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Emmanuel Ibarra Estrada1*, Maribel Pacheco Snchez2, Rosario Garca Mateos3, Rubn San Miguel Chvez4,
Gustavo Ramrez Valverde5 y R. Marcos Soto Hernndez4
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Postgrado de Recursos Genticos y Productividad-Fisiologa Vegetal, 4Programa de Botnica y 5 Programa de Estadstica, Colegio de Postgraduados-Campus
Montecillo. km. 36.5 Carr. Mxico-Texcoco. 56280, Montecillo, Texcoco, Edo. de Mxico. Tel: 01 (595) 95-20200 ext. 1361. 2rea de Biologa y 3rea de Qumica,
Preparatoria Agrcola, Universidad Autonma Chapingo. km. 38.5 Carr. Mxico-Texcoco. 56230, Chapingo, Texcoco, Edo. de Mxico.
la existencia de seis especies reactivas de oxgeno (ROS) Alcaloides liberados. El remanente de la fase acuosa
que provocan dao oxidativo al cuerpo humano: anion se acidific a pH 2 con cido clorhdrico concentrado. La
superxido (O2 ), perxido de hidrgeno (H2O2), radicales mezcla se llev a reflujo durante 3 h a una temperatura
perxilo (ROO), radical hidroxilo (HO), oxgeno (O2) y entre 60 y 70 C. La mezcla fra se alcaliniz con NaHCO3
peroxinitrito (ONOO) (Huang et al., 2005). hasta obtener pH 8 y se extrajo con diclorometano (5
extracciones de 100 mL cada una); el disolvente se sec con
Un mtodo sencillo, fcil y rpido de llevar a cabo, Na2SO4 anhidro y posteriormente se evapor, para obtener
desarrollado por Brand-Williams et al. (1995) para la fraccin de alcaloides liberados.
determinar actividad antioxidante de alimentos y
compuestos secundarios, utiliza al radical estable 2,2-difenil- Purificacin de alcaloides. De la fraccin de alcaloides
1-picril-hidrazilo (DPPH). En interaccin con DPPH, los liberados se obtuvo el alcaloide erisodina mediante
antioxidantes transfieren electrones o tomos de hidrgeno fraccionamiento por cromatografa preparativa en
a este compuesto y as neutralizan su propiedad de radical columna, con slica gel (gel de slice G 60 Merck) como fase
libre (Naik et al., 2003). La caracterstica de la reaccin es un estacionaria; los eluyentes fueron diclorometano:metanol
efecto decolorante sobre el DPPH de azul-violeta a amarillo en diferentes proporciones, desde 100:0 % a 80:20 % (v:v).
(Brand-Williams et al., 1995). Una inhibicin de por lo Se obtuvieron fracciones de 5 mL cada una y se analizaron
menos 50 % de la concentracin de DPPH representa una por cromatografa en capa fina, y se combinaron las que
buena actividad antioxidante. El objetivo principal de este resultaron cromatogrficamente similares. Despus se
estudio fue evaluar la actividad antioxidante de fracciones realiz otra columna preparativa para la separacin de los
crudas de alcaloides y de erisodina, y su comparacin con ismeros erisovina y erisodina, con el uso de los eluyentes
cido ascrbico. cloroformo:metanol desde 100:0 % hasta 95:5 %.
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triplicado. El porcentaje de DPPH inhibido (% DPPH) se Garn et al. (2000) reportaron un rendimiento de 0.224
calcul con la ecuacin: % de fraccin de alcaloides liberados de semillas de E.
americana, valor que corresponde con el obtenido en este
% DPPH inhibido= (Acontrol A muestra) x 100/Acontrol estudio. La fraccin de alcaloides liberados se purific en
una columna cromatogrfica, y se obtuvieron 34.9 mg de un
donde Acontrol es la absorbancia del control, y Amuestra compuesto con aspecto de polvo caf y amorfo con un punto
es la absorbancia de la muestra. Los valores de CI50 se de fusin de 204-206 C, correspondiente a la erisodina
calcularon a partir de grficos del porcentaje de inhibicin (Amer, 1991). Se hizo un segundo anlisis cromatogrfico a
y las concentraciones de los tratamientos. El CI50 denota 34.9 mg del compuesto obtenido en el primer anlisis, para
la concentracin de un compuesto para inhibir la separar la erisodina de su ismero erisovina, y as lograr
concentracin del valor inicial del DPPH a 50 %, a una una mejor purificacin. En el Cuadro 2 se presentan los
absorbancia de 517 nm. desplazamientos qumicos de los protones de erisodina en
RMN-1H.
