MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO

El microscopio de campo oscuro es un microscopio que utiliza

un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco
concentrado sobre la muestra. El objeto iluminado dispersa la luz y
se hace as visible contra el fondo obscuro que tiene detrs, como
las partculas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela
en una habitacin cerrada. Por ello las porciones transparentes del
espcimen quedan oscuras, mientras que las superficies y
partculas se ven brillantes, por la luz que reciben y dispersan en
todas las direcciones, incluida la del eje ptico que conecta el
espcimen con la pupila del observador. Esta forma de iluminacin
se utiliza para analizar elementos biolgicos transparentes y sin
pigmentar, invisibles con iluminacin normal, sin fijar la muestra, es
decir, sin matarla. Tambin es bastante utilizado en la observacin
de muestras metalogrficas para la observacin de detalles en
superficies con alta reflectancia.
El objetivo recibe la luz dispersa o refractada por las estructuras del
espcimen. Para lograrlo, el microscopio de campo oscuro est
equipado con un condensador especial que ilumina la muestra con
luz fuerte indirecta.
CARACTERISTICAS Y USO
En consecuencia el campo visual se observa detrs de la muestra
como un fondo oscuro sobre el cual aparecen pequeas partculas
brillantes de la muestra que reflejan parte de la luz hacia el objetivo.
El efecto es similar a las partculas de polvo que se ven en el haz de
luz emanado de un proyector de diapositivas en una habitacin
oscura. La luz reflejada por las partculas de polvo llegan hasta la
retina del ojo, lo que las hace visibles. La luz dispersa permite
incluso distinguir partculas ms pequeas que el poder separador
del sistema ptico usado por transparencia.
Los condensadores que se emplean en microscopa de campo
oscuro son de dos tipos: del tipo paraboloide (tiene una superficie
espejada), y los del tipo cardioide, con dos superficies espejadas. El
empleo de uno u otro es indistinto, mediante cualquiera de ambos,
la luz no incide directamente en el objetivo (este es el objetivo de
estos condensadores), sino que incide con una apertura numrica
mayor al del objetivo.
RESOLUCIN DE MICROSCOPIA EN CAMPO OSCURO
Se llama poder de resolucin de un sistema ptico a la capacidad de separar detalles y es
expresado por el limite de resolucin que es la menor distancia que existe entre dos puntos
para que estos aparezcan individualizados. Lo que determina la riqueza del detalle de la
imagen provista por un sistema ptico es su limite de resolucin y no su poder de aumentar el
tamao de los objetos.

El limite de resolucin depende de la apertura numrica (AN) del objetivo y de la longitud de

onda de la luz utilizada . En la microscopia de campo oscuro la AN no debe ser superior a 1.0 ya
que el condensador debe tener siempre una apertura numrica superior a este valor.

El limite de resolucin del objetivo esta dado por la siguiente formula:

LR = k x Long. onda

AN * k = Constante ( 0.61)

* Log. onda = 0.55 Se toma la longitud de onda de la franja verde amarilla por ser el ojo
humano mas sensible a estos colores que a otros.

* AN = Apertura numrica no superior a

1.0 MTODOS PARA OBSERVACIN EN FONDO OSCURO

Existen diferentes mtodos para observar un objeto sobre un fondo oscuro es decir, utilizando
nicamente la luz difractada por l.

OBSERVACIN INCIDENTE O POR REFLEXIN La observacin por reflexin con

iluminacin oblicua o anular es la mas frecuentemente utilizada con los microscopios
estereoscopios o lupas binoculares. Generalmente no nos damos cuenta de que observamos
en fondo oscuro cuando el material ocupa todo el campo visual

OBSERVACIN POR TRANSMISIN ( Fondo Negro Central) La observacin por

transmisin con una pantalla central necesita la utilizacin de un objetivo con pantalla interna
de Spierer; con una pantalla anular , la de Wilska: anoptral, versin original y no la fabricada
industrialmente que es un contraste de fase negativa a fuerte absorcin .

