comentar modelos embriolgicos facilitados por el
profesor(a).
- Conocer las etapas del desarrollo embrionario.
- Ver un documental del vientre materno y responder el cuestionario anexo.
~ 46 ~
Investigue y Estudie
1. Qu es un embrin?
2. Qu son las capas germinales?
3. Defina: mrula, blstula, gstrula, gastrulacin, organognesis, vrnix y lanugo.
4. Qu rganos o estructuras derivan de cada una de las capas germinales?
5. Realicen una bsqueda sobre los principales eventos ocurridos durante el
desarrollo embrionario y fetal humano, desde la fecundacin hasta el
nacimiento, y descrbanlos brevemente.
6. Qu es el aborto y cmo se puede clasificar?
7. Investigue, cmo se preservan los fetos o embriones post mortem para su
posterior estudio?
Materiales
- Estudiante: cinta mtrica flexible.
- Laboratorio: modelos de diferentes estadios de fetos.
Para la casa
Figura 1.
Se muestran las 23 etapas de Carnegie
~ 47 ~
Las etapas de Carnegie se basan en el desarrollo morfolgico externo y/o interno
del embrin vertebrado, y no son directamente dependientes de la edad o el
tamao. El perodo embrionario humano se divide en 23 etapas de Carnegie. Los
criterios ms all de las caractersticas morfolgicas incluyen la edad en das, el
nmero de somitas presentes y la longitud embrionaria. Estas etapas tambin se
muestran en la pelcula; Crecimiento humano de la etapa de Carnegie a travs del
perodo embrionario.
[http://www.embryology.ch/anglais/iperiodembry/carnegie02.html#st106]
En el laboratorio
Registro de fetos
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ID: _________________________________ Fecha: ______________________________
Estado del feto: Bueno ________ Regular ________ Malo ________
Edad morfolgica aproximada: __________________________________________________________
Sexo morfolgico: ________________________________________________________________________
Peso: _______________________________________________________________________________________
Longitud Crneo-Caudal: _________________________________________________________________
Longitud Crneo-Taln: __________________________________________________________________
Longitud de la planta del pie: ____________________________________________________________
Permetro ceflico: _______________________________________________________________________
Permetro torcico: _______________________________________________________________________
Permetro abdominal: ____________________________________________________________________
Descripcin:
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Prctica No. 8: Embriologa
Parte 2. Documental: En el vientre materno (In the Womb; National Geographic Society)
Cuntos das toma el blastocisto en llegar desde las trompas al tero? ______________________________________________
En cul de los trimestres del embarazo se forman los miembros y rganos del beb? _______________________________
Qu porcentaje de nuestros genes nos hace humanos? _______________ qu % compartimos con perros? __________
A partir de cuntas semanas se le llama feto al embrin? ___________________ qu significa en latn? _________________
Cul es el mximo nmero de latidos que tiene el feto y ocurre a las 9 semanas? ___________________________________
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Por qu el ultrasonido no sirve para visualizar el estmago o intestino de un adulto? _______________________________
Qu tipo de imgenes compara el documental con el telescopio Hubble y son capaces de dar imgenes en tiempo
Cul es la razn evolutiva para que el feto humano tenga tanta fuerza de sujecin en las manos? __________________
A partir de qu semana comienza a funcionar el sistema digestivo? ____________ qu traga el feto? _______________
A partir de qu semana aumentan las probabilidades de sobrevivir si nace prematuro el feto? _____________________
En cul trimestre aumenta ms de peso el feto? _____________________________________________________________________
Cul es el nico sentido que el feto no puede utilizar hasta que nace? ______________________________________________
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