PRCTICA DE LABORATORIO: CROMATOGRAFA EN PAPEL DE PIGMENTOS VEGETALES 1

CROMATOGRAFA DE PIGMENTOS VEGETALES

OBJETIVOS
Extraer los pigmentos vegetales de hojas de espinacas o acelgas por cromatografa en papel.
Separar las clorofilas a y b de xantofilas y carotenos por disolucin en gasolina.

MATERIAL
- Placa elctrica. - Agua. - Varilla de vidrio.
- Rejilla de amianto. - Alcohol, benceno o acetona. - Hojas de espinacas o acelgas.
- Matraz de 250 ml. - Gasolina. - Placa Petri.
- Embudo y filtro. - Vasos de precipitados. - Gradilla.
- 1 tubo de ensayo grande y 2 pequeos.
- Tira de papel de filtro de 15 a 20 cm de alto y 6 a 8 cm de ancho.

FUNDAMENTO TERICO
Bajo el trmino cromatografa (escribir con colores) se engloba un conjunto de tcnicas,
basadas en el principio de adsorcin selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes
de una mezcla. En toda cromatografa hay dos fases: una mvil y otra estacionaria. La fase mvil es
un fluido que, al desplazarse en la fase estacionaria, que es un slido o un lquido fijado en un
slido, arrastra a la mezcla. Los componentes de la mezcla interaccionan de distinta forma con la
fase mvil y con la estacionaria, de manera que, atraviesan la fase estacionaria a distintas
velocidades y se van separando.

En la cromatografa en papel, la fase estacionaria es una tira de papel de filtro que se coloca,
verticalmente, sobre un recipiente, en cuyo fondo se encuentra el disolvente que se va a utilizar
como fase mvil, con la mezcla a separar. El disolvente asciende por capilaridad por el papel de
filtro, arrastrando a la mezcla consigo. En su ascenso, los distintos componentes de la mezcla se
irn separando segn su grado de movilidad. Si las sustancias tienen color propio, al final, se vern
manchas de distinto color separadas; si carecen de color, el papel deber ser sometido a procesos
de revelado.
Los pigmentos vegetales son insolubles en agua, pero se disuelven en disolventes orgnicos
como alcohol, benceno o acetona. Basta con dejar macerar hojas de espinacas en alcohol fro durante
24 a 48 h o, hervirlas en alcohol, para obtener una disolucin concentrada de pigmentos vegetales:
clorofilas a y b (verdes), carotenos (naranjas) y xantofilas (amarillas).
PRCTICA DE LABORATORIO: CROMATOGRAFA EN PAPEL DE PIGMENTOS VEGETALES 2

PROCEDIMIENTO
1. Enciende la placa elctrica. Coloca el termostato en el mximo.
2. Llena de agua el matraz de 250 ml, slo hasta el inicio del cuello.
3. Pon la rejilla de amianto sobre la placa elctrica y coloca sobre ella el matraz que acabas de
llenar con agua.
4. Echa hojas de espinacas en el interior del tubo de ensayo grande, no ms de 4 cm (unos tres
dedos de altura).
NOTA: No aprietes las espinacas, deben quedar sueltas y separadas para que les moje bien el alcohol.

5. Vierte alcohol en el interior del tubo de ensayo grande, hasta que el alcohol quede a 4 cm del
borde superior del tubo.
NOTA: Remueve el conjunto con la varilla de vidrio para favorecer el paso del alcohol entre las hojas de espinacas.

6. Mete el tubo de ensayo en el matraz que tienes en la placa elctrica. Cuando comience a
burbujear el alcohol del tubo de ensayo, apagas la placa elctrica y lo dejas hervir 5
minutos (si lo dejas ms, se evaporar el alcohol).
7. Filtra la disolucin obtenida, para separarla de las hojas de espinacas, y reparte su contenido
en los dos tubos de ensayo pequeos.
8. En uno de los tubos de ensayo vierte un volumen de gasolina semejante al del lquido que ya
contiene y agtalo, para que se mezclen; luego, djalo en reposo en la gradilla hasta que se
separen dos fases. La fase superior contiene gasolina con las clorofilas a y b. La fase
inferior est compuesta de alcohol con xantofilas y carotenos.
9. Del contenido del otro tubo de ensayo vierte, en la placa Petri, el volumen de lquido
necesario para cubrir su base. Dobla la tira de papel de filtro longitudinalmente, por la mitad,
y apyala en el fondo de la placa. Debe sujetarse sola! Djalo reposar 24 a 48 h.

ACTIVIDADES
1. Dibuja el resultado del pto. 8 del mtodo, indicando cul es el contenido de cada fase.
2. Pega el papel de filtro de la cromatografa en tu hoja de trabajo e identifica el componente
de cada una de las bandas que se han formado.