Manual de Prcticas de Biologa_____________________________________________|1

Manual de Prctica

BIOLOGA

rea de Biologa
Lima Per
2014
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Rector

Dr. Jos Amiel Prez

Vicerrectora Acadmica
Dra. Josefina Takahashi Sato
Presidente ejecutivo
MBA Rolando Vallejo Cortez
Vice-Rector de Investigacin
Dr. Jos Amiel Prez
Directora de Desarrollo y Gestin Acadmica
Dra. Mara Pa Sirvent de Luca
Coordinador de Cursos Bsicos de Ciencias
Alejandro Fukusaki Yoshizawa

Coordinadores de rea
Biologa
Joyce Del Pino Robles Ecologa
Hctor Aponte Ubills
Estadstica
Jorge Medina Gutirrez
Fsica
Rodolfo Andrade Bambarn
Matemtica
Jos Dvila Tapia
Qumica
Elvito Villegas Silva

Reservados todos los derechos: ningn material de este manual puede ser reproducido sin autorizacin expresa por escrita por los autores. La
autorizacin ser en hoja aparte y firmada y adosada a este material. Todo compromiso suscrito aparte, no se refiere a este manual. Queda
exento del compromiso, el fotocopiado interno en una cantidad no mayor de 100, solo para uso con fines educativos y sin lucro

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CONTENIDO

Pg.
Recomendaciones para el estudiante del curso de Biologa 05

Introduccin 07

Instrucciones para el desarrollo de las prcticas 08

Prctica N 1: Principios fundamentales del trabajo de laboratorio:

Bioseguridad. 11

Prctica N 2: Fundamentos de Microscopia 15

Prctica N 3: Identificacin de Biomolculas en Compuestos

Orgnicos 21

Prctica N 4: Identificacin y Diferenciacin de las Clulas

Procariotas y Eucariotas 26

Prctica N 5: La membrana celular y su permeabilidad. Difusin:

smosis y Dilisis 30

Prctica N 6: Clula procaritica: reconocimiento de estructuras

Bacterianas 36

Prctica N 7: La clula eucaritica. Reconocimiento de estructuras

y organelas 42

Prctica N 8: Respiracin celular y Fotosntesis 47

Prctica N 9: Extraccin de ADN y Sntesis de protenas 53

Prctica N10: Ciclo celular: Mitosis y ejercicios de Sntesis de protenas 60

Prctica N 11: Ciclo celular: Meiosis 64

Prctica N 12: Gentica Mendeliana 68

Referencias Bibliogrficas 75

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RECOMENDACIONES PARA EL ESTUDIANTE DEL CURSO DE

BIOLOGA

El estudiante debe INGRESAR AL LABORATORIO CON MANDIL LARGO, LIMPIO, ABOTONADO Y BIEN
PLANCHADO mientras dure la prctica (Cada alumno debe usar el mandil correspondiente a su Facultad). Los
estudiantes deben usar pantaln largo, zapatos o zapatillas y las chicas deben tener el cabello bien amarrado.
Debe entrar NICAMENTE CON LOS MATERIALES NECESARIOS, como cuaderno de trabajo, lpices, lapiceros,
etc. y el material solicitado por el Docente para cada prctica. Las mochilas, carteras y otros aditamentos no
ingresan al laboratorio, las mismas deben ser colocados en los casilleros que se encuentran en el pasillo, para
lo cual el estudiante debe traer consigo un candado para su seguridad. Terminada la sesin el estudiante
recoger sus pertenencias y se llevar su candado.(Recomendacin de INDECI)
LOS LABORATORIOS SON AMBIENTES DE TRABAJO. No se puede COMER ni BEBER.
LLEGAR PUNTUAL a clases. Slo se dar 10 minutos de tolerancia.
El uso de celulares durante las clases queda terminantemente prohibido, antes de ingresar al laboratorio,
asegrese de apagar su telfono mvil.
El estudiante ES RESPONSABLE de cualquier accidente que ocurra con el material y/o equipo con el que
trabaje, debiendo reponer dicho material a la brevedad posible. Cualquier accidente con vidrios, reactivos,
cultivos biolgicos y/o similares deber comunicarse al responsable del laboratorio o al profesor de prcticas
a fin de tomar las medidas adecuadas.
El ORDEN Y LA LIMPIEZA son obligatorios en el laboratorio de Biologa, asegrese de aplicarlos durante y
despus de la prctica. Se recomienda tener a mano un equipo de limpieza personal para su microscopio que
consiste de un pao o franela y papel lente
MANTENGA LOS EQUIPOS EN SU SITIO, moverlos podra daarlos. Salvo indicaciones expresas del docente de
aula, los equipos permanecern en sus respectivos lugares.
LA MANIPULACIN DE LOS EQUIPOS SE HAR EXCLUSIVAMENTE POR EL PROFESOR que solicitar la ayuda
del responsable si fuera necesario.
Los estudiantes slo podrn manipular los equipos dirigidos por el docente o el responsable de laboratorio

