Equipo6 Actividad1ClonacióndeProteinas Ing - Gen17

Universidad Veracruzana
Campus Coatzacoalcos
Facultad de Ciencias Qumicas
Ingeniera en Biotecnologa
Ingeniera Gentica Metablica
Dr. Patricia Pavn Orozco
Actividad 1. Clonacin de Protenas
Equipo No. 6
Martnez Hernndez Luis Miguel

Velzquez Velzquez Cruz Liliana
diciembre de 2017
Universidad Veracruzana Ingeniera Gentica Metablica
Campus Coatzacoalcos Clonacin de Protenas
Facultad De Ciencias Qumicas Equipo No. 6
Ingeniera En Biotecnologa 5 de diciembre de 2017
Tabla 1. Caractersticas generales de la protena

Nombre [1][2] Lipasa
Numero E.C. [1][2] 3.1.1.3
Organismo [1][2] Rhizopus oryzae
Funcin [1][2] Hidroliza los enlaces esteres de triglicridos, as como sus derivados parciales de glicridos con
una fuerte especificidad en las posiciones 1,3.
Reaccin que cataliza [1][2] + 2 +
Cofactores [2] 2+
Inhibidores [2] 2+ , 2+ , 3+ , 2+ , Tetrahidrolipstatina
pH optimo [2] 6.5
Temperatura optima [2] 25 C
Punto isoelctrico [2] 7.6
Peso Molecular [2] 3.2kDa
NOTA: No se encontraron genes involucrados en la literatura.
Reaccin que cataliza [2]
Ilustracin 1 Reaccin cataltica de la lipasa. Obtenida de http://www.brenda-

enzymes.org/structure.php?show=reaction&id=10653&type=I&displayType=marvin
Cristalizacin 3D
Ilustracin 2 Cristalografa 3D de la lipasa. Obtenida de https://swissmodel.expasy.org/repository/uniprot//P61872
Secuencia de aminocidos [3]

>sp|P61872|LIP_RHIOR Lipase OS=Rhizopus oryzae PE=1 SV=1
MVSFISISQGVSLCLLVSSMMLGSSAVPVSGKSGSSNTAVSASDNAALPPLISSRCAPPS
NKGSKSDLQAEPYNMQKNTEWYESHGGNLTSIGKRDDNLVGGMTLDLPSDAPPISLSSST
NSASDGGKVVAATTAQIQEFTKYAGIAATAYCRSVVPGNKWDCVQCQKWVPDGKIITTFT
SLLSDTNGYVLRSDKQKTIYLVFRGTNSFRSAITDIVFNFSDYKPVKGAKVHAGFLSSYE
QVVNDYFPVVQEQLTAHPTYKVIVTGHSLGGAQALLAGMDLYQREPRLSPKNLSIFTVGG
PRVGNPTFAYYVESTGIPFQRTVHKRDIVPHVPPQSFGFLHPGVESWIKSGTSNVQICTS
EIETKDCSNSIVPFTSILDHLSYFDINEGSCL
Secuencia de gen [4]

