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EXTRAO E CARACTERIZAO QUMICA DE CAROTENOIDES

PRODUZIDOS PELA LEVEDURA PSEUDOZYMA SP 300

Helan carlos Silva Oliveira1 Resumo:


Gildomar Lima Valasquez 2 Carotenoides so corantes naturais responsveis pelas cores
amarelas, laranja e vermelho, utilizados nas indstrias
1
Discente da Universidade alimentcia, farmacutica, de cosmticos e rao. So
Estadual do Sudoeste da Bahia- encontrados em fungos, bactrias, leveduras, animais, em
UESB- Brasil. tecidos verdes de plantas e de rgos no fotossintticos
2
Docente da Universidade Estadual como frutas, flores, sementes e razes. As leveduras
do Sudoeste da Bahia- UESB-
destacam-se pelo seu uso como fonte proteica, capacidade de
Brasil.
crescimento em substratos de baixo custo e alto teor de
acar. Este trabalho descreve processo de extrao e
caracterizao de carotenoides visando seu uso na indstria
alimentcia e farmacutica. O microrganismo utilizado neste
trabalho foi a levedura pseudozyma sp 300 por apresentar
altas taxas de crescimento em substratos de baixo custo e de
alto teor de acar. Aps cultivo, o pigmento produzido foi
extrado por diferentes tcnicas de extrao com os solventes:
acetona, etanol, dimetilsulfxido(DMSO), associadas ao
sistema de ultrassom. Aps extrao, utilizou-se o espectro na
regio UV/vis e o infravermelho para caracterizao dos
carotenoides. O espectro UV-VIS das amostras de
carotenoides foram identificados, a amostra 1 obteve a
absoro mxima em 534,97 nm. Amostra 2,3 e 4 teve
respectivamente 469,94nm, 454,96nm e 469,94nm. No
infravermelho as bandas de absoro entre 3273 - 2880 cm-1
foram muito intensas e largas em todas as amostras, devido
s vibraes de estiramento C-H de compostos
hidrocarbonetos alifticos. As bandas entre 1700 a 1800 pode
ser atribuda deformao assimtrica CH3 e tenso da
ligao C=C. A presena das bandas de flexo C-H, tenso da
ligao C-C e a ligaes C=C nos fornece fortes indcios da
presena de b-caroteno, sendo indicado agora que as
mesmas amostras sejam caracterizadas por cromatografia
lquida de alta eficincia (HPLC).

Palavra-chave: Leveduras, carotenoides, infravermelho.


Abstract

Carotenoids are natural pigments responsible for the yellow,


orange and red, used in food, pharmaceutical, cosmetics and
food. They are found in fungi, bacteria, yeasts, animals in
green tissues of plants and non-photosynthetic organs such as
fruits, flowers, seeds and roots. Yeasts stand out for its use as
a protein source, growth capacity in low-cost and high-sugar
substrates. This paper describes the extraction process and
characterization of carotenoids aiming its use in food and
pharmaceutical industry. The microorganism used in this work
was the yeast Pseudozyma sp 300 to present high growth
rates in low-cost, high-sugar substrates. After cultivation, the
pigment produced was extracted by different extraction
techniques with solvents: acetone, ethanol, dimethylsulfoxide
(DMSO), associated with the ultrasound system. After
extraction, we used the spectrum in the UV region / vis and
infrared characterization of carotenoids. The UV-VIS spectra
of samples of carotenoids have been identified, the sample 1
obtained maximum absorption at 534.97 nm. Sample 2,3 and
4 respectively had 469,94nm, 454,96nm and 469,94nm. In the
infrared absorption bands between 3273 - 2880 cm-1 were
very intense and broad in all samples due to CH stretching
vibrations of aliphatic hydrocarbon compounds. The bands
between 1700 to 1800 can be attributed to the asymmetric
deformation of the CH3 and voltage C = C bond. The presence
of CH bending bands, DC link voltage and the C = C bonds
provides strong evidence of the presence of b-carotene, being
shown now that these strains are characterized by high-
performance liquid chromatography (HPLC).

Keyword: Yeast, carotenoids, infrared.


1.0 INTRODUAO:

Os carotenoides so corantes naturais responsveis pelas cores


amarelas, laranja e vermelho, utilizados nas indstrias alimentcia, farmacutica,
de cosmticos e rao. Muitos microrganismos produzem carotenoides, porm
nem todos so industrialmente interessantes. As leveduras destacam-se pelo
seu uso como fonte proteica, capacidade de crescimento em substratos de baixo
custo e alto teor de acar1,2.

Os carotenoides tambm podem ser utilizados para o enriquecimento de


alimentos devido a sua atividade pr-vitamnica A e as propriedades que
resultam em possveis funes biolgicas benficas sade, tais como o
fortalecimento do sistema imunolgico e a diminuio do risco de doenas
degenerativas3.

