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BIOQUIMICA DE OXIGENO
COD. GL-PL-25
APROBADO: _______________________
CONTENIDO
1. OBJETO .............................................................................................................. 3
2. APLICACIN ....................................................................................................... 3
3. DEFINICIONES ................................................................................................... 3
4. FUNDAMENTO DEL MTODO .......................................................................... 3
5. INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES ................................................................ 4
6. TOMA DE MUESTRA, ALMACENAMIENTO Y PRESERVACIN...................... 5
7. MATERIALES Y EQUIPOS ................................................................................. 5
8. REACTIVOS Y SOLUCIONES ............................................................................ 6
9. PROCEDIMIENTO .............................................................................................. 7
10. CLCULOS ..................................................................................................... 10
11. AUTORIDAD ................................................................................................... 11
12. FORMATOS .................................................................................................... 11
13. REFERENCIAS ............................................................................................... 11
1. OBJETO
2. APLICACIN
El ensayo de los 5 das de incubacin para determinar DBO (SM 5210 B) es aplicable en
muestras de agua superficial, marinas, subterrneas, residual industrial y domstica.
El anlisis de DBO se requiere en los anlisis de aguas residuales para valorar los efectos
de las descargas de los efluentes domsticos e industriales sobre la calidad de los
cuerpos receptores; asimismo, para evaluar la eficiencia de remocin de los sistemas de
tratamiento y para el control de contaminacin de corrientes. Los datos de la prueba de
DBO se utilizan en ingeniera para disear las plantas de tratamiento de aguas residuales.
3. DEFINICIONES
Las condiciones naturales de temperatura, poblacin biolgica, movimiento del agua, luz
solar y la concentracin de oxgeno no pueden ser reproducidas en el laboratorio. Los
resultados obtenidos deben tomar en cuenta los factores anteriores para lograr una
adecuada interpretacin.
La realizacin de las pruebas de DBO exige que se puedan garantizar las siguientes
condiciones mnimas:
- Que las muestras dispongan de una poblacin uniforme, capaz de digerir la materia
orgnica existente en la muestra. Por lo tanto, si no existe una poblacin aerbica en la
muestra original, ser necesario adicionarla de manera artificial, condicin que se logra
satisfactoriamente agregando al agua de dilucin, una alcuota de una solucin
homognea de E. Coli.
- Que las muestras estn exentas de algas o de que si stas existen no puedan prosperar
- Que exista un tiempo de incubacin definido y homogneo para todas las muestras, 5
das para DBO5 con una margen de variabilidad que no exceda de 4 horas. Este
requisito debe darse por cuanto a mayor tiempo de incubacin mayor consumo de
materia orgnica.
El mtodo consiste en llenar una botella winkler de 300 mL con una muestra diluida e
inoculada e incubada por cinco das a una temperatura de 20C en la oscuridad. El
oxgeno disuelto es medido al inicio y al final del perodo de incubacin y la DBO se
calcula de la diferencia entre el oxgeno disuelto inicial y el final, tomando como referencia
la dilucin de la muestra en la botella.
5. INTERFERENCIAS Y LIMITACIONES
Existen numerosos factores que afectan la prueba de la DBO5, entre ellos la relacin de la
materia orgnica soluble a la materia orgnica suspendida, los slidos sedimentables, los
flotantes, la presencia de hierro en su forma oxidada o reducida, la presencia de
compuestos azufrados y la falta de mezcla. Hasta el momento no existe una forma de
corregir o ajustar los efectos de estos factores.
La oxidacin de las formas reducidas del nitrgeno como amoniaco y nitrgeno orgnico
mediada por microorganismos, ejercen una demanda nitrogencea, la cual ha sido
considerada como una interferencia en la prueba; sin embargo, sta puede ser eliminada
con la adicin de inhibidores qumicos. Se reportan los resultados como DBOC5 (DBO
carboncea) cuando se inhibe la demanda nitrogencea. Sin inhibicin, la DBO calculada
corresponde a la suma de la carboncea y la nitrogencea. La inhibicin es recomendable
en muestras de efluentes secundarios, para muestras de agua contaminada o cuando la
semilla provenga de efluentes secundarios.
