OBJETIVO GENERAL

Establecer y estandarizar los procedimientos bsicos de un examen de hemograma,

hemoglobina, hematocrito, recuento de eritrocitos, velocidad de sedimentacin, los
ndices eritrocitarios que sirvan de ayuda diagnstica al clnico.

OBJETIVOS ESPECIFICOS

Detallar el procedimiento de obtencin de muestras sanguneas con un adecuado control

de calidad.
Obtener sangre capilar para realizar pruebas hematolgicas.
Reconocer los elementos celulares de la sangre mediante el frotis sanguneo coloreado
Aprender a realizar un hematocrito y saberlo interpretar
Determinar el mtodo para obtener el valor de cuanta hemoglobina hay en la sangre.
 INTRODUCCIN

El presente manual ha sido elaborado en forma simple, didctica y eminente-mente prctica

para que su contenido sea fcil de entender por el personal que labora en el laboratorio de
hematologa.

Este manual est compuesto con los aspectos ms importantes de la bioseguridad en el

laboratorio y las principales tcnicas bsicas del laboratorio de hematologa.

El objetivo principal es protocolizar y estandarizar los procedimientos hematolgicos que

empiezan con la toma de muestra (siguiendo las pautas de control de calidad preanaltica)
hasta el procesamiento de sta (fase analtica) en la determinacin correspondiente, y
por ltimo, en la emisin de los resultados (fase post-analtica). Debemos recalcar que
cuando se realizan pruebas de hemostasia debe tenerse en consideracin los cuidados
comunes a toda prueba de laboratorio, es decir, las muestras deben obtenerse en
condiciones apropiadas y rotularse debidamente. Esperamos que el presente manual sirva
de gua efectiva y que pueda ser enriquecido con nuevos aportes con la finalidad de
alcanzar un trabajo de calidad.
 NORMAS DE BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

Introduccin

La bioseguridad se ha definido como el conjunto de medidas preventivas destinadas a

reducir o eliminar los riesgos por exposicin a agentes biolgicos, fsicos o qumicos por
parte del personal del laboratorio clnico.

El riesgo de infeccin est referido primariamente a la contaminacin de las manos o

mucosas (bucal, ocular y nasal) con sangre o fluidos corporales de personas infectadas
mediante puncin con objetos filosos, salpicaduras o aerosoles. Los riesgos de infeccin
subsiguiente a un accidente por puncin percutnea con una aguja con sangre contaminada
vara entre microorganismos, as se ha reportado para VIH un estimado entre 0.13-0.50%
mientras que para el virus de hepatitis B est aumentado al 26%.

Las prcticas seguras de trabajo son la nica proteccin prevenible con que se cuenta por el
momento contra el riesgo de infecciones con enfermedades transmitidas por la sangre. De
ah que poner en prctica las normas de bioseguridad signifique tomar conciencia de la
propia salud as como de la consideracin de la salud de los dems.

Modos de infeccin ms frecuentes

1. Pinchazos o cortes con agujas, bisturs u otros elementos punzantes.

2. Exposicin de la piel o mucosas a sangre, hemoderivados u otros fluidos biolgicos

contaminados especialmente cuando la permeabilidad de las mismas se encuentra alterada
por heridas, escoriaciones, eczemas, herpes, conjuntivitis o quemaduras.

3. Inhalacin de aerosoles producidos al agitar muestras, al destapar tubos, durante la

centrifugacin, especialmente cuando se emplean tubos con mayor volumen del aconsejado
por el fabricante en una centrfuga de ngulo fijo o cuando sta es frenada abruptamente
para ganar tiempo.

4. Salpicaduras en las mucosas expuestas.

Precauciones universales de trabajo

1. Asumir que la sangre, los fluidos corporales que contengan sangre, tejidos y algunos
lquidos corporales SON POTENCIALMENTE INFECCIOSOS.

2. Las puertas de los laboratorios debern estar cerradas y el acceso al mismo deber estar
restringido nicamente al personal debidamente entrenado.

3. El laboratorio deber ser mantenidos limpio, ordenado y libre de materiales extraos.

4. No se permitir comer, beber, fumar y/o almacenar comidas as como el uso de cualquier
otro tem personal (Ej. joyas, cosmticos, celulares, cigarrillos, etc.) dentro del rea de
trabajo.

5. Lavarse las manos cuando la contaminacin sea visible; despus de quitarse los guantes
y otro equipo de proteccin; despus de terminar el trabajo; antes de comer, beber o fumar,
y antes de otras actividades fuera del laboratorio.