Os carotenoides tm um carter lipoflico forte e so geralmente


analisadas em solventes orgnicos. No entanto, por causa da sua atividade
biolgica, a caracterizao destes compostos de grande importncia. Portanto,
o objetivo do referido trabalho realizar a extrao com trs diferentes solventes
orgnicos e caracterizar cada uma das amostras utilizando a tcnica de
espectroscopia de absoro e infravermelho4.

2.0 MATERIAS E MTODOS

2.1 EXTRAO:

O mtodo de extrao utilizado foi a permeabilizao de membranas com


o dimetilsufxido (DMSO), acetona e etanol, utilizando como solvente extrator o
ter etlico. No processo de extrao obteve quatro amostras diferentes. Amostra
1- Acetona colorao Rosa, 2- Acetona colorao Amarela, 3- DMSO e 4-
Etanol.

2.2 ANLISE EM ESPECTROFOTMETRO:

Os carotenides extrados foram medidos no aparelho. Realizou-se um


branco como segue no procedimento padro e as amostras foram medidas em
espectrofotmetro a 450 nm, traando os resultados em um grfico de disperso
identificando o pico de cada amostra.

2.3 ANLISE POR ESPECTROSCOPIA NO INFRAVERMELHO:

A espectroscopia no infravermelho tem sido utilizada para identificao de


grupos funcionais. No presente trabalho foi feito a leitura das quatro amostras,
analisando assim o espectro caracterstico de cada amostra.

3.0 RESULTADOS E DISCUSSO

3.1 PROCESSO DE EXTRAO;


Para fazer uma anlise qualitativo ou quantitativo dos carotenoides
produzidos por leveduras, comumente realizada um processo de extrao dos
compostos de interesse. Seguidamente, e realizada uma anlise utilizando
tcnicas analticas como cromatografia de gases e espectrometria de massas.
Sendo os mtodos de extrao um passo necessrio das anlises das
biomolculas provenientes das leveduras, e importante considerar os mtodos
de extrao que comumente so utilizados5. No presente trabalho, a extrao
ocorreu de modo satisfatria, sendo avaliado somente aspectos qualitativos, e
em seguida os produtos extrados foram caracterizados por espectrofotmetro
de absoro e espectroscopia no infravermelho.

O espectro na regio UV/vis dos carotenoides de grande importncia


para o analista, pois fornece valiosas informaes sobre a estrutura da
substncia. O espectro caracterstico dos carotenoides consequncia da
presena da longa cadeira com duplas ligaes conjugadas. Quanto maior o
nmero de duplas ligaes conjugadas, menos energia necessria para
promover a excitao e consequentemente o valor do comprimento de onda
mximo maior. Ao menos 7 duplas ligaes conjugadas so necessrias ao
carotenoide para que haja percepo de cor pelo olho humano. O zeta-caroteno,
com 7 duplas ligaes conjugadas tem colorao amarela plida, enquanto o
fitoeno e fitolueno que apresenta 3 e 5 duplas ligaes, so incolores6.

O espectro UV-VIS das amostras de carotenoides foram ento


identificados. A amostra 1 obteve a absoro mxima em 534,97 nm. Amostra
2,3 e 4 teve respectivamente 469,94, 454,96 e 469,94. Como pode ser
evidenciado nos grficos abaixo.

FIGURA 01- ESPECTRO UV-VIS DAS AMOSTRAS DE CAROTENOIS


Os espectros de absoro no UV-Visvel dos carotenides tm um perfil
caracterstico entre 400 e 500 nm, com max por volta de 450 nm e normalmente
duas bandas menores de cada lado. A posio exata dos mximos de absoro
varia de pigmento para pigmento e suficientemente diferente para a
identificao de cada carotenide.7 As coloraes variam desde o amarelo,
passando pelo laranja, at o vermelho intenso, e resultam das ligaes duplas
conjugadas na estrutura mais freqente, do tipo C40.

Foi feita a comparao dos espectros UV-Vis do pigmentos extrados por


diferentes solventes com os espectros de diversos carotenoides j relatados em
outros trabalhos acadmicos. O espectro da amostra 1 se aproxima ao espectro
das betalanas. O espectro das betalanas depende dos grupos R1-N-R2.
Quando R no estende a conjugao do grupo imino, a substncia exibe
absoro mxima em 480 nm, caracterstico das betaxantinas. Porm, se o
grupo R permite a extenso da conjugao do sistema, a absoro mxima
ocorre em 540 nm, caracterstico das betacianinas8. O espectro da amostra 2 e
amostra 4 so totalmente similares um ao outro, apresentando uma banda
com mx ~469, caractersticos da configurao cis do b-caroteno. O espectro do
amostra 3 apresenta grande similaridade com o espectro do -caroteno, sendo
observada uma banda com mx ~ 454 nm, caracterstica das ligaes duplas
conjugadas do -caroteno9.