OBSERVACIN POR TRANSMISIN (Fondo negro Anular) La observacin con

iluminacin anular de abertura superior a la del objetivo, es la nica que, en la practica
corriente , se denomina campo oscuro. Debe indicarse que difcilmente puede utilizarse
objetivos de gran aumento , de apertura numrica superior a 1.0. dado que el condensador
debe presentar una abertura superior a esta. Debe entonces practicarse la inmersin, evitando
las burbujas de aire .

OBSERVACIN BIRREFRINGENTE (Polarizacin) La observacin de un objeto

birrefringente entre nicoles cruzados da una imagen sobre fondo negro de naturaleza muy
particular.
OBSERVACIN HAZ PERPENDICULAR (Fondo Negro ultramicroscopico) La
observacin con un haz perpendicular a la direccin de la observacin segn Ziedentopf y
Szimondy da informaciones sobre la orientacin de las partculas observadas (3). Accesorios de
campo oscuro Usados principalmente para especimenes no coloreados que son
semitransparentes o transparentes.

NATURALEZA Y ESTRUCTURA DE LA IMAGEN EN FONDO OSCURO

Las imgenes en autentico fondo negro son remarcables por un efecto de borde ,con
numerosas franjas de difraccin muy brillantes si le objeto es refringente. Los planos ,en el
centro de una estructura parecen pticamente vacos . es por ello que deben adoptarsen
grandes precauciones en el momento de interpretar las imgenes . Dado que la imagen solo se
forma con las luz difractada, siempre ms dbil que la luz directa deben formarsen fuentes
lumnicas muy intensas, lo que no siempre es fcil sobre todo cuando los objetos son vivos y,
por consiguiente, sensibles a fuertes iluminaciones .

. VENTAJAS
Permite ver partculas dipersas en un medio homogneo.

* Hace posible la observacin del movimiento Browniano de las partculas.

* Se puede utilizar para la observacin de preparaciones sin colorear.

* Visualiza los bordes destacados delas muestras. *

DESVENTAJAS
Inadecuada preparacin de la muestra.

* Difcil acceso al microscopio que posea el condensador especial por su alto costo.

* No deja visualizar estructuras celulares especificas, solo bordes de clulas o partculas.

MICROSCOPIO EN CAMPO CLARO

DEFINICIN:
En campo claro toda la luz desde el espcimen y sus alrededores es colectada
por el objetivo para formar una imagen contra un fondo brillante.

TECNOLOGA:
El campo claro es la forma ms simple de microscopa donde la luz pasa a
travs de o reflejada del espcimen. La iluminacin no se altera por
aditamentos que cambien las propiedades de la luz (como polarizadores o
filtros).

APLICACIONES:
En aplicaciones biolgicas, las observaciones de campo claro son usadas
ampliamente para tinciones o pigmentos naturales o especmenes altamente
contrastados montados en un porta objetos. El espcimen es iluminado desde
abajo y observado desde arriba. El espcimen aparece brillante, pero ms
oscuro que el brillante fondo. Esta tcnica es ampliamente usada en patologa
para ver secciones de tejidos fijos o pelculas celulares/frotis. El campo claro no
es muy til para clulas vivas sin teir o secciones de tejido sin teir, como en
la mayora de los casos, la luz pasa a travs de muestras transparentes o
traslucida con poca o sin definicin de la estructura.
La luz es reflejada desde muestras opacas y esto es explotado en los
ambientes industriales donde las imgenes de campo claro son usadas para la
inspeccin de obleas (WAFERS) y tarjetas de cristal lquido.

CONFIGURACIN DEL MICROSCOPIO:

Todos los microscopios son capaces de obtener imgenes de campo claro.

SISTEMA RECOMENDADO:
Para aplicaciones biolgicos los microscopios Nikon verticales de la serie
Eclipse-i (Eclipse 50i, 55i, 80i, y 90i) brindan soberbias imgenes de campo
claro ideales para la observacin de especmenes teidos fijados. Estos
microscopios adicionalmente brindan muchas otras capacidades de imagen
para ajustarse a las demandas de aplicaciones tanto de rutina como clnica e
investigacin.