EXTRACCIN ASISTIDA POR MICROONDAS

Las microondas se han utilizado desde la Segunda Guerra Mundial tras el desarrollo de la
tecnologa de radar, y ms tarde la primera aplicacin comercial de microondas se centr en los
hornos domsticos. El uso de energa de microondas como una fuente de calefaccin en los
laboratorios analticos comenz a finales de 1970 y se aplic a las digestiones con cido
(AbuSamra et al., 1975). El desarrollo de extracciones asistidas por microondas fue reportado por
primera vez por Ganzler y colaboradores (Ganzler et al., 1986a, Ganzler y Salgo', 1987).

Principio del mtodo y mecanismo de calentamiento

Las microondas son radiaciones electromagnticas con una frecuencia de 0.3 a 300 GHz (Camel,
2001). Para evitar interferencias con las comunicaciones de radio, las microondas domsticas e
industriales generalmente operan a 2,45 GHz (figura 1). Debido a su naturaleza electromagntica,
las microondas poseen campos elctricos y magnticos que son perpendiculares entre s. El campo
elctrico causa calentamiento a travs de dos mecanismos simultneos, a saber, la rotacin
dipolar y la conduccin inica (Thue'ry, 1992; Demesmay y Olle, 1993; Sinquin et al., 1993). La
rotacin dipolar se debe a la alineacin en el campo elctrico de las molculas que poseen un
momento dipolar (permanente o inducido por el campo elctrico) tanto en el disolvente como en
la muestra slida. Esta oscilacin produce colisiones con las molculas circundantes y, por lo tanto,
la liberacin de energa trmica en el medio. Con una frecuencia de 2,45 GHz, este fenmeno
ocurre 4.9? 109 veces por segundo (Ganzler et al., 1990; Sinquin et al., 1993; Barnabas et al., 1995;
Onuska y Terry, 1995) y el calentamiento resultante es muy rpido. De hecho, cuanto mayor es la
constante dielctrica del disolvente (ver Tabla 1), ms ptimo es el calentamiento (Jassie et al.,
1997). En consecuencia, a diferencia de los mtodos clsicos de calentamiento conductivo, las
microondas calientan toda la muestra simultneamente (Figura 2). En el caso de la extraccin, la
ventaja del calentamiento por microondas es la interrupcin de los lmites dbiles de hidrgeno
promovidos por la rotacin dipolar de las molculas. Una mayor viscosidad del medio disminuye
este mecanismo al afectar la rotacin molecular (Sinquin et al., 1993, Camel y Bermond, 1999).
Adems, la migracin de iones disueltos aumenta la penetracin del solvente en el matriz y as
facilita la solvatacin del analito (Ganzler et al., 1990). Las corrientes inicas tambin son
inducidas en la solucin por el campo elctrico. Como el medio resiste estas corrientes, se
producen fricciones y el calor se libera mediante un efecto Joule. Este fenmeno depende del
tamao y la carga de los iones presentes en la solucin. El efecto de la energa de microondas
depende fuertemente de la naturaleza del solvente y la matriz slida. Los solventes generalmente
utilizados cubren un amplio rango de polaridades, desde heptano hasta agua. La mayora de las
veces, el disolvente elegido posee una alta constante dielctrica y absorbe fuertemente la energa
de microondas, sin embargo, la selectividad de extraccin y la capacidad del medio para
interactuar con microondas se pueden modular utilizando mezclas de solventes (Renoe, 1994). En
algunos casos, la propia matriz interacta con las microondas mientras que el solvente
circundante posee una baja constante dielctrica y por lo tanto permanece fra (Jassie et al.,
1997). Esta ltima situacin presenta algunas ventajas obvias en el caso de los compuestos
termosensibles y se ha utilizado con xito para la extraccin de aceites esenciales (Pare', 1990,
1991; Chen y Spiro, 1994; Romele y Polesello, 1997). De hecho, las microondas interactan
selectivamente con las molculas polares presentes en las glndulas, los tricomas o los tejidos
vasculares. El calentamiento localizado conduce a la expansin y ruptura de las paredes celulares y
es seguido por la liberacin de aceites esenciales en el solvente (Pare 'et al., 1994; Jassie et al.,
1997; Majors, 1998) .Se puede obtener una escisin cuando la muestra seca tiene se ha
rehidratado antes de la extraccin (Pare ', 1990; Pare' et al., 1994; Majors, 1998). De hecho, el
contenido de humedad es esencial en MAE porque el agua localmente se sobrecalienta y
promueve que los analitos se liberen en el medio circundante (Onuska y Terry, 1993, Budzinski et
al., 1996; Jassie et al., 1997). En adicin, el control del contenido de agua de la matriz permite
resultados ms reproducibles.

