INSTITUTO TECNOLOGICO SUPERIOR DE CALKINI EN

EL ESTADO DE CAMPECHE

ENZIMOLOGIA BASICA.

Profesor:

Dr. Luis Alfonso Can Herrera.

Alumno:

Andy Manuel Escalante Domnguez

Ingeniera Bioqumica

Semestre:

Investigar tpicos acerca de la cintica enzimtica.

15/09/17
 RESUMEN.
La cintica enzimtica es el campo de la bioqumica que se encarga de la medicin
cuantitativa de los ndices de reacciones catalizadas por enzimas, y del estudio
sistemtico de factores que afectan estos ndices. El anlisis cintico puede revelar
el nmero y orden de los pasos individuales mediante los cuales las enzimas
transforman sustratos en productos.

Junto con la mutagnesis dirigida hacia sitio y otras tcnicas que sondean la
estructura de protenas, los anlisis cinticos revelan detalles del mecanismo
cataltico de una enzima dada.

Un conjunto completo y balanceado de actividades enzimticas tiene importancia

fundamental para el mantenimiento de la homeostasis. De este modo, una
comprensin de la cintica enzimtica es importante para entender de qu modo
los estados de estrs fisiolgico, como la anoxia, la acidosis o alcalosis metablica,
las toxinas y los agentes farmacolgicos afectan ese equilibrio. La participacin de
las enzimas en casi todos los procesos fisiolgicos hace de ellas los mejores
objetivos para frmacos que curan o aminoran enfermedad en seres humanos.

La cintica enzimtica aplicada representa el principal recurso mediante el cual los

cientficos identifican y caracterizan agentes teraputicos que inhiben de manera
selectiva los ndices de procesos catalizados por enzima especficos. De este modo,
la cintica enzimtica desempea una funcin crucial en el descubrimiento de
frmacos y en la farmacodinmica comparativa, as como en la dilucidacin del
modo de accin de los frmacos.
 ABSRACT.
Enzymatic kinetics is the field of biochemistry that is responsible for the quantitative
measurement of the rates of reactions catalyzed by enzymes, and the systematic
study of factors that affect these indices. Kinetic analysis can reveal the number and
order of individual steps by which enzymes transform substrates into products.

Along with site-directed mutagenesis and other techniques that probe protein
structure, kinetic analyzes reveal details of the catalytic mechanism of a given
enzyme.

A complete and balanced set of enzymatic activities is of fundamental importance

for the maintenance of homeostasis. Thus, an understanding of enzyme kinetics is
important in understanding how physiological stress states, such as anoxia, acidosis
or metabolic alkalosis, toxins, and pharmacological agents affect that balance. The
involvement of enzymes in almost all physiological processes makes them the best
targets for drugs that cure or ameliorate disease in humans.

Applied enzyme kinetics represents the main resource by which scientists identify
and characterize therapeutic agents that selectively inhibit specific enzyme-
catalyzed process indices. Thus, enzymatic kinetics play a crucial role in drug
discovery and comparative pharmacodynamics, as well as elucidation of the mode
of action of the drugs.
 INTRODUCCION.
El trmino cintica enzimtica implica el estudio de la velocidad de una reaccin
catalizada por una enzima y los efectos que pueden tener factores como los
inhibidores. Uno de los principales estudios que se realizan en una enzima es medir
el efecto en la velocidad de la reaccin cuando se modifican las concentraciones
del sustrato y se mantienen constantes la concentracin de enzima, el pH, la fuerza
inica del medio, la temperatura, entre otros.

Se evala la influencia de estos factores en la reaccin catalizada por enzimas con

la finalidad de determinar los intermediarios en una reaccin y el papel que juegan
en la reaccin enzimtica, es decir, para predecir mecanismos de reaccin. Es
esencial entender estos mecanismos para desarrollar nuevas herramientas
moleculares, por ejemplo, para combatir enfermedades en las que se conoce a la
enzima que la produce. Tambin es usual medir la actividad enzimtica con
diferentes sustratos para entender su especificidad o bien, medir la actividad de la
enzima de diferentes tejidos u organismos para entender cmo las diferencias en
actividad estn relacionadas con la funcin y/o la fisiologa del organismo del que
proceden.
 ANTECEDENTES.
Los estudios sistemticos del efecto de la concentracin inical del sustrato sobre la
actividad enzimtica comenzaron a realizarse a finales del siglo XIX. Ya en 1882 se
introdujo el concepto del complejo enzima-sustrato como intermediario del proceso
de catlisis enzimtica.

