Universidade Federal de Juiz de Fora (UFJF)

Instituto de Cincias Exatas

Depto. de Qumica

QUI 070 Qumica Analtica V

Anlise Instrumental

Aula 11 Cromatografia Lquida de

Alta Eficincia (CLAE)

Julio C. J. Silva

Juiz de Fora, 2014

 Introduo
Cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) o tipo mais verstil e
mais amplamente empregado de cromatografia por eluio.

Na cromatografia lquida, a fase mvel um solvente lquido, o qual

contm a amostra na forma de uma mistura de solutos.

O tipo de cromatografia lquida de alta eficincia geralmente definido

pelo mecanismo de separao ou pelo tipo de fase estacionria:
(1) partio ou cromatografia lquido-lquido;
(2) adsoro ou cromatografia lquido-slido;
(3) troca inica ou cromatografia de ons;
(4) cromatografia por excluso;
(5) cromatografia por afinidade;
(6) cromatografia quiral.

A cromatografia lquida de alta eficincia (CLAE) tornou-se uma

ferramenta analtica indispensvel. Os laboratrios
criminais e os programas de televiso policiais e forenses, como CSI,
CSI Miami, Crossing Jordan e Law and Order, freqentemente
empregam a CLAE no processo de obteno de evidncias criminais.
 Introduo

Nos anos de 1960 que se desenvolveu a tecnologia para

produzir e utilizar recheios com dimetros de partculas to
pequenos como 3 a 10 m.

O termo cromatografia lquida de alta eficincia sempre

empregado para distinguir essa tecnologia dos procedimentos
cromatogrficos realizados em colunas simples que os
precederam.

A cromatografia de coluna simples, contudo, ainda encontra

considervel uso para propsitos preparativos.
 Instrumentao

Cromatografia lquida moderna:

Altas presses de bombeamento velocidades

razoveis por recheios de partculas muito
pequenas (3 10 m)

Equipamentos mais complexos

Equipamentos mais caros

Instrumentao
Instrumentao
 Instrumentao
Reservatrio de fase mvel
Sistemas de tratamento de solventes

Gases dissolvidos e material particulado devem ser retirados

Desgaseificadores vcuo, sistemas de destilao,

aquecimento e agitao e sistema de sparging

Sparging sistema pelo qual os gases dissolvidos so

arrastados para fora de um solvente por pequenas bolhas de um
gs inerte e solvel

Sistema de Eluio:

Isocrtico constituio do solvente permanece constante

Gradiente composio do solvente alterada

Instrumentao
 Instrumentao
Sistema de Bombeamento
Requisitos:
Habilidade de gerar presses altas (at 6.000 psi)

Sada livre de pulsao

Vazes na faixa 0,1 10 mL/min

Reprodutibilidade relativa da vazo de 0,5% ou melhor

Resistncia a corroso

Tipos de bomba:
De seringa

Bomba recproca

Bomba pneumtica de presso

 Instrumentao
Sistema de Bombeamento
Bomba de seringa (rosca):
Sada livre de pulsao
Pequena capacidade de volume ( 250 mL)
Troca de solventes difcil

Bomba recproca:
Fluxo pulsado que deve ser atenuado
Pequeno volume interno
Alta presso de sada (10.000 spi)
Eluio por gradiente
Vazes constantes

Bomba pneumtica de presso

Barata
Simples
Livres de pulsao
Eluio por gradiente no permite
Instrumentao
 Instrumentao
Sistema de Injeo da Amostra
Ala de amostragem
Permite a escolha do volume (5 a 500 L)
Boa preciso
Auto-amostradores
 Instrumentao
Colunas para cromatografia
Ao inoxidvel

Comprimento 10 a 30 cm

Dimetro 2 a 5 mm

Recheio partculas de 3 10 m

Microcolunas d.i = 0,1-5 mm, l = 3 8 cm, recheio = 3 5 m

Vantagens:
Maior eficincia da coluna
Menor consumo de solventes
Maior velocidade de eluio
 Instrumentao
Colunas para cromatografia

Microcolunas exemplo:
 Instrumentao
Colunas para cromatografia

Recheio

Slica (suporte) partculas com dimetros altamente uniformes

Fase estacionrio composto orgnico qumica ou fisicamente ligados a

superfcie do suporte.