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INTRODUCCIN
Todos los seres vivientes estn formados por clulas; pero el nmero y la variedad de cada una de estas clulas
difieren grandemente entre los distintos organismos. Algunos organismos se componen de solamente una clula;
otros, como los seres humanos, se componen de billones de clulas. La Biologa como ciencia, enmarca los principios
bsicos del conocimiento requerido sobre el estudio de los seres vivos. Se trata de una ciencia natural que ha ido
forjando, a travs del tiempo la lucha constante, por conocer y transformar la naturaleza. A travs de su desarrollo,
ha surgido una diversidad de campos especializados dentro de lo que destaca la gentica, con sus estudios del
genoma humano, la clonacin de animales, la terapia gnica y la transgnica como tambin el desarrollo de animales
y vegetales transgnicos, que nos sirven para la alimentacin humana.
A fin de observar mejor las complejas y delicadas estructuras vivientes se requiere del contacto directo con los
materiales a estudiar, por lo tanto vemos que es necesario relacionar la teora con la prctica; para lo cual brindamos
el presente Manual de Biologa, detallndose las guas de prctica con principios muy sencillos y fciles de
comprender, para que el estudiante tenga un material didctico de trabajo que le permitir afianzar los conceptos
aprendidos en las clases tericas, adicionalmente al finalizar cada experiencia se proponen preguntas que
incentivarn la investigacin y la aplicacin de los conceptos aprendidos. Tambin, tendr como propsito involucrar
al estudiante en el trabajo de laboratorio, familiarizarlo con la metodologa del trabajo en un laboratorio de Biologa,
desarrollar sus destrezas con los equipos, instrumentos y materiales para que lo motiven a investigar, a trabajar en
equipo, dando lugar a procesos de constante integracin, comunicacin, investigacin, construccin de ideas,
surgimiento de nuevas preguntas, en fin, donde las actividades experimentales faciliten su aprendizaje, desarrollen
su actividad analtica y crtica y se convierta en el inicio exitoso de su carrera en el rea de las Ciencias de la Salud.

INSTRUCCIONES PARA EL DESARROLLO DE LAS PRCTICAS

Lee la gua de prctica previa al desarrollo de la experiencia en el laboratorio.
Investiga previamente sobre los conceptos bsicos del tema a desarrollar en la prctica.
Escucha atentamente las indicaciones de los docentes y sigue las instrucciones del manual de prcticas.
En caso de que las pruebas experimentales sean individuales realiza todas las pruebas mencionadas en el
manual en forma independiente.
En el caso de las experiencias grupales, trabaja en coordinacin con tu grupo, realizando una distribucin
equitativa de las tareas asignadas, cumpliendo con rapidez y eficiencia, ya que de tu trabajo depende todo el
grupo.
Realiza cuidadosamente tus pruebas experimentales, entendiendo el porqu de los hechos acaecidos.
Al efectuar cada uno de los pasos del desarrollo experimental, observa minuciosamente tus experimentos y
anota y/o esquematiza con claridad los cambios ocurridos (color, volumen, aumentos observados, emisin de
gases, texturas, etc.), as como los resultados finales. Estos resultados son de forma individual y debern ser
entregados a los docentes el da de la prctica para su revisin y firma, siendo anexados en el informe final.
Discute y analiza con los miembros de tu grupo el porqu de estos resultados y las conclusiones preliminares,
encontrando patrones, explicando sucesos, hechos y construyendo deducciones.
Desarrolla en forma grupal o individual segn las indicaciones de los docentes el informe de prctica, utilizando
fuentes de informacin de nivel universitario que expliquen de forma sustentada tus resultados y conclusiones
desarrolladas que ser entregado al ingresar al laboratorio de la clase siguiente.
Resuelve los cuestionarios que tienen como objetivo reforzar los conceptos aprendidos en teora y prctica,
porque estas preguntas sern consideradas ara tomar en los pasos al inicio de la prctica.
Cita tus referencias segn el sistema Vancouver.
Las resultados prcticas desarrolladas por uno o un grupo de ESTUDIANTES NO
PUEDEN SER TRANSFERIBLES A OTROS.