Instrumentacin: Hay dos tipos de instrumentos disponibles comercialmente y utilizan diferentes

enfoques. El procedimiento ms comn implica la extraccin en un recipiente cerrado bajo presin
y temperatura controladas, mientras que el enfoque alternativo utiliza un recipiente de extraccin
abierto a presin atmosfrica. Debe enfatizarse fuertemente que no se debe considerar el uso de
un horno de microondas domstico para propsitos de laboratorio. La aplicacin de energa de
microondas a solventes orgnicos altamente inflamables puede causar serios peligros. Adems, la
reproducibilidad puede ser pobre con un dispositivo domstico debido a la falta de homogeneidad
del campo de microondas. Por lo tanto, se recomienda seriamente que solo se utilicen equipos
aprobados para MAE.

Sistemas de buques cerrados:Dichos sistemas generalmente se recomiendan para digestiones o

mineralizaciones cidas o para extracciones en condiciones drsticas, ya que los disolventes
pueden calentarse hasta ca. 100 C por encima de su punto de ebullicin atmosfrico (Barnabas et
al., 1995; Jassie et al., 1997). Tanto la velocidad de extraccin como la eficiencia se mejoran en
este procedimiento. Los peligros ocasionados por el calentamiento de solventes altamente
inflamables se superan mediante el uso de tcnicas de seguridad recientes como ventiladores de
escape de alta capacidad, detectores de vapor de solventes o membranas de seguridad de
explosin de presin colocadas en cada recipiente (Demesmay y Olle, 1993; Jassie et al., 1997 ) La
Figura 3 muestra un diagrama esquemtico de un sistema de recipiente cerrado de CEM
Corporation (Matthews, NC, EE. UU.). Para superar la no homogeneidad del campo, las clulas se
colocaron en un carrusel de activacin como en un horno domstico. Los disolventes se pueden
variar, y la presin en los recipientes depende esencialmente del volumen y del punto de
ebullicin de los disolventes utilizados. La temperatura puede ajustarse a un valor fijo ajustando la
potencia del microondas. Por lo general, las celdas estn hechas de Teflo. En los sistemas de
recipiente cerrado, la potencia mxima suministrada es de aproximadamente 600-1000 W (Pare',
1990, 1991; Young, 1995), pero la potencia elegida debe ajustarse correctamente para evitar
temperaturas excesivas que conducen a posibles problemas de degradacin de solutos y
sobrepresin. El recipiente debe enfriarse a temperatura ambiente antes de abrirlo: esto es
particularmente importante en presencia de solutos voltiles que pueden dividirse en el espacio
para la cabeza, pero este paso puede aumentar considerablemente el tiempo de extraccin
Adems, es necesaria una etapa adicional de filtracin o centrifugacin para eliminar el residuo
slido.

Celdas abiertas: Estas clulas son recipientes de cuarzo cubiertos por un

condensador de vapor (Fig. 4). El sistema funciona a presin atmosfrica, y la
temperatura mxima est determinada por el punto de ebullicin del disolvente
utilizado (Renoe, 1994; Letellier et al., 1999). El solvente se calienta y refluye a
travs de la muestra, y en este caso las microondas se e nfocan en la muestra
colocada en el vaso permitiendo un calentamiento homogneo y muy eficiente
(Demesmay y Olle, 1993). La muestra que se va a extraer se puede colocar en un
cartucho de celulosa de tipo Soxhlet para evitar los pasos de filtracin, o se pu ede
sumergir directamente en el disolvente. En comparacin con las extracciones de
vasos cerrados, las celdas abiertas ofrecen una mayor seguridad en el manejo de
muestras y, adems, permiten que se extraigan muestras ms grandes. Un sistema
tpico es el Soxwave 3.6 comercializado por Prolabo (Fontenay -sous-Bois, Francia)
que opera en porcentajes de potencia del 10 al 100%, que corresponde a una
potencia mxima de 250 W.

Aplicaciones para la extraccin de productos naturales

Aunque muchas de las publicaciones iniciales tratan de la extraccin de productos naturales, la

mayora de las aplicaciones se refieren a la extraccin de contaminantes del medio ambiente.

matrices mentales El uso de MAE para el anlisis ambiental ha sido revisado exhaustivamente
(Dean et al., 1999; Camel, 2000) y, por lo tanto, en esta revisin solo se informan las aplicaciones a
productos naturales, que se resumen en la Tabla 2.

Recipientes cerrados

Glucsidos de Pirimidina. Los primeros documentos para informar el uso de MAE para productos
naturales fueron publicados por Ganzler y sus colaboradores (Ganzler et al., 1986a, Bs. Ganzler y
Salgo, 1987) y se referan a la extraccin de vicua y avena de faba: estos los glucsidos de
pirimidina txicos excluyen el uso de los granos de faba como fuente de protenas nutricionales.
Los granos molidos se suspendieron en una mezcla de metanol: agua (1: 1, v / v), y la suspensin
se someti a dos irradiaciones de microondas sucesivas (30 segundos cada una) con una etapa de
enfriamiento en el medio. No se pudo observar degradacin bajo estas condiciones, pero se
encontr que la irradiacin adicional disminua el rendimiento de vicine y convicine. El
rendimiento obtenido fue un 20% mayor que con el mtodo convencional de extraccin Soxhlet.