Diseo experimental
Cuadro 2. Desplazamientos qumicos de erisodina
Se utiliz un diseo completamente al azar con cinco Protones Desplazamientos qumicos ()
tratamientos a diferentes concentraciones: fraccin de
1H 6.04
alcaloides libres hexnicos, fraccin de alcaloides libres
metanlicos, fraccin de alcaloides liberados, erisodina 2H 6.58
y cido ascrbico (testigo positivo). Se utilizaron las 3Ha 4.01
concentraciones 0.5, 0.1 y 0.05 mg mL-1 para las fracciones 4Ha 1.6
crudas; 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 0.1 y 0.05 mg mL-1 para erisodina; 4He 2.5
y 0.001, 0.005. 0.0075 y 0.01 mg mL-1 para cido ascrbico. 7H 5.73
Las evaluaciones se hicieron por triplicado.
8H 3.38
8H 3.58
Para determinar diferencias entre tratamientos se hizo
un anlisis de varianza con el paquete SAS para Windows 10Ha 2.93
9.0, previa transformacin a rangos (Conover y Iman, 10He 3.39
1981) para el cumplimiento de los supuestos, as como la 11Ha 2.89
comparacin de medias REGWQ (Ryan-Einot-Gabriel- 11He 2.35
Welsh). 14H 6.77
17H 6.72
RESULTADOS Y DISCUSIN
15OCH3 3.77
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ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE DE ALCALOIDES DE Erythrina americana Rev. Fitotec. Mex. Vol. 34 (4), 2011
2004). La concentracin de DPPH utilizada podra explicar chalcona (160 g mL-1) y una flavanona (380 g mL-1),
la diferencia entre concentraciones inhibitorias. El alcaloide las cuales presentaron menor actividad antirradical que
melosmina de Rollinia pittieri present una CI50 de 3.037 erisodina.
0.18 g mL-1 (Montoya et al., 2004), valor superior al
obtenido con erisodina, que a su vez es superior a O-metil- Entre los porcentajes de inhibicin de las fracciones
moschatolina de la misma especie y que no mostr efecto crudas y el cido ascrbico se aprecia que los alcaloides
significativo sobre DPPH. La melosmina tiene dos grupos libres hexnicos y liberados presentan altos porcentajes
hidroxilos, que pueden ser responsables de la donacin de inhibicin sobre el radical DPPH; sin embargo, las
de tomos de hidrgeno necesarios para la actividad concentraciones de las fracciones crudas son mayores que
antioxidante, mientras que erisodina presenta un grupo las utilizadas con cido ascrbico (Cuadro 3). Con las tres
hidroxilo en su estructura; la ausencia de estos grupos en fracciones crudas evaluadas se logr una inhibicin de por
O-metil-moschatolina podra explicar su pobre actividad. lo menos 50 % sobre el radical estable, aunque su potencial
es diferente; esto evidenca que las fracciones crudas
Entre fracciones crudas, la de alcaloides liberados present tienen propiedades antioxidantes, debido quiz a un efecto
la mejor concentracin para inhibir al radical DPPH (0.1593 sinrgico entre los alcaloides presentes, pero su efecto
mg mL-1) y es significativamente igual a la que present la es inferior al del cido ascrbico. Similar al efecto de las
fraccin de alcaloides libres hexnicos (0.1791 mg mL-1). La fracciones crudas de alcaloides de E. americana, los extractos
fraccin de alcaloides libres metanlicos present una CI50 de diferentes especies como el extracto de oleorresina de
de 0.7243 mg mL-1, que es menos efectiva para inhibir al hojas del rbol del curry (Murraya koenigii Spreng.) (Rao et
menos en 50 % a la concentracin original del DPPH. al., 2007) y la fraccin alcaloidal del extracto metanlico de
races de Cissampelos pareria Linn. (Bafna y Mishra, 2010),
En E. latissima, Chacha et al. (2005) estudiaron las presentaron ms de 50 % de inhibicin sobre el DPPH.