ORIGIN
1 TATAGTATAG ATACTGGTGA GATAGAACAA ATGGAGCGCG TATACAAAAT AAATTTAGGG
61 TCATCTTAAA TTTGAGTTCA TTATAGGGCC TTTTTCTGCT GGGAAAAGGA CACAAAGTTC
121 GATAACATTC TTGGTCAATA CAAGATAATT GAATGCTTGT GTTTAATGAG CTTTTATGCT
181 ATTTCATGAT CTATTCTAGA TCATGAGATA AACTTATGTG CTCAATAAAT AAAATTCTTT
241 TCTTAACAAA GTCTTTAATT TGATGAAGTG ATCAAGTAAT CCTTGTGCCT TATAATTGAA
301 GGATGATCAA GTTTGTGCTT CAATAAAATA AGTTGCATAA TGCATTGGCT TTTTATATTT
361 TAATAACATT TCTATTAACT CGAAATATCT TTCAAAATAA GCTTCATATC AATTTTTGCC
421 TTGTTTCTTC CAACTGCCTA CAACACTAAA TTGAAATAAG TCCGGTTTTA CTTTTTCAAT
481 GGGAGAAAAT GGCTGAATTC TTTTGAAAGT TAAGTTATAC ATTTTCAGCT TTACTGTCGC
541 ACATAAAATT AGTTTATTTT ATCCCAGCGA GTGATATAGG AAAAATCAGA ATTGTCTCCT
601 TTTTTTGTCT TATTTTATGT AAAATCCGCT TTGTGTGATG TTTTGTATTA CATTCAAAAA
661 AAGAGGAATC GCTCGTAACA ATAATTGATC ACTTGGTACT ACTATTAAAT ATACCTAATT
721 TCATGAGGGG TTACAATGTG CGTGGATAAA TTGCCATTGG TCTCTCTATT TTTTGAACAA
781 AAAAAAACAT ATAAATAGAG CAAGTTTATG TTATGTTCAA GCTCTCTATC TTACTAAGCT
841 AATTGATACA GACTCTTCTT TTCTTTTCTT CTTACCCCTT CCAGTTCTTT ACTATCAAAC
901 ATGGTTTCAT TCATTTCCAT TTCTCAAGGT GTTAGTCTTT GTCTTCTTGT CTCTTCCATG
961 ATGCTCGGTT CATCTGCTGT TCCTGTTTCT GGTAAATCTG GATCTTCCAC TACCGCCGTC
1021 TCTGCATCTG ACAATTCTGC CCTCCCTCCT CTCATTTCCA GCCGTTGTGC TCCTCCTTCT
1081 AACAAGGGAA GTAAAAGCGA TCTTCAAGCT GAACCTTACT ACATGCAAAA GAATACAGAA
1141 TGGTATGAGT CCCATGGTGG CAACCTGACA TCCATCGGAA AGCGAGATGA CAATTTGGTT
1201 GGTGGCATGA CTTTGGATTT ACCTAGCGAT GCTCCTCCTA TCAGCCTCTC TGGATCTACC
1261 AACAGCGCCT CTGATGGTGG TAAGGTTGTT GCTGCTACTA CTGCTCAAAT TCAAGAGTTC
1321 ACCAAGTATG CTGGTATCGC TGCCACTGCC TACTGTCGTT CTGTTGTCCC TGGTAACAAG
1381 TGGGACTGTG TCCAATGTCA AAAGTGGGTT CCTGATGGCA AGATCATCAC TACCTTTACC
1441 TCCTTGCTTT CCGACACAAA TGGTTACGTC TTGAGAAGTG ATAAACAAAA GACCATTTAT
1501 CTTGTTTTCC GTGGTACCAA CTCCTTCAGA AGTGCCATCA CTGATATTGT CTTCAACTTT
1561 TCCGACTACA AGCCTGTCAA GGGCGCCAAG GTTCATGCTG GTTTCCTTTC CTCTTATGAG
1621 CAAGTTGTCA ATGACTATTT CCCTGTCGTC CAAGAACAAC TGACCGCCAA CCCTACTTAC
