Guia de Laboratorio BCM 1-5

Gua de Practicas de Biologa Celular y Molecular FAMURP
Gua de Laboratorio
Biologa Celular y Molecular
Lima Per
2017
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UNIVERSIDAD RICARDO PALMA
FAMURP
Dr. Elio Ivn Rodrguez Chvez

Rector
Dra. Mara del Socorro Alatrista Gutirrez Vda. De Bambarn

Decana de la Facultad de Medicina Humana
Dr. Hugo Gonzales Figueroa

Coordinador de Curso
Blga. Carola Chambers Medina

Coordinadora de Practicas
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Instrucciones Generales
El estudiante ingresar al laboratorio en el horario indicado en la gua de
matrcula y vistiendo el mandil blanco manga larga.
Est PROHIBIDO Fumar, Comer y Beber dentro del laboratorio.
Est PROHIBIDO el uso de telfono celular dentro del laboratorio, de lo

contrario el alumno ser retirado.
Los alumnos participarn activamente durante el desarrollo de cada prctica

como parte de su evaluacin.
Los alumnos que no cumplen con traer el material de trabajo sern retirados
del laboratorio y no podrn recuperar la prctica en otro grupo.
Antes de iniciar la practica correspondiente el alumno rendir un test para

verificar que posea los conocimientos bsicos introductorios y conozca:
- Conceptos tericos bsicos para esa practica
- Los objetivos de cada prctica.
- El material y equipo de laboratorio necesario para la realizacin de
dicha prctica.
Motivos por los cuales el alumno no ingresara al

Laboratorio
Si llega tarde a clase. Se dar 5 minutos mximo luego de la hora que figura
en la gua de matrcula.
Si no trae el mandil blanco largo.
Si no trae el material requerido para la prctica a desarrollar.
Si no presenta el material obligatorio.
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Material de uso permanente (obligatorio)

El material obligatorio y de uso permanente para cada practica constar de
lo siguiente:
- Material indicado en la gua de prctica.

- Laminas porta objetos: una caja por mesa de trabajo.
- Laminas cubreobjetos: una caja por mesa de trabajo.
- Guantes descartables: dos pares por alumno.
- Mandil blanco largo (manga larga).
- Gua de prctica y colores.
Presentacin de resultados
Los resultados sern presentados al finalizar la prctica en el formato

respectivo.
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CRONOGRAMA DE PRACTICAS 2017 II
SEMANA TITULO DE LA PRACTICA

21/08 al 25/8 Instrucciones Generales y reconocimiento de material
y equipo de laboratorio
28/8 al 01/9 Microscopa
04/9 al 08/9 Niveles de complejidad de un sistema viviente
Interaccin de organismos multicelulares y
11/9 al 15/9
procariontes
18/9 al 22/9 Identificacin de clulas procariotas y eucariotas
25/9 al 29/9 Glicocalix: grupo sanguneos
02/10 al 06/10 Permeabilidad de la Membrana Celular
09/10 al 13/10 Ciclosis y flagelo espermtico
EXAMEN PRACIAL
16/10 al 20/10 Visualizacin de mitocondrias y lisosomas
23/10 al 27/10 Mitosis en meristemos de Allium cepa
30/10 al 03/11 Cromatina sexual: Corpsculo de Barr
06/11 al 10/11 Gametognesis
13/11 al 17/11 REDES. Cmo curan las clulas madre
https://youtu.be/LMMugCa--4A
20/11 al 24/11 Extraccin de ADN en tejido heptico
27/11 01/12 EXAMEN FINAL
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BIOSEGURIDAD DENTRO DEL LABORATORIO
Las normas de bioseguridad obligatorias para la permanencia en el

laboratorio son las siguientes:
1. El ingreso se realizar con el mandil blanco puesto.

2. El cabello se mantendr recogido durante la permanencia en el
laboratorio, evitando as una posible contaminacin.
3. No se permitir el ingreso a los alumnos que presenten
minifaldas, shorts o bermudas, sandalias o zapatos
descubiertos.
4. Sobre las mesas de trabajo solo se podr colocar el material
requerido para realizar las prcticas y el material obligatorio.
5. Antes de manipular las muestras biolgicas el estudiante deber
colocarse los guantes descartables.
6. Se utilizar mascarillas o gafas segn lo requiera la prctica.
7. Se utilizarn propipetas para medir cualquier solucin. No utilizar
la boca.
8. Se realizarn coloraciones sobre varillas de vidrio localizadas en los
respectivos lavaderos de cada mesa.
9. Al trmino de la prctica se dejar el material utilizado y el rea de
trabajo limpio.
10. Durante la permanencia en el laboratorio est prohibido
comer, fumar o beber.
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Practica N 1
RECONOCIMIENTO DE MATERIALES Y EQUIPOS DE LABORATORIO
Introduccin:
En el laboratorio y en las prcticas es esencial la utilizacin de instrumentos y materiales para el

manejo de los reactivos, colorantes y muestras. Hay una serie de materiales que nos va a permitir
el desarrollo de las practicas, es por eso necesario el reconocimiento de estos, cual y como es su
uso, por eso muy importante reconocerlos.
Material de vidrio:
Bagueta: se utiliza para agitar y mezclar sustancias.
Caja De Petri: Existen de diferentes medidas; es utilizada para preparar cultivos de hongos y
bacterias, y tambin para seleccionar muestras de animales.
Frasco Gotero: Son de color blanco o mbar. Sirven para guardar de una manera segura los
reactivos, regularmente se administra con conteo de gotas.
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Tubos de ensayo: Estos recipientes sirven para hacer experimentos o ensayos, los hay en varias
medidas y aunque generalmente son de vidrio tambin los hay de plstico
Pipetas: Permiten medir volmenes. Las hay en dos presentaciones:

a) Pipeta graduada: Es un elemento de vidrio que sirve para dar volmenes exactos, con esta
pipeta, se pueden medir distintos volmenes de lquido, ya que lleva una escala graduada.
b) Pipeta volumtrica: Es un elemento de vidrio, que posee un nico valor de medida, por lo que
slo puede medir un volumen.
c) Pipetas Pasteur.
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Laminas excavadas: lminas de porcelana con pozos para observar reacciones de aglutinacin
para determinar grupo sanguneo.
Mecheros de vidrio para alcohol
Otros materiales:
Propipeta: este se utiliza junto con la pipeta para trasvasar lquidos de un recipiente a otro.
Hojas de bistur. Pinzas de madera
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Gradilla para tubos de ensayo. Gradilla para pipetas.
Equipos:
Incubadora Centrfuga
Microscopio compuesto de campo claro Balanza de 0 600 grs.
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PRACTICA N 2
MICROSCOPA
El microscopio es un instrumento que permite amplificar la imagen de un objeto pequeo. La

imagen puede ser observada directamente, fotografiada o percibida por fotoclulas u otros
receptores, dependiendo de la naturaleza y del uso que haya de hacerse de esta imagen.
Clases de microscopios
MICROSCOPIOS OPTICOS:
El microscopio ptico comn sigue siendo el instrumento ms importante para la enseanza y la

investigacin de muchas especialidades como la biologa celular.
Entre los que pertenecen a la microscopia ptica tenemos:
Microscopio de Campo Oscuro:

Presenta un condensador de campo oscuro, que dirige los rayos de luz dentro del campo de
la muestra formando un ngulo de tal forma que chocan contra el objeto se refractan y
penetran en el objetivo. As el objeto queda brillantemente iluminado en un fondo oscuro. Se
utiliza en hematologa, minerales, cristales qumicos, etc.
Microscopio de Fluorescencia:
Con la ayuda del microscopio de fluorescencia pueden analizarse estructuras celulares
autofluorescentes o estructuras a las que se les une fluorocromos que absorben radiacin
ultravioleta invisible y emiten porciones de energa en las longitudes de onda visibles, ms
larga conocida como fluorescencia. Una desventaja puede ser el rpido desvanecimiento de
la imagen fluorescente. Aplicaciones: marcaje de molculas en clulas y tejidos para su
caracterizacin e identificacin, estudio de clulas normales y patolgicas, estudios
inmunolgicos, etc.
Microscopio de Contraste de Fases:

Permite la observacin de clulas vivas no teidas, mediante un contraste entre sustancias
de diferente grosor o diferente ndice de refraccin mediante el uso de un condensador y
objetivos especiales que controlan la iluminacin del objeto de manera que acentua las
ligeras diferencias en el espesor o en los inidces de refraccin de las estructuras celulares.
Las dieferencias se revelan en forma de distintos grados de brillo o de oscuridad.
Aplicaciones: en disciplinas como fisiologa, parasitologa, farmacologa (procesos
celulares, identificacin y cuantificacin de microorganismos, efecto de medicamentos y
otras sustancias en las clulas, etc.)
Microscopio de luz Polarizada:
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La luz polarizada se utiliza en el microscopio de polarizacin para detectar y analizar

estructuras muy bien ordenadas, por ejemplo fibrillas colgenas de distribucin paralela o
fascculos de filamentos de miosina organizados en forma paralelas en las bandas A de la
clula muscular esqueltica o cardiaca. Aplicacin: Identificar sustancias cristalinas o
fibrosas intracelulares (como el citoesqueleto) y extracelulares (Sustancia amiloide, asbesto,
colgeno, cristales de uratos y otras de origen exgeno)
Microscopio Confocal de barrido Lser:

El microscopio confocal proporciona un mtodo altamente sofisticado y mejorado para
obtener imgenes. En el campo de la biologa celular es muy til para medir procesos
dinmicos, realizar videos para capturar secuencias es muy corto tiempo en clulas vivas y
otras aplicaciones como por ejemplo medir actividades enzimticas, reacciones de oxidacin
, pH intracelular, fagocitosis, apoptosis, estudios de ADN y ARN.
Microscopio Compuesto de Campo Claro.
Breve resea histrica:

En 1590 Hans y Zacaras Janssen (Middleburg, Holanda) construyeron el primer microscopio
compuesto. Este consista de un tubo con lentes en ambos extremos, cerca de uno de ellos se coloca
el objeto (objetivo) y por el otro extremo se observa (ocular). Este instrumento artesanal
constituy la base conceptual de la microscopia moderna.
Marcello Malpighi (1653) fue uno de los primero que observo tejidos bajo el lente del microscopio.
Se considera el fundador de la Anatoma microscpica.
Antonio Van Leewenhoek (1673) us un magnificador simple y un soporte para el espcimen y

observ protozoarios infusorios (ciliados) a una magnificacin de aproximadamente 275 X. El
descubri microorganismos en agua y en 1683 public sus primeros dibujos de bacterias, tambin
descubri el espermatozoide humano.
Giovanni Batista Amici (1827), es famoso por los microscopios de alta calidad, introdujo un
conjunto de sistemas acromtico. El incidi en la importancia del espesor del cubre y porta objeto
para la calidad de la imagen. Invent el objetivo de inmersin.
Reigner de Graaf realiz estudios en los rganos reproductivos de los animales y descubri ciertos
elementos en los ovarios que desde entonces se conocen con el nombre de folculos de graaf.
Otto Muller Consigui en 1773 distinguir lo suficientemente bien a pequeos seres para
clasificarlos en dos tipos: bacilos y espirilos.
El trabajo de Amici sirvi para que un grupo de microscopistas de Carl Zeiss, Ernst Abbe y Otto
Schott, disearan el sistema de inmersin usando un aceite que tenga el mismo ndice de
refraccin que el vidrio, incidieron en la importancia de la apertura numrica.
En 1879 Walter Flemming observo la divisin celular.
Asimismo en 1886 introdujeron los objetivos apocromticos para el microscopio.
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En los primeros aos del siglo XX, el profesor Kohler ide el mtodo de iluminacin microscpica,
conocido universalmente como "iluminacin Kohler"; tambin diseo y perfeccion el microscopio
de luz ultravioleta.
En 1906 Santiago Ramn y Cajal recibi el Premio Nobel de Fisiologa y Medicina por su doctrina
de la neurona, para poder visualizar las neuronas utilizo tcnicas de coloracin lo que permiti
aislar las neuronas y demostrar a travs del microscopio que estaban separadas.
En 1906 Alois Alzheimer present por primera vez en la XXXVII Conferencia de Psiquiatria el
estudio de una enfermedad de la corteza cerebral denminada la enfermedad de Alzheimer, que
presentaba diversos sntomas como perdida de la memoria, desorientacin y demencia.
En 1983 Harald Zur Hausen descubri que el virus del papiloma humano, una enfermedad de
transmisin sexual, era un factor necesario en el desarrollo de casi todos los canceres cervicales.
Zur Hausen logro aislar bajo el microscopio dos cepas del virus responsables del 70% de los
canceres en el cuello del tero.
Partes:
A. El Sistema de Soporte
Consiste en:
La Base
El Brazo
El Revlver
La Platina
B. El Sistema de Aumento.
Los Objetivos: Lentes donde se forma a la imagen real, invertida y aumentada del
espcimen que se observa.
Aumento:
El objetivo de 10x aumenta 10 veces.
Los objetivos secos son: 4X, 10X, 40X, El objetivo de 100x utiliza como medio ptico
el aceite de inmersin.
Apertura numrica (A.N)

Es la medida de la capacidad de un objetivo para colectar rayos de luz difractados
que pasen a travs del espcimen. A medida que aumenta la apertura numrica
mayor es el poder de resolucin.
Resolucin
Es la capacidad del microscopio para discriminar dos puntos situados uno cerca de
otro (poder de resolucin). Esta capacidad se extienda hasta una distancia mnima
que el instrumento es capaz de distinguir (lmite de resolucin).
El Ocular: son un conjunto de lentes que permiten magnificar la imagen

aumentada por el objetivo. Acta como una lupa es decir proyecta una imagen
virtual y derecha de la definida por el objetivo. Por ejemplo si la imagen del objetivo
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aumenta 40 veces (objetivo de 40x) y enseguida de 10 veces mediante el ocular de

10x, el aumento ser de 400 veces.
C. El Sistema de Iluminacin.
Fuente luminosa.
Muchos microscopios bsicos, utilizan espejos o focos de bajos voltajes. La luz
natural o artificial es focalizada, va un sistema de lentes colectores en el
condensador.
Condensador
En los microscopios de luz transmitida, el condensador concentra un cono de luz de
la misma apertura numrica (AN) del objetivo con el que se observa la muestra.
Diafragma
Se encuentra dentro del condensador, se utiliza para reducir o ampliar la cantidad
de luz que ingresa al condensador.
D. El Sistema de Ajuste o Enfoque.
Tornillo Macromtrico.
Tornillo Micromtrico.
Tornillo de ajuste del condensador (eleva o baja el condensador)
Elevador del diafragma (cierra o abre el diafragma)
Tornillos reguladores de la platina.
Para conseguir una buena iluminacin:
* Utilice el objetivo de menor aumento (10x).

* Eleve la lente frontal del condensador a una distancia de 1 a 2 mm de la platina
* Cercirese que el diafragma este abierto.
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* Observe por el ocular y desplace la platina girando con una de sus manos el tornillo de
desplazamiento de la platina.
Enfoque
* Colocar la muestra sobre la platina y sujetarla.