Ante la idea de que las enzimas actuaban exclusivamente en sistemas acuosos, la

investigacin y desarrollo en tecnologa enzimtica se desarrollaron hasta los aos
1980s fundamentalmente en soluciones acuosas, principalmente en aplicaciones de
la industria alimentaria, con tan slo aisladas exploraciones de sistemas de reaccin
con solventes orgnicos.

La primera aplicacin de enzimas en procesos industriales fue en la elaboracin de

detergentes en 1930, basndose en una patente de Otto Rhm, la cual describa el
uso de enzimas pancreticas en detergentes. Inclusive, durante los ltimos aos,
su utilidad en gran cantidad de industrias ha adquirido gran relevancia; por ejemplo,
las proteasas son el grupo de enzimas de mayor importancia industrial y comercial
a escala internacional.

Casi la mitad de las enzimas industriales son proteasas y se utilizan en los

detergentes, en procesos de ablandamiento de pieles, en la manufactura de quesos,
industria vincola y fabricacin de sedas; a la vez tienen aplicaciones muy
importantes en el rea mdica como la produccin de frmacos anti-inflamatorios,
disolucin de cogulos sanguneos, inhibicin de la transcripcin (como el
Zidovudine que acta como inhibidor de la transcriptasa reversa en el HIV) y
activacin de hormonas entre otras
 JUSTIFICACION
La cintica enzimtica aplicada representa el principal recurso mediante el cual los
cientficos identifican y caracterizan agentes necesarios para que de manera
selectiva los ndices de procesos catalizados por enzima sean especficos.

Para las reacciones enzimticas son naturalmente acuosas, por lo que usan como
solvente el agua. Aun en bajas cantidades, el agua es un ingrediente esencial para
la catlisis enzimtica: permite a la enzima desplegar movimientos
conformacionales indispensables para la actividad enzimtica.

METODOLOGA
La metodologa utilizada para realizar esta investigacin documental se basa en una
bsqueda en diferentes bibliografas autorizadas previamente por el profesor del
curso y tambin de bsquedas en internet utilizando fuentes confiables como
revistas cientficas, publicaciones, tesis, paginas especializadas, etc.

MATERIALES.
Computadora, Internet, Libros.
 RESULTADOS.
Los procesos biocatalticos difieren de los procesos qumicos convencionales dadas
las caractersticas del catalizador como parmetros cinticos, estabilidad de la
protena bajo las condiciones del proceso, si la enzima est aislada o forma parte
del metabolismo de una clula, crecimiento celular, induccin de la actividad
enzimtica y/o el uso de rutas metablicas para reacciones mltiples. La mayora
de los bioprocesos utilizan enzimas hidrolticas o se basan en fermentacin.

Las condiciones de reaccin para los bioprocesos generalmente estn basadas en

parmetros interdependientes, por lo tanto una descripcin matemtica del proceso
es esencial para su optimizacin.

El desarrollo de un bioproceso requiere de diferentes pasos, como:

Identificar una reaccin especfica para escalarla y que sea costeable

Encontrar un biocatalizador que pueda catalizar la reaccin deseada
Caracterizar el biocatalizador bajo las condiciones de trabajo del bioproceso
(medio acuoso o mezcla agua-solvente),
Aplicacin, ya sea por inmovilizacin o sistemas mltiples,
Recuperacin del producto.