6. Usar bata o uniforme dentro del laboratorio. Esta ropa protectora deber ser quitada
inmediatamente antes de abandonar el rea de trabajo.

7. Antes de iniciar el trabajo asegrese que la piel de sus manos no presente cortes,
raspones y otras lastimaduras, en caso que as sea, cubrir la herida de manera conveniente
antes de colocarse los guantes.

8. Usar guantes de ltex de buena calidad para todo manejo de material biolgico.

9. Cambiar los guantes de ltex toda vez que hayan sido contaminados, lavarse las manos y
ponerse guantes limpios.

10. NO tocar los ojos, nariz o piel con las manos enguantadas.

11. No abandonar el laboratorio o caminar fuera del lugar de trabajo con los guantes
puestos.
12. El uso de lentes de seguridad y/o escudo facial est indicado siempre que exista riesgo
de salpicaduras de sangre o fluidos corporales, en la remocin de tapones de hule con
muestras biolgicas y durante el uso de vrtex o centrfuga.

13. El uso de agujas, jeringas y cualquier otro instrumento similar deber ser restringido a
su uso indispensable. Las agujas y otros elementos punzantes debern ser descartados en un
recipiente resistente y exclusivo para ese fin. Se debern evitar los intentos de re-introducir
directamente las agujas descartadas en sus capuchones.

14. Todos los procedimientos debern ser realizados de manera tal que sea nula la creacin
de aerosoles, gotas, salpicaduras, etc.

15. Bajo ninguna circunstancia se pipetear sustancia alguna con la boca, para ello se
usarn pipeteadores automticos.

16. Las superficies del rea de trabajo debern ser descontaminadas cuando se termine el
trabajo diario. Se recomienda utilizar para tal efecto una solucin de hipoclorito de sodio en
concentracin adecuada (5%).

Manejo de desechos

1. Desecho peligroso Material slido o lquido que por su cantidad, concentracin,

caractersticas qumicas, fsicas o infecciosas puede representar una amenaza para la salud
o el ambiente cuando son tratadas inapropiadamente.

2. Desecho bio-infeccioso Se refiere a todos aquellos equipos, utensilios y otros artculos

descartables o sustancias que pueden transportar o transmitir microorganismos patgenos.

3. Programa de manejo de desechos Su objetivo principal es reducir el volumen del

material peligroso a un mnimo absoluto. Para ello es necesario considerar lo siguiente:

a) Todo el equipo re-usable (por ejemplo, puntas de micro-pipetas, etc.) deber ser
ubicado en un recipiente metlico o de plstico resistente a punciones o cortaduras. El
recipiente contendr lquido descontaminante y deber estar plenamente identificado y
ubicado en el mismo lugar de trabajo.
b) Todo elemento descartable (por ejemplo, agujas, jeringas, etc.) deber ser colocado en
un recipiente de material resistente a punciones y/o cortaduras, el que ser colocado
 dentro de un recipiente a prueba de prdidas para ser descontaminado e incinerado
siempre que esto sea posible.
c) Importante: Para la eliminacin de todo material contaminado, el mtodo de eleccin
es la incineracin de los mismos, eso si el incinerador est ubicado en el predio del
laboratorio y bajo control del mismo.
Manejo de accidentes

1. Derrames Cuando se produzca derrame de material infectado o potencialmente infectado,

el operador deber ponerse guantes y luego cubrir el fluido derramado con el papel
absorbente. Derramar alrededor de este material, solucin descontaminante y finalmente
verter solucin descontaminante sobre el papel y dejar actuar por lo menos 20 minutos.
Usando material absorbente, seco y limpio, levantar el material y arrojarlo al recipiente de
desechos contaminados para su posterior eliminacin. La superficie deber ser enjuagada
nuevamente con solucin descontaminante. Los guantes sern descartados despus del
procedimiento. NO se recomienda el uso del alcohol puesto que se evapora rpidamente y
adems coagula los residuos orgnicos superficiales sin penetrar en ellos.

2. Pinchazos o lastimaduras; contacto directo con mucosas Los pinchazos, heridas

punzantes, lastimaduras y piel contaminada por salpicadura de materiales infectados
debern ser lavados con abundante agua y jabn. Se deber favorecer el sangrado de la
herida.