Espectros de absoro obtidos no UV / Vis foram usadas para deduzir as


caractersticas estruturais das molculas, no entanto ele no pode ser avaliado
sem a comprovao por outros mtodos. As molculas de carotenoides embora
constituem uma ampla famlia com uma ampla diversidade estrutural, os
espectros so muitos semelhantes uns aos outros. Para identificao e
elucidao estrutural de cada molcula, necessrio um conjunto de tcnicas
tais como UV/visvel, infravermelho, cromatografia, ressonncia, espectrometria
de massa entre outros.

3.3 LEITURA NO INFRAVERMELHO

A espectroscopia no infravermelho tem sido utilizada para identificao de


grupos funcionais. A regio do espectro eletromagntico correspondente ao
infravermelho tem o comprimento de onda 2,5 a 15 u (4000 a 667 cm-1). a
regio onde est localizada a maior parte da energia das vibraes moleculares.
As vibraes de tomos ou de grupos funcionais de um dado composto tm
frequncia caracterstica e atravs da anlise detalhada das bandas vibracionais
de absoro, consultas das tabelas e compilaes espectrais das literaturas
publicadas, obtm-se informaes necessrias para a identificao de estruturas
e, consequentemente determinar a estrutura da molcula de interesse6,10.

Usualmente, as anlises por frequncias so utilizadas para determinar a


presena ou ausncia de grupos funcionais em uma determinada molcula
ajudando assim na elucidao da estrutura molecular. As frequncias
vibracionais dos grupos funcionais podem ser encontradas no espectro em
diferentes regies, a Fig. 02 apresenta as regies onde se encontram alguns
grupos funcionais caractersticos.

FIGURA 02: Regies espectrais de alguns grupos funcionais caractersticos27

Os espectros obtidos so apresentados na Fig. 3.

FIGURA 03- Regies espectrais de alguns grupos funcionais caractersticos


O espectro no infravermelho das amostras de carotenoides avaliado na
regio espectral entre 4000 - 667 cm-1. As bandas de absoro entre 3273 -
2880 cm-1 so muito intensas e largas em todas as amostras, devido s
vibraes de estiramento C-H de compostos hidrocarbonetos alifticos. As
bandas entre 1700 a 1800 pode ser atribuda deformao assimtrica CH3 e
tenso da ligao C=C. Sabe-se que os principais sinais para identificao dos
carotenides so de flexo C-H, tenso da ligao C-C e tenso da ligao
C=C6,10.

A espectroscopia no infravermelho, pela riqueza em bandas de absoro,


na maioria das vezes de boa resoluo, um mtodo apropriado para obter as
informaes necessrias para o reconhecimento e a identificao de estruturas
moleculares. Percebe-se se que, diante os espectros obtidos no infravermelho,
possvel descartar a presena da betalanas nas amostras. A presena das
bandas de flexo C-H, tenso da ligao C-C e a ligaes C=C continua a nos
d fortes indcios da presena do carotenoide b-caroteno, sendo indicado agora
que as mesmas amostras sejam caracterizadas por cromatografia lquida de alta
eficincia (HPLC).
REFERNCIAS:

1. Niizu, P. Y.; Dissertao de Mestrado, Universidade Estadual de


Campinas, Brasil, 2003.
2. Silva, M. C.; Tese de Doutorado, Universidade Estadual de Campinas,
Brasil, 2004
3. LIBKIND, D., BROOCK, M.van. Biomass and carotenoid production by
patagoniam native yeasts. World Journal of Microbiology and
Biotechnology, 22: 687-692, 2006.
4. KRINSKY, N.I. Actions of carotenoids in biological systems. Annu. Rev.
Nutr., Palo Alto, v. 13, p. 561-587, 1993.
5. INFRA RUEDA, D. R.; SACALL, T; BAYER, R.K. Differences in the
interaction of water with starch and chitosan films as revealed by infrared
spectroscopy and differencial scanning calorimetry. v.40, p.49-56, 1999.
6. SIDNEY PACHECO; Espectros de absoro de luz dos carotenoids.
Acesso em 25 julho. Disponvel em:
http://www.cromatografialiquida.com.br/carotespec.htm
7. Harbone, J. B.; Phytochemical methods: A guide to modern techniques of
plant analysis, 2nd ed., Chapman and Hall: London, 1984, p. 55-136
8. Hamerski, L.; Rezende, M. J. C.; Silva, Usando as Cores da Natureza para
Atender aos Desejos do Consumidor: Substncias Naturais como
Corantes na Indstria Alimentcia B. V. Rev. Virtual Quim., 2013, 5 (3),
394-420. Data de publicao na Web: 21 de abril de 2013.
9. Marcos Coelho Mller, Delia B. Rodriguez-Amaya, Sergio O. Loureno.
Carotenides da cianobactria Synechocystis pevalekii produzida em
condies normais e sob limitao de nutrientes. Revista Brasileira de
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10. J. Larkin Peter IR and Raman Spectroscopy. - USA: Elsevier, 2011. - pp.
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