Girar el revlver hasta el objetivo de 10x.
Gira el tornillo macromtrico y lleva la platina a una distancia de 1 a 2mm entre el objetivo y
la lmina preparada ESTA OPERACIN DEBES HACERLA SIN COLOCAR TUS OJOS
SOBRE LOS OCULARES.
* Ahora coloca ambos ojos abiertos sobre los oculares. NO COMETAS EL ERROR DE
CERRAR O SEMICERRAR ALGUNO DE TUS OJOS.
* Una vez realizado lo anterior empieza a desplazar hacia abajo la platina, utilizando el
tornillo macromtrico hasta que empieces a visualizar el espcimen que se encuentra en la
muestra que has preparado. Este enfoque se llama ENFOQUE GRUESO.
* Luego gira el revlver hasta el objetivo de 40x. Rota el revolver, de manera que cambias de
objetivo sin necesidad de bajar la platina.
Empieza a girar, con tus dedos pulgar e ndice de ambas manos, el tornillo micromtrico en
un mismo sentido hasta que puedas observar ntidamente el espcimen, ESTO ES EL
ENFOQUE FINO, que se ajusta a la visin de cada observador.
Tcnica de la inmersin:
Consiste en colocar una gota de aceite de inmersin entre el cubreobjetos y la lente frontal del
objetivo de mximo aumento. Para ello, teniendo ya enfocado el objeto a un aumento menor, se gira
levemente el revlver, se coloca una pequea gota de aceite de inmersin sobre el cubreobjetos,
luego se sigue girando hasta enfocar con el objetivo de mayor aumento y se procede al ajuste con el
tornillo micromtrico.
Terminada la observacin se eleva el tubo o se baja platina y se limpia el objetivo con papel de seda
o lente suave que puede estar humedecido en un detergente especial para lentes.
MICROSCOPIOS ELECTRNICOS
Tenemos:
Microscopio Electrnica de Transmisin.:

Proporciona contraste mediante los electrones dispersos. Las muestras que se van a analizar
por microscopa de transmisin de electrones se pueden preparar con tintes positivos o
negativos. En la tincin positiva, la muestra de tejido se corta en secciones finas y se tien
con sales de metales pesados que reaccionan con lpidos, protenas y cidos nucleicos.
Tambin se pueden utilizar para identificar macromolculas especficas dentro de las clulas.
La tincin negativa resulta til para la visualizacin de estructuras biolgicas intactas, como
las bacterias tambin macromolculas.
Microscopio Electrnico de Barrido: se emplea para examinar superficies de objetos cuyo

tamao va desde un virus hasta la cabeza de un animal. La preparacin del espcimen es
producir un objeto que tenga las mismas propiedades de forma y superficie que en el estado
vivo, pero que carezca de lquido, por lo tanto para fijar la muestra esta se somete a una
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serie de alcoholes y luego se secan en un proceso de secado a punto crtico, luego se cubre
con una lmina delgada de metal. Lo que lo convierte en un blanco adecuado para un rayo
de electrones.
II) OBJETIVOS
1. Identificar los diferentes componentes del microscopio.

2. Realizar el enfoque fino y observar detalles de la muestra.
III) MATERIALES
Deben traer los estudiantes:

1. Muestra: 02 Pulgas (dentro de un frasco con agua) por alumno
2. Material Obligatorio.
3. Lancetas (02 por alumno)
4. Papel toalla.
El laboratorio proporcionar:
1.- Microscopios compuestos de campo claro.
2.- Papel lente
3.- Papel filtro
4.- Pinzas
5.- Placas Petri.
IV) PROCEDIMIENTO
Preparacin y Observacin de la muestra:
* Toma una lmina portaobjeto limpia. Estas lminas y los cubreobjetos siempre debes tomarlo
por los bordes usando tus dedos pulgar e ndice. NUNCA OLVIDES ESTO.
* Coloca tu cubre objeto sobre hoja de papel bond extendida sobre la mesa de trabajo.
* Con un gotero coloca, en el centro del portaobjeto, una pequea gota de agua y sobre esta la
pulga, cubre la muestra con el cubreobjeto y seca los bordes utilizando papel filtro.
Si el cubreobjetos se encuentra inclinado, se coloca un trozo de papel filtro sobre la lmina
cubreobjetos y de presiona.
* En otra lmina se coloca la muestra de gota de sangre sin agregarle agua y se coloca sobre
la muestra una lmina cubreobjetos. A este tipo de lminas que presentan una muestra
lquida se denominan preparaciones hmedas.
* Coloca una de las lminas sobre la platina y asegrala con las pinzas del sistema de
desplazamiento que se encuentran sobre la platina.
* Procura que la muestra que has preparado se encuentre en el centro del orificio de la
platina.
* Recuerda que para enfocar la muestra primero debes hacerlo con el objetivo de menor
aumento (10) y observando con los dos ojos para que puedas apreciar mejor la muestra y
observar tambin el puntero que se encuentra en uno de los oculares.
Recomendaciones para el uso del Microscopio ptico:

1. Comience siempre las observaciones con el objetivo de menor aumento. Esto le dar una
visin integral del preparado y le permitir seleccionar las mejores areas o las de especial
inters, que luego observar con mayores aumentos.
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2. La iluminacin debe ser homognea y de buena intensidad pero no excesiva y deber

modificarla de acuerdo con el objetivo que est utilizando.
3. Siempre que se haga una observacin, ajuste el enfoque con el tornillo micromtrico aun
cuando ya haya sido enfocado por otra persona previamente.
4. Recuerde que el microscopio ptico otorga imgenes invertidas del objeto, por lo tanto el
movimiento que realice de la platina ser inverso al corrimiento de la imagen.
5. Todo dibujo que realice de la observacin debe ser esquemtico, respetando las proporciones
de los elementos que observa.
6. Los portaobjetos y cubreobjetos deben estar limpios y secos.
7. Si el lquido excede la lmina cubreobjetos utilizar papel filtro.
V) CUESTIONARIO
1. Mencione otros tipos de Microscopios pticos y su aplicacin en la medicina.

2. Complete el cuadro con 4 ejemplos:
Colorante utilizado Muestra / Corte histolgico
Ejm:
VI) REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS
Karp, Gerald. 2008 Biologa Celular y Molecular 5ta. Edicin, Mc Graw Hill.Ulrich
Welsch, Johannes Sobotta 2009 Histologa. 2da edicin. Editorial Mdica
Panamericana.
http://www.agro.unlpam.edu.ar/catedras-
pdf/biologia2010/Apuntes%20Te%F3ricos%202010/Microscop%EDa%202010.pd
f
https://books.google.com.pe/books?id=Oy-
kG04ClBUC&pg=PA9&dq=microscopia&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwiH3sa-
n9DLAhVC6CYKHQHwBtMQ6AEIOTAF#v=onepage&q=microscopia&f=false
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Resultados de Laboratorio
Muestra: .
Colorante o Coloracin:
Clula que observa: .
Estructura:
Muestra: .
Colorante o Coloracin:
Clula que observa:
Estructura:
VB Blga. Carola Chambers Fecha:
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PRACTICA N 3
NIVELES DE COMPLEJIDAD DE UN SISTEMA VIVIENTE
I) INTRODUCCIN
Los seres vivos son sistemas altamente organizados y complejos. El nivel ms simple de la materia
es el subatmico, en este nivel se encuentran principalmente los electrones, protones y neutrones
que constituyen los tomos. En el siguiente nivel, los tomos individuales forman molculas, en
este nivel se encuentran los niveles atmicos, sub atmico y molecular ms complejas o
macromolculas formadas a partir de molculas simples.
Las interacciones entre los componentes de un nivel dan lugar a propiedades nuevas y diferentes
de las que caracterizan el nivel anterior. En un nuevo nivel de organizacin surge la propiedad
ms notable de todas, la vida, en la forma de organismos unicelulares o multicelulares. Como lo
establece la teora celular, todos los organismos vivos estn compuestos de una o ms clulas. Las
clulas vivas especializadas se organizan en tejidos como el epitelial, conectivo y nervioso, los que
a su vez pueden constituir rganos como el hgado, el tracto intestinal o el cerebro humano, que
presentan un grado extraordinario de complejidad. Sin embargo el cerebro es a su vez parte de
algo mayor, el sistema nervioso con nuevas propiedades que a su vez dependen de las del cerebro.
Otro rasgo fundamental que caracteriza a la vida es que los seres vivos intercambian sustancias y
energa con el medio externo funcionando como un sistema abierto. Los organismos vivos son
expertos en la conversin de energtica. El conjunto de reacciones qumicas y de transformaciones
de energa, incluidas la sntesis y la degradacin de molculas, constituyen el metabolismo.
Otra capacidad crucial para la vida es que los organismos son capaces de mantener un medio
interno estable dentro de ciertos lmites a pesar de que intercambian materiales continuamente
con el mundo externo. Todo esto es posible por el fenmeno denominado homeostasis, es decir los
seres vivos se mantienen relativamente estables lo que le permite al organismo mantener su
identidad bioqumica y funcional pese a las cambiantes condiciones en su medio exterior.
El organismo individual no es el ltimo nivel de la organizacin biolgica ya que los organismos