3. Aerosoles En el caso que el accidente genere aerosol (por la rotura de centrfuga u

homogenizador), el trabajador deber contener la respiracin y abandonar inmediatamente
el cuarto cerrando la puerta y avisar de inmediato al supervisor. Personal entrenado para el
efecto, podr entrar al lugar despus de 30 minutos de ocurrido el accidente para efectuar
las tareas de descontaminacin.
DETERMINACIN DEL VOLMEN GLOBULAR (HEMATOCRITO)

FUNDAMENTO

El hematocrito es un examen de sangre que mide la fraccin que comprende a los glbulos
rojos (masa globular), respecto al volumen total de la muestra de sangre venosa o capilar.
Esta medicin depende del nmero de glbulos rojos y de su tamao. El resultado se
expresa en porcentaje, aunque tambin puede expresarse como valor decimal. El
hematocrito casi siempre se ordena como parte de un conteo sanguneo completo
(hemograma o hematimetra). Para la realizacin de esta prueba, con el macromtodo, la
sangre se extrae tpicamente de una vena, por lo general de la parte interior del codo o del
dorso de la mano. Cuando se inserta la aguja para extraer la sangre, algunas personas
sienten un dolor moderado, mientras que otras slo sienten un pinchazo o sensacin de
picadura. Posteriormente, puede haber algo de sensacin pulstil. Un volumen de sangre se
deposita en un tubo de Wintrobe, por medio de una pipeta, hasta la marca del 10 y se
centrifuga. Al terminar la prueba, deben de quedar separados el plasma de la sangre y las
clulas, depositndose en el fondo y presentando un color rojo intenso. Para la realizacin
del micromtodo, se utilizan unos tubos de un calibre muy delgado, llamados capilares, y
pueden ser llenados con la misma sangre venosa o de capilar. Este ltimo es el ms usado,
por ser ms rpido y menos riesgoso. Para su lectura se usa una escala estandarizada.

OBJETIVO

Aprender a realizar la prueba del hematocrito utilizando el macro y micromtodo, conocer

su importancia en el diagnstico de enfermedades y la forma adecuada de su
procedimiento.

METODOLOGA Y TCNICAS DEL REA

MATERIAL

Tubo de Wintrobe graduado de 0-100 mm

Pipetas Pasteur
Equipo para venopuncion (Tubo lila)
Tubos capilares rojos y azules (75 x 1.5 mm)
 Plastilina
Centrifuga
Microcentrifuga

SUSTANCIAS

Alcohol al 70%
Sangre venosa

Mtodo de Wintrobe (para macrohematocrito).

1. Una vez seleccionada, se desinfecta la zona con alcohol al 70%, y se practica

puncin venosa. La sangre es recogida en un tubo lila con EDTA.
2. Llenar el tubo de Wintrobe con la sangre extrada con anticoagulante ayudndose de
una pipeta Pasteur, comenzando desde el fondo hasta la marca superior de 100 mm,
teniendo cuidado de no provocar espuma ni dejar burbujas en el tubo.
3. Se recomienda como medida de precaucin tapar el tubo con un tapn de goma para
evitar la evaporacin
4. Centrifugar a 3000 rpm durante 30 minutos
5. Leer directamente de la graduacin la columna de glbulos rojos y anotar resultados

Mtodo del capilar (para microhematocrito).

1. Tomar la muestra en capilares rojos heparinizados directamente del dedo, o utilizar

capilares azules sin heparina para sangre venosa con anticoagulante EDTA. Debe
llenarse aproximadamente 70-80% del capilar, sin dejar burbujas de aire.
2. Ocluir (tapar) el extremo del capilar que no estuvo en contacto con la sangre, con
plastilina o sellando con fuego.
3. Colocar el capilar sobre la plataforma del cabezal de la microcentrifuga, con el
extremo ocluido adherido al reborde externo de la plataforma.
4. Centrifugar por 5 minutos entre 10 000 y 12 000 rpm.
5. Para leer el resultado, se lleva a cabo una regla de tres, midiendo el volumen total de
plasma y eritrocitos o por medio de la regleta.
 6. Para la regleta, se sostiene el tubo frente a la escala de manera que el fondo de la
columna de eritrocitos, quede exactamente al mismo nivel de la lnea hroizontal
correspondiente al cero.
7. Desplazar el tubo a travs de la escala hasta que la lnea marcada con el 1.0 quede al
nivel del tope del plasma. El tubo debe de encontrarse completamente en posicin
vertical.
8. La lnea que pase al nivel del tope de la columna de eritrocitos indicara la fraccin
del volumen de estos.

METODOLOGA Y TCNICAS DE CONTROL DE CALIDAD DEL REA.

