UNIVERSIDAD VERACRUZANA

Facultad de Ciencias Qumicas

Campus Coatzacoalcos

Experiencia Educativa: Bioqumica

Practica No. 4
Determinacin espectrofotomtrica de carbohidratos.

Equipo: 5
NOMBRE DEL ALUMNO.
Paniagua Morales Nereyda

Matrcula: zS16020543
Grupo: I.B-301

Docente: Dr. Oswaldo Guzmn Lpez

NDICE

OBJETIVOS ............................................................................................................................. 3
INTRODUCCIN ..................................................................................................................... 3
MARCO TERICO................................................................................................................... 3
MATERIAL Y REACTIVOS ....................................................................................................... 4
PROCEDIMIENTO ................................................................................................................... 4
Primera parte. Preparacin de la curva de calibracin ................................................................ 4
......................................................................................................................................................... 5
Segunda parte: Medicin de la muestra problema (jugo de caa) ............................................. 5
Manejo de residuos ........................................................................................................................ 6
RESULTADOS ......................................................................................................................... 6
CONCLUSIN ......................................................................................................................... 7
REFERENCIAS......................................................................................................................... 7

OBJETIVOS
Que el estudiante determine azucares
reductores presentes en una muestra de
jugo azcar mediante un mtodo
espectrofotomtrico. A partir de la
valoracin espectrofotomtrica de hidratos
de carbono por el mtodo de fenol/cido
sulfrico usando una disolucin de
glucosa/sacarosa como patrn. Los
resultados se expresan como g de
equivalentes de glucosa/sacarosa en 100 mL.
INTRODUCCIN
El desarrollo de mtodos analticos es
esencial en el seguimiento y control del
proceso de fabricacin de azcar y alcohol.
En la Industria sucro-alcoholera es comn el
empleo del mtodo desarrollado por Eynon
y Lane para la determinacin de azcares
reductores en mieles y caldos de
fermentacin de destileras(1,2), siendo ste
el aceptado por las normas cubanas y el
recomendado por la Comisin Internacional
para los Mtodos Uniformes de Anlisis de
Azcar (ICUMSA en Ingls) (3,4). El mtodo
de Eynon-Lane tiene como principal
inconveniente el ser un mtodo volumtrico
donde el punto final de la valoracin se
detecta por cambio de color, adems es un
mtodo poco productivo. Sin embargo, ha
demostrado ser exacto y preciso en la
determinacin de azcares reductores en
mieles y baticiones de mieles (2,5). Sumner y
colaboradores desarrollaron otro mtodo
utilizando el cido 3,5 dinitrosaliclico (DNS)
para calcular la concentracin de azcares
reductores en distintos materiales. El
procedimiento se basa en una reaccin
redox que ocurre entre el DNS y los azcares
reductores presentes en la muestra
(6,7,8,9). Este mtodo ha sufrido varias
modificaciones a travs de los aos para
adecuarse al anlisis de diferentes
materiales y su principal ventaja radica en su
alta sensibilidad y productividad debido a
que es un mtodo espectrofotomtrico
(10,11). El mtodo del DNS no es
recomendable utilizarlo para la
determinacin de azcares reductores en
muestras intensamente coloreadas como
mieles y caldos de fermentacin que la
contengan. Estudios de Otero y
colaboradores muestran dispersin en la
determinacin de azcares reductores en
mieles por el mtodo del DNS con la
modificacin de Miller (12). En la actualidad,
el programa alcoholero cubano y en especial
la produccin de alcohol a partir de jugos
mezclados de caa de azcar necesita del
desarrollo de nuevos procedimientos
analticos: precisos, de elevada
productividad y de poca manipulacin
tcnica que permitan llevar con exactitud la
contabilidad y eficiencia global del proceso.
En el presente trabajo se desarrolla un
procedimiento para la determinacin de
azcares reductores totales en jugos
mezclados de caa de azcar por el mtodo
del cido 3,5 dinitrosaliclico. Adems, se
hace un anlisis comparativo con el mtodo
de Eynon y Lane.
MARCO TERICO
Summer y colaboradores desarrollaron un
mtodo utilizando el cido 3,5
dinitrosaliclico (DNS) para calcular la
concentracin de azucares reductores en
distintos materiales. El procedimiento se
basa en una reaccin redox que ocurre entre
el DNS y los azucares reductores presentes
en la muestra. Este mtodo ha sufrido varias
modificaciones a travs de los aos para
adecuarse al anlisis de diferentes
materiales y su principal ventaja radica en su
alta sensibilidad y productividad debido a
que es un mtodo espectrofotomtrico.
En la actualidad, en especial la produccin
de alcohol a partir de jugos mezclados de
caa de azcar necesita del desarrollo de
PROCEDIMIENTO
nuevos procedimientos analticos: precisos,
de elevada productividad y de poca Primera parte. Preparacin de la curva de
manipulacin tcnica que permitan llevar calibracin
con exactitud la contabilidad y eficiencia
1.- Se prepara una gradilla con 7 tubos de
global del proceso.
ensaye de 13 x 100 mm para preparar 5 ml de
En este trabajo se desarrollara un
procedimiento para la determinacin de las siguientes concentraciones: Blanco. 0.5,
azucares reductores totales en jugos 0.7, 0.9, 1.1, 1.3 y 1.5 g/L de glucosa a partir de
mezclados de caa de azcar por el mtodo
la solucin de STD con 1.5 g/L de este azcar,
del cido 3,5 dinitrosaliclico.
rotulndolos adecuadamente y
procediendo de la siguiente manera.
MATERIAL Y REACTIVOS