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FICHA DE EVALUACIN DE LA PRACTICA: N.

Nombre del Estudiante:
Mesa:Fecha:
COMPETENCIAS A EVALUAR 0 1 2
1. Llega con puntualidad / tarde / no asiste a la prctica (F y T)
2. Ingresa al laboratorio debidamente presentado
3. Trae todos los materiales que requiere para el desarrollo de la prctica
4. Participa activamente en el desarrollo de los conceptos tericos que se brindan en la
primera parte de la sesin.

5. Trabaja en equipo cumpliendo con eficiencia el rol que le toca en la experiencia.

6. Participa activamente en el desarrollo de la experiencia demostrando inters,

habilidad y destreza en las preparaciones experimentales.
7. Muestra Inters por su aprendizaje y sobre todo en relacin a la prctica
desarrollada.
8. Esquematiza y toma nota de sus resultados
9. Participa activamente en el anlisis de los resultados obtenidos
10. Tiene confianza en s mismo, tiene adecuada presentacin y muestra respeto a
las opiniones de sus docentes y/o compaeros de trabajo
NOTA

CRITERIOS QUE SE TOMARN EN CUENTA PARA LA EVALUACIN DE LOS INFORMES DE PRCTICA

ITEMS A EVALUAR Puntos
1. Cartula y presentacin 1
2. Introduccin (marco terico y objetivos de la prctica) 1
3. Procedimiento experimental (materiales y mtodos usados) 1
4. Resultados. 5
5. Anlisis y discusin de los resultados 5
6. Conclusiones (5 como mnimo) 5
7. Referencias usadas en la preparacin del informe (citadas segn sistema
2
Vancouver)
NOTA

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PRCTICA N 1

PRINCIPIOS FUNDAMENTALES DEL TRABAJO DE LABORATORIO: BIOSEGURIDAD

1. BIOSEGURIDAD
Es un conjunto de medidas preventivas orientadas a proteger la salud y la seguridad del personal que labora en
instituciones de salud, pacientes, visitantes y al medio ambiente que pueden ser afectados como resultado de la
actividad asistencial, con el fin de reducir o eliminar los riesgos que pueden ser producidos por agentes
infecciosos, fsicos, qumicos y mecnicos.

La bioseguridad se realiza en conjunto, el personal debe cumplir las normas de bioseguridad, las autoridades
deben hacerlas cumplir y la administracin debe dar las facilidades para que estas se cumplan.

AGENTES DE RIESGO
Durante las labores que realizamos diariamente en el laboratorio, nos encontramos expuestos a riesgos que
pueden causar una enfermedad o dao fsico e incluso puede ser transmitida a nuestros familiares y a la
comunidad.