Es evidente que la intensa actividad en el estudio de las enzimas ha estado

relacionada con las reacciones biolgicas, porque se ha demostrado que
prcticamente todas las reacciones de sntesis y degradacin en las clulas vivas
se controlan y catalizan con enzimas especficas. Muchas de estas reacciones son
homogneas en la fase lquida; es decir son reacciones de tipo enzima soluble
sustrato soluble. Sin embargo, aunque por lo general las enzimas funcionan en
soluciones acuosas, los estudios sobre sistemas enzimticos se derivan para
solucionar este tipo de situaciones, debido a que desde un punto de vista
biotecnolgico, el usar enzimas en solventes orgnicos en lugar de agua tiene
ventajas, como la alta solubilidad de compuestos orgnicos en medios no acuosos,
la habilidad de llevar a cabo reacciones imposibles en agua por restricciones
cinticas o termodinmicas, estabilidad de la enzima, recuperacin eficiente del
producto y la insolubilidad de las enzimas en medios orgnicos, lo que permite su
recuperacin y reso, con lo cual se excluye la inmovilizacin de enzimas.

Existe una clara relacin entre el nivel de hidratacin de una enzima, su movilidad
y su actividad enzimtica. El nivel de hidratacin de una enzima y su relacin con la
movilidad y por lo tanto la actividad enzimtica depende de la composicin de la
protena en trminos de polaridad de las cadenas laterales de los aminocidos, de
esta manera que hay enzimas que son capaces de llevar a cabo reacciones
enzimticas con cantidades de agua inferiores a los necesarios para otras, es decir,
diferentes enzimas tienen diferentes requerimientos de agua asociada para
mantener una actividad cataltica apreciable en medio orgnica.

La polaridad del solvente que rodea a la enzima establece una determinada

capacidad de remover agua de la enzima, y por lo tanto influye tambin en la
hidratacin de sta; aunque por otra parte, las enzimas tienen la capacidad de ligar
fuertemente una cierta cantidad de agua, la cual no es removida por los solventes;
esta agua fuertemente ligada a la protena cuando sta se encuentra en un medio
orgnico no es intercambiable con el agua menos ligada o el agua libre, y es el agua
que mantiene la conformacin cataltica de la enzima.
 EJEMPLO DE REACCIN ENZIMTICA SOLUBLE EN
AGUA.

Proteasas en Hidrolisis

Actualmente se encuentran disponibles comercialmente muchas proteasas grado-

alimenticio. Estas proteasas pueden ser clasificadas, por su origen, (animal, vegetal,
bacteriano o fngico), por su modo de accin cataltica (endo- o exo-actividad) o con
base en su sitio cataltico.

Las endoproteasas hidrolizan enlaces amdicos dentro de la cadena de la

protena.
Las exoproteasas, por el contrario, eliminan aminocidos terminales de las
protenas o pptidos.

La naturaleza del centro cataltico de las proteasas difiere de acuerdo con los
aminocidos y otros ligandos que intervienen en la formacin del complejo enzima-
sustrato.

El centro activo contiene aminocidos o bien cationes metlicos que promueven la

catlisis, denominndose serinproteasas, cisteinproteasas, aspartato proteasas,
segn intervengan los aminocidos serina, cistena o cido asprtico. En las metalo-
proteasas la actividad est promovida por un catin metlico, siendo el ms
frecuente el znc. Todas las serinproteasas tienen actividad endo. Contrariamente,
las metalo-proteasas son sobre todo exo-proteasas. Las primeras enzimas
proteolticas utilizadas en la industria alimentaria fueron proteasas pancreticas de
origen animal, si bien cada vez estn adquiriendo mayor importancia las de origen
bacteriano o fngico.

Etapas de la hidrlisis enzimtica

La hidrlisis proteoltica no se desarrolla en una sola reaccin. Se trata de un
conjunto de reacciones simultneas de ruptura de enlaces, con distintas especies
cargadas en equilibrio, lo que da una gran complejidad a este tipo de procesos.

Se propone un proceso de hidrlisis constituido por tres reacciones consecutivas.

Primero, la formacin de un complejo enzima-sustrato (protena), y despus la
rotura del enlace amdico dando como resultado la liberacin de un pptido.

Finalmente, el pptido restante se separa de la enzima despus de un ataque

nucleoflico de una molcula de agua. El proceso puede reiniciarse sobre los dos
nuevos pptidos o sobre uno solo de ellos.