Tubo Blanco 0.5 0.7 0.9 1.1 1.3 1.5

MATERIAL REACTIVOS
Probeta graduada Primera sesin
de 50 mL mL de 0.0 1.67 2.33 3 3.67 4.3 5
Agitador de vidrio Sustrato de
STD
almidn 8 mg/mL
glucosa
8 tubos de ensaye Solucin (1:80)
1.5 g/L.
de 13 x 100 mm de amilasa salival
Gradilla Solucin ml de 5 3.33 2.67 2 1.33 0.7 0
reguladora de agua.
fosfatos 0.02 M
pH = 7
Tripi metlico Reactivos de
Fehling A y
Fehling B
Mechero bunsen
Tela de alambre Segunda sesin:
con asbesto
Vaso de pp de 400 Sustrato de
mL almidn 8 mg/mL
Cuba Solucin (1:80)
hidroneumtica de amilasa salival
Soluciones
reguladoras de
pH = 3, 4, 5, 6, 7,
8, 9 y 10
Traer Hielo en la Solucin de
primera sesin NaOH 2N
Reactivos de
Fehling A y
Fehling B
 2.- Agitar los tubos cuidadosamente y
preparar en otra gradilla otros 7 tubos de
ensaye de 13 x 100 mm, rotulndolos
adecuadamente de acuerdo a las
instrucciones siguientes:

Tubo Blan 0. 0. 0. 1. 1. 1.
co 5 7 9 1 3 5
mL de 0.5 0. 0. 0. 0. 0. 0.
los 5 5 5 5 5 5
tubos
anterio
res.
ml de 0.5 0. 0. 0. 0. 0. 0.
reactiv 5 5 5 5 5 5
o DNS.
Agitar cuidadosamente.
Colocar 5 minutos en un vaso de pp de
600 ml con 200 ml de agua a 100C.
Enfriar a temperatura ambiente.
Agregar a cada tubo 5 ml de agua
destilada.
Agitar cuidadosamente.
Leer la absorbancia de cada tubo a 540
nm en un espectrofotmetro UV-visible.
Llevar a cero el instrumento con el
blanco de reactivos.
Trazar la grfica de la curva de
calibracin: concentracin (Eje x) vs
absorbancia (Eje y).