CLASIFICACIN
1. AGENTES BIOLGICOS: Cuyo riesgo depender de la identidad del agente, modo de transmisin y va de
entrada. Estos pueden ser transmitidos por ingestin, inhalacin, inoculacin, por contacto directo a travs de
piel o mucosas, conteniendo bacterias, hongos, virus, parsitos, etc.
2. AGENTES FSICOS Y MECNICOS: Como los efectos traumticos por cadas, accidentes por cables sueltos,
quemaduras por exposicin a temperaturas muy altas y/o muy bajas, quemaduras, cortaduras por vidrios
resquebrajados de recipientes daados o tubos rotos o condiciones de trabajo como aparatos que producen
mucho ruido llevando a una disminucin de la audicin; mala iluminacin de los ambientes que pueden
producir efectos sobre la visin y el uso de muebles de trabajo inadecuados que hacen optar por posiciones
inadecuadas y por consiguiente defectos posturales y dolor de espalda.
3. AGENTES QUMICOS: Que pueden ser corrosivos, produciendo la alteracin de los tejidos, como los que
producen la exposicin a la leja, cido clorhdrico, entre otros. Txicos, que pueden causar sus efectos por
inhalacin, ingestin o contacto directo con la piel y/o mucosas. Otros pueden producir efectos
carcinognicos, teratognicos, o por inflamacin o explosin.
SEALES DE BIOSEGURIDAD

Fuentes: PROCEDIMIENTOS DE MICROBIOLOGA CLNICA

http://www.seimc.org/documentos/protocolos/microbiologia/cap33.asp

PRECAUCIONES UNIVERSALES
Todo el personal debe seguir las precauciones estndares rutinariamente para prevenir la exposicin de la piel y
de las membranas mucosas, en todas las situaciones que puedan dar origen a accidentes, estando o no previsto
el contacto con sangre o cualquier otro fluido corporal del paciente. Estas precauciones, deben ser aplicadas
para TODAS las personas, independientemente de presentar o no patologas.

1. Lavarse siempre las manos con abundante agua y jabn.

2. Usar barreras de proteccin como guardapolvo largo, guantes, mascarilla, etc.
3. Evitar lesiones por agujas, bisturs y otros instrumentos cortantes durante los procedimientos y limpieza del
material utilizado.
4. Desinfectar, esterilizar y descartar adecuadamente los instrumentos despus de usarlos.

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NIVELES DE BIOSEGURIDAD
Clasificacin segn el tipo de agente patgeno

NIVEL 1: Agentes no patgenos para el hombre. Ej.: Bacillus subtilis.

Precauciones para el trabajo: uso del guardapolvo o mandil. Uso de guantes para el manipuleo de animales y
material contaminado, y todos los residuos y animales de experimentacin deben ser descontaminados antes
de su eliminacin.

NIVEL 2: Microorganismos de riesgo moderado y procedimientos de riesgo moderado. Ej.: Hepatitis B,

Salmonella, Influenza.
Acceso a las reas de riesgo restringido. Prohibido el ingreso de personas con riesgo aumentado de infeccin. En
todos los accesos debern figurar seales de riesgo biolgico, as como los requerimientos para el ingreso, adems
del nombre, telfono y direccin del responsable del laboratorio.
El personal debe conocer perfectamente el riesgo y estar vacunado; saber la forma de prevenir y actuar en un
posible accidente.
Precauciones para el trabajo: adems de las precauciones tomadas en el nivel anterior, evitar, hasta donde sea
posible, el uso de jeringas y agujas, y de ser imprescindible, debern descartarse en un recipiente a prueba de
pinchazos y luego procederse a su descontaminacin. Nunca se reenvainarn las agujas ni se doblarn.
Es recomendable que el trabajo se realice en cabinas de flujo laminar de seguridad biolgica. Por ejemplo, un
laboratorio de anlisis clnicos.
NIVEL 3: Microorganismos que pueden causar la muerte o aquellos de riesgo moderado pero donde los
procedimientos de trabajo incluyen alto riesgo de infeccin (aerosoles). Ej.: Mycobacterium tuberculosis,
Brucella, virus oncognicos, VIH en alta concentracin.
Adems de las precauciones y medidas de seguridad tomadas para un rea de Nivel 2 deberemos considerar
lo siguiente:

Restringir el acceso al personal que no est directamente involucrado en las tareas y llevar un registro de las
visitas y del personal de servicios, as como de los accidentes ocurridos.
Tomar muestras de suero, iniciales y peridicas, a todo personal para conocer posibles contaminaciones.
Las superficies de trabajo se limpiarn y desinfectarn al finalizar cada tarea. Pero a todo esto deben agregarse
barreras de contencin fsica, como el trabajo en cabinas de seguridad, el uso de indumentaria protectora (bata,
mscaras, respiradores, guantes, etc.) y sistemas de proteccin contra los aerosoles con las tapas de seguridad
y rotores sellados en centrfugas, cajas de contencin para el alojamiento de animales infectados o filtros HEPA
(High Efficiency Particulate Air) interpuestos en las lneas de vaco.
NIVEL 4: Microorganismos exticos y/o altamente peligrosos cuya manipulacin involucre alto riesgo para la
vida. Ej.: Virus Lassa, Virus Hanta, Antrax, Machupo, Junn.
Para el trabajo con microorganismos de alta peligrosidad deber contarse con laboratorios especiales de
mxima seguridad, donde existan barreras de aire con el exterior, donde es necesario ducharse y cambiarse
ntegramente de ropa al ingreso y a la salida y en los que se trabaja en cabinas de alta seguridad. La
indumentaria del personal deber ser con vestimentas completamente aisladas del medio, uso de respiradores
conectados a tanques de oxgeno e intercomunicadores.

PRECAUCIONES PARTICULARES PARA EL LABORATORIO DE BIOLOGIA

1. Asume que todo material biolgico con que trabajas, es potencialmente infectante.
2. Limpia y desinfecta prolijamente tu rea de trabajo antes y despus de realizar tu tarea.
3. Nunca pipetear con la boca ni permitir que otro lo haga.
4. Nunca comas, bebas, fumes, guardes alimentos, ni te apliques cosmticos en la zona de trabajo del laboratorio.
5. Mantn el laboratorio limpio y aseado; retira del mismo cualquier material que no tenga relacin con el
trabajo.
6. Descontamina las superficies al final de la jornada o cuando se te derramen sustancias potencialmente
peligrosas.
7. Usa siempre guantes cuando manipules sangre, fluido o muestras.
8. No abandones tu lugar de trabajo ni circules por el laboratorio con los guantes puestos.
9. Lvate las manos despus de manipular materiales y animales infecciosos y cuando salgas del laboratorio.
10. Realiza todos los procedimientos evitando formar aerosoles, gotas, salpicaduras o derrames.

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PRCTICA N 2
FUNDAMENTOS DE MICROSCOPA
Los diversos elementos que existen en la naturaleza, presentan tamaos, formas y composiciones distintas, la
mayora de ellas pueden verse, algunas a simple vista, y otras mediante instrumentos, como el microscopio.
El primer microscopio fue inventado por el holands Zacharas Janssen (1590), constituido por un tubo con lentes en
ambos extremos, este microscopio aumentaba 200 veces la muestra pero la imagen que proyectaba era muy borrosa.
Posteriormente, Robert Hooke (1655) mejor el microscopio incorporando una lente ocular y una lente objetivo.
El MICROSCOPIO PTICO COMPUESTO es un sistema ptico utilizado para observar estructuras muy pequeas que
no se ven a simple vista, en donde se combinan dos lentes o sistemas de lentes convergentes de amplificacin de
imagen, colocados en los extremos del tubo: el denominado OBJETIVO, situado ms cerca del objeto a observar; y el
OCULAR, ms cercano al ojo del observador; y el CONDENSADOR que consigue una adecuada iluminacin de los
objetos concentrando la luz.

CARACTERSTICAS DEL MICROSCOPIO PTICO

1. PODER DE AMPLIFICACIN: Es la capacidad que tiene el microscopio de proyectar del objeto una imagen
con mayor tamao, esta se encuentra determinado por la multiplicacin de la ampliacin de los oculares
y los lentes objetivos.

Amplificacin del lente Amplificacin del lente

Amplificacin Total
= ocular X objetivo

Ejemplos:
OBJETIVO 4x 10x 40x 100x
OCULARES 10x 40x 100x 400x 1000x
OCULARES 15x 60x 150x 600x 1500x
Bajo condiciones ptimas, usando el objetivo de 100X, en la cual una gota de aceite de inmersin es colocada
sobre la lmina portaobjeto y el lente es sumergido en la gota, objetos tan pequeos como de 200nm (0.2 m),
pueden ser observados hasta con una ampliacin de 1000X.