propiedades antioxidantes de flavonoides de madera del
tallo de esta especie, un pterocarpano (135 g mL-1), una En el Cuadro 3 se aprecia que erisodina en la mnima
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concentracin evaluada, logr inhibir ms de 50 % del Bafna A R, S H Mishra (2010) Antioxidant and immunomodulatory
DPPH. En concentraciones mayores alcanz porcentajes de activity of the alcaloidal fraction of Cissampelos pareira Linn. Sci.
Pharm. 78:21-31.
inhibicin muy altos; con 0.5 mg mL-1 inhibi hasta 94.23 Brand-Williams W, M E Cuvelier, C Berset (1995) Use of a free radical
% 1.4 de la concentracin de DPPH, comparable con el method to evaluate antioxidant activity. Lebensm Wiss. Technol.
alcaloide pterodina de tipo oxindol aislado de ua de gato 28:25-30.
(Uncaria tomentosa), el cual present una inhibicin de Chacha M G, Bojase M, R R T Majinda (2005) Antimicrobial and radical
scavenging flavonoids from the stem wood of Erythrina latissima.
98.26 % con una concentracin de 250 g mL-1 (Paniagua Phytochemistry 66:99-104.
et al., 2009); erisodina a esta misma concentracin inhibe Conover W J, R L Iman (1981) Rank transformations as a bridge between
alrededor de 90 % del radical DPPH. parametric and nonparametric statistics. The Amer. Stat. 35:124-
129.
Games D E, A H Jackson, N A Khan, O S Millington (1974) Alkaloids
A una concentracin de 100 g mL-1 los alcaloides 6-ace- of some African, Asian, Polynesian and Australian species of
tonildihidroqueleritrina, queleritrina y dihidroqueleritrina, Erythrina. Lloydia 37:581-588.
aislados del extracto de metanol de la corteza de Bocconia Garca M R, M Soto H (2001) Alcaloides como una alternativa en la
arborea, presentaron un porcentaje de barrido sobre DPPH obtencin de principios activos. Prod. Nat. Persp. Biotecnol. 6:1-9.
Garca M R, B Lucas, M Zendejas, M Soto H, M Martnez, A Sotelo
de 84.3, 80.2 y 77.5 % respectivamente (Prez et al., 2003) (1996) Variation of total nitrogen, non-protein nitrogen content,
valores similares a los presentados por erisodina a esa con- and types of alkaloids at different stages of development in
centracin con 77.19 %. Este ltimo valor es ligeramente Erythrina americana seeds. J. Agric. Food Chem. 44:2987-2991.
superior al que present el alcaloide norditerpeno cochlea- Garca M R, M Soto H, H Vibrans (2001) Erythrina americana Miller
(Colorn; Fabaceae), a versatile resource from Mexico: a review.
renina obtenido de races de Delphinium linearilobum, que Econ. Bot. 55:391-400.
tuvo un efecto inhibitorio de 75.52 % sobre el radical DPPH Garn A M E, J E Ramrez L, M Soto H, G Valencia del T, M Martnez
a una concentracin de 100 g, ligeramente inferior al pre- V (2000) Effect of crude extracts of Erythrina americana Mill. on
sentado por erisodina a la misma concentracin (77.19 % aggressive behavior in rats. J. Ethnopharm. 69: 189-196.