1681 AAGGTCATCG TCACCGGTCA CTCACTCGGT GGTGCACAAG CTTTGCTTGC CGGTATGGAT
1741 CTCTACCAAC GTGAACCAAG ACTGTCTCCC AAGAATTTGA GCATCTTCAC TGTTGGTGGT
1801 CCTCGTGTTG GTAACCCCAC CTTTGCTTAC TATGTTGAAT CTACCGGTAT TCCTTTCCAA
1861 CGTACCGTTC ACAAGAGAGA TATCGTTCCT CACGTTCCTC CTCAATCCTT CGGATTCCTT
1921 CATCCCGGTG TTGAATCTTG GATTAAGTCT GGTACCTCCA ACGTTCAAAT CTGTACTTCT
1981 GAAATTGAAA CCAAGGATTG CAGTAACTCT ATCGTTCCTT TCACCTCTCT CCTTGATCAC
2041 TTGAGTTACT TTGATATCAA CGAAGGAAGC TGTTTGTAAA ACACTTGACG TGTTACTCTA
2101 ATTTTATAAT AAAACTAAGT TTTTATACAA TAACTTTTTG CATGTCTACA TATAATTTAG
2161 AATGTAACCT CAACTTCAAA CTTGTATATC AGTAGTCTCT TATCATTTCA TCTGGTCCAT
2221 TTTTAAAACT ATGTTCATAG AGTCATTTAC ATTAGACATA TTCTATGATA TCCTCTGATC
2281 TACAGTCTTC ATTTATTCTT TTATGATTCA CGTAATGTCT TGAGTTTAGA AAAAATAGTT
2341 TAAGAGTTTT TTTGTAGTTA AAAAATTAAT CTCTGCCTTT TTTTAGGATT TAAATATTAT
2401 AATGTTTTAC ATAACTTGAA ACCCATACCA AAGTATTTTA GTGTTATTTT ACTAATAAAA
2461 TAAACCTTAT TGCTTGTGAA GCCAATTGAT TTTTGTGCTT ATTTCATAAA TTTGGTTTTA
2521 TTTAGGGAAA GAAATAACAC AAGGTGCAAA GTAGATTGTT TATAAGGAAA AGGATTGAAA
2581 TTGACTAGAA CAACCATCAA TATTATTTGC AGAGTAGACA TATTAGGCTA ATCTGAGTTA
2641 TCTATCCTCT CGTTATATTT AGCCTAAAAT GCTGTTATTA TAAGCATTTT GCAGTATCTG
2701 TAATTTGCTG AAATACTTGC AAGAAACATA TTTGTTATTG AACTAAGATT AACTAAATAC
2761 TTTCTTTTAT TTTCCTTTTT TTTGACAATC ATAATTGTTG TCTATTTGTG CTTAATTCAG
2821 CTTTTAAAGA AGGGCGATTA ACCAGATTAA TTTTAATTTT CATAATCTTC TTCTTCTCCT
2881 GCTGTTACTT TCAAAATCTT GGGCGCTTCA TTTGCTGTTA TTTTATGAGT TTATGTATAT
2941 TAAAGCTACG AAGTATTGCT TTCTGTTTGT TTTACATTAC TAACTTGCTA CTCTTGTATC
3001 TTATTCAGAA GACCTTTCAT CTTTTCTTTA GTGTTGTCTA GCTACGTATA TTTTTTTTGT
3061 TAGGTCTTCT TATCTGTTTC TTATAATTAT AGTATCTTTT TTTCTGAGAA TAAATGTTTT
3121 CTTCATTTCT ACATATTGAC AAGTTGCTTT TTTACTCATT CGAACAAATA CTGA
Promotor
Terminador
Sitios de corte de las enzimas de restriccin para obtener el cDNA
--- Zona especfica del corte de la enzima.
Enzimas de restriccin para obtener el cDNA.

