DETERMINAO DA GLICEMIA

1. Objetivo:
Determinar a concentrao de glicose em amostra de plasma.

A concentrao de glicose em fluidos biolgicos pode ser determinada atravs de mtodos

enzimticos, por meio de reaes catalisadas pela hexoquinase ou a glicose-oxidase. No
procedimento que utiliza a glicose oxidase (GOD), a glicose oxidada enzimaticamente,
formando cido glucnico e perxido de hidrognio. O perxido em presena de peroxidase
(POD) causa a ligao do fenol com a 4-aminoantipirina, formando um cromgeno vermelho,
que medido espectrofotometricamente.

GOD
Glicose + O2 + H2O cido glucnico + H2O2

POD
2H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol antipirilquinonimina + 4H2O

2. Material por bancada:

Estante para tubos de ensaio
4 tubos de ensaio
Pipetas automticas para 1,0 mL e 10 L
Ponteiras
Reagente 1 (contm tampo fenol/fosfato pH 7,4, glicose oxidase, peroxidase e 4-aminoantipirina).
Soluo padro de glicose na concentrao de 100 mg dL-1
Espectrofotometro

3. Procedimento

Identificar 3 tubos de ensaio como B (branco), P (padro) e A (amostra) e pipetar:

Tubos B P A
Sol padro de glicose -- 0,010 mL --
Amostra -- -- 0,010 mL
Reagente 1 1,0 mL 1,0 mL 1,0 mL
Misturar vigorosamente, incubar em banho-maria a 37C durante 10 minutos.
Determinar as absorbncias em 505 nm, acertando o zero do aparelho com o branco.
A cor estvel por 30 minutos.

4. Clculo

Glicose (mg dL-1) = Absorbncia da amostra X concentrao do padro

Absorbncia do padro

5. Valores de referncia:

Plasma jejum de 8 horas: 65 a 99 mg/dL

Ps-prandial: > 140 mg/dL - hiperglicemia