Colunas de proteo (guarda)

Posicionada a frente da coluna analtica

Funo aumentar a vida til da coluna analtica
Composio semelhante a composio da coluna analtica

Termostato para coluna manter a temperatura sob

controle.
 Instrumentao
Detectores

Pequeno volume morto

Pequeno e compatvel com a vazo de lquido

No existe detector universal

Tipos de detectores:
Instrumentao
Detectores
Instrumentao
 Tipos de CLAE (partio)
Cromatografia por partio a fase estacionria
um lquido imiscvel com a fase mvel

Cromatografia por partio lquido-lquido FE

um solvente que imobilizado por adsoro

Cromatografia por partio com fase ligada FE

um composto orgnico imobilizado por ligaes
qumicas

Amplamente empregada
 Tipos de CLAE (Partio)
Recheios com fase ligada

FE diferentes polaridades

Caractersticas:
Maior estabilidade
Compatvel com CLAE por gradiente
Pequena capacidade de amostra

Recheios de Fase Normal e Reversa

Fase normal A FE polar e a fase mvel apolar

Fase reversa A FE apolar e a fase mvel polar

 Tipos de CLAE (Partio)
Escolha das Fases Mvel e Estacionria

Regra geral:
iguala-se a polaridade do analito com a da FE

Usas-se uma FM com polaridade diferente da FE

Analito e FM com polaridades semelhantes no vantajoso...

Analito e FE com polaridades muito parecidas tambm no

vantajoso...
 Tipos de CLAE (Partio)
Aplicaes:
 Tipos de CLAE (Partio)
Aplicaes:
 Tipos de CLAE (Adsoro)
CLAE por adsoro Os analitos so adsorvidos
sobre uma superfcie de um slido polar finamente
dividido (recheio)

A FM constituda por um solvente orgnico ou

por uma mistura de solventes orgnicos

A FE composta por partculas de slica ou alumina

 Tipos de CLAE (Troca Inica)
Existem dois tipos Baseadas em supressores e coluna
nica

Cromatografia de ons baseadas no uso de supressores:

Detector de condutividade sensveis, universais para

espcies carregadas, simples, baixo custo e fceis de serem
miniaturizados

Limitao alta concentrao de eletrlito para eluio da

maioria dos ons dos analitos

Conseqentemente alta condutividade e baixa

sensibilidade

Porm, em 1975...
 Tipos de CLAE (Troca Inica)

Porm, em 1975...

Coluna supressora de eluente coluna recheada com uma

resina trocadora de ons que converte os ons do solvente de
eluio para espcies moleculares de ionizao limitada

Na determinao de ctions:

Na determinao de anions:
 Tipos de CLAE (Troca Inica)

Supressora Coluna
Tipos de CLAE (Troca Inica)

Coluna de guarda
 Tipos de CLAE (Troca Inica)

Fluoreto

Cloreto
Sulfato
Tipos de CLAE (troca inica)
 Tipos de CLAE (Excluso)

O fracionamento baseado nos tamanhos

das molculas

Filtrao em gel recheio hidroflico

(espcies polares)

Permeao em gel recheio hidrofbico

(espcies apolares)
 Tipos de CLAE (Excluso)
Aplicao:
CLAE versus CG
 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

1. Silva, L.L.R. Notas de Aula. FACET, UFVJM, 2008.

2. Cadore, S. Notas de Aula. IQ, UNICAMP, 2004.

3. SKOOG, D. A; HOLLER, F. J.; NIEMAN, T. A., Princpios

de Anlise Instrumental, 5 edio, Editora Bookman,
2006.

4. COLLINS, H. C.; BRAGA, G. L.; BONATO, P. S.,

Fundamentos de Cromatografia, Editora Unicamp, 2006.