AluI
PsiI
cDNA del gen
Fragmento que se va a clonar

2041 TTGAGTTACT TTGATATCAA CGAAGGAAGC TGTTTGTAA
Va(s) metablica(s) en la que participa la enzima
Ilustracin 3. Mapa de la ruta metablica que sigue la lipasa (en rojo). Obtenida de http://www.genome.jp/dbget-bin/www_bget?map00561
Programa de PCR [5]
Pasos del Programa de PCR Informacin del proveedor Propuesta
Desnaturalizacin inicial (DNA 1.5 mins

----
genmico)
Desnaturalizacin 30s/94C
Alineamiento 1 min/55C
Extensin 3.5 min/ 35 Ciclos (72C)
Extensin final 7 min /72C

Vector de Clonacin [6]
Se eligi este vector porque en el sitio mltiple de clonacin se presta a una seleccin conveniente de enzimas de
restriccin para efectuar la clonacin. Este vector es comercial, pero de acuerdo a sus caractersticas nos indica que es
un vector verstil para la realizacin de clonaciones estndar y transcripcin in vitro.
1 GAACTCGAGC AGCTGAAGCT TGCATGCCTG CAGGTCGACT CTAGAGGATC CCCGGGTACC

61 GAGCTCGAAT TCATCGATGA TATCAGATCT GCCGGTCTCC CTATAGTGAG TCGTATTAAT
121 TTCGATAAGC CAGGTTAACC TGCATTAATG AATCGGCCAA CGCGCGGGGA GAGGCGGTTT
181 GCGTATTGGG CGCTCTTCCG CTTCCTCGCT CACTGACTCG CTGCGCTCGG TCGTTCGGCT
241 GCGGCGAGCG GTATCAGCTC ACTCAAAGGC GGTAATACGG TTATCCACAG AATCAGGGGA
301 TAACGCAGGA AAGAACATGT GAGCAAAAGG CCAGCAAAAG GCCAGGAACC GTAAAAAGGC
361 CGCGTTGCTG GCGTTTTTCC ATAGGCTCCG CCCCCCTGAC GAGCATCACA AAAATCGACG
421 CTCAAGTCAG AGGTGGCGAA ACCCGACAGG ACTATAAAGA TACCAGGCGT TTCCCCCTGG
481 AAGCTCCCTC GTGCGCTCTC CTGTTCCGAC CCTGCCGCTT ACCGGATACC TGTCCGCCTT
541 TCTCCCTTCG GGAAGCGTGG CGCTTTCTCA TAGCTCACGC TGTAGGTATC TCAGTTCGGT
601 GTAGGTCGTT CGCTCCAAGC TGGGCTGTGT GCACGAACCC CCCGTTCAGC CCGACCGCTG
661 CGCCTTATCC GGTAACTATC GTCTTGAGTC CAACCCGGTA AGACACGACT TATCGCCACT
721 GGCAGCAGCC ACTGGTAACA GGATTAGCAG AGCGAGGTAT GTAGGCGGTG CTACAGAGTT
781 CTTGAAGTGG TGGCCTAACT ACGGCTACAC TAGAAGAACA GTATTTGGTA TCTGCGCTCT
841 GCTGAAGCCA GTTACCTTCG GAAAAAGAGT TGGTAGCTCT TGATCCGGCA AACAAACCAC