FASE PREANALTICA: Control de la muestra

Es importante tener cuidado con ella desde su obtencin hasta el momento en que es
utilizada para llevar a cabo la metodologa antes descrita, en resmen, se requiere de una
muestra, que esta sea: Bien obtenida, bien transportada, bien procesada, bien conservada y
bien identificada

Manejo de los aparatos.

Formacin especfica del personal, es importante que el personal sepa utilizar los aparatos
que sern necesarios para llevar a cabo los anlisis.

Guas de manejo o procesos normalizados de operacin (PNO) siempre presentes.

Calibracin:

Es necesario que tanto los aparatos como los materiales volumtricos o de medicin se
encuentren bien calibrados, pues esto garantiza la confiabilidad y exactitud de los
resultados. La calibracin puede ser: programada (tras sustitucin de componentes
peridicos

Reactivos- o tras un tiempo prolongado sin ser utilizado) y no programada (tras la aparicin
desviaciones).

Mantenimiento.
Tanto las instalaciones como los instrumentos y aparatos realizados deben contar con un
mantenimiento adecuado, este mantenimiento puede ser: peridico (con carcter
preventivo), o correctivo (por averas o mensajes de error).

FASE ANALTICA: Valoracin de la precisin:

Mediante muestras control comerciales de sangre total.

Las primeras determinaciones del da son 2 muestras control (una de nivel alto y
otra bajo)
Se intercalan varias muestras control entre los especmenes procesados y se evala
la dispersin.

Valoracin de la exactitud:

Regla de los 3: En el caso del hematocrito se utiliza el valor de la concentracin de

hemoglobina, su relacin est dada por: [Hemoglobina] x 3 = Hematocrito 3

FASE POSTANALTICA: Criterios de revisin de los resultados:

Las sangres sospechosas se observan al microscopio (extensiones) cuando tras el anlisis:

No se tienen resultados
Hubo alguna alarma o fallo en los aparatos.
Se obtuvo un nmero o proporcin de algn tipo de clulas normales fuera de los
rangos prefijados de revisin.

VALORES DE REFERENCIA

Los resultados normales varan, pero en general son:

Hombres: de 40.7% a 50.3%

Mujeres: de 36.1% a 44.3%

Los resultados normales para los nios varan, pero en general son:

Recin nacido: 45% a 61%

Lactante: 32% a 42%
Los ejemplos anteriores muestran las mediciones comunes para los resultados de estas
pruebas. Los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes
laboratorios. Algunos laboratorios usan diferentes medidas o pueden analizar diferentes
muestras. Hable con el mdico acerca del significado de los resultados especficos de su
examen.

INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS.

El resultado obtenido por los mtodos tanto macro como micro es un porcentaje que se
compara con los siguientes, que actan como valores de referencia:

Tras una centrifugacin de la sangre total se pueden apreciar dos niveles, uno con el
depsito de los glbulos rojos, principalmente y en color rojo oscuro, otra capa blanca, de
leucocitos y una delgada de color gris, que son plaquetas y finalmente otro nivel del plasma
total, de un leve color amarillento. La disposicin celular en los tubos es: Con el valor
hematocrito se confirma el diagnostico de diferentes enfermedades y patologas,
principalmente de las anemias y la policitemia. Normalmente, el valor hematocrito se
realiza en un anlisis completo de hematimetra, donde consta el recuento de hemates. Los
patrones de los valores del hematocrito dependen de la edad y del sexo, as como de la
altitud geogrfica. Otra de las observaciones a tener en cuenta es que los valores varan de
un laboratorio a otro. De acuerdo a esto, un ndice bajo de Hematocrito puede deberse a:

Anemia
Fallos en la mdula sea (Radiaciones, toxinas, fibrosis, tumores, etc.)
Embarazo
Hemorragias
Hipertirodismo
Hemolisis (destruccin de glbulos rojos) por una transfusin
Leucemia
Problemas de alimentacin
Artritis reumatoide

Y un ndice alto de Hematocrito puede deberse a:

Cardiopatas
 Deshidratacin
Eclampsia (en el embarazo)
Enfermedades pulmonares crnicas
Exceso de formacin de hemates (eritrocitosis)
Policitemia vera
Choque (shock)

COMO SE VALIDA LA CORRIDA.

La validacin de los resultados es el proceso por el que un facultativo se responsabiliza de

los resultados, mediante la firma del informe.

Validacin tcnica: Comprobacin de criterios de calidad de las muestras y resultados no

aberrantes.

Validacin facultativa: Revisin de resultados sospechosos. Procedimientos de

confirmacin como la observacin de extensiones sanguneas, que lleven a confirmar o
descartar los resultados obtenidos. Repeticin de la prueba realizada, de ser necesario.

