PRCTICAS DE LABORATORIO

MICROBIOLOGA GENERAL UNIDAD I

05/06/20017

Lecca Ruiz, Joao R.

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
 UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE CIENCIAS AGROPECUARIAS
ESCUELA DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL

INFORMES DE LABORATORIO UNIDAD I

ALUMNO:

LECCA RUZ, JOAO

DOCENTE:

Blgo. ALVARADO IBAEZ, JUAN CARLOS

CURSO:

MICROBIOLOGA GENERAL

CICLO / AO:

IV CICLO / II AO

2017
 PRCTICA DE LABORATORIO N 1: Microscopio: Uso del microscopio. Observacin en fresco
coloracin simple y Gram

1. PROCEDIMIENTO DE LA TINCIN GRAM:

1 Colocar una pequea gota 2 Esterilizar el asa con 3 Recoger una muestra
de solucin salina en cada mechero con el asa fra y estril
laminilla

4 Mezclar la colonia en la 5 Esterilizar el asa con 6 Repetir los pasos 3-5

solucin salina y extenderla mechero nuevamente para la segunda laminilla
finamente con la muestra Gram y
dejarlas secar al aire
airtenegativas

7 Fijar ambas muestras con 8 Verter el cristal violeta 9 Verter el lugol sobre las
ayuda del mechero y luego se sobre las muestras, muestras, esperar 20
procede a la tincin Gram esperar 20 segundos segundos y lavar con agua
destilada

10 Verter el alcohol acetona 11 Verter la safranina, esperar 12 Secar al aire las

para la decoloracin y luego 20 segundo y lavar con agua laminillas y observar en el
lavar con agua destilada destilada microscopio
2. RESULTADOS

2.1. Observacin de clulas sanguneas

OBSERVACIN: Muestra sangunea

PREPARADO: En fresco

COLORACIN: Neutra (Wright)

ESTRUCTURAS OBSERVADAS: Neutrfilos,

basfilos, monocitos. Granulocitos y
Agranulocitos

AUMENTO: 1000x

2.2. Observacin de bacilos esporulados

OBSERVACIN: Muestra bacteriana

PREPARADO: En seco con aceite de

inmersin.

COLORACIN: Gram negativos

ESTRUCTURAS OBSERVADAS: Cuerpos

bacterianos (somas), endosporas, clulas
vegetativas y esporas.

OBSERVACIN: Muestra bacteriana

PREPARADO: En seco con aceite de

inmersin

COLORACIN: Gram negativos

ESTRUCTURAS OBSERVADAS: Cuerpos

bacterianos (somas), endosporas, clulas
vegetativas y esporas.
 2.3. Observacin de bacterias Gram positivas y Gram negativas

OBSERVACIN: Muestra
bacteriana

COLORACIN: Gram negativa

OBSERVACIN: Muestra bacteriana

COLORACIN: Gram positiva

3. DISCUSIN:

- Las clulas son fijadas por medio del calor sobre un portaobjetos, se tien primero con una
solucin de cristal violeta y son lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este
punto las clulas Gram positivas y Gram negativas, estn teidas de azul/violeta.

- El KI hace soluble el I2 en agua. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua
con el cristal violeta. En este punto las clulas se mantienen iguales.

- Para la decoloracin se usa una solucin de Alcohol-acetona, sustancia en la que es soluble el

complejo I2-Cristal violeta. Algunos microorganismos no se decoloran. La diferencia esencial
entre los dos tipos de clulas es la resistencia que presentan ante la decoloracin.

- Despus de la decoloracin las clulas Gram positivas son azul\violeta, y las Gram negativas
son incoloras.

- RELACIN CON LA AGROINDUSTRIA: Los bacilos Gram-negativos, catalasa-positivos, son los

agentes ms importantes en el deterioro de los alimentos y al mismo tiempo los patgenos ms
relevante de origen entrico transmitidos por alimentos.
 PRCTICA DE LABORATORIO N 2: Preparacin de medios de cultivo. Siembra. Aislamientos

1. PROCEDIMIENTO DE PREPARACIN EDL AGAR NUTRITIVO Y CALDO NUTRITIVO:

1 Pesar las cantidades 2 Disolver en H2O destilada 3 Enfriar moderadamente y

necesarias de pepona y llevarla a ebullicin (agitar tapar el matraz con un algodn,
(0.5g), NaCl (0.3g), extracto peridicamente) cubierta de papel y amarrar
de carne (0.3 g), agar-agar
(1.5g), para 100 ml de H20
destilada o la mitad (todos)

Esterilizar el asa con

mechero

4 Llevar a la autoclave 5 Estando estril, el 6 Pasado un tiempo, las

por 15 minutos a 120 C cultivo se vierte en una placas se habrn enfriado y
placa Petri esterilizada con solidificado
ayuda del mechero

2. RESULTADOS:

*Medio de cultivo slido (Agar nutritivo)

3. DISCUSIN:

- En el medio slido (agar nutritivo) se observarn pequeos puntos, denominados colinas.

