Esterilizacin.

Para este apartado de esterilizacin nos enfocaremos en la esterilizacin del medio de cultivo para los
reactores semillas, que ser el inoculo con el cual comenzar el proceso en el reactor. Cabe mencionar que
Tambin se debe realizar la esterilizacin de los materiales a utilizar para la produccin de la biomolcula, las
tuberas por donde fluye el caldo, el birreactor etc. Esto para garantizar la eficiencia del proceso.

Para el estudio de los microorganismos es indispensable contar entre otras cosas con material y medios de
cultivo estriles. En Microbiologa la esterilizacin se define como el proceso mediante el cual se eliminan
todos los microorganismos (incluyendo formas de resistencia) de un objeto, medio o superficie y su
aplicacin garantiza la ausencia de microorganismos en el material y medios de cultivo a ser empleados.
Existen diversos mtodos de esterilizacin, entre ellos: calor (seco o hmedo), filtracin (para sustancias
termolbiles y aire), radiaciones y aplicacin de gas de xido de etileno (para jeringas y cajas de plstico).

Un medio de cultivo est constituido por una mezcla de agua y sustancias orgnicas e inorgnicas, los que en
conjunto proporcionan los requerimientos nutricionales para el desarrollo de los microorganismos. La
composicin de los medios de cultivo vara en funcin de: a) grupo microbiano que se pretende estudiar, b)
complejidad qumica, c) estado fsico, y d) aplicacin.

Esterilizacin: eliminacin o muerte de todos los microorganismos que contiene un objeto o sustancia, y que
se encuentran acondicionados de tal forma que no pueden contaminarse nuevamente.

Una elevada temperatura, provoca entre otra cosa la desnaturalizacin de las protenas, como el rompimiento
de sus enlaces disulfuro, fuerzas de vander walls, con lo anterior mencionado se pierde total funcionalidad
del metabolismo o replicacin de ADN, sntesis de protenas. Una presin elevada, causa una lisis celular ya
que la pared celular u otro tipo de capa que cubra o envuelva al microorganismo, no soporta la presin y al
ser en su mayora permeable, lo compuesto tienden a migrar al lado de mayor presin o a favor del gradiente
de presin.

Agentes antibacterianos esterilizantes y/o desinfectantes

Provocan prdida de la viabilidad en los microorganismos

Fsicos (calor, radiaciones)
Qumicos (xido de etileno, formaldehdo, agentes oxidantes, soluciones antispticas.)

Provocan una separacin de los microorganismos de la sustancia lquida

Filtracin (se eliminan los microorganismos presentes en un fluido).

Autoclave

En el proceso de produccin es imprescindible trabajar con material y soluciones estriles con objeto de que
los resultados que se obtengan correspondan al microorganismo o microorganismos que estn presentes en
la muestra en estudio y no a contaminantes que procedentes del medio o los materiales, puedan desarrollarse
y falsear las pruebas. Para ello antes de comenzar el trabajo prctico se esterilizar, junto con los medios de
cultivo, el material que posteriormente va a ser utilizado. Se entiende por esterilizacin los procedimientos
por los cuales se eliminan todas las formas vivas de microorganismos, sean patgenos o no, que se hallen en
un material. Esta esterilizacin suele efectuarse con calor hmedo en unos aparatos denominados autoclaves.

La autoclave es un instrumento habitual en los laboratorios. Es un sistema cerrado donde se forma vapor de
agua que se somete a una presin elevada, una atmsfera, lo que hace que el agua alcance una temperatura
de 121C causando la desnaturalizacin de enzimas lo que conlleva a la muerte de los microorganismos y la
destruccin de las esporas. Habitualmente, se esteriliza a 121C durante 20 minutos.

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 Ilustracin 1 Esquema de un autoclave

Proceso de Esterilizacin

El proceso completo de esterilizacin en una autoclave se compone de diferentes fases:

Fase de purgado: A medida que la resistencia calienta el agua del fondo del caldero, se va
produciendo vapor que desplaza el aire, hacindolo salir por la vlvula de purgado que est abierta.
Esta fase termina cuando se alcanza la temperatura de esterilizacin.
Fase de esterilizacin: Una vez cerrada la vlvula de purgado y alcanzada la temperatura de
esterilizacin previamente seleccionada se inicia el proceso de esterilizacin.
Fase de descarga: Terminado el proceso de esterilizacin, deja de funcionar la resistencia calefactora,
con lo que deja de producirse vapor y la presin y temperatura del caldero empieza a bajar poco a
poco.

Consideraciones.

Para que la esterilizacin de medios de cultivo sea eficaz, la temperatura y el tiempo seleccionados
deben alcanzarse en todo el lquido.
Los recipientes con cierre hermtico deben ser introducidos en la autoclave sin cerrar totalmente el
tapn, para facilitar la entrada del vapor durante el proceso. Al vaciar la autoclave despus de la
esterilizacin procederemos a cerrar totalmente estos recipientes.
Los recipientes vacos precisan de un tiempo de esterilizacin mayor que los recipientes con lquido
en su interior.

Medio de cultivo lquido

1. Leer cuidadosamente el marbete del medio de cultivo deshidratado.

2. Calcular la cantidad necesaria para preparar 100 mL de caldo del medio de cultivo deshidratado.

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3. Pesar la cantidad calculada del medio deshidratado. Esta operacin debe ser rpida para evitar que la
humedad del ambiente no afecte el resto del contenido del frasco.

4. Disolver el medio en 50 mL de agua destilada en un matraz de 250 mL, y una vez disuelto completar el
volumen con 50 mL ms.

5. Ajustar el pH entre 6.8 y 7.2.

6. Colocar 10 mL de caldo en el matraz semilla.

Seguidos los procedimientos anteriores, se asegura que la esterilidad del medio de cultivo, o en su defecto
del material a utilizar, ahora mediante condiciones estriles se debe agregar, el inoculo al medio para
comenzar con el procedimiento de crecimiento de biomasa, que servir para inocular el reactor.

Sin autor( 2006), Esterilizacin y Preparacin de Medios de Cultivo , Fecha de

Consulta(25/10/2017), En lnea, disponible en:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/Protocolo2_3_19088.pdf
Manuel Sanchez (Sin Fecha), Preparacin de medios de cultivo, Fecha de Consulta(24/10/17). En
lnea, Disponible en:
https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-de-
microbiologia/indice/esterilizacion-desinfeccion-y-antisepsis/autocave