interactan y as constituyen parte de un sistema ms vasto de organizacin, las poblaciones.
Estas a su vez constituyen las comunidades que forman un ecosistema. El ltimo nivel de
organizacin es la biosfera.
A continuacin detallamos los diferentes:
1. Nivel Quimico: Los atomos, formados a su vez por particulas subatomicas (protones,
neutrones, electrones),se combinan entre si para formar combinaciones llamadas
molculas, que pueden ser inorgnicas y orgnicas. Por lo tanto el tomo es la unidad mas
pequea de un elemento qumico, la molcula es la parte mas pequea de un compuesto.
2. Nivel Celular: Los diferentes tipos de moleculas se combinan entre si para formar
estructuras celulares llamadas organoides u organelos, como la membrana celular las
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mitocondrias y los cromosomas, que realizan funciones organizadas en la unidad biologica

que es la celula. Tengamos en cuenta que cada celula posee su propio metabolismo y es
capaz de reproducirse.
Algunos organismos son unicelulares, pero la mayoria son individuos pluricelulares, por lo
que las celulas semenjantes en forma y funcion se unen para formar tejidos con distintos
grados de complejidad. En los individuos pluricelulares los tejidos se agrupan de acuerdo
con sus caracteristicas propias para formar rganos (partes del organismo formados por
varios tejidos que trabajan para la misma finalidad, como el estomago o la mano).
Los organos pueden ser de varios tipos y se combinan coordialmente de diferentes maneras
para dar origen a un nivel de organizacin mayor que son los aparatos o sistemas, la
principal diferencia radica en que los aparatos sus organos estan formados por diferentes
tipos de tejidos y en los organos de los sistemas, predomina un tipo de tejido. El individuo u
organismo es el resultado de la organizacin y funcionamiento coordinado de todos y cada
uno de los niveles anteriores.
3. Niveles Ecolgicos:
Poblacion: es el conjuntos de individuos de la misma especie que habitan en una zona
geogrfica limitad; por ejemplo un hormiguero, una manada de coyotes, etc.
Comunidad: es el conjunto de todas la poblaciones de diferentes especies que habitan en un
ecosistema.
Ecosistema: es un nivel de organizacin mayor, ya que adems de la comunidad,
representada por todos los seres vivos que viven en un ecosistema, se encuentran los
factores abiticos que consisten en las condiciones del medio que interactuan con los seres
vivos.
La biosfera: es el mayor nivel de organizacin biolgica de nuestro planeta, por que incluye
a todos los seres vivos de todos los ecosistemas de la tierra.
Niveles de Organizacin de los seres vivos
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II) OBJETIVOS
1. Observar y conocer los principales multiniveles de organizacin desde individuo u organismo

hasta la clula, tomando como modelo de estudio el ratn.
2. Verificar las interrelaciones entre sistemas de rganos, tejidos, clulas y molculas
III) MATERIALES
Los alumnos agrupados por pareja de trabajo debern traer lo siguiente:

1. Estuche de diseccin o las siguientes piezas: tijera recta, pinzas, mango de bistur n 4,
estiletes, sonda acanalada.
2. Un ratn blanco vivo (adulto).
3. Una tabla de diseccin de espuma tecknopor, medida 20x30 cm. Sin forrar.
4. 1 pao yess
5. Alfileres
6. Una Bolsa negra para eliminar los desechos.
7. Papel Toalla.
8. Material Obligatorio.
9. Placa de 3 divisiones (01 por pareja de trabajo)
Que proporciona el laboratorio:
1. Microscopio compuesto de campo claro
2. Distencil
3. Algodn.
4. Jeringa de tuberculina.
5. Pipetas.
6. Propipetas.
7. Placas Petri
8. Tubos de ensayo
9. Baguetas de vidrio
10. Gradillas
11. Colorante Wright.
12. Agua Oxigenada.
13. Papel lente.
IV) PROCEDIMIENTO
Morfologa externa del organismo en estudio.
1. Observe el ratn de cabeza a cola e identifique los rganos externos que forman parte de
los sistemas: digestivo, respiratorio, excretor, reproductor, auditivo y visual.
2. Observa minuciosamente el sistema tegumentario e identifique los rganos que lo forman.
Del organismo a los rganos.
Sacrificio del ratn:
1. Coloque al ratn en posicin dorso ventral (boca abajo) sobre el plano de la tabla de
diseccin.
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2. Con ayuda del pao yess cubrir al ratn dejando las extremidades inferiores expuestas.
3. Estirar una de las extremidades inferiores, palpar la zona ms blanda de esta y colocarle
0.1ml. de distencil con ayuda de la jeringa de tuberculina. Esperar unos minutos.
Procedimiento:
1. Coloque el ratn muerto en posicin ventro dorsal (boca arriba) y con ayuda de la pinza
pellizque la piel, en la lnea medio ventral, tire en sentido contrario cuidadosamente y
realice un pequeo corte con la tijera.
2. Introduzca la sonda acanalada, con el canal hacia arriba hasta la parte donde inicia el
esternn y haga un corte longitudinal en la pared del cuerpo siguiendo el canal de la
sonda. Tenga cuidado de no perforar rganos de la regin abdominal.
3. Observe y reconozca los rganos que se encuentran dentro de la cavidad.
4. Observe en la base de la cavidad torcica, la presencia del msculo diafragma.
5. Introduzca la sonda acanalada rompiendo el diafragma y corte el esternn (la pieza
esqueltica central, entre las extremidades anteriores). Tenga cuidado de no daar los
rganos que estn en la cavidad torcica.
6. Identifique los rganos que se encuentran en esta cavidad: corazn, los pulmones.
7. Identifique el sistema reproductor de su espcimen. Reconozca si es macho o hembra.
Hembra en estado de gestacin
De los rganos a las clulas.
La sangre es un tejido que forma parte del sistema circulatorio.