- En el medio lquido (caldo nutritivo) no hay presencia de colonias, pero se observa una turbidez
lo que indica que los microorganismos han crecido y se han multiplicado.

- El NaCl acta como un controlador del crecimiento microbiano, por lo tanto, no se debe
exceder de lo necesario.

- La peptona es la fuente de Nitrgeno en los medios de cultivo.

- A una temperatura menor de 45 C, el agar nutritivo se solidifica, mientras que a una

temperatura mayor que 45 C, el agar nutritivo est es lquido.

- Luego del proceso de disolucin con H2O destilada (paso 2), se observa una clarificacin.
 4. PROCEDIMIENTO PARA LA TCNICA DE AISLAMIENTO:

1 Dividir cada una de las
cajas Petri por la parte de
atrs en cuatro cuadrantes.
Esterilizar el asa con calor en
el mechero.
2 Dejar enfriar el asa y 3 Inocular la muestra haciendo 4
tomar la muestra de una o 5 estras simples muy juntas de
colonia (muestra bucal) lado a lado sobre el primer
cuadrante de la caja, cerrar la caja.

4 Flamear el asa de
inoculacin y hacer girar
la caja Petri un cuarto de
vuelta.
6 Incubar la siembra a 37
5 Repetir los pasos 3 y 4
C previa identificacin,
hasta lograr estras en los durante 24-48 h.
4 cuadrantes.

5. DISCUSIN:

- Las estras realizadas en el primer y segundo cuadrante sirven como tcnica de agotamiento;
es decir, para agotar la muestra (la gran cantidad de microorganismos)

- El tercer y cuarto cuadrante son los ms tiles, pues los microorganismos se presentan ms
aislados o separados.

- Se debe tener en cuenta que, si se usa muy poco agar en el cultivo, el asa se hunde y este
proceso resultara ineficiente.

- Tambin hay que tener en cuenta que, si se usa demasiado agar, el microbio ya no crece, esto
tambin dificultara en la tcnica de aislamiento.

- Las tcnicas de aislamiento, permiten la obtencin de microorganismos a partir de muestras

complejas (suelo, agua, alimentos, etc.) en las que hay una gran diversidad microbiana, as como
para comprobar la pureza de los cultivos obtenidos.
 PRCTICA DE LABORATORIO N 3: Accin de los microorganismos sobre los

carbohidratos. Protenas y lpidos

1. PROCEDIMIENTO:

A) Degradacin de carbohidratos

A.1) MEDIANTE EL CALDO GLUCOSADO

1 Flamear la boca del tubo 3 Colocar la muestra en el

2 Sacar una muestra del
de la muestra con ayuda del centro del tubo, incubar a
tubo con el asa (esterilizada)
mechero 37 C por 24 h y observar.

A.2) MEDIANTE LA REACCIN VOGES PROSKAUER-ROJO DE METILO

1 Inocular el medio con 3 Luego se aaden 5

2 Se incuba a 35-
un cultivo puro joven.
37 C durante 48 h
gotas del reactivo Rojo de
metilo (no agitar)
identificacin, durante 24-
48 h.

A.3) MEDIANTE EL AGAR DE ALMIDN SOLUBLE AL 0.2 %

1 Esterilizar asa y 2 Sembrar ambas 3 Incubar a 37 C por 48 h.

enfriar muestras en tubos Luego adicionar lugol a las
que contengan el placas petri
almidn
 B) Accin sobre las protenas y otras sustancias nitrogenadas

B.1) LICUEFACCIN DE LA GELATINA

1 Se incuba la muestra 3 Se observa la

2 Se refrigera la muestra
sembrada en un tubo, a 37 licuefaccin de la gelatina
por 4 h
C por 24 h en las pseudomonas

B.2) MEDIANTE EL CALDO PEPTONADO

1 Se incuba la muestra 2 Se aaden 5 3 Leer las muestras

sembrada en un tubo, a gotas del reactivo del caldo peptonado
37 C por 24 h de Kovacs