2. PODER DE RESOLUCIN: Es la capacidad del microscopio para que dos puntos prximos del objeto
aparezcan separados en la imagen, lo cual permite observar detalles de los objetos que con el ojo humano
no se podran ver.
Instrumento ptico Resolucin Magnificacin
Ojo humano 0.1 mm 1X
Microscopio ptico 0.1 2500X
Microscopio electrnico 0.1 nm 1 000 000X
Las clulas observadas por el microscopio ptico pueden estar vivas, fijadas o teidas. Estas muestras son montadas
en lminas portaobjetos y cubiertas por una lmina cubreobjetos y pueden ser momentneas o permanentes
dependiendo las tcnicas que se requieran en su preparacin. Las modificaciones en el microscopio han sido
numerosas. Los microscopios de diseccin, por ejemplo, usan un sistema de imgenes de rea amplia y baja
magnificacin de objetos relativamente grandes.

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SISTEMAS DEL MICROSCOPIO PTICO

El microscopio se encuentra formado por dos sistemas generales, los que a su vez estn compuestos por ms
componentes

1. Sistema Mecnico:
a. Tubo ocular e. Tornillo micromtrico i. Diafragma
b. Cabezal f. Platina j. Pinza
c. Brazo g. Revlver
d. Tornillo macromtrico h. Base

2. Sistema ptico:
a. Condensador
b. Objetivos
c. Oculares

ENFOQUE
Asegrese primero de conseguir una buena iluminacin:
Utilice el objetivo de menor aumento
Encienda la fuente de luz
Lleve el condensador a una distancia de 1 a 2 mm de la platina
Cercirese que el diafragma est abierto y el objetivo perpendicular a la platina.
Recuerde que a mayor aumento, el condensador debe estar ms cerca de la platina
Coloque una de las lminas preparadas sobre la platina y asegrela con las pinzas del sistema de
desplazamiento que tiene la platina.
Procure que la muestra que va a observar se encuentre en el centro del orificio de la platina.
Recuerde que todo esto lo est haciendo en el microscopio que ilumin previamente, por lo tanto el objetivo
que est usando es el de menor aumento (4X)
Gire el tornillo macromtrico hasta tener una distancia de 1 a 2 mm entre el objetivo y la lmina preparada.
ESTA OPERACIN DEBE HACERLA SIN COLOCAR SUS OJOS SOBRE EL OCULAR.
Ahora coloque los ojos sobre los oculares y mantngalos abiertos, ajuste el sistema de binoculares a su distancia
ocular, de modo que observe un solo y gran campo de luz.
Siga moviendo la platina hacia arriba utilizando el tornillo macromtrico hasta que visualice la muestra en la
lmina que prepar. Este enfoque se llama ENFOQUE
GRUESO.
Empiece a girar, con los dedos pulgar e ndice de ambas manos, el tornillo micromtrico hasta que pueda
observar ntidamente la muestra, esto es el ENFOQUE FINO, que se ajusta a la visin de cada observador.
Rote el revlver para cambiar de objetivo.
Manipule el tornillo micromtrico y enfoque nuevamente la muestra que est observando.

PREPARACION DE MUESTRAS
La preparacin de una muestra para estudiarla al microscopio es diferente segn la naturaleza del material que ha
de ser observado, puede ser orgnico o inorgnico, si es orgnico puede ser en muestras vivas o fijadas.
Preparacin de muestras vivas.- es aquel que no precisa un tratamiento en el que se maten las clulas, como es la
fijacin o la inclusin. La muestra puede ser colocada en solucin fisiolgica o en una gota del lquido que las
contiene sobre una lmina portaobjeto y luego cubierta por una lmina cubreobjetos. Se pueden utilizar colorantes
vitales en muy bajas concentraciones para colorear zonas especficas como el verde de Janus, el rojo congo, el rojo
neutro, el azul de metileno.
Preparacin de muestras fijadas.- consiste en la observacin de clulas y de tejidos muertos, para ello las muestras
debe ser preparadas pasando por una serie de pasos que permitirn su coloracin y por lo tanto una mejor
observacin, estos pasos son fijacin, inclusin, corte, tincin y montaje.

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