Gosipol. En cuanto a las habas, la presencia de gosipol en las semillas de algodn limita su uso para
el consumo humano o la alimentacin animal (Ganzler et al., 1986a; Ganzler y Salgo, 1987). Los
rendimientos de extraccin de gosipol fueron mucho ms altos con tres ciclos de 30 segundos
cada uno de MAE que con la extraccin tradicional de 4ho Soxhlet, probablemente porque el
compuesto es sensible a las altas temperaturas. Este fenmeno fue confirmado por otras
irradiaciones MAE que tambin conducen a la degradacin de gosipol.

Alcaloides. La espartena, un alcaloide de altramuz, se extrajo de semillas de altramuz (Lupinus

mutabilis) con metanol: cido actico (99: 1, v / v) en un horno de microondas domstico (mire la
precaucin anterior!), Y el tratamiento (de uno a cinco ciclos de 30 s con una etapa de
enfriamiento en el medio) dieron un 20% ms de espartena que la obtenida con una extraccin
con matraz agitado utilizando la misma mezcla de solventes durante 20 minutos (Ganzler et al.,
1990). Los alcaloides de pirrolizidina se extrajeron del material vegetal seco (Seneciosp.) Por
Bicchietal. (1992) utilizando tecnologa de recipiente cerrado con control de retroalimentacin de
temperatura (65-100 C). Los resultados cromatogrficos cualitativos y cuantitativos fueron
idnticos a los obtenidos con las tcnicas tradicionales, con una reduccin significativa en el
tiempo de extraccin y el consumo de solventes con buena reproducibilidad.
Terpenes. Cinco compuestos terpnicos (linalool,? -terpineol, citronelol, nerol y geraniol)
asociados con el aroma de uva (Vitis vinifera) fueron extrados de las muestras de mosto por MAE
(Carro et al., 1997). Se optimizaron cuatro variables (extraccin de volumen de disolvente,
temperatura de extraccin, cantidad de muestra y tiempo de extraccin) mediante diseos
factoriales de dos y tres niveles. Se fijaron varias condiciones, como el tiempo de extraccin (10
min) y la potencia aplicada (475 W). El volumen de disolvente pareca ser el nico factor
estadsticamente significativo, pero estaba limitado a 15 ml por el tamao de la celda. El mayor
rendimiento de extraccin se obtuvo tanto con el volumen del disolvente como con la
temperatura en sus valores mximos probados. Por el contrario, la cantidad de la muestra tuvo
que ser minimizada para que pueda aparecer en los recuadros principales. Al final las condiciones
de extraccin optimizadas fueron las siguientes: cantidades de muestra de 5 ml extradas con 10
ml de diclorometano a una temperatura de 90C durante 10 minutos con la potencia de
microondas ajustada al 50% (475 W).

Aceites esenciales. MAE de aceites esenciales ha sido patentado por Pare' (1991). Las muestras se
suspendieron en hexano y las microondas alcanzaron los sistemas glandulares y vasculares
internos del material vegetal. Debido al alto contenido de humedad de estas estructuras, se
calentaron casi especficamente y esto promovi la disrupcin de las membranas celulares
liberando los analitos en el solvente. El mismo autor tambin patent la extraccin de voltiles a
partir de material biolgico (Pare', 1990); el mtodo implic la exposicin de la materia celular que
contiene aceite o el sistema glandular a microondas genricos y la disolucin de un aceite orgnico
en un solvente orgnico adecuado. Otra patente ha sido depositada por Pare' (1994) en relacin
con la extraccin de aceites voltiles de plantas y material biolgico. Este procedimiento fue
aplicado por Chen y Spiro (1994) para la extraccin de aceites esenciales de romero y hojas de
menta suspendidas en hexano,etanol o mezclas de los dos solventes. Las micrografas electrnicas
de escaneo de las hojas mostraron cambios estructurales en las glndulas que contenan aceite
despus de la extraccin con microondas: algunas de ellas se colapsaron y otras se desintegraron
por completo. Son plausibles dos mecanismos de extraccin distintos, uno que implica la difusin
del aceite esencial a travs de la pared de la glndula y el otro que implica la ruptura de la
liberacin glandular y la liberacin de los constituyentes en el disolvente. Cualquiera de los dos
fenmenos puede ser prominente segn las diferentes etapas de maduracin de las glndulas. El
MAE tambin se ha comparado con la hidrodestilacin clsica para la extraccin de aceites
esenciales de 10 especies de plantas diferentes que utilizan un horno microondas domstico
(Collin et al., 1991). Los rendimientos fueron generalmente similares, pero los per fi les
cromatogrficos variaron drsticamente, especialmente con respecto a las relaciones entre las
diferentes sustancias.