1 Con la tuberculina descartable punce el corazn y tome muestra de sangre. (con un
Angulo de 90)
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2. Coloque una gota en el extremo de una lmina porta objeto, luego con otra lmina haga una
extensin o frotis (con un ngulo de 45)
3. Deje secar y coloree con Wright
4. Luego observe al microscopio a menor aumento (l0) y mediano aumento (40). Qu nivel
de organizacin biolgica esta Ud. observando?
De las clulas a las molculas.
Como puede comprobar, los rganos estn formados por tejidos y las unidades estructurales de
estos son las clulas. Estas, a su vez, contienen organelas y molculas biolgicas: protenas
polisacridos, lpidos y cidos nucleicos. Las enzimas son protenas catalizadores que se
encuentran en todas las clulas. Los catalizadores tienen la caracterstica de aumentar las
velocidades de reacciones que ya son energticamente favorables al disminuir la energa de
activacin. Las enzimas deben catalizar reacciones qumicas en las apacibles condiciones
celulares: 37 c, pH 6.5 7.5 y solventes acuosos. Para demostrar la actividad enzimtica se
realizar lo siguiente:
1. Tome una pequea muestra de hgado, rin y msculo del ratn, se coloca cada muestra
en una placa Petri y se cortan en pequeos cubitos, con ayuda de la tijera o del bistur.
2. Coloque los cubitos en tres tubos de ensayo diferentes, un tubo para cada muestra.
3. Con ayuda de la bagueta de vidrio triture los cubitos en los tubos que ya contienen 1 ml de
perxido de hidrgeno.
4. Observe y compare los resultados obtenidos en los tres tubos.
En todos los tejidos vivos las clulas se encargan de producir la enzima catalasa, la cual cataliza
la reaccin que descompone el perxido de hidrgeno, producto del metabolismo celular.
V) CUESTIONARIO
1. Explique Ud. como est interrelacionado el sistema respiratorio con el sistema

digestivo.
3. A qu nivel de organizacin pertenece la catalasa? Escriba la ecuacin de reaccin de la
catalasa.
4. Cul es el papel que desempea el diafragma?
5. Mecione las funciones que cumplen los siguientes rganos: hgado y riones.
Audesirk T. & Audesirk G.. 1996: Biologa: La vida en la tierra. 4ta. Edicin. Pretice-Hall
Hispanoamericana, S.A. Mxico, Nueva York, Bogot, Londres.
23
Ondarza R.N. 1996.Biologia Moderna . 10 a. Edicin. ed.Trillias. Mxico, Argentina, Espaa.

Rosaura Ruiz Gutirrez 2006. 1ra edicin. Editorial Pearson Education. Impreso en Mxico.
http://www.noticiasmvs.com/#!/noticias/explican-las-diferencias-sexuales-que-provocan-el-
cancer-de-higado-354.html
Hoja de resultados
Muestra: .
Clula que seala el puntero: .
Colorante: ...
Tcnica que se utiliz para obtener la muestra:
Identificar las estructuras internas : (seale con una flecha las estructuras).
Dibuje la reaccin enzimtica para cada una de las muestras:
24
Msculo Hgado Rin

PRACTICA N 4
INTERACCION DE ORGANISMOS MULTICELULARES Y PROCARIOTES EN EL CONTEXTO DE SU
MEDIO AMBIENTE
INTRODUCCIN
La poblacin microbiana existente en nuestro entorno es grande y compleja. Cientos de especies

microbianas habitan normalmente en distintas partes de nuestro cuerpo, incluidas la boca, el
tracto intestinal y la piel. Al nacer, los microbios inmediatamente empiezan a colonizar nuestros
cuerpos, as como a casi todos los objetos del mundo. Ellos flotan alrededor hasta que entran en
contacto con una superficie que ofrezca comida y resguardo. Se encuentran ms frecuentemente
en la oscuridad, en objetos hmedos que a menudo entran en contacto con la comida, la suciedad
o la vegetacin. Las superficies del bao, los cepillos para el cabello, los refrigeradores, los
lavaplatos y las tablas de cocina tienen a menudo muchos microbios. Las manijas y las paredes
tienen menos porque son pobres en nutrientes y secos.
El visualizar de manera prctica el crecimiento de vida a travs de un cultivo para clulas

eucariotas o procariotas es un aporte esencial de la biologa, que permite comprender de manera
prctica, como se pueden estudiar clulas procariotas por medio de la tcnica biolgica de
cultivo. Observar la interaccin de sistemas vivos autopoyticos de naturaleza eucariota y
procariota en su medio ambiente normal, determinando la aparicin de microorganismos
bacterianos. Identificar y comprender a las estructuras biomoleculares que determinan la
interaccin de los microorganismos aislados con el sistema autopoytico multicelular humano y
contextualizar dichas interacciones en trminos de homeostasis o prdida de la misma es
importante como conocimiento de base para el estudiante de medicina que en ciclos posteriores
profundiza desde la disciplina microbiolgica y clnica estos procesos.
Se dispone de una gran cantidad de medios y la clase que se debe de utilizar depende de muchos
factores, uno de los cuales es la clase de microorganismos que se va a cultivar.
Para cultivar un microorganismo determinado proveniente de una muestra clnica en particular

Primero, el medio de cultivo debe contener los nutrientes adecuados para el microorganismo
especfico que se desea desarrollar, como humedad suficiente, un pH ajustado de manera
apropiada y una concentracin conveniente de oxgeno, tal vez ausente por completo.
Para favorecer el crecimiento microbiano un medio debe proporcionar una fuente de energa as
como fuentes de carbono, nitrgeno, azufre, fosforo y cualquier otro factor de crecimiento que el
organismo no pueda sintetizar.
Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su

crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material
alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los
microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes.
La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a

los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una
infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.
25
En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como

hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por
dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar
reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la
sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos
resistentes.
Condiciones generales para el cultivo de microorganismos:
1. Disponibilidad de nutrientes adecuados.

2. Consistencia adecuada del medio.
3. Presencia (o ausencia) de oxgeno y otros gases.
4. Condiciones adecuadas de humedad.
5. Luz ambiental.
6. pH.
7. Temperatura.
8. Esterilidad del medio.
El material que se inocula sobre el medio se denomina inculo mediante la tcnica de siembra por
estra en placa o siembra en masa en placa. Durante la incubacin a 37:C , las clulas microbianas
individuales se reproducen tan rpidamente que en un lapso de 18 a 24 horas producen masas
visibles de clulas denominadas colonias. Una colonia es visible a simple vista. Cada colonia
diferente es presumiblemente un cultivo puro de una sola clase de microorganismo. Si dos clu las
microbianas procedentes del inculo original quedan muy cerca una de otra sobre el medio de
Agar, la masa de clulas observables no ser un cultivo puro.
La mayora de los microbios en nuestro cuerpo y otras superficies son inofensivas, pero algunos
son patgenos o causan enfermedad. Por esta razn, queremos controlar el nmero de microbios
26
que nos rodea. La posibilidad de infectarnos aumenta con el nmero de microbios en los objetos
circundantes.
PROCEDIMIENTO
1. Lava tus manos y colcate los guantes. Saca tu placa de Petri pero no abras las cajas hasta que
se te indique.
2. Toma dos de los tres tubos de ensayo con suero y coloca un hisopo dentro de cada uno. Recorre
la facultad y busca una superficie que presente las caractersticas para un crecimien to bacteriano.
Toma una muestra con el hisopo limpia t superficie u objeto escogido con todos los lados de la
punta del hisopo voltendolo y retorciendo el hisopo a medida que lo mueves por la superficie del
objeto. y regresa al laboratorio.
3. Coloca un hisopo en el tercer tubo y toma una muestra de la superficie de la mano de tu

compaero, el hisopo NO SE REGRESA AL TUBO.
Toma tu placa Petri asignada y sin abrir con t plumn indeleble, escribe el nombre de tu
compaero y el nombre de las superficies muestreadas.
4. Ahora abre la tapa de la caja y frota suavemente en cada compartimiento de la placa. Para la
siembra de superficies se utilizara el mango de Kolle y el asa de siembra, mientras que para la
muestra de la mano frota suavemente el hisopo en la superficie del medio de cultivo. Tus siembras
slo deben dejar una impresin muy ligera en el Agar.
27
5. Deja tu placa en la estufa de cultivo para esperar el resultado 24 a 48 horas.
6. Descarta todos los hisopos usados en el recipiente con bolsa roja de biodesechables
acondiconado en cada mesa del laboratorio para este fin.
6. Despus de que hayan pasado dos das, mira tu placa Petri inicial. No la abras. En un cuaderno
anota lo observado con la asesora de tu profesor. Indica si hubo aparicin de sistemas
autopoytico microscpicos en el medio, que caractersticas generales tenan.
OBJETIVOS:
- Comprender de manera prctica, como se pueden estudiar clulas procariotas por medio
de la tcnica biolgica de cultivo.
- Observar la interaccin de sistemas vivos autopoyticos de naturaleza eucariota y
procariota en su medio ambiente normal, determinando la aparicin de microorganismos
bacterianos.
- Identificar y comprender a las estructuras biomoleculares que determinan la interaccin
de los microorganismos aislados con el sistema autopoitico multicelular humano.
- Contextualizar dicha interaccin en trminos de homeostasis o prdida de la misma.
MATERIAL
El alumno deber traer:
Material obligatorio
Mango Kolle
Asa de siembra en anillo y en punta.
3 Hisopos largos (por cada alumno)
28
1 pliego de papel craft (por todo el grupo de laboratorio)
Siembra en estra:
Clasificacin:
Cuestionario:
1.- Los macronutrientes son CHONPS Por qu son necesarios para la clula?
2.- Complete el siguiente cuadro con 5 medios de cultivos y que bacteria crece en ellos.
29
Nombre de la especie o familia de bacterias