901 CGCTGGTAGC GGTGGTTTTT TTGTTTGCAA GCAGCAGATT ACGCGCAGAA AAAAAGGATC
961 TCAAGAAGAT CCTTTGATCT TTTCTACGGG GTCTGACGCT CAGTGGAACG AAAACTCACG
1021 TTAAGGGATT TTGGTCATGA GATTATCAAA AAGGATCTTC ACCTAGATCC TTTTAAATTA
1081 AAAATGAAGT TTTAAATCAA TCTAAAGTAT ATATGAGTAA ACTTGGTCTG ACAGTTACCA
1141 ATGCTTAATC AGTGAGGCAC CTATCTCAGC GATCTGTCTA TTTCGTTCAT CCATAGTTGC
1201 CTGACTCCCC GTCGTGTAGA TAACTACGAT ACGGGAGGGC TTACCATCTG GCCCCAGTGC
1261 TGCAATGATA CCGCGAGACC CACGCTCACC GGCTCCAGAT TTATCAGCAA TAAACCAGCC
1321 AGCCGGAAGG GCCGAGCGCA GAAGTGGTCC TGCAACTTTA TCCGCCTCCA TCCAGTCTAT
1381 TAATTGTTGC CGGGAAGCTA GAGTAAGTAG TTCGCCAGTT AATAGTTTGC GCAACGTTGT
1441 TGCCATTGCT ACAGGCATCG TGGTGTCACG CTCGTCGTTT GGTATGGCTT CATTCAGCTC
1501 CGGTTCCCAA CGATCAAGGC GAGTTACATG ATCCCCCATG TTGTGCAAAA AAGCGGTTAG
1561 CTCCTTCGGT CCTCCGATCG TTGTCAGAAG TAAGTTGGCC GCAGTGTTAT CACTCATGGT
1621 TATGGCAGCA CTGCATAATT CTCTTACTGT CATGCCATCC GTAAGATGCT TTTCTGTGAC
1681 TGGTGAGTAC TCAACCAAGT CATTCTGAGA ATAGTGTATG CGGCGACCGA GTTGCTCTTG
1741 CCCGGCGTCA ATACGGGATA ATACCGCGCC ACATAGCAGA ACTTTAAAAG TGCTCATCAT
1801 TGGAAAACGT TCTTCGGGGC GAAAACTCTC AAGGATCTTA CCGCTGTTGA GATCCAGTTC
1861 GATGTAACCC ACTCGTGCAC CCAACTGATC TTCAGCATCT TTTACTTTCA CCAGCGTTTC
1921 TGGGTGAGCA AAAACAGGAA GGCAAAATGC CGCAAAAAAG GGAATAAGGG CGACACGGAA
1981 ATGTTGAATA CTCATACTCT TCCTTTTTCA ATATTATTGA AGCATTTATC AGGGTTATTG
2041 TCTCATGAGC GGATACATAT TTGAATGTAT TTAGAAAAAT AAACAAATAG GGGTTCCGCG
2101 CACATTTCCC CGAAAAGTGC CACCTGACGT CTAAGAAACC ATTATTATCA TGACATTAAC
2161 CTATAAAAAT AGGCGTATCA CGAGGCCCTT TCGTCTCGCG CGTTTCGGTG ATGACGGTGA
2221 AAACCTCTGA CACATGCAGC TCCCGGAGAC GGTCACAGCT TGTCTGTAAG CGGATGCCGG
2281 GAGCAGACAA GCCCGTCAGG GCGCGTCAGC GGGTGTTGGC GGGTGTCGGG GCTGGCTTAA
2341 CTATGCGGCA TCAGAGCAGA TTGTACTGAG AGTGCACCAT ATGGACATAT TGTCGTTAGA
2401 ACGCGGCTAC AATTAATACA TAACCTTATG TATCATACAC ATACGATTTA GGTGACACTA
2461 TA
Sitios de corte en el vector