CONCLUSIONES.
En esta prueba se mide la cantidad de eritrocitos de la sangre en porcentaje del total, o lo
que es lo mismo, el porcentaje de clulas que transportan oxgeno frente al volumen total de
sangre, determinado por proceso de centrifugacin En este proceso, se pueden apreciar dos
niveles, las clulas sanguneas que se sedimentan, y el plasma total que flota. En definitiva
es la relacin porcentual entre ambos lo que representa el valor hematocrito. Tambin, en
este trabajo se trat de dar una idea de los controles de calidad necesarios para llevar a cabo
la prueba de manera correcta y satisfactoria, y de esta manera obtener resultados confiables.
DETERMINACIN DE LA HEMOGLOBINA
FUNDAMENTO:
La hemoglobina es una protena conjugada que sirve para el transporte de oxgeno y
dixido de carbono. La masa total de eritrocitos de un adulto contiene unos 600gr. De
hemoglobina capaces de transportar 800ml de oxgeno.
Una molcula de hemoglobina consta de 2 pares de cadenas polipepticas (unin de
aminocidos) (globina) y 4 grupos proteicos HEM que contienen cada uno un tomo de fe
en estado ferroso. Cada punto HEM se localiza en una zona determinada de una de las
cadenas de polipepticos. Localizando cerca la superficie de la molcula, el HEM se
combina de forma reversible con una molcula de oxgeno y dixido de carbono. Este
grupo HEM es el responsable del color rojo de la hemoglobina (hb).

La parte proteica o globina tiene 4 cadenas polipeptidicas que se denominan con las letras
, , , . Existe una cadena ms la que est presente durante los 3 primeros meses de
vida se diferencian unas de las otras en el numero o posicin (de los aminocidos de los que
estn compuestas). Por lo tanto existen varios tipos de hb. En el ser humano se pueden
encontrar las siguientes hemoglobinas normales:
Hemoglobina A: consta de 2 cadenas y 2 cadenas en un adulto normal corresponde a
ms del 95% del total.
Hemoglobina A: consta de 2 cadenas y 2 cadenas en un adulto sano est en porcin
menor de 3%.
Hemoglobina F (fetal): consta de 2 cadenas y 2 cadenas . Es la hemoglobina principal
en el feto desde el 4 mes del embarazo hasta aproximadamente los 6 meses de edad. La Hb
F tiene mayor afinidad por el oxgeno.
Hemoglobina Gower: consta de 2 cadenas y 2 cadenas . Desaparece casi por completo
en el tercer mes de embarazo y empieza a aparecer la Hb fetal.
Algunos datos se obtienen examinando a simple vista una muestra de sangre. Un aspecto
normal del suero o del plasma revela que el pigmento est en los glbulos rojos. Si se agita
en una sangre total normal en el aire durante 15 min. Adquiere un color rojo claro por
convertir la Hb en oxihemoglobina.
La sangre tiene un color rojo cereza brillante cuando el pigmento es carboxi-hemoglobina
en la intoxicacin por CO. El color es chocolate en la metahemoglobulemia y la banda
malvada en alsulfohemoglobulemia.

Las distintas Hb tienen espectros de absorcin caractersticas a las que determina en un

espectrofotmetro. La identificacin de diferentes formas de la Hb con la determinacin de
sus espectros de absorcin puede hacerse de una manera sencilla
Objetivo:
Determinar cuntos gr de hemoglobina (Hb) hay en toda la sangre circulante, para tener un
diagnstico clnico ya que se pueden variar diversas enfermedades debido a un valor
anormal de Hemoglobina.
Material y Equipo:
Un colormetro fotoelctrico o un espectrofotmetro.
Una pipeta de vidrio graduada de 5 mL
Pipeta semiautomtica
Tubos de ensayo.
Cubetas cuadradas.
Gradilla
Reactivos:
EDTA
Reactivo Drabkin
Ferrocianuro de potasio
Cianuro de potasio
Bicarbonato de potasio
Solucin estndar de cianometahemoglobina