Figura 1. Mecanismo cataltico de una proteasa

Para la hidrlisis de protena, la unin sustrato-enzima es esencial. En el caso de

protenas globulares, la mayora de los enlaces peptdicos estn localizados en el
interior de la protena y no son accesibles para la enzima, por esto, se considera
que para protenas globulares es necesario efectuar la desnaturalizacin de la
protena antes de proceder a hidrolizarla, ya que despus de la desnaturalizacin
estarn expuestos ms enlaces peptdicos.

En solucin, las protenas en estado plegado (nativo) y no plegado

(desnaturalizadas) estn en equilibrio. Solamente las molculas no plegadas son
susceptibles a degradacin por enzimas proteolticas.
 Figura 2. Teora de Linderstrm-Lang

Si la velocidad de desnaturalizacin (v0 = v+0-v-0) es menor que v1, la etapa de

desnaturalizacin es la etapa limitante de la velocidad de hidrlisis y cada protena
desnaturalizada ser rpidamente hidrolizada hasta los productos finales.

El hidrolizado resultante, adems de contener ambas protenas intactas, contendr

los productos finales, aunque sern deficientes en pptidos de tamaos
intermedios. Este tipo de reaccin est designada como una reaccin "en etapas
sucesivas". Si, adems, la desnaturalizacin de la protena es ms rpida que la
hidrlisis (v1<v0), las molculas de la protena sern degradadas a intermedios pero
posteriormente son degradadas lentamente en productos finales.

Este tipo de reaccin es llamada de "cremallera", obtenindose un hidrolizado que

contiene principalmente pptidos de tamao intermedio. Ambos mecanismos de
hidrlisis estn implicados en la mayora de las reacciones proteolticas.

Si la protena se desnaturaliza irreversiblemente antes de la hidrlisis, el nmero de

enlaces de pptidos disponibles se incrementa notablemente y la degradacin de la
protena debera proceder de acuerdo con un tipo de reaccin "cremallera". Para
estas protenas desnaturalizadas otros factores tales como la disminucin de la
solubilidad media influyen en la velocidad de reaccin inicial.
 DISCUSIN & CONCLUSIONES.
Como conclusin se puede intervenir por el uso de las reacciones enzimticas
solubles en agua. En la actualidad, se busca detener o inhibir la funcin acuosa de
una enzima de tal forma que es preferible usar solventes orgnicos en vez del
solvente general que es el agua, debido a que a diferencia de sta y a
conveniencia de las industrias, consta de una alta solubilidad de compuestos
orgnicos en medios no acuosos, adems de la habilidad de llevar a cabo
reacciones imposibles en agua por restricciones cinticas o termodinmicas,
provoca la estabilidad de las enzimas, se recupera el eficiente del producto y permite
la recuperacin y reso de las enzimas.

Sin embargo, esto no quiere decir que una reaccin enzimtica soluble en agua sea
poco factible. Por ejemplo, la hidrlisis enzimtica de protenas hasta pptidos o
aminocidos, por accin de enzimas proteolticas, la composicin final y, por tanto,
el uso de los hidrolizados depende principalmente de la fuente proteica, las cuales
son las enzimas.

Los hidrolizados se utilizan ampliamente en la tecnologa alimentaria por sus

propiedades nutricionales o funcionales (solubilidad, poder emulsificante, capacidad
espumante).
 REFERENCIAS.
1. Murray, R. K., Granner, D. K., Mayes, P. A., & Rodwell, V. W. (2004). Harper
bioqumica ilustrada. El manual moderno.
2. McKee, T., McKee, J. R. T., & McKee, J. R. (2003). Bioqumica: la base
molecular de la vida. McGraw-Hill/Interamericana,.
3. Devlin, T. M. (2004). Bioqumica: libro de texto con aplicaciones clnicas.
Revert.
4. Chvez, M. A., Daz, J., Prez, U., & Delfn, J. (1990). Temas de
enzimologa. Tomo II. Universidad de la Habana, Facultad de Biologa, 78-
80.