B.3) MEDIANTE EL AGAR DE REA HIDRLISIS DE LA REA

1 Se siembra el M.O. en 2 Incubar a 37 3 Leer las muestras

el caldo urea C por 24 h del caldo de urea
 B.4) MEDIANTE LA REDUCCIN DE NITRATOS A NITRITOS CALDO NITRATADO

1 Se siembra el M.O. en 2 A las 24 h se adiciona 3 Leer las muestras

el caldo nitratado cido sulfanIico y alfa del caldo nitratado
naftilamina (R. Gries)

2. DISCUSIN

* En la degradacin de carbohidratos, tenemos:

-Mediante el caldo glucosado: la fuente de carbono es la glucosa, la presencia de turbidez, gas,

sedimentaciones indican el crecimiento bacteriano, mediante el indicador rojo de fenol se sabe
que el color rojo indica presencia de alcalinidad y el color amarillo presencia de acidez. Los cidos
dbiles ocasionan un ph ligeramente cido (6,6); es decir, la klebsiella y la E. coli dan positivo a
esta reaccin.

-Mediante la reaccin Voges Poskauer-RM: El caldo se degrada y se forma el compuesto acetona

(acetilmetilcarbinol) que reacciona a su vez con el alfa naftol. Para la reaccin Voges Proskauer
el E. coli da negativo, mientras que el Enterobacter da positivo (forma el anillo indlico). Para la
reaccin Rojo e metilo, el E. coli da positivo tindose de rojo por la presencia de cidos fuertes
que brindan acidez a la solucin, mientras que el Enterobacter da negativo, tindose de
amarillo por encontrarse en solucin alcalina.

-Mediante la solucin de almidn soluble al 2 %: ambos (staphylococcus aureus y bacillus

subtilis) crecen en el medio, pero solo el bacillus subtilis desarrolla el halo de hidrlisis de
almidn, hallndose amilasas inducidas y extracelulares (el microorganismo lo produce y lo
expulsa).

* En la degradacin de protenas, tenemos:

-En la licuefaccin de la gelatina: las Pseudomonas son las que presentan accin de la gelatinasa.

-Mediante el caldo peptonado: Proteus da positivo para la produccin de cido sulhdrico y

negativo para el indol, mientras que el E. coli da positivo para el indol y negativo para el cido
sulfhdrico.

-Mediante el agar de urea: La fuente de energa es el Nitrgeno, el amonaco alcaliniza el medio,

Proteus da positivo por teirse de rojo e indicar la presencia de un medio alcalinizado, y el E. coli
al teirse de anaranjado, no indica la presencia de un medio alcalino por lo que da negativo.

-Mediante la reduccin de nitratos a nitritos: El E. coli se tie de rojo ladrillo, ya que hay
presencia de nitratos, mientras que las Pseudomonas son incoloras debido a que degradan al
nitrato.
 PRCTICA DE LABORATORIO N 4: Accin de los agentes fsicos y qumicos sobre las bacterias.
El antibiograma y espectro antibitico

1. PROCEDIMIENTO

1.1. Accin de los agentes fsicos y qumicos:

1 Sembrar la bacteria en la 2 Embeber 4 pequeos 3 Incubar a 37 C por 24 h

placa Petri discos de papel de filtro y leer los resultados
con: Formol, leja, alcohol
yodado y fenol (1%)

1.2. Antibiograma y espectro antibitico. Se sigue el mismo procedimiento, pero con las
siguientes especificaciones:

Antibiograma: 1 bacteria vs varios antibiticos

Espectro antibitico: 1 antibitico vs varias bacterias

ANTIBIOGRAMA

ESPECTRO ANTIBITICO

2. DISCUSIN:

* En la accin de los agentes fsicos y qumicos, la leja y el formol presentan una mayor actividad
frente al microorganismo, presencindose en la leja un halo mucho ms grande que el de lo
dems.

-El alcohol yodado y el fenol son antispticos, mientras que la leja y el formol son
desinfectantes.

* En el antibiograma, la Clindamicina, cefazolina y gentamicina son los antibiticos ms efectivos

contra el E. coli, siendo el de mayor efectividad la Clindamicina; es decir, se evidenciar un halo
mucho ms grande.

* En el espectro antibitico, el norfloxacino (NOR-10) a la concentracin de 10 mg. es quien tiene

mayor efectividad contra las Gram negativas, en este caso contra las Pseudomonas y el
Staphylococcus aureus.