Segunda parte: Medicin de la muestra

problema (jugo de caa)

1.- medir 10 ml de jugo de caa de azcar,

colocando en un tubo de ensaye de 18 x 150
mm y centrifugando 10 minutos a 10 000
rpm. Filtrar el sobrenadante en un papel
filtro de filtrado rpido.
2.- Colocar con una pipeta volumtrica 0.5 8.- Agitar perfectamente estos tubos y
ml. Del jugo filtrado en tubo de ensaye de 18 preparar otra gradilla con 5 tubos de ensaye
x 150 mm, agregarle 2.5 ml de HCl al 50 %. de 13 x 100 mm y numerarlos
adecuadamente, de acuerdo a las siguientes
3.- Colocar el tubo en un vaso de 600 ml que
instrucciones:
tenga aproximadamente 100 ml de agua de
la llave a una temperatura de 65 C y Tubo Blanco 25% 50% 75% 100%
mantenerlo ah durante 10 minutos en esas mL de los 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
tubos
condiciones. anteriores.

4.- Se deja enfriar a temperatura ambiente y ml de 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
reactivo
se vaca a vaso de pp de 100 ml procurando DNS.
enjuagar con 5 ml de agua destilada; agregar
Agitar cuidadosamente.
otros 15 ml de agua destilada al vaso. Colocar 5 minutos en un vaso de pp de 600
Neutralizar la solucin con NaOH al 10 % con ml con 200 ml de agua a 100C.
Enfriar a temperatura ambiente.
la ayuda de un potencimetro. Agregar a cada tubo 5 ml de agua destilada.
Agitar cuidadosamente.
5.- vaciar la solucin cuantitativamente a un Leer la absorbancia de cada tubo a 540 nm
matraz volumtrico de 50 ml. Aforar con en un espectrofotmetro UV-visible. Llevar
a cero el instrumento con el blanco de
agua destilada y rotulando como jugo de reactivos.
caa de azcar (JCI). Determinar la concentracin de glucosa en
cada tubo, utilizando la curva de calibracin
6.- Preparar 5 tubos de ensaye de 18 x 150 elaborada en la sesin anterior.

mm rotulados de la siguiente: blanco, 25%,

Manejo de residuos
50%, 75%, 100%. El contenido de los tubos puede desecharse
en el drenaje
7.- Preparar las diluciones de la manera
siguiente: RESULTADOS
Resultados:
Tubo Blanco 25% 50% 75% 100%
absorbancia Concentracin
De muestras
mL de 0 2.5 5 7.5 10
0 0
solucin
JCI. 666 0.5
ml de 10 7.5 5 2.5 0 662 0.7
agua. 874 0.9
1147 1.1
 1280 1.3 CONCLUSIN
1305 1.5 Por medio de esta prctica, se aprendi un
mtodo para la identificacin de azucares
reductores a partir de una muestra de jugo
por el mtodo del cido 3,5 dinitrosaliclico.
linealidad abs vs
Y teniendo como base a qu longitudes de
concentracin onda podra realizarse el ensayo DNS de
1600 azcares reductores siendo esta de (540 nm)
y = 201x + 43.714 parece apropiada y compara concentraciones
1400 R = 0.8891
de las muestras a analizar a partir de una
1280 1305 curva con respecto a la ecuacin de la recta.
1200
1147

1000
874
800
REFERENCIAS
666 662
600 http://www.redalyc.org/pdf/2231/223120664
006.pdf
400

200

0 0 0.5 0.7 0.9 1.1 1.3 1.5

1 2 3 4 5 6 7

A lo visto, se cumple un aumento de la

absorbancia con el aumento de la
concentracin, solo hay una pequea
variabilidad en la muestra nmero 2 con
concentracin 0.7 ya que hay un descenso
en la absorbancia y aumento en la
concentracin lo que afecta a la linealidad.

La ecuacin de la recta obtenida fue la

siguiente:

y=201x + 43.714

La linealidad de la prueba
espectrofotomtrica fue la siguiente:
R=0.8891 de linealidad,