La tcnica de microondas se us para promover la desorcin del aceite esencial de Lippia sidoides
con un horno de microondas comercial modificado (Craveiro et al., 1989). Las hojas frescas fueron
irradiadas en el horno los voltiles fueron extrados por una corriente de aire que pasa a travs del
sistema. Los rendimientos obtenidos despus de 5 minutos fueron comparables a los obtenidos
despus de 60-90 minutos de destilacin con vapor de agua, y se encontraron rendimientos tanto
cualitativos como cuantitativos similares al mtodo convencional.

Carotenoides. El MAE de carotenoides de pimentn ha sido optimizado por Csiktusnadi Kiss et al.
(2000) Treinta diferentes agua: se evaluaron mezclas de disolventes orgnicos, y tanto la eficiencia
de extraccin como la selectividad fueron significativamente dependientes de la constante
dielctrica de la mezcla de disolventes de extraccin. Las extracciones tuvieron que realizarse a
temperaturas inferiores a 60 C debido a la posible reorganizacin de las molculas a
temperaturas ms altas.

Esteroides: Recientemente, un sistema se ha desarrollado simultneamente para saponificar y

extraer ergosterol por MAE (Young, 1995). La determinacin de este compuesto en aire filtrado o
maz o polvo contaminado puede usarse como indicador de contaminacin por hongos. Las
muestras se colocaron en tubos de cultivo que contenan 2 ml de metanol y 0,5 ml de hidrxido
sdico 2 M. La irradiacin de microondas se aplic a 375 W durante 35 segundos y las muestras se
enfriaron durante 15 minutos antes de la neutralizacin con cido clorhdrico 1 M seguido de
extraccin con pentano. Se demostr que solo 30-40 fueron suficientes para extraer ergosterol de
manera cuantitativa y que el rendimiento fue similar o incluso mayor que el obtenido con la
extraccin de metanolina tradicional despus de la aposicin de la cefalina y la extraccin con
pentano.

Taxanos. La aplicacin de energa de microondas para la extraccin de taxanos de la biomasa

Taxus fue informada por Incorvia Mattina et al. (1997). Se investigaron varios parmetros, incluida
la temperatura, el tiempo de extraccin, la eleccin del disolvente y el contenido de agua para
optimizar la eficiencia de la extraccin. Los recetarios de taxano alcanzaron el 100% del mtodo
convencional cuando la biomasa se liofiliz a menos del 10% de humedad y se remojaron
previamente con agua antes de la extraccin con etanol al 95%. Como se produjo cierta
degradacin de paclitaxel a temperaturas superiores a 115 C, la temperatura se ajust a 85 C y
MAE se realiz durante 54 s. Los extractos fueron cuantitativamente y cualitativamente
equivalentes a los obtenidos con el mtodo de extraccin convencional, pero con una
considerable reduccin tanto del tiempo de extraccin como del consumo de solvente.

Vasos abiertos

Se han publicado muy pocos artculos sobre la extraccin enfocada en microondas de productos
naturales.

Alcaloides. La cocana y la benzoilecgonina se extrajeron de hojas de coca (100 mg) mediante MAE
concentrado (Brachet et al., 2002). La extraccin se optimiz teniendo en cuenta varios
parmetros, como la naturaleza del disolvente de extraccin, la distribucin del tamao de
partcula, la humedad de la muestra, la potencia de microondas aplicada y el tiempo de radiacin.
Se encontr que el MAE generaba extractos similares a los obtenidos por el LES convencional, pero
de una manera ms eficiente. De hecho, los 30 fueron suficientes para extraer cocana
cuantitativamente de las hojas, usando metanol como solvente y una potencia de microondas de
125 W.

Esteroides: Se aplic MAE enfocado a la extraccin de witferina A, iochromolida y withacnistina de

las hojas de Iochroma gesnerioides (Kaufmann et al., 2001a). Los withanlidos son lactonas
esteroidales derivadas de un esqueleto de tipo ergostano. Se investigaron seis variables de
extraccin, es decir, la naturaleza y el volumen del disolvente de extraccin, la humedad de la
muestra, el tiempo de extraccin, el poder de irradiacin y el tamao de partcula de la matriz. Las
condiciones ms favorables se obtuvieron usando material vegetal en polvo (\ sim 220 \ Omega
m), previamente humedecido con agua durante 15 minutos, y se extrajo con metanol durante 40
segundos a 25C. El rendimiento de extraccin obtenido con el mtodo optimizado fue
comparable al obtenido con una extraccin Soxhlet.