ESTERILIZACIN EN BIORREACTORES

1. Objetivos
Aprender sobre la esterilizacin y en que consiste.
Conocer los fundamentos necesarios para la realizacin del proceso de
esterilizacin en biorreactores.
Profundizar los conocimientos sobre la cintica de esterilizacin por calor.
Averiguar las tendencias futuras en cuanto a la esterilizacin en bioprocesos.

2. Introduccin

Los biorreactores generalmente requieren miles de litros de medio lquido y millones de

litros de aire. Para procesos operados con cultivos sensibles algn contaminante microbiano
debe realizarse una etapa de estilizacin.

Para poder llevar a cabo una fermentacin con xito es imprescindible y obligatorio tener
en todas las etapas cultivos libres de contaminantes, desde el cultivo preliminar hasta el
fermentador de produccin.
Deben estar estriles antes de la inoculacin: fermentador y su equipamiento; medio de
cultivo. Deben estar estriles durante la fermentacin: aire, aditivos (antiespumantes)
porque los microorganismos pueden generar espuma cuando estn en agitacin
No deben existir roturas mecnicas en el fermentador.

Agentes esterilizantes: calor, radiacin, productos qumicos, filtracin.

3. Esterilizacin

Esterilizacin es la completa eliminacin de todos los microorganismos viables incluidas

las esporas. En la esterilizacin, a diferencia de la desinfeccin, no hay niveles, es decir; un
producto est o no est estril. Teniendo en cuenta que es un concepto cualitativo, la
esterilizacin ha de verificarse demostrando que todos los microorganismos vivos se han
destruido.
El proceso de esterilizacin verifica su eficacia utilizando, como indicadores,
microorganismos en forma de esporas que suponen la mxima dificultad para el proceso de
esterilizacin y que no son patgenos para el hombre.

Los parmetros que se utilizan para evaluar el proceso de esterilizacin son:

Tiempo de muerte trmica: Es el tiempo necesario para que a una temperatura

determinada se destruyan todas las esporas.
Valor D: Es el periodo de tiempo (expresado en minutos), o dosis de irradiacin,
que se necesita para asegurar la desactivacin del 90% de los organismos de ensayo,
bajo condiciones de exposicin definidas.
Valor F: Tiempo que se requiere para la destruccin de todas las esporas a
temperatura de 121 C.

El agente esterilizante ideal es aquel que consigue una eficaz accin germicida y esporicida
actuando en el menor tiempo posible y posee alto poder de penetracin en el material a
esterilizar. Todo ello sin presentar riesgos para el paciente, el trabajador o el medio
ambiente.

Caractersticas del Agente Esterilizador

Alta eficacia: Bactericida, esporicida, tuberculicida, fungicida, virucida y

prionicida.
Rpida actividad: Conseguir la esterilidad en el menor tiempo posible.
Penetrabilidad: Gran poder de penetracin y difusin al interior de equipos.
Compatibilidad: No debe alterar la constitucin del material ni modificar el
funcionamiento de los objetos esterilizados.
 Atoxicidad: Su uso no debe representar riesgosa las personas. Si stos son
inevitables; debe existir la posibilidad de su control mediante mecanismos de
seguridad eficaces.
Ecoseguridad: No daar el medio ambiente.
Adaptabilidad: Para usar en instalaciones grandes o pequeas.
Monitorizacin: Mediante controles fsicos, qumicos y biolgicos.
Eficacia y coste: Adecuado a los estndares establecidos en cada Unidad de
Esterilizacin.

4. Mtodos de esterilizacin

Mtodos que se basan en la destruccin de los microorganismos:

Mtodos fsicos:

Calor hmedo: Este tipo de calor es ms conveniente porque el vapor de agua

difunde por smosis a travs de la membrana de los microorganismos,
produciendo la muerte de los mismos por coagulacin de su protoplasma y no
por deshidratacin, como en el caso del calor seco.
Este mtodo de esterilizacin se lleva a cabo en autoclaves a vapor.

Fuente: http://slideplayer.es/slide/1636472/

Calor seco:
Como su nombre lo indica se transmite a travs de un fluido seco caliente (aire).
Presenta la desventaja, con respecto al calor hmedo, de que es poco penetrante. El
aire hmedo es un conductor ms eficiente del calor que el aire seco ya que el
coeficiente de transmisin del calor del agua es mayor que el del aire (K agua > K aire)

La muerte de microorganismos en este caso se produce por deshidratacin y por lo

tanto hay que llegar a temperaturas elevadas (160 C) durante tiempos altos (1 hora
o ms).
Este mtodo de esterilizacin se lleva a cabo en pupinel o estufas.

Fuente: http://slideplayer.es/slide/1636472/

Radiacin: ionizantes (rayos gamma) y no ionizantes (electrones).

Rayos gamma: su empleo est basado en los conocimientos sobre la energa

atmica Este tipo de esterilizacin se aplica a productos o materiales
termolbiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar
antibiticos, vacunas, alimentos, etc.

Fuente: http://slideplayer.es/slide/1636472/

Rayos X: Penetran bien, pero requieren mucha energa, son pocos operativos
para su empleo masivo, su uso es muy costoso, por lo tanto son muy poco
usados con fines de esterilizacin.

Rayos UV: Afectan a las molculas de DNA de los microorganismos.

El ADN absorbe una longitud de onda de 2600a y libera energa ocasionado
un re arreglo de enlaces qumicos son escasamente penetrantes y se utilizan
para superficies, se utilizan para la esterilizacin en quirfanos.
 Fuente: http://slideplayer.es/slide/1636472/

Mtodos qumicos:

Norma: La esterilizacin con mtodos qumicos gaseosos deber realizarse en

cmaras con ciclos automatizados que brinden seguridad al usuario.

Esterilizantes lquidos: cido peractico, perxido de hidrogeno.

Fuente: http://slideplayer.es/slide/1636472/

Esterilizantes gaseosos: xido de etileno, formaldehdo

 Fuente: http://slideplayer.es/slide/1636472/

Mtodos que se basan en la separacin de los microorganismos:

Mtodos fsicos:
Filtracin
De todos los mtodos disponibles para la esterilizacin, incluido el tratamiento
qumico, la exposicin a la radiacin ultravioleta, gamma y de rayos X, la
sonicacin, la filtracin y el calentamiento, solo los dos ltimos se usan en
operaciones a gran escala.

Fuente: http://slideplayer.es/slide/1636472/
El cambio de escala se refiere a XXXXXXXXXXXXXXX, normalmente en el sentido de
aumentarlo. Este es un proceso complejo, pues en funcin de la escala de operacin pueden
aparecer distintos fenmenos que controlen la velocidad global del proceso. No existe una
metodologa nica para realizar el proceso de cambio de escala (teora de similitud).

Generalmente el escalamiento se hace en base de principios de semejanza entre dos sistemas. Estas
semejanzas se refieren a la similitud a las 2 escalas, dichas similitudes pueden ser:
Similitudes geomtricas: las razones entre las longitudes correspondientes deben ser iguales en
ambos sistemas.
Similitudes cinemticas: las razones entre las velocidades en puntos equivalentes deben ser iguales
en ambos sistemas.
Similitudes dinmicas: las razones entre las fuerzas en puntos equivalentes deben ser iguales en
ambos sistemas.

Depende de la selectivada de la membrana que se utiilice, es un lroceso muy similar a la

cromatografa, solo que en lugar de retener en una capa