Reactivos biolgicos:
Sangre venosa con EDTA.
PROCEDIMIENTO:
1. En un tubo de 13 x 100 colocar exactamente 5 mL de reactivo de Drabkin, marcarlo
como problema (P).
2. Obtener 5 ml de sangre venosa con anticoagulante (EDTA).
3. Mezclar perfectamente la sangre problema, por inversin por lo menos 20 veces
antes de tomar la muestra.
4. Con una pipeta automtica o pipeta de Shali se toma exactamente 0,02 mL (20 L)
de sangre total, limpiar luego la punta de la pipeta.
5. La sangre tomada del tubo con EDTA se vierte en el tubo que contenga reactivo de
Drabkin. Se enjuaga 3 veces y se mezcla.
6. Mezcle la solucin de Drabkin con la sangre por inversin y con mucha precaucin
(utiliza parafilm para tapar los tubos, recuerda que el reactivo tiene cianuro, el cual
es un VENENO).
7. Dejar en reposo por espacio de 3 a 5 minutos. Para que se efecte la reaccin.
8. Despus de ese tiempo se observara una coloracin roja transparente, se llena las
cubetas hasta la marca que se encuentra y se procede la lectura.
9. Leer en absorbancia con filtro verde a 540 nm llevando a cero el fotmetro con agua
destilada /Drabkin.

Antes de hacer la medicin con el espectrofotmetro hacer el siguiente procedimiento

PARA HACER LA MEDICION DE TRANSMITANCIA HACER EL SIGUIENTE

PROCEDIMIENTO:
Medicin de Transmitancia:
1. Encender el Espectrofotmetro 30 minutos antes, despus seleccione la longitud de
onda deseada (540 nm para Hb) con las teclas numricas y oprima <GO
TO>. Aparecer en la pantalla el valor numrico.
2. Presine < %T> para Transmitancia. Aparecer en la pantalla T.
3. Insertemla cubeta con el blanco en el portacubeta, cierre la puerta y oprima
<SECOND FUNCTION> Y <100 %>. Aparecer En la pantalla 100.0 T.
 4. Remueva el blanco e inserte la muestra problema contenida en la celda y cierre la
puerta.
5. Aparecer en la pantalla el valor en Transmitancia.
6. Si desea imprimir, oprima <PRINT> para avance de papel y/o una segunda vez para
la impresin en el papel del espectrofotmetro o <SECND REMOTE> para mandar
a un dispositivo externo (a la computadora).
7. Retire la cubeta del compartimiento y cierre la puerta (lave la cubeta y gurdela).
8. Si no va usar ms el aparato, apguelo y cbralo, si desea continuar trabajando, elija
el modo de trabajo siguiente y contine.
Resultado:
Este fue el resultado que nos sali en el espectrofotmetro.
Clculos:
461/.472 x 15 = 14.65
Rango:
Normal
Clculos:
Hb total = concentracin de Hb (gr/ml) x volumen sanguneo (ml). En espectrofotmetro
se aplica la siguiente formula:
muestra/ estandar x 15 = Hb.
Valores de referencia:
Nios al nacer.. 13,6 - 19,6 g/dL
Nios de 1 ao..... 11,3 - 13,0 g/dL
Nios de 10 -12 aos... 11,5 - 14,8 g/dL
Mujeres... 11,5 - 16,5 g/dL
Hombres. 14,0 - 18,0 g/dL
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS.

Al hacer la prctica notamos que para determinar este volumen que existe de Hb circulante
en la sangre es fcil y sencillo de sacar ya que a la hora de meterlo al espectrofotmetro
prcticamente nos dice todo solo hay que sacar el resultado haciendo la operacin bsica
que ya nombramos anteriormente.
Los exmenes de laboratorio pueden realizarse por muchas razones, como investigacin
rutinaria de salud o sospecha de enfermedad o de toxicidad. Tambin pueden ser utilizados
para determinar si la efectividad de un medicamento mejora o empeora. Los exmenes
pueden medir el xito o fracaso de un tratamiento. Pueden ser solicitados por razones
mdicas o legales. Las siguientes son posibles razones por las que este examen puede
realizarse:

Acidosis lctica
Anemia de clulas falciformes
Anemia por deficiencia de hierro
Embolia grasa
Conclusiones:
Existen varios factores para determinar cundo y con qu frecuencia se pueden realizar los
exmenes. Su duracin puede depender de los resultados o terminacin de otros exmenes,
procedimientos o tratamientos. Los exmenes pueden ser realizados inmediatamente en una
emergencia o pueden ser demorados conforme una condicin es tratada o monitoreada. Se
puede sugerir un examen o llegar a ser necesario cuando aparecen ciertos signos o
sntomas.
Debido a cambios de las funciones naturales del organismo durante el da, los exmenes
pueden ser realizados en una determinada hora. Si usted se ha preparado para este examen
con cambios en la ingesta de comida o lquidos, los exmenes pueden ser realizados de
acuerdo con estos cambios. Los intervalos para la realizacin de los exmenes pueden
basarse en el aumento o disminucin de los niveles de medicamentos, drogas u otras
sustancias en el organismo. La edad o el gnero de las
personas pueden influir en la fecha y la frecuencia con que se requiere un examen. Las
condiciones crnicas o progresivas pueden necesitar un monitoreo continuo mediante
exmenes. Ciertos exmenes pueden ser repetidos para obtener una serie de resultados o
para confirmar o refutar resultados. Las veces que deban realizarse los exmenes y su
frecuencia varan dependiendo si se llevan a cabo por razones profesionales o legales.
VELOCIDAD DE SEDIMENTACIN GLOBULAR
FUNDAMENTO:
La velocidad de sedimentacin globular se modifica siempre en que existe un desequilibrio
humoral que afecte a las protenas plasmticas: ndices elevados de fibringeno y en menor
grado de globulinas.
La VGS constituye una medida de agregabilidad de los eritrocitos y depende
fundamentalmente de los siguientes factores:
1. tamao de los eritrocitos
2. diferencia de densidad entre eritrocitos y el plasma
3. viscosidad plasmtica (concentracin de fibringeno y/o globulinas)
4. temperatura ambiente
Para la prueba la sangre no debe coagularse, motivo por el cual se adiciona a la sangre
extrada una sustancia anticoagulante (la ms comn es citrato sdico 3,8 %, en proporcin
volumtrica exacta de 1 parte de citrato por cada 3 de sangre).
La sangre homogeneizada se carga en una pipeta. Se acomoda la pipeta en un soporte y a
determinado tiempo preestablecido (60 minutos si est la pipeta a 90 grados de la mesa
donde se apoya el soporte, o menos tiempo cuanto menor sea el ngulo entre la mesa y la
pipeta; hay soportes especiales que permiten inclinaciones controladas para obtener ngulos
diferentes a 90 grados) se procede a leer cuntos milmetros han sedimentado (decantado)
los hemates.
La sedimentacin globular se realiza en tres etapas:
1. Hemaglutinacin: es la tendencia de los hemates a formar agregados en forma de
"pilas de monedas". Estos sedimentan de forma muy lenta por lo que van a
determinar la velocidad de todo el proceso
2. Sedimentacin: desplazamiento de los hemates hacia el fondo de la pipeta a
velocidad constante.
3. Acmulo o depsito en el fondo.
El principio fsico de esta prueba se basa en la Ley de Stokes, considerando los hemates
como esferas suspendidas en un medio infinito.
Objetivo:
Realizar la prctica de VSG correctamente y observar la velocidad de sedimentacin de la
sangre del paciente.
Hiptesis:
 1. Entre los factores fsicos que afectan la VSG se destacan la morfologa eritrocitaria
y el volumen corpuscular medio, observndose que a mayor tamao de los glbulos
rojos, mayor velocidad de sedimentacin.
2. Entre los factores no dependientes de la muestra y que afectan el resultado se
encuentran la temperatura, la hemlisis, el tiempo transcurrido desde la extraccin,
o la limpieza de material. Esto pone de manifiesto la importancia de la perfecta
estandarizacin del mtodo.
3. Uno de los efectos sistmicos que tiene el proceso inflamatorio es un aumento de la
VSG.
Material:
Pipeta de sedimentacin (tubo de westergreen o wintrobe).
Soporte con capacidad variable que inmovilice la pipeta en posicin vertical.
Pipetas Pasteur con punta larga o cualquier otro sistema de succin.
PROCEDIMIENTO:
1. Mezclar el tubo de sangre perfectamente con agitacin mecnica.
2. Llenar el tubo de wintrobe hasta que la sangre alcance la marca de 0 mm.
3. Colocar el tubo de wintrobe verticalmente en el soporte.
4. Cuidar que la temperatura se encuentre entre 10 y 25 c
5. Dejar reposar durante 1 hora exactamente.
6. Transcurrido el tiempo, se lee la distancia existente entre la superficie del meisco
correspondiente a la columna eritrocitaria y la parte superior de la columna de
sangre, situada a nivel de la marca o de la escala graduada. El valor de (esta
distancia se expresa en mm/hr).
Marco terico:
La sedimentacin globular se produce debido a que la densidad de los eritrocitos es mayor
que la del plasma. La cada de los eritrocitos ocasiona un desplazamiento hacia arriba del
plasma, produciendo as una corriente ascendente y una fuerza de retardo, por lo tanto la
velocidad de sedimentacin globular (VSG) depende de la interaccin entre fuerzas fsicas
opuestas.
En sangre de personas normales estas fuerzas opuestas tienden a igualarse y
consecuentemente la VSG es mnima.
Los valores de referencia son:
Nios y adolescentes: 1-13 mm/hr
Hombres: 0-5 mm/hr
Mujeres: 0-13 mm/hr
INTERPRETACIN DE LOS RESULTADOS:

La velocidad de sedimentacin globular de la muestra estuvo dentro de lo normal saliendo

como resultado: 7 mm/hr.
Conclusin:
La prctica de sedimentacin de glbulos en la sangre es muy importante ya que alerta
sobre procesos infecciosos e inflamatorios en el paciente y puede causar la muerte.
CONTEO DE GLOBULOS ROJOS
FUNDAMENTO
Para el recuento en cmara de glbulos rojos, se diluye la sangre problema en un lquido
apropiado y posteriormente se deposita en la cmara de recuento, donde se cuentan clulas
presentes en algunos cuadrados de uno de los retculos.
Material:
Una pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glbulos rojos.
Un tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora.
Una cmara de recuento, con un retculo tipo Neubauer mejorado.
Un cubre (hay unos cubres especiales para su uso en recuentos con cmara).
Un microscopio.
Reactivos
Lquido de dilucin. ste debe de ser isotnico con el plasma, para evitar la
alteracin morfolgica e incluso la lisis de los hemates.
El ms utilizado es el de Hayem, que se compone de las siguientes sustancias:
2,5 g de sulfato sdico.
0,5 g de cloruro sdico.
0,25 g de cloruro mercrico.
100 ml de agua destilada.
Si contiene precipitados, antes de usarlo deber ser filtrado.
Muestra
Sangre capilar obtenida por puncin del pulpejo de un dedo, o sangre venosa procedente de
una puncin venosa y anticoagulada con EDTA.
PROCEDIMIENTO:
1. Situar un cubre sobre el retculo de la cmara. Para facilitar su adhesin a sta, se
ejerce una ligera presin al tiempo que se desliza el cubre sobre las bandas laterales,
previamente humedecidas con H2O, de su porcin central.
2. Aspirar la sangre hasta la seal de 0,5 ( si se cree que puede haber una policitemia)
o hasta la de 1 ( si se piensa que puede existir una anemia).
3. Limpiar cuidadosamente el exterior de la pipeta con un algodn.
4. Aspirar lquido diluyente hasta la seal de de 101.
5. Quitar el tubo de goma y homogeneizar el contenido moviendo la pipeta con
cuidado durante 2 o 3 minutos.
6. Desechar las tres primeras gotas y depositar la cuarta entre la cmara y el cubre.
7. Dejar reposar la sangre unos minutos para qie las clulas presentes puedan
sedimentarse.
 8. Enfocar el retculo con el objetivo de 40 x y verificar que la distribucin de los
hemates es homognea.
9. Contar los hemates presentes en 80 cuadros pequeos del cuadro grande central,
esto se logra contando los 4 cuadros medianos de las esquinas y en el del centro.,
solo se cuentan los hemates contenidos dentro del cuadro y los que estn en
contacto con las lneas de demarcacin superior o derechas y se sigue un orden en
zig-zag.
VALORES DE REFERENCIA
(Millones de clulas/mm3)
Hombres:...4 500 000-5 500 000
Mujeres:....4 000 000-5 000 000
Nios (4 aos):.........................4 200 000-5 200 000
Lactantes (1-6 meses):.....3 800 000-5 200 000
Recin nacidos:5 000 000-6 000 000

CONCLUSIN
Los eritrocitos o glbulos rojos son clulas de color amarillento, con la forma de un disco
bicncavo, sin ncleo y contienen un pigmento llamado hemoglobina que les otorga su
caracterstico color.
Estos se forman constantemente en la medula sea, en el crneo, las costillas, las vrtebras
y el esternn, en un proceso conocido como eritropoyesis. Viven aproximadamente 120
das y al envejecer son destruidos por las clulas reticuloendoteliales del hgado, la medula
sea y el bazo.
La falta de ncleo le confiere la virtud de acarrear oxigeno sin consumir nada de l.
La pipeta de Thoma para glbulos rojos est constituida por dos porciones capilares y un
bulbo central. El tubo capilar inferior est dividido en 10 partes iguales con marcas de 0.5 y
1.0. En el interior del bulbo existe una perlita de plstico roja para favorecer la mezcla de
sangre con el lquido y en el capilar superior hay una marca de 101.
BIBLIOGRAFA:
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