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Macromolculas de la levadura

A. F. Bermdez, S.A. Garca, M.A Giraldo


Programa acadmico de Biologa, Facultad de Ciencias,
Universidad del Valle, Cali (Colombia)
24 de abril de 20!

RESUMEN

"n esta #r$ctica se obtuvieron datos cualitativos re%erentes a la #resencia de macromolculas en


la levadura de #anadera, &a 'ue esta al igual 'ue todas las clulas eucariotas, #resentan una
estructura 'umica com#lea, en base a esto la #osibilidad de obtener #ruebas a #artir de la
#reci#itacin de #rotenas, la se#aracin #or densidad del glucgeno (al igual 'ue la #rueba del
almidn & el glucgeno con *ugol) & la com#aracin entre las muestras mediante el orcinol con
+-, +.- & los $cidos nuclei cos obtenidos en la #r$ctica, #udieron evidenciar 'ue las
macromolculas cum#len una %uncin estructural en las clulas/

INTRODUCCION

"n esta #r$ctica se logr identi%icar cualitativamente los di%erentes ti#os de macromolculas,
#resentes en las clulas eucariotas, tambin se conocieron algunos mtodos de identi%icacin
(coloracin de com#uestos es#ec%icos)/ *as macromolculas tienen masas moleculares elevadas
(gran gru#o de $tomos), las cuales %orman #olmeros/ Pueden ser tanto org$nicas como
inorg$nica, un eem#lo de estos en %orma sinttica son los #l$sticos/ "s necesario la inclusin de
%ueras de van der 1aals, #uentes de idrogeno, interacciones idro%bicas & enlaces covalentes/
*as macromolculas m$s im#ortantes & comunes en los sistemas vivos son3 #olisac$ridos
com#uestos #or subunidades de acar, #rotenas %ormadas #or cadenas lineales de amino$cidos,
$cidos nucleicos %ormados #or bases nucleotidicas & l#idos %ormados #or glicerol $cidos grasos
o colesterol/

"l organismo utiliado #ara llevar a cabo el #roceso es la levadura, ongos microsc#icos
unicelulares con organiacin eucariota, 'ue #resentan caractersticas es#ec%icas 'ue %acilitan
ser obeto de estudio como es su %$cil & r$#ida re#roduccin, %$cil de modi%icar genticamente,

ada#tabilidad & versatilidad


necesidades nutricionales/ #ara
"stas crecer en ambientes
caractersticas es#ec%icas controlados
son tenidas adem$s
en cuentade#ara
sus#oder
#ocas
realiar la #r$ctica &a 'ue se aco#la al obetivo #rinci#al/

Una de las #ruebas 'ue se utili #ara obtener resultados cualitativos es la reaccin de biuret,
#rueba 'ue detecta la #resencia de enlaces #e#tdicos/ "l sul%ato de cobre es el reactivo utiliado,
este reacciona con el enlace #e#tdico & cambia de color cuando entra en contacto/ "l color
verde, es el color #ositivo #ara la #rueba/

METODOLOGA

*a #rimera #arte de la #r$ctica inicio con la trituracin de la levadura de #anadera con $cido
tricloroactico, #osteriormente se de re#osar durante algunos minutos & se agregaron
e5actamente 20g de la sus#ensin de #rotenas a la centri%uga/ *uego se obtuvieron sedimentos
con #rotenas & $cidos nucleicos 'ue %ueron agregados en un ba6o ielo, mientras el
sobrenadante %ue decantado & luego #reci#itado con alcool etlico, nuevamente se agregaron
20g de esta sus#ensin & se #as a la centri%uga, #or ltimo se reali la #rueba del *ugol 'ue
consisti en com#arar la coloracin entre el sedimento de glucgeno obtenido de la
centri%ugacin & una solucin de almidn/

*a siguiente #arte consisti en la se#aracin de las #rotenas & los $cidos nucleicos, & esto se
reali mediante la adicin de una solucin de -aCl & un ba6o de agua irviendo, luego se
#asaron 20g de esta sustancia a la centri%uga, el sobrenadante con $cidos nucleicos %ue decantado
a otro tubo & el #reci#itado de #rotenas %ue deado en un ba6o de ielo/

*a #reci#itacin del $cido nucleico se llev a cabo mediante alcool etlico & la utiliacin de la
centri%uga, #osteriormente se reali la #rueba con el orcinol, en la cual se agregaban 7 m* de
esta sustancia, 2 m* de amortiguador salino #8 9 a tres tubos de ensa&o con +-, +.- & los
$cidos nucleicos obtenidos de la levadura de #anadera, & %inalmente se realiaba un ba6o de
agua irviendo asta el cambio en la coloracin de estas sustancias/

*a #arte %inal del laboratorio consisti en la #rueba de Biuret, donde se tom el sedimento de
#rotenas anteriormente obtenido & se le agregaron 2 m* de solucin -aCl, %inalmente se agreg
m* de sul%ato c#rico & 2m* de idr5ido de sodio, al realiar esto, se observ un cambio en la
coloracin de la muestra #ara las #rotenas/
RESULTADOS Y DISCUSIN

Para la #rueba realiada sobre las #rotenas, denominada #rueba de Biuret, se io uso de
#rotenas #rovenientes de clulas maceradas de levadura de #anadera ( Saccharomyces spp), &
Cu:;4 en solucin salina de -a;8, las #rotenas se obtuvieron #or el tratamiento con $cido
tricloroactico, centri%ugado de las clulas maceradas, & %inalmente una resus#ensin en una
solucin de -aCl #ara centri%ugarse nuevamente< des#us de esto %ue a6adido el Cu:; 4 lo 'ue
dio como resultado una solucin de color violeta, *o 'ue indica el #ositivo de esta #rueba <
tambin se observaron algunos grumos blancucos como #reci#itado, esto no ocurri #ara el tubo
de ensa&o 'ue contiene solucin salina sola , a la 'ue tambin se le a6adi Cu:; 4/

=eniendo en cuenta lo anterior, se #uede a%irmar 'ue la reaccin ocurre debido a las #rotenas de
la solucin, & no a las sales #resentes en ella, en este caso las sales nicamente desestabilian las
%ueras elctricas dbiles de las #rotenas #ara 'ue ad'uieran una %orma no globular & menos
soluble en agua< de a'u se tiene tambin 'ue la solucin cambia de color debido a la %ormacin
de un com#leo coordinado entre los electrones de los -itrgenos del enlace #e#tdico de las
#rotenas & el ion Cu>2 liberado #or la disociacin del sul%ato c#rico/

"sta #rueba %unciona nicamente #ara molculas 'ue contengan 2 o m$s enlaces #e#tdicos &a
'ue el Cu>2, re'uiere de 4 interacciones coordinadas de -itrgenos de este ti#o #ara estabiliarse/

CONCLUSIONES
Para la e5traccin de las di%erentes macromolculas #resentes en la levadura es necesario
modi%icar el medio de reaccin como la tem#eratura, rom#imiento mec$nico de molculas,
reaccin con otros reactivos, etc/

*a #rueba #ara determinar cuantitativamente la #resencia de $cidos nucleicos dio


#ositiva, aun'ue no con un resultado com#letamente o#timo, una #robable causa del
%racaso de esta #rueba se #uede deber a 'ue los reactivos se encontraban contaminados
#or errores en la mani#ulacin o #erdida en la cantidad de la macromolcula en cada
eta#a de la #r$ctica/

REFERENCIAS
[1]Guarnizo, A y Martnez, P. 2009. Experimentos de qumica orgnica con enfoque
en ciencias de la vida. Ediciones Elizcom. Armenia.

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