ANTIBIOGRAMA Y DETECCIN DE MECANISMOS DE RESISTENCIA

Generalidades:
Las resistencias antibacterianas es la capacidad que tienen las bacterias de
soportar los efectos de los antibiticos o biocidas destinados a eliminarlas o
controlarlas, entre ellas encontramos:
Antibiograma; es una prueba microbiolgica que se realiza para determinar la
susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de una bacteria a un grupo de antibiticos
que se sospecha es la responsable de una infeccin a uno o varios antibiticos y
tambin de seguir la evolucin de las resistencias bacterianas.(1) Es una
herramienta imprescindible para establecer medidas epidemiolgicas, adecuacin
de los tratamientos y aplicacin de polticas de antimicrobianos. La lectura
interpretada del antibiograma trasciende la vertiente clnica del microbilogo y es
til en la toma de decisiones. (2)
BLEE (Betalactamasas de Espectro Extendido) son antibiticos de accin
bactericida que actan sobre la fase final de sntesis del peptidoglicano. En
presencia de antibitico, las transpeptidasas hidrolizan el enlace amida del anillo
betalactmico y se forma un ster estable entre el compuesto hidrolizado y un grupo
hidroxilo de la serina del sitio activo de la enzima. Con ello se inhibe la
transpeptidacin, se desestabiliza la pared celular y finalmente se produce la lisis
bacteriana mediada por autolisina, que sera el principal mecanismo de resistencia
en gramnegativos que en este caso, sera E.coli. (3)
Resistencia a la meticilina implica resistencia a todos los betalactmicos,
incluyendo penicilinas, combinaciones de betalactmico con inhibidor de
betalactamasa, cefalosporinas (con la posible excepcin de las cefalosporinas
ceftobiprole y ceftarolina), monobactamas y carbapenemas (con la posible
excepcin de razupenem),esto quiere decir, que la resistencia a la meticilina
(oxacilina, meticilina, cloxacilina, nafcilina) en estafilococos se debe a la
adquisicin de ADN exgeno que codifica la produccin de una protena fijadora
de penicilina (PBP)supernumeraria, de baja afinidad por los betalactmicos y
que no se inhibe por estos antimicrobianos. (4)
Resistencia a macrlidos, (eritromicina, claritromicina, azitromicina,
midecamicina) puede asociarse a diferentes fenotipos de sensibilidad o de
resistencia a las lincosamidas (clindamicina) que se pueden identificar en el
laboratorio mediante el mtodo de difusin con discos de eritromicina y
clindamicina o mediante dilucin en caldo utilizando una combinacin de ambos
antimicrobianos. Los fenotipos que se observan mediante difusin con discos
son: 1) resistencia a la eritromicina y a la clindamicina; 2) resistencia a la
eritromicina y sensibilidad a la clindamicina pero con un achatamiento del halo
de la clindamicina en la proximidad de la eritromicina (D-test positivo); 3)
resistencia a la eritromicina y sensibilidad a la clindamicina sin achatamiento del
halo (D-test negativo). (5)
Objetivos:

Metodologa:
En primera instancia, se realiz el antibiograma con la bacteria Klebsiella
pneumoniae. Utilizando un hisopo esterilizado se cogi de 1 a 2 colonias del cultivo
agar sangre y se lo mezcl en el tubo que contena suero fisiolgico quitando el
exceso en las paredes de ste hasta llegar a una turbidez equivalente al patrn de
0,5 en la escala de Mc Farland; con el mismo hisopo, sembramos de manera
continua y girando en el agar de Mueller Hinton. Luego se colocaron los discos con
los antibiticos correspondientes con las pinzas estriles en el agar: ceftazidime,
cefepime, ciprofloxacina, gentamicina y ampicilina.
Para la prueba BLEE (Betaloactamasas de Espectro Prolongado) que se realiz
exclusivamente para la bacteria Escherichia coli, se hizo el mismo procedimiento
anterior: utilizando un hisopo esterilizado se cogi de 1 a 2 colonias del cultivo agar
sangre y se lo mezcl en el tubo que contena suero fisiolgico hasta llegar a una
turbidez equivalente al patrn de 0,5 en la escala de Mc Farland y con el mismo
hisopo se realiz la inoculacin en el agar Mueller Hinton. La diferencia que se
colocaron diferentes discos con los antibiticos: amoxicilina + cido clavulnico, que
deben estar en el centro del agar Mueller Hinton y alrededor de stas se ubicaron
cefalosporinas.
Y para la prueba de resistencia a meticilina y macrlidos, se utiliz colonias de S.
aureus; con el hisopo ya esterilizado se cogi de una a dos colonias del cultivo agar
sangre y se lo mezcl en el tubo de suero fisiolgico para llegar a tener un patrn
equivalente de 0,5 en la escala de Mc Farland. Tambin se realiz la inoculacin
utilizando el mismo hisopo en el agar Mueler Hinton. Los discos que se ubicaron en
esta prueba fueron cefoxitina y oxacilina (resistentes a meticilina) y clindamicina y
eritromicina (resistentes a macrlidos).
Para estas tres diferentes pruebas se incubaron a 37C en la estufa por un tiempo
de 24 horas.
 Resultados:

Bacteria Antibiticos Sensible Intermedio Resistente

Ceftazidime 24mm

Cefepime 22mm
Klebsiella
pneumoniae Ciprofloxacino ----

Gentamicina 11mm

Ampicilina ----

Fig. 1. Antibiograma (21-06-17).

Klebsiella pneumoniae

Fig. 2. BLEE. (21-06-17). Fig.3. Meticilina y Macrlidos. (21-06-17).

E. coli BLEE: Negativo S. aureus sensible a Meticilina: Positivo
S. aureus resistente a Macrlidos: Negativo

PoP
Conclusiones:

Bibliografa:
(1) (2) guila, A. (2016) Antibiograma. Qu es? Y Cmo interpretarlo? Facultad
de Medicina. Universidad de Panam.
(3) Garca, A; Torres, A; Ruiz, J. (2011) Bacteriemias por Escherichia coli
productor de betalactamasas de espectro extendido (BLEE): significacin clnica y
perspectivas actuales. Departamento de Medicina Interna, Facultad de Medicina
Universidad de Murcia.
(4) (5) Ardanuy, C; Cercenado, E; Morosini, M; Torres, C. (2011) Deteccin
fenotpica de mecanismos de resistencia en grampositivos. Seimc. Espaa.