Nombre del Medio de Cultivo
que se desarrolla.
Referencias Bibliogrficas:
Gerard J. Tortora, Berdell R. Funke, Christine L. Case 2007. Introduccin a la microbiologa.
9na edicin. Editorial Mdica Panamericana.
30
HOJA DE RESULTADOS:
Muestra 1: Muestra 2:
................................ .
Muestra 3:
N Muestra
Caractersticas
de la colonia Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3
Forma
Elevacin
Borde
Color
------------------------------------------------- ----------------------------------
VB Blga. Carola Chambers Medina Fecha
31
PRACTICA N 5
IDENTIFICACIN DE CLULAS PROCARIOTICAS Y EUCARIOTAS
I) INTRODUCCIN
La clula unidad estructural, funcional y de continuidad de los sistemas vivientes por su origen, se
clasifica como:
Clula procariotica: Los organismos vivos que se denominan organismos procariotes

incluyen a las bacterias, presentan una estructura simple.
Los procariotas estn divididos en dos grandes grupos: Arqueobacterias que se vinculan de
forma ms estrecha con los eucariotas y los Eubacterias (bacterias).
Dentro de las Aequeobacterias tenemos: metangenos, halfilos, acidfilos, termfilos.
La estructura de la clula procariota est formada por lo siguiente:
Pared celular.
Membrana celular.
Citoplasma.
Estructuras que le confieren movilidad: Cilios y flagelos.
Clula eucaritica: presentan compartimentos definidos por membranas celulares, El

compartimiento ms grande recibe el nombre de citoplasma y contiene las organelas,
asociaciones supramoleculares (ribosomas, microtbulos y microfilamentos) y dems
molculas que participan en el metabolismo celular.
En el ncleo se encuentra el material gentico organizado en cromatina, adems se puede
observar el nuclolo que es una organizacin supramolecular ribonucleoproteica.
Los organismos eucariontes incluyen a los organismos ms conocidos, agrupados en cuatro
reinos: Animalia (animales), Plantae (plantas), Fungi y Protista.
32
Las clulas vegetales presentan diferencia en la cubierta esta es muy marcada y se conoce
con el nombre de pared celular vegetal.
Clula Animal Clula Vegetal
BACTERIAS:
Las Bacterias carecen de ncleo diferenciado; presenta un ADN circular en doble hlice sin
protenas asociadas; carecen de microtbulos y estructuras relacionadas. En los
procariotes no hay compactacin de los cromosomas ni huso mittico. El ADN se duplica y
las dos copias se separan de manera sencilla y precisa por el desarrollo de una membrana
celular entre las dos. La mayor parte de los procariotas corresponde a organismos
asexuados, ya que solo contienen una copia de su nico cromosoma y carecen de procesos
comparables a la meiosis, formacin de gametos o fecundacin verdadera. Aunque en los
procariotas no hay una reproduccin sexual verdadera, algunos son capaces de tener
conjugacin en la cual un fragmento de DNA se transfiere a otra.
La cubierta de la membrana plasmtica se encuentra muy diferenciada y se denomina pared

celular bacteriana, esta le da rigidez y forma a la bacteria; su estructura molecular bsica es el
peptidoglicano. La pared puede contener algunos otros componentes, adems del peptidoglicano,
como los lipopolisacridos en las bacterias gram-negativas y los cidos teitoicos en las bacterias
gram-positivas.
Las bacterias comprenden, por una parte, especies de importancia mdica puesto que producen
una serie de infecciones y padecimientos en el hombre y en los animales pero, por otra parte, una
gran mayora representa beneficios para la agricultura, la industria y la salud humana y animal.
Las bacterias, se clasifican de acuerdo a como retiene el colorante cristal violeta, en su pared
celular, segn la tcnica diseada por el mdico dans Hans Christian Gram, es la siguiente:
Gram positivas: Pared celular contiene mureina y cido teitoico.

Ejemplos: Listeria, Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, y Clostridium.
Gram negativas: La composicin de su pared celular es ms compleja.
33
Adems del peptidoglucano, contiene una asociacin de protenas lpidos y

lipopolisacridos.
Ejemplos: gonorrea: Neisseria gonorrhoeae, meningitis: Neisseria meningitidis y sntomas
respiratorios Moraxella catarrhalis, enfermedades respiratorias: Haemophilus
influenzae, Klebsiella pneumoniae , Legionella pneumophila, Pseudomonas aeruginosa,
enfermedades urinarias: Escherichia coli, Proteus mirabilis, Enterobacter cloacae,
Serratia marcescens y enfermedades gastrointestinales Helicobacter pylori, Salmonella
enteritidis, Salmonella typhi.
CLULAS EPITELIALES:
Las clulas epiteliales son un componente especializado de muchos rganos. Presentan unas
caractersticas estructurales comunes, en especial una disposicin en capas cohesivas, pero
desempean funciones diversas gracias a sus adaptaciones especializadas, estas capas forman
epitelios y funcionan principalmente como:
Cobertura o revestimiento de las superficies corporales, por ejemplo la piel, el intestino y

diferentes conductos.
Unidades funcionales de las glndulas de secrecin como la saliva y el hgado.
34
35
II) OBJETIVOS
Reconocer las estructuras celulares de clulas procariticas y eucaritica.
Diferenciar bacterias Gram positivas y Gram negativas
Reconocer el compartimiento nuclear de una clula eucaritica.
III) MATERIALES
Los alumnos deben traer:
1. 2 hisopos largos por mesa de trabajo.
2. Mango de Kolle y asa de siembra en punta.
3. Material indispensable u obligatorio.
4. Papel toalla.
El laboratorio proporciona:
1. Microscopios compuestos de campo claro
2. Lmina de referencia coloreadas.
3. Colorante azul de metileno.
4. Aceite de inmersin.
5. Algodn.
6. Fsforos.
7. Mecheros de alcohol.
8. Papel lente.
9. Pinzas de madera.
10. Puentes de coloracin.
36
Coloracin Gram:
1. Solucin de cristal violeta.
2. Solucin de lugol.
3. Solucin alcohol-acetona.
4. Solucin de safranina.
IV) PROCEDIMIENTO
Observacin de clulas procariticas (bacterias): Coloracin Gram.

1. Tener listo un portaobjeto limpio y desengrasado.
2. Extraer con el hisopo una muestra de sarro dentario y extenderlo (frotis) en la parte central
del portaobjeto.
3. Fijar el frotis a la llama del mechero.
4. Cubrir con Cristal Violeta por 1 min.
5. Lavar con agua corriente.
6. Cubrir la preparacin con lugol por 1 min.
8. Agregar alcohol-acetona hasta que ya no arrastre colorante.
9. Lavar con agua corriente
10. Agregar el colorante safranina por 30 seg.
12. Secar con ayuda del mechero.
11. Observar al microscopio (al ser una muestra seca no requiere de cubreobjetos) primero a
10, luego agregar a la lmina 01 gota de aceite de inmersin y pasar al objetivo de 100.
12. Esquematice sus observaciones realizadas con el objetivo 100.
Observacin de clulas eucariticas (clulas epiteliales) coloracin de azul de metileno.

