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EXTRACCION DE LA CASEINA Y DETERMINACION DEL PUNTO ISOELECTRICO

EXTRACTION AND DETERMINATION CASEIN ISOELECTRIC POINT

Ardila Greilly (05242097)

Corporacin tecnolgica de Bogot, Tecnologa en Qumica Industrial


Bogot, Colombia
12/11/2015

Una caracterstica de las protenas y otros


RESUMEN biopolmeros es que la carga total que
adquieren depende del pH del medio. De la
Se llev a cabo el procedimiento de extraccin misma manera las protenas tienen una carga
y separacin de la casena de una muestra de neta dependiendo del pH del medio en el que
leche comn, La casena es una protena se encuentren y de los aminocidos que la
conjugada de la leche del tipo fosfoprotena componen. La casena es una protena
que se separa de la leche por acidificacin y conjugada de la leche del tipo fosfoprotena
que se separa de la leche por acidificacin y
forma una masa blanca. Se realiz la
forma una masa blanca. Las fosfoproteinas son
determinacin experimental del punto un grupo de protenas que estn qumicamente
isoelctrico de la protena separada (5,2) unidas a una sustancia que contiene cido
haciendo preparacin de soluciones a fosfrico. En la casena la mayora de los
diferentes concentraciones y medida su grupos fosfato estn unidos por los grupos
absorbancia en el espectrofotmetro. hidroxilo de los aminocidos serina y treonina.
La casena en la leche se encuentra en forma
Palabras clave: Protena, casena, extraccin, de sal clcica (caseinato clcico). La casena
Punto isoelctrico. representa cerca del 77% al 82% de las
protenas presentes en la leche y el 2,7% en
ABSTRACT composicin de la leche lquida.

Carried out the process of extraction and MATERIALES Y METODOS


separation of casein from a sample of regular
Extraccin de la casena:
milk, Casein is a milk protein conjugate of the
type phosphoprotein which is separated from A una mezcla de agua destilada y leche
milk by acidification and forms a white mass. caliente se le agreg 1 mL de cido actico 1M
Experimental determination of the isoelectric hasta formar un precipitado, se filtr y se
point of the separated protein (5.2 ) was agreg etanol para volver a filtrar.
performed by preparing solutions at different
Determinacin del punto isoelctrico:
concentrations and the absorbance measured
in a spectrophotometer . A 50 mg de casena se le adicion agua
destilada, Hidrxido de potasio y se prepar
una solucin de 10 mL, los cuales se
distribuyeron los 10 tubos de ensayo (1 mL en
cada uno), a los cuales se les agreg los
volmenes correspondientes a la tabla No. 1, y
se midi la absorbancia de cada uno de ellos a
INTRODUCCION
640 nm para realizar la posterior grfica acetat cido cido
pH
(Grfica No. 1) de absorbancia Vs pH o de actic actic
Tubo aprox
sodio o 0.1 o
.
RESULTADOS Y ANALISIS DE 0.1m m 0.01m
TESULTADOS 1 0.5 9.5 3.2
2 1 9 3.6
Extraccin de la casena:
3 1.5 8.5 3.8
Al adicionar el cido actico a la leche se 4 2 8 4
observa un cambio en su composicin, 5 3 7 4.2
evidencindose una precipitacin completa, ya 6 4 6 4.5
que la fase lquida es traslcida y la fase slida 7 6 4 5
completamente blanca. Se puede explicar ya 8 8 2 5.1
que de acuerdo al cambio de pH
9 6 4 5.5
experimentado por la leche, inicialmente entre
6,5 y 6,7, all la protena (casena) se encuentra 10 8 2 6.1
cargada negativamente solubilizada con sal BLANC
2 8 4
clcica, al acidificarse el pH se acerca al punto O
isoelctrico de la protena, al llegar a pH Tabla No. 1. Fraccin para preparacin de
soluciones segn sus componentes a pH
aproximado a 4,2 y 4,7 se neutraliza la casena
aproximado.
(los grupos fosfatos se protonan), as se
precipita debido a que hay menos repulsiones Se obtuvieron los siguientes resultados
intermoleculares, evidencindose la correspondientes a la medicin de la
separacin de estos compuestos por medio de absorbancia de la muestra de casena a
densidad ya que la densidad del agua es 1 g/ml diferentes pH en diferentes tubos de ensayo
quedando arriba por tener densidad ms baja (10) a 640 nm:
que la casena que es de 1.3g/ml, esta
separacin se da debido a que cuando las pH
Tubo Absorbancia
protenas en este caso la casena se encuentra Experimental
a pH de punto isoelctrico son menos solubles 1 2,81 0,081
en agua y se da la separacin de la protena y 2 3,01 0,058
el agua. 3 3,12 0,004
4 3,21 0,002
Ca2 + Caseinato + CH3COOH Casena + CaCOOH 5 3,35 -0,004
Despus de precipitada la casena, se procede 6 3,54 0,008
a lavado para eliminar el suero y grasas 7 3,85 0,010
forzando a la parte soluble de la casena con la 8 4,18 0,014
lactosa a cristalizar. 9 5,20 0,040
10 7,5 0,011
Tabla No. 2 Medidas de las absorbancias de la
casena a diferentes pH en solucin.
Determinacin del punto isoelctrico:

Con la preparacin previa de las siguientes Con los anteriores datos se realiz una grfica
soluciones se prepararon la solucin para pH Vs Absorbancia, en la que se muestra el
medir su correspondiente absorbancia: comportamiento de las soluciones:
se observa una ligera precipitacin est
pH Vs absorbancia indicando que la protena se ha insolubilizado.
0.1
Se observa la disminucin de la actividad de la
0.05
protena (casena) con referencia a su pH
debido a que cuanto est a pH alejados de su
0 punto isoelctrico se comporta diferente, igual
0 2 4 6 8 se puede notar en su inestabilidad despus de
-0.05 pasar por el punto en que sus cargas son
neutras.
Grfica No 1. PH Vs absorbancia

Derivada de absorbancia
0.1

0.05

0
0 2 4 6 8 CONCLUSIONES
-0.05
Se logr la debida separacin de la protena de
Grfica No. 2 derivada de absorbancia
la leche (casena) con el proceso de
Segn la grfica el punto isoelctrico se acidificacin.
encuentra en (5,2), ya que se puede observar
un aumento de la absorbancia por respecto al Se determin el punto isoelctrico
pH. experimental de la casena (5,2) con la
interpretacin de la grfica de pH Vs
Al utilizar un porcentaje de error tenemos Absorbancia
que:
Se evidenci error en el procedimiento de
teorico experimental medicin de las absorbancias ya que el
% = porcentaje de error alcanza el 10%.
teorico
4,7 5,2 Se adoptaron conocimientos tericos y
% = 100 = 10,6%
4,7 prcticos con respecto a las protenas.

La prueba para determinar el punto


isoelctrico de la casena no es aceptable, ya BIBLIOGRAFIA
que el porcentaje indica que se hicieron errores
en el proceso pero que son aceptables, ya que Lehninger principios de bioqumica. Nelson,
estn cerca del rango en que precipita la David L., Michael M. Cox.
casena. las soluciones de acetato de sodio y
Fisicoqumica de molculas. Extraccin de
cido actico al 0.1 y 0.01 se usaron como
casena y determinacin de punto isoelctrico.
soluciones amortiguadoras que permitieron
Licenciatura de Biotecnologa.
identificar la protena ya que la casena se
solubiliza fcilmente en valores de pH
alejados a su punto isoelctrico, en el tubo que