7. MATERIALES Y EQUIPOS
- Oxmetro
- Barra magntica para introducir en las botellas y barra magntica larga para retirarlas
- Beaker grande para contener las botellas durante la medicin
8. REACTIVOS Y SOLUCIONES
- Buffer de fosfatos. Para un litro de solucin: Disolver 8,5 g KH2PO4, 21,75 g de K2HPO4 ,
33,4 g Na2HPO4.7H2O, y 1,7 g NH4Cl en unos 500 ml de agua destilada y diluir a 1 litro.
El pH debe estar en 7,2 sin ms ajustes, debe almacenarse siempre en la nevera a 4 C.
Descartar cualquier reactivo si se ve alguna seal de crecimiento biolgico en la botella
stock. Para preparar 250 mL: Disolver 2,125 KH2PO4, 5,438 g de K2HPO4 g, 8,35 g
Na2HPO4.7H2O, y 0,425 g NH4Cl en unos 100 ml de agua destilada y diluir a 250 mL.
Alternativamente disolver 10,625 g de KH2PO4 y 0,425 g de NH4Cl en cerca de 170 mL
de agua desionizada. Ajustar el pH a 7,2 con NaOH al 30% y diluir a 1 L.
- Solucin de Cloruro de calcio. Para un litro de solucin, disolver 27,5 g CaCl2 en agua
destilada y diluir a 1 litro. Para preparar 250 mL, disolver 6,875 g de CaCl2 en
aproximadamente 100 mL y diluir en 250 mL.
- Solucin de Cloruro frrico. Para un litro de solucin, disolver 0,25 g FeCl3.6H2O en agua
destilada y diluir a 1 litro. Para preparar 250 mL, disolver 0,063 g FeCl3.6H2O en 100 mL
y diluir en 250 mL.
- Solucin cida 1 N. Se utiliza para neutralizar las muestras en el rango de 6,5 7,5
unidades. Aada lentamente 28 ml de H2SO4 concentrado al agua destilada y diluya a
1litro.
- Solucin alcalina 1N. Se utiliza para neutralizar las muestras en el rango de 6,5 7,5
unidades. Disolver 40 g de NaOH en agua destilada y diluir a 1litro.
- Solucin de sulfito de sodio. Se utiliza para eliminar el cloro residual de las muestras.
Disolver 1,575 g de Na2SO3 en 1litro de agua destilada. Preparar diariamente, pues esta
solucin no es estable.
- Solucin de glucosa - cido glutmico 198 30,5 mg/L: Secar glucosa y cido glutmico
grado reactivo a 103 C por una hora. Aadir 150 mg de glucosa y 150 mg de cido
glutmico a agua desionizada y diluir hasta 1litro. Preparar solucin fresca o conservada
a 4 C o menos por no ms de 4 semanas. La solucin patrn comercial debe preparase
segn instrucciones y se conservar en condiciones estriles a 4 C o menos.
- Agua para preparar las diluciones. Utilizar agua destilada que cumpla con el control de
calidad.
9. PROCEDIMIENTO
Para todas las muestras: Registre el valor de pH a la temperatura dentro del laboratorio
en el formato de datos, antes de realizar las diluciones. Las muestras con pH extremos
(inferiores a 5 o superiores a 10), se deben neutralizar a un pH entre 7,0 y 7,2 con una
solucin cida 1N o solucin alcalina 1N, cuidando de no diluir la muestra ms de un
0.5%. Se puede justificar una excepcin para las aguas naturales cuando la DBO se mide
a valores de pH in situ. El pH del agua de dilucin no debera ser afectado por la menor
dilucin de la muestra. Siempre que se ajuste el pH de una muestra se debe inocular.
Para muestras con compuestos clorados residuales: se debe tomar la muestra antes de
los procesos de cloracin. Si la muestra ha sido clorada pero no hay cloro residual
detectable, se debe inocular el agua de dilucin. Si hay presencia de cloro residual, debe
eliminarse con una gota de tiosulfato de sodio Na2SO3 e inocular el agua de dilucin. No
ensayar muestras cloradas/decloradas sin inocular el agua de dilucin. En algunos casos
el cloro puede disiparse con una o dos horas de estar expuesta la muestra a la luz, que
puede ser durante el tiempo de transporte y manipulacin.