Garn A M E, G Valencia del T, S G Snchez H, M Soto H, J Garca
3.9) (Kolak et al., 2006); el alcaloide koenigina extrado A (2001) Alcaloides de Erythrina herbacea. Prod. Nat. Persp.
de hojas del rbol del curry inhibi 91.6 % a 50 g g-1 (Rao Biotecnol. 6:10-19.
et al., 2007). Estos alcaloides con efecto inhibitorio sobre Garn A M E, S Lpez V, C L Martnez V, G Valencia del T, M Soto
DPPH contienen grupos hidroxilo, al igual que la erisodi- H, R A Prado A (2009) Erisodina y receptores nicotnicos 42
del hipocampo dorsal en la consolidacin de la memoria. Rev.
na; esto parece indicar que la actividad secuestradora sobre Latinoam. Qum. 37:206-217.
el radical se debe a la habilidad para donar tomos de hi- Huang D, B Ou, R L Prior (2005) The chemistry behind antioxidant
drgeno. Los resultados de este estudio sugieren que la efi- capacity assays. J. Agric. Food Chem. 53:1841-1856.
ciente habilidad de erisodina para atrapar al radical DPPH Juma B F, R R T Majinda (2004) Erythraline alkaloids from the flowers
and pods of Erythrina lysistemon and their DPPH radical
podra relacionarse con la capacidad para inhibir daos al scavenging properties. Phytochemistry 65:1397-1404.
ADN, como se demostr para el alcaloide pterodina (Pania- Kolak U, M ztrk, F zgke, A Ulubelen (2006) Norditerpene
gua et al., 2009). alkaloids from Delphinium linearilobum and antioxidant activity.
Phytochemistry 67:2170-2175.
Kubola J, S Siriamornpun (2008) Phenolic contents and antioxidant
CONCLUSIONES activities of bitter gourd (Momordica charantia L.) leaf, stem and
fruit fraction extracts in vitro. Food Chem. 110:881-890.
Las fracciones crudas de alcaloides de E. americana Liu L, Y Sun, T Laura, X Liang, H Ye, X Zeng (2009) Determination of
tienen potencial antioxidante con diversos niveles de poder polyphenolic content and antioxidant activity of kudingcha made
from Ilex kudingcha C. J. Tseng. Food Chem. 112:35-41.
inhibitorio sobre el DPPH, donde destaca la fraccin de Montoya P G L, E J Osorio D, N S Jimnez U, G J Arango A (2004)
alcaloides liberados con la mayor actividad antioxidante. El Actividad captadora de radicales libres de alcaloides de Rollinia
alcaloide dinico erisodina tiene un potencial antioxidante pittieri (Annonaceae) por el mtodo del DPPH. Rev. Fac. Qum.
similar al del cido ascrbico. El mtodo DPPH es sencillo y Farm. Univ. Antioqua 11:51-57.
Naik G H, K I Priyadarsini, J G Satav, M M Banavalikar, D P Sohoni,
rpido para evaluar la actividad antioxidante de compuestos M K Biyani, H Mohan (2003) Comparative antioxidant activity
bioactivos, principalmente con los que contienen grupos of individual herbal components used in Ayurvedic medicine.
OH, tal como erisodina. Este estudio contribuye al Phytochemistry 63:97-104.
conocimiento de la actividad antioxidante de los alcaloides Paniagua P R, E Madrigal B, D Molina J, S Reyes C, I lvarez G, L
Snchez C, J Prez G (2009) Antigenotoxic, antioxidant and
del tipo eritrinano, en particular del alcaloide erisodina. lymphocyte induction effects produced by pterodine. Basic
Clinical Pharmacol. Toxicol. 104:222-227.
BIBLIOGRAFA Prez R M, R Vargas, F J Martnez, E V Garca, B Hernndez (2003)
Actividad antioxidante de los alcaloides de Bocconia arbrea.
Amer M E (1991) The tetracyclic Erythrina alkaloids. J. Nat. Prod. 54:329- Estudio sobre seis mtodos de anlisis. Ars Pharm. 44:5-21.
363. Rao L J M, K Ramalaksmi, B B Borse, B Raghavan (2007) Antioxidant
Bafna A R, S H Mishra (2005) Actividad antioxidante in vitro del extracto and radical-scavenging carbazole alkaloids from the oleoresin of
de metanol de los rizomas de Curculigo orchioides Gaertn. Ars curry leaf (Murraya koenigii Spreng.). Food Chem. 100:742-747.
Pharm. 46:125-38. Soler R C, J C Espn, H J Wichers (2000) An easy and fast test to compare
total free radical scavenger capacity of foodstuffs. Phytochem.
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