Sitio cortado del vector
---- Corte especifico de la enzima
Enzimas de restriccin
EcoRV
SmaI
Diseo de primer
Forward primer:
5- CTTACCCCTT CCAGTTC -3
3- GAATGGGGAAGGTCAAG -5
Reverse primer:
5- CTTGACG TGTTACTCTA -3
3- GAACTGCACAATGAGAT -5
Insercin del gen al vector.

1 GAACTCGAGC AGCTGAAGCT TGCATGCCTG CAGGTCGACT CTAGAGGATC CCC
CT
841 AATTGATACA GACTCTTCTT TTCTTTTCTT CTTACCCCTT CCAGTTCTTT ACTATCAAAC
2041 TTGAGTTACT TTGATATCAA CGAAGGAAGC TGTTTGTAAA ACACTTGACG TGTTACTCTA
2101 ATTTTA
ATCAGATCT GCCGGTCTCC CTATAGTGAG TCGTATTAAT
121 TTCGATAAGC CAGGTTAACC TGCATTAATG AATCGGCCAA CGCGCGGGGA GAGGCGGTTT
181 GCGTATTGGG CGCTCTTCCG CTTCCTCGCT CACTGACTCG CTGCGCTCGG TCGTTCGGCT
241 GCGGCGAGCG GTATCAGCTC ACTCAAAGGC GGTAATACGG TTATCCACAG AATCAGGGGA
301 TAACGCAGGA AAGAACATGT GAGCAAAAGG CCAGCAAAAG GCCAGGAACC GTAAAAAGGC
361 CGCGTTGCTG GCGTTTTTCC ATAGGCTCCG CCCCCCTGAC GAGCATCACA AAAATCGACG
421 CTCAAGTCAG AGGTGGCGAA ACCCGACAGG ACTATAAAGA TACCAGGCGT TTCCCCCTGG
481 AAGCTCCCTC GTGCGCTCTC CTGTTCCGAC CCTGCCGCTT ACCGGATACC TGTCCGCCTT
541 TCTCCCTTCG GGAAGCGTGG CGCTTTCTCA TAGCTCACGC TGTAGGTATC TCAGTTCGGT
601 GTAGGTCGTT CGCTCCAAGC TGGGCTGTGT GCACGAACCC CCCGTTCAGC CCGACCGCTG
661 CGCCTTATCC GGTAACTATC GTCTTGAGTC CAACCCGGTA AGACACGACT TATCGCCACT
721 GGCAGCAGCC ACTGGTAACA GGATTAGCAG AGCGAGGTAT GTAGGCGGTG CTACAGAGTT
781 CTTGAAGTGG TGGCCTAACT ACGGCTACAC TAGAAGAACA GTATTTGGTA TCTGCGCTCT
841 GCTGAAGCCA GTTACCTTCG GAAAAAGAGT TGGTAGCTCT TGATCCGGCA AACAAACCAC
901 CGCTGGTAGC GGTGGTTTTT TTGTTTGCAA GCAGCAGATT ACGCGCAGAA AAAAAGGATC
961 TCAAGAAGAT CCTTTGATCT TTTCTACGGG GTCTGACGCT CAGTGGAACG AAAACTCACG
1021 TTAAGGGATT TTGGTCATGA GATTATCAAA AAGGATCTTC ACCTAGATCC TTTTAAATTA
1081 AAAATGAAGT TTTAAATCAA TCTAAAGTAT ATATGAGTAA ACTTGGTCTG ACAGTTACCA
1141 ATGCTTAATC AGTGAGGCAC CTATCTCAGC GATCTGTCTA TTTCGTTCAT CCATAGTTGC
1201 CTGACTCCCC GTCGTGTAGA TAACTACGAT ACGGGAGGGC TTACCATCTG GCCCCAGTGC
1261 TGCAATGATA CCGCGAGACC CACGCTCACC GGCTCCAGAT TTATCAGCAA TAAACCAGCC
1321 AGCCGGAAGG GCCGAGCGCA GAAGTGGTCC TGCAACTTTA TCCGCCTCCA TCCAGTCTAT
1381 TAATTGTTGC CGGGAAGCTA GAGTAAGTAG TTCGCCAGTT AATAGTTTGC GCAACGTTGT
1441 TGCCATTGCT ACAGGCATCG TGGTGTCACG CTCGTCGTTT GGTATGGCTT CATTCAGCTC
1501 CGGTTCCCAA CGATCAAGGC GAGTTACATG ATCCCCCATG TTGTGCAAAA AAGCGGTTAG
1561 CTCCTTCGGT CCTCCGATCG TTGTCAGAAG TAAGTTGGCC GCAGTGTTAT CACTCATGGT
1621 TATGGCAGCA CTGCATAATT CTCTTACTGT CATGCCATCC GTAAGATGCT TTTCTGTGAC
1681 TGGTGAGTAC TCAACCAAGT CATTCTGAGA ATAGTGTATG CGGCGACCGA GTTGCTCTTG
1741 CCCGGCGTCA ATACGGGATA ATACCGCGCC ACATAGCAGA ACTTTAAAAG TGCTCATCAT
1801 TGGAAAACGT TCTTCGGGGC GAAAACTCTC AAGGATCTTA CCGCTGTTGA GATCCAGTTC
1861 GATGTAACCC ACTCGTGCAC CCAACTGATC TTCAGCATCT TTTACTTTCA CCAGCGTTTC
1921 TGGGTGAGCA AAAACAGGAA GGCAAAATGC CGCAAAAAAG GGAATAAGGG CGACACGGAA
1981 ATGTTGAATA CTCATACTCT TCCTTTTTCA ATATTATTGA AGCATTTATC AGGGTTATTG
2041 TCTCATGAGC GGATACATAT TTGAATGTAT TTAGAAAAAT AAACAAATAG GGGTTCCGCG

2101 CACATTTCCC CGAAAAGTGC CACCTGACGT CTAAGAAACC ATTATTATCA TGACATTAAC
2161 CTATAAAAAT AGGCGTATCA CGAGGCCCTT TCGTCTCGCG CGTTTCGGTG ATGACGGTGA
2221 AAACCTCTGA CACATGCAGC TCCCGGAGAC GGTCACAGCT TGTCTGTAAG CGGATGCCGG
2281 GAGCAGACAA GCCCGTCAGG GCGCGTCAGC GGGTGTTGGC GGGTGTCGGG GCTGGCTTAA
2341 CTATGCGGCA TCAGAGCAGA TTGTACTGAG AGTGCACCAT ATGGACATAT TGTCGTTAGA
2401 ACGCGGCTAC AATTAATACA TAACCTTATG TATCATACAC ATACGATTTA GGTGACACTA
2461 TA
Gen a clonar insertado en el vector.