Para muestras que contienen metales txicos, como es el caso de algunos residuos
industriales, se requiere un estudio especial y tratamiento.
Para muestras sobresaturadas con oxgeno disuelto, es decir, aquellas con contenido
mayor a 9 mg/L de oxgeno disuelto a 20C provenientes de lugares fros o con abundante
fotosntesis, para prevenir la prdida de oxgeno durante la incubacin, se debe reducir el
oxgeno disuelto hasta saturacin a temperatura de 203C, agitando en una botella
parcialmente llena o aireando la muestra
Usar agua destilada para preparar el agua de dilucin. Para asegurar la calidad se debe
contar con material muy limpio. Se prefiere preparar inmediatamente antes de su uso y no
con ms de ocho horas de anticipacin. La fuente de agua de dilucin debe estar
evaluada con la prueba de chequeo antes de ser utilizada en anlisis, segn formato de
verificacin de la calidad del agua.
Preparacin de diluciones: Con el agua de dilucin preparada, realizar por lo menos dos
diluciones con un tamao de la muestra en la botella que asegure un consumo de oxgeno
en 5 das (OD inicial menos OD final) de al menos 2 mg/l del oxigeno disuelto y que
permanezca por lo menos un residual (OD final) de 1 mg/L al cabo de los 5 das. Marcar
cada botella con el cdigo de muestra, la fecha de anlisis, la dilucin preparada.
Registrar la hora del anlisis, el volumen del inoculo agregado y del inhibidor si aplica, en
el formato de Datos para anlisis de DBO5.
Slo la experiencia con una muestra particular permitir hacer hasta una sola dilucin.
Con la DQO como referencia se pueden correlacionar algunos valores de DBO. Se
determinan como gua las siguientes diluciones: de 0,01 a 1% para desechos industriales,
1 a 5% para descargas crudas y sedimentadas, 5 a 25% para efluentes tratados
biolgicamente y 25 a 100% para aguas superficiales contaminadas. Las diluciones se
pueden preparar en material volumtrico Clase A.
Cualquiera de los mtodos de dilucin puede ser combinado con cualquier mtodo de
medicin de oxgeno disuelto. Para diluciones mayores que 1:100 (3 ml en la botella)
hacer una dilucin primaria en baln, antes de hacerla en la botella.
Llenado de botellas: Llenar cuidadosamente las botellas con suficiente agua de dilucin
de modo que la insercin del tapn desplace todo el aire, sin dejar burbujas. Para evitar el
intercambio de gases durante el periodo de incubacin, y luego de la medicin de
oxgeno, debe asegurarse en la botella un sello de agua y cubrirlo con bolsa plstica,
atada con banda elstica.
Realizar la medicin del oxgeno disuelto inicial dentro de los 30 minutos siguientes a la
preparacin de la dilucin.
10. CLCULOS
Para las muestras que cumplen con el mnimo de consumo de 2 mg/L y un residual mayor
a 1 mg/L
Cuando todas las diluciones tienen un residual menor a 1 mg/L, seleccionar la botella que
tenga el ms bajo valor de OD o sea la mayor dilucin, realizar el clculo y reportar como
DBO > (mayor a) el clculo realizado con base en la ecuacin.
Reporte. Promediar el resultado de las pruebas para todas las botellas calificadas dentro
de cada serie de diluciones. Reportar el resultado como DBO5 si no se inhibe la
nitrificacin. Reportar como CDBO5 cuando se inhiba la nitrificacin.
11. AUTORIDAD
Director tcnico: Posee autoridad para decidir acerca del uso de equipos y la realizacin,
suspensin, reanudacin o reprogramacin de una prueba.
Tcnico Analista titular o suplente y/o Auxiliares: Autoridad para decidir el encendido
de equipos, si se requiere, tomar las muestras, realizar las lecturas pertinentes y repetir
las pruebas cuando sea necesario.
12. FORMATOS
13. REFERENCIAS
Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater. 5-DAY BOD TEST
5210 B. Membrane Electrode Method 4500- O G. American Public Health Association,
American Water Works Association, Water Pollution Control Federation. 21st ed., New
York, 2005.pp 5-2, 4-141