ELISA

Enzyme-Liked
Immunosorbent Assay
Prueba Inmunoadsorbente Ligado a Enzimas

Realizado por: Cristina Barn Lozano

 Antes de nada
quera recordaros
que

ANTGENO (Ag):
Molcula exgena, que se encuentra
en la superficie de un agente patgeno,
y que al entrar en contacto con el
organismo, induce la produccin de una
respuesta del Sistema Inmune especfica
(formacin de Acs)

ANTICUERPO (Ac):
Protena producida como respuesta a una sustancia extraa (Ag)
y que tiene la capacidad de combinarse con l (complejo Ag-Ac).
 Qu es un INMUNOENSAYO?

Es una prueba que usan complejos antgeno:anticuerpo

(tambin denominados inmunocomplejos) para medir la
presencia de un analito especfico en una muestra.
Inmuno se refiere a una respuesta inmunolgica que haceAnalito es todo
que el cuerpo genere anticuerpos, y ensayo se refiere a unalo que se mide en
prueba. Entonces, un inmunoensayo es una prueba que utilizaunalaboratorio.
prueba de

inmunocomplejos cuando hay una unin Ag-Ac. En el

inmunoensayo, el
analito puede ser
tanto un Ac como
Los Inmunoensayos se diferencian de otros tipos de pruebas un Ag.
de laboratorio (como las pruebas colorimtricas) ya que usan
complejos Ac-Ag para generar una seal que pueda medirse.

Los Acs son la base de los inmunoensayos, ya que poseen

una alta especificada y afinidad para un Ag especfico. Es
esta unin lo que permite la deteccin de analitos por medio
de una variedad de tcnicas de inmunoensayo.
INTRODUCCIN:

El mtodo ELISA, se basa en el uso de Ags o Acs

marcados con una enzima, de forma que los
conjugados resultantes tengan actividad tanto
inmunolgica como enzimtica.

Al estar uno de los componentes (Ag o Ac) marcado

con una enzima e insolubilizado sobre un soporte o
pocillo (inmunoadsorbente) la reaccin Ag-Ac quedar
inmovilizada y, por tanto, ser fcilmente revelada
mediante la adicin de un substrato especifico que al
actuar, la enzima producir un color observable a
simple vista o cuantificable mediante el uso de un
espectrofotmetro o un colormetro.
TIPOS:
ELISA no competitivo:
Consiste en enfrentar la muestra con el Ag o Ac que est en la
fase slida. Si una muestra es positiva se formar el complejo Ag-
Ac, y al agregar el conjugado reaccionar con el respectivo sustrato
desarrollando color.
Directo: Detectan Ag

Indirecto: Detectan Ac

ELISA Sandwich
Doble (DAS)
Heterlogo (HADAS)

ELISA competitivo:
El Ac de la muestra va a competir con el conjugado por un
nmero limitado de sitios de unin del Ag. Habr ausencia de color en
una muestra positiva debido a que el sustrato no encontrar a la
 Pasos generales
El primero es el
ELISA directo,
seguido del indirecto

1. Tapizado del pocillo con el Ag o

Ac.
2. Adicin de la muestra problema
con la mezcla de Ags o Acs.
3. Unin del Ag o Ac especfico al Ag
o Ac tapizado en el pocillo.
4. Lavado del pocillo para eliminar el
exceso de Ag o Ac no unido.
5. Adicin del Ac secundario
marcado con la enzima.
6. Unin del Ac secundario al Ag o
Ac.
7. Lavado del pocillo para eliminar el
exceso de enzima no unida.
8. Adicin del sustrato.
9. Unin del sustrato a la enzima.
10. Coloracin.
ELISA directo
Consta de las siguientes etapas:
1. Fijacin al soporte insoluble (tapizado) de Acs especficos.

2. Lavado con solucin salinaTween 20 como agente tensioactivo

(ph-7,2) para eliminar los Acs fijados deficientemente o no fijados.
3. Adicin de Ags marcados (conjugados) con una enzima; si los
Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedar solubilizado.

4. Lavado para eliminar los Ags marcados que no hayan

reaccionado.
ELISA directo
5. Adicin de un substrato sobre el que sea capaz
de actuar la enzima marcadora.

6. Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

Los lectores ELISA
se llaman
espectrofmetros!
!
ELISA indirecto
Consta de las siguientes etapas:
1. Fijacin al soporte insoluble (tapizado) de Ags especficos.

2. Lavado con solucin salina Tween 20 como agente tensioactivo

(ph-7,2) para eliminar los Ags fijados deficientemente o no fijados.
3. Adicin de Acs marcados (conjugados) con una enzima; si los
Acs reaccionan con los Ags, el complejo quedar solubilizado.

4. Lavado para eliminar los Acs marcados que no hayan

reaccionado.
ELISA indirecto
5. Adicin de un substrato sobre el que sea capaz
de actuar la enzima marcadora.

6. Lectura visual o colorimtrica del producto final coloreado.

ELISA indirecto

Por si no les ha
quedado claro
 LECTURA E INTERPRETACIN
DE RESULTADOS:
Una de las grandes ventajas de la tcnica
ELISA es la posible automatizacin de la
lectura y, por lo tanto, su objetividad. Dicha
automatizacin se puede conseguir con un
simple colormetro o espectrofotmetro de
cubeta o con sofisticados equipos de
lectura automtica de microplacas.

Los resultados finales de la lectura

colorimtrica se reflejan numricamente
mediante valores de absorbancia o
densidad ptica que se obtendrn a la
longitud de onda ms adecuada para la
coloracin final alcanzada.
 APLICACIONES CLNICAS:
Enfermedades producidas por parsitos
Toxoplasmosis, Triquinosis, Tripanosomas
Enfermedades producidas por Micoplasmas
Enfermedades producidas por bacterias
Mycobacterium tuberculosis, brucelas, Estreptococos, Salmonelas
Enfermedades producidas por virus
Enfermedad de Newcastle, Peste porcina, Rotavirus, artritis vrica, Leucemia
felina
Otras aplicaciones
Hormonas (GCH, Progesterona, Testosterona..)
Cuantificacin de inmunoglobulinas (IgG, IgE, IgA)
Inmunopatologa (Ac anti-DNA, Factor reumatoide, Inmunocomplejos
circulantes)
 Bibliografa:
Palacios, L. (2012). E.L.I.S.A Enzime Linked Inmuno Sorbent
Assay. http://www.slideshare.net/lexass/presentacion-elisa-
13245114

Cultek (2006). Fundamentos y Tipos de ELISAs.

http://www.cultek.com/inf/otros/soluciones/Soluciones-ELISA-
protocolos.pdf

Dra. Fernndez, N. (2007). E.L.I.S.A Enzime Linked Inmuno

Sorbent Assay. http://www.slideshare.net/aselle/elisa-
14876995?from_search=2

Jose, M. (2009). Tcnica de ELISA (Enzyme Linked Inmuno

Sorbent Assay) http://es.scribd.com/doc/15834994/Tecnica-de-
ELISA-Enzyme-Linked-Inmuno-Sorbent-Assay

Escobedo, J., Bautista, A., Correa, P., Mier, J., Pam, W., Valladar
es, J. (2012). Tcnicas aplicadas a la Protemica.
http://www.slideshare.net/angelicashantay/elisa-pasos-
2 Anatoma Patolgica y Citologa