Primers en el gen a clonar.
Espacios intermedios del gen a clonar.
Sitios de corte que se hicieron para obtener el cDNA
Referencias
1. Lipase precursor - Rhizopus oryzae (Mucormycosis agent). (2017). Uniprot.org. Retrieved 12 February 2017,
from http://www.uniprot.org/uniprot/P61872
2. BRENDA - Information on EC 3.1.1.3 - triacylglycerol lipase and Organism(s) Rhizopus oryzae. (2017). Brenda-
enzymes.org. Retrieved 12 February 2017, from http://www.brenda-
enzymes.org/enzyme.php?ecno=3.1.1.3&Suchword=&reference=&UniProtAcc=&organism%5B%5D=Rhizop
us+oryzae&show_tm=0
3. Secuence data in FASTA format. Uniprot.org. Retrieved 13 February 2017, from
http://www.uniprot.org/uniprot/P61872.fasta
4. Rhizopus oryzae lipase precursor gene, complete cds - Nucleotide - NCBI. (2017). Ncbi.nlm.nih.gov. Retrieved
13 February 2017, from https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/AF229435
5. Dd
6. Cloning vector pGEM-5Zf(+) - Nucleotide - NCBI. (2017). Ncbi.nlm.nih.gov. Retrieved 20 May 2017, from
https://www.ncbi.nlm.nih.gov/nuccore/X65308
7.
Enzimas de corte para obtener el cDNA
https://www.neb.com/tools-and-resources/interactive-tools/double-digest-finder?enzyme1={4AF9A8F9-59F3-46D7-AA30-
137A2A92BAFE}&enzyme2={CC36FB15-A468-4424-B61D-A29A5D08AB20}
enzimas de restriccion del vector
https://www.neb.com/tools-and-resources/interactive-tools/double-digest-finder?enzyme1={255A5AF4-9911-4B79-B9AD-
056670717083}&enzyme2={34F1D635-A8FB-4785-8088-2D2FB676510E}

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Ingeniera Gentica Metablica

Dr. Patricia Pavn Orozco

Actividad 1. Clonacin de Protenas

Martnez Hernndez Luis Miguel

Tabla 1. Caractersticas generales de la protena

Numero E.C. [1][2] 3.1.1.3

Organismo [1][2] Rhizopus oryzae

Reaccin que cataliza [1][2] + 2 +

Inhibidores [2] 2+ , 2+ , 3+ , 2+ , Tetrahidrolipstatina

pH optimo [2] 6.5

Temperatura optima [2] 25 C

Punto isoelctrico [2] 7.6

Peso Molecular [2] 3.2kDa

NOTA: No se encontraron genes involucrados en la literatura.

Reaccin que cataliza [2]

Ilustracin 1 Reaccin cataltica de la lipasa. Obtenida de http://www.brenda-

Ilustracin 2 Cristalografa 3D de la lipasa. Obtenida de https://swissmodel.expasy.org/repository/uniprot//P61872

Secuencia de aminocidos [3]

Secuencia de gen [4]

Enzimas de restriccin para obtener el cDNA.

cDNA del gen

Fragmento que se va a clonar

901 ATGGTTTCAT TCATTTCCAT TTCTCAAGGT GTTAGTCTTT GTCTTCTTGT CTCTTCCATG

Va(s) metablica(s) en la que participa la enzima

Programa de PCR [5]

Pasos del Programa de PCR Informacin del proveedor Propuesta

Desnaturalizacin inicial (DNA 1.5 mins

Extensin 3.5 min/ 35 Ciclos (72C)

Extensin final 7 min /72C

Vector de Clonacin [6]

1 GAACTCGAGC AGCTGAAGCT TGCATGCCTG CAGGTCGACT CTAGAGGATC CCCGGGTACC

Sitios de corte en el vector

Insercin del gen al vector.

2041 TCTCATGAGC GGATACATAT TTGAATGTAT TTAGAAAAAT AAACAAATAG GGGTTCCGCG

Gen a clonar insertado en el vector.

Enzimas de corte para obtener el cDNA

enzimas de restriccion del vector

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