1. Extraer con el hisopo una muestra de raspado bucal (cara interna de las mejillas) y
extenderlo sobre la parte central de un portaobjeto limpio y desengrasado.
2. Dejar secar a temperatura ambiente.
3. Cubrir la lmina con azul de metileno por 10 min.
4. Enjuagar con agua corriente.
5. Dejar secar a temperatura ambiente
6. Observar al microscopio a 10 y luego a 40. Esquematice sus observaciones con el objetivo
de 40.
V) CUESTIONARIO
1. En que se bas Christian Gram para clasificar las bacterias. Explique.

2. Haga una relacin de 10 bacterias patgenas completando la siguiente tabla:
Muestra en la
Gram positiva o Enfermedad que
Nombre de la bacteria que la
negativa causa
encontramos
3. Por qu no puede observar la estructura y medir el espesor de la membrana plasmtica en

el microscopio compuesto de campo claro.
37
4. Por que una bacteria Gram + se tie de azul?

5. Mencione la clasificacin de clulas epiteliales en base a su forma y su manera de apilarse.
6. Mencione las uniones que se encuentran entre las clulas epiteliales.

Darnell J., Lodish H & Baltimore D. 1990. Molecular Cell Biology. 2da. Edicin. Scientific
American Books. New York
Stevens A. 2000 Histologia Humana 2da. Edicin Ed. Harcourt Brace. Espaa.
Jan Koolman - 2005 -. Bioqumica: texto y atlas. 3ra. Edicin. Editorial medica Panamericana.
Espaa.
https://books.google.com.pe/books?id=TdsoWPEYaoUC&pg=PA1&dq=celulas+procariotas
&hl=es&sa=X&ved=0ahUKEwi2rab9pYvPAhVBySYKHTAsBbsQ6AEIGjAA#v=onepage&q=cel
ulas%20procariotas&f=false
38
Hoja de resultados
Muestra: ....
Coloracin: ..
Clasificacin por coloracin:
Clasificacin por forma: ..
Muestra: .
Colorante:
Estructura que identifica: ..
--------------------------------------------- --------------------------------------
VB Blga. Carola Chambers Fecha
39
PRACTICA N 6
GLICOCALIX: GRUPOS SANGUNEOS
I) INTRODUCCION
Receptores de membrana:
Para la captacin y transmisin de las seales las clulas disponen de protenas receptoras.
Muchas de estas protenas integran la membrana plasmtica, desde donde captan las seales que
llegan de los alrededores. Los receptores de hormonas lipfilas son los nicos que actan en forma
disuelta.
Fundamento de la accin de los receptores:

Los receptores ubicados en las membranas pueden subdividirse en tres segmentos con diferentes
funciones.
El dominio receptor: reacciona especficamente ante una seal determinada. Esa seal puede ser
de naturaleza puramente fsica.
Los receptores mecnicos: participan entre otras cosas en la audicin y en la regulacin de la
presin.
Los canales inicos que reaccionan ante potenciales de accin.
Sin embargo la mayor parte de los receptores no reaccionan ante estmulos fsicos sino ante
molculas seal. Los receptores de dichas seales qumicas contienen en su porcin receptora
sitios de unin que son complementarios de los respectivos ligandos.
La Aglutinacin es cuando la accin del anticuerpo est dirigida a antgenos que estn en la
superficie o forman parte de la membrana de una clula, el anticuerpo produce su agregacin,
dando lugar al fenmeno visible denominado aglutinacin.
Reaccin de Aglutinacin
40
Grupos Sanguneos: tanto los eritrocitos como los leucocitos poseen en su membrana
glucoprotenas que son antgenos de grupos sanguneos. Se han encontrado en la membrana de
los eritrocitos humanos, un mnimo de 30 antgenos comunes y varios ciento de antgenos menos
frecuentes. La mayora de estos ltimos son dbiles y su importancia principal radica en el estudio
de la herencia de los genes ya que se encuentran bajo estricto control gentico transmitindose de
padres a hijos de acuerdo con las leyes de Mendel. Por esto se emplean para: el establecimiento
de la paternidad e investigaciones semejantes en medicina legal, antropologa, en los transplantes
de rganos y en teraputica transfusional. De todos los sistemas sanguneos hay dos grupos
importantes de antgenos: el sistema ABO y el sistema Rh.
El tipo de sangre A tiene la protena A sobre sus eritrocitos, el tipo B tiene la protena B y el tipo O
no tiene ninguna. Adems cada tipo sanguneo lleva anticuerpos en el plasma para las protenas
que no estn presentes en sus propios eritrocitos por ejemplo: Una persona con sangre tipo A tiene
anticuerpos para la protena B. Si una persona con sangre tipo A recibe en donacin sangre tipo B,
los anticuerpos para B atacan a los eritrocitos de la sangre donada ocasionando que se aglut inen
y tapen pequeos vasos sanguneos, en ocasiones con resultados fatales.
Un ANTIGENO es toda sustancia que al introducirse en un organismo viviente lo induce a formar

anticuerpos que reaccionan especficamente con los antgenos que provocaron su snt esis.
En la membrana de los eritrocitos y leucocitos encontramos antgenos que nos ayudaran a definir
el grupo sanguneo.
Los ANTICUERPOS son protenas pertenecientes al grupo de las gamma-globulinas o

inmunoglobulinas, constituidas por la asociacin de cuatro cadenas polipeptdicas unidas entre s
mediante puentes disulfuro, dos cadenas se denominan pesadas y las otras dos ligeras. A su vez,
cada una de las cadenas ligeras y pesadas, incluye una regin variable, cuya secuencia de
aminocidos es peculiar de cada anticuerpo, y una regin constante, con la misma secuencia en
todos los anticuerpos. Estos al reaccionar con un antigeno bloquea la accin de este constituyendo
un mecanismo de defensa contra agentes extraos al mismo.
Clases de inmunoglobulinas: gamma (Ig G), alfa (IgA), delta (Ig D), psilon (Ig E) y mu (Ig M).
Ig G:
Se encuentran abundantes en el suero.
Promueven la fagocitosis en el plasma.
Activan el sistema del complemento.
41
Son los nicos que atraviesan la placenta.

Ig A:
Se encuentran en las secresiones mucosas, lagrimas, calostro y leche materna.
Ig M:
Se presenta en la superficie de los linfocitos y en el plasma.
Promueven la fagocitosis.
Activan el sistema de complemento.
Ig E:
Reacciones parasitarias y alergias.
Grupo sanguneo A B AB O
Glbulos rojos
En la membrana Antgeno B No antgenos

Antgeno A Antgenos A y B
Anti-A y
En el plasma Anticuerpo B Anticuerpo A No anticuerpos
Anti-B
El sistema ABO o grupos sanguneo se detecto y estudio hace mucho tiempo debido a que
provocaba aglutinacin de las clulas sanguneas al realizar una transfusin entre individuos
genticamente distintos..
42
Landsteiner en 1901, descubri el primer sistema de grupos sanguneos al estudiar los problemas
de incompatibilidad que surgan durante las transfusiones de sangre. Posteriormente Berstein en
1925, determino su transmisin hereditaria.
De manera que un individuo tendr grupo sanguneo A si sus glbulos rojos tienen la
glicoprotena A en su membrana, siguiendo el mismo criterio para el resto de los grupos (si no
existe protena, entonces ser de grupo sanguneo O). Estas protenas corresponderan a lo que
denominan antgenos.
En el plasma sanguneo tenemos anticuerpos. Evidentemente, un individuo del grupo A no podr

tener anticuerpos anti-A, pues esto no sera viable (la sangre coagulara Y MORIRIA).
As:
los individuos A tendrn anticuerpos anti-B
los individuos B tendrn anticuerpos anti-A
los individuos AB no tendrn anticuerpos de este tipo
los individuos O tienen los dos tipos de anticuerpos
De la misma manera, el factor Rh es otra protena que existe en los glbulos rojos de algunas
personas. Su nombre viene del mono en el que fue descubierta, el macacco rhesus.
El sistema RH : En 1940 , Landsteiner y Wiener descubrieron otra diferenciacin hereditaria en la

sangre: EL FACTOR RH.
Inyectaron sangre de mono Macacus rhesus en conejos y cobayos, luego observaron que el suero
que contena los anticuerpos resultantes aglutino no solo a los glbulos rojos de Macacus rhesus
sino tambin al 85% de la poblacin de blancos neoyorquinos, mientras que el 15% restante no
reacciono con el antisuero.
Aparentemente la sangre de la mayora de los seres humanos contiene un antigeno denominado

Rh que es semejante al antigeno presente en los monos Macacus rhesus de ah el nombre de Rh, de
tal manera que todos los individuos se pueden clasificar en Rh positivo(Rh + ) o Rh negativo ( Rh
- ) segn presente o no el antigeno. Siendo el factor Rh positivo un factor hereditar io dominante.
Por ejemplo:
Si una persona tiene los genes + +, el factor Rh en la sangre ser positivo.
Si una persona tiene los genes + -, el factor Rh en la sangre ser positivo.
Si una persona tiene los genes - -, el factor Rh en la sangre ser negativo.
Un beb recibe un gen del padre y uno de la madre.
Levine reconoci que dicho factor esta involucrado en la produccin de la enfermedad

hemoltica del recin nacido( Eritroblastosis fetal) que ocasiona ictericia. Normalmente la
sangre humana no contiene anticuerpos especficos contra el antigeno Rh, pero estos pueden
producirse solo en las persona s Rh desde que son sensibilizadas.
Si una mujer no se ha sensibilizado en un anterior embarazo sus anticuerpos anti -Rh pueden
cruzar la placenta hacia la circulacin fetal produciendo destruccin de los glbulos rojos
(hemlisis) generndose anemia en el feto. La anemia es responsable de una deficiente
oxigenacin fetal, pueden ser responsables de dao neurolgico en el recin nacido. El hgado fetal
se transforma en un rgano formador de glbulos para compensar esa anemia y disminuye la
formacin de protenas entre ellas la albmina.
Esto determina en el feto acumulacin anormal de lquidos en diferentes lugares como por
ejemplo en la piel (edemas), en el abdomen (ascitis) en el trax (derrame pleural - hidrotrax) y
eventualmente en la membrana que recubre al corazn (derrame pericrdico).
43
El anlisis detallado de la gentica, el factor RH ha puesto de manifiesto que se trata algo mas de
un gen de dos alelos , posiblemente de una serie de tres genes ntimamente ligados que fueron
denominados C,D y E ( dominantes ) y c,d,e, ( recesivos) dndose 8 posibles combinaciones en un
mismo cromosoma.
Tcnica de ELISA (ensayo por inmunoabsorcin ligado a enzimas):

Esta tcnica detecta anticuerpos mediante una tcnica indirecta basada en el uso de anticuerpos
unidos a enzimas para marcar sustancias antignicas en los tejidos o lquidos corporales.
El antgeno se adosa a una matriz slida y reacciona con una muestra que puede contener un
anticuerpo complementario. Se agrega antiglobulina humana conjugada con la enzima y el
antgeno reacciona con el anticuerpo unido del paciente. Mediante el agregado de la molcula de
sustrato se detecta la enzima. Este sistema ha sido usado para identificar anticuerpos contra
virus, parsitos, y producen bacteriano, y para la cuantificacin de algunas drogas.
Fases de realizacin de una ELISA

Sensibilizacin de la placa.
Bloqueo de espacios vacos.
El Ag o el Ac se fija a una superficie.
Aplicacin del espcimen de prueba.
Controles positivo y negativo
Deteccin y caracterizacin por Ac. 2.
Marcado.
Incubacin con la muestra.
Incubacin con el sistema de deteccin.
Adicin del sustrato.
Los diferentes tipos de ELISA son los que se enumeran a continuacin:
Anticuerpos Marcados
ELISA Directo.
ELISA Indirecto.
44
ELISA Sandwich.
Doble (DAS).
Heterologo (HADAS).
Antgenos Marcados.
ELISA Competitivo.
ELISA Directo.
Consta de las siguientes etapas:
Fijacin al soporte insoluble (tapizado) de antgenos especficos.
Lavado para eliminar los antgenos fijados deficientemente o no fijados.
Adicin de anticuerpos marcados (conjugados) con una enzima; si los anticuerpos
reaccionan con los antgenos, el complejo quedar solubilizado.
Lavado.
II) OBJETIVOS
1. Conocer la tcnica para determinar los grupos sanguneos y el factor Rh de una poblacin.
2. Analizar e interpretar los resultados en relacin con los factores responsables de la
herencia.
3. Conocer la importancia de las protenas receptoras de membrana en la identificacin de
los grupos sanguneos.
4. Conocer la importancia de la reaccin antgeno anticuerpo en la determinacin de
enfermedades, mediante la tcnica de ELISA.
III) MATERIALES
Que debe traer los alumnos:

1. Palitos mondadientes (01 Caja por mesa)
2. Material obligatorio.
Que proporciona el Laboratorio:

1. Suero anti A, suero anti B y suero anti D (RH)
2. Reactivos para Salmonella y Brucella.
3. Alcohol
4. Algodn
45
5. Laminas escavadas
6. Lancetas.
7. Microscopio compuesto
IV) PROCEDIMIENTO
Grupo Sanguneo
1. Con un algodn empapado en alcohol se desinfecta la punta del dedo ndice y haz una
puncin con la lanceta.
2. Coloca separadamente 3 gotas de sangre sobre una lamina portaobjeto limpia o lamina
escavada
3. Agregar l gota de reactivo Anti A, Anti B y Anti D sobre cada una de las gotas de sangre, sin
que la punta del gotero tenga contacto directo con la muestra de sangre para que no se
contamine el reactivo.
4. Homogeniza cada preparado con un palillo de mondadientes : un palillo por cada
preparado
5. Rotar la lamina suavemente por l minuto y realizar la lectura.
Reaccin de Aglutinacin
Si aglutina con AntiA y no con anti B: Es el tipo A

Si aglutina con anti B y no con anti A: Es el tipo B
Si aglutina con Ambos sueros es el tipo AB
Si no aglutina con ningn suero es del tipo O
Si aglutina con Anti. RH: es del grupo Rh +
Si no aglutina con anti Rh : Es del grupo Rh -
6. Se recomienda trabajar con rapidez para que la sangre no coagule antes que reaccione
con el suero especfico. Para leer: inclina ligeramente la lmina. Si no se ve con nitidez
obsrvalo al microscopio.
7. Anota los resultados y dibuja las reacciones.
V) CUESTIONARIO
1. Haz un esquema que muestre todas las posibilidades de donacin y recepcin de sangre de
los diversos grupos.
2. A quienes se les llama Donadores universales? Explique por que?
3. A quienes se les llama Receptores Universales? Explique por que?
4. Por que los individuos Rh+ pueden recibir indistintamente sangre Rh+ o Rh - y porque
los individuos Rh - no pueden ?
5. Por que son importantes los antigenos de los grupos sanguneos.
46
6. Por que es importante la Albumina en el organismo?

7. Mencione las enfermedades que se diagnostican utilizando la tcnica de ELISA.
8. Usted cree que el resultado de el test de ELISA es determinante para diagnostico.
VI) BIBLIOGRAFIA
AUDESIRK, T G. AUDESIRK 1996. Biologa. 4 Edicin.. Prentice _ Hall Hispanoamericana S.A
Hoja de Resultados
Grupos sanguneos:
--------------------------------------------- --------------------------------------
VB Blga. Carola Chambers Fecha
47
48

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