Receptores Celulares

ece btores
_e u.~ares
Temas de Biologa Celular
FNCLENTR()
,1 UPl Edito:
Taleisnik, Samuel
Receptores celulares y la transduccin de seales - 1a
ed. - Crdoba: Encuentro Grupo Editor, 2006.
272 p. ; 25x17 cm.
ISBN 987-23022-7-8
1. Biologa Celular. 1. Ttulo

CDD 571.6
2006 Samuel T aleisni k

2006 Encuentro Grupo Editor
Primera edicin
Impreso en Argentina
SBN: ISBN-lO: 987-2..'\022-7-8
rSBN-13: 978-987-23022-7-6
Quedo hecho el depsito que ruaren la ley 11.723
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de ser reproducida, almacenada o rransmitida por ningn medio. ya
sea electrnico, qumico, mecnico, ptico, de grabacin o por
fotocopia sin autorizacin previa del editor,
'-?E<l' . {B' Miembros de l. CMARA

~ Wnll '''I/1S ARGENTINA DEL LIBRO
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Crdoba - Argentina
Contenidos
,
CAPITULO 1. De la seal a la expresin gnica 1
l_1aea1~ -
1.2 Ligandos 1
1.3 Receptores 2
1.3.1 Unin de ligandos 3
1.3.2 Medicin de la afinidad 4
1.3.3 Agonistas y antagonistas 5
1.3.4 el asi ficaci IL ..::J.
1.411ansduac1ulln~due~s~e~liaul~es~ ~6
CAPTULO 2. Receptores acoplados a protenas G 7

2. 1 Receptores 7
2. 1. 1 Estructura., -'-
2 ..L2_Clasificaci.l'- 9.
2.1.3 Unin del ligando 11
2.1_4 Activacin _12
2.1 .5 Dmerizaciu; __I..>l.
2.1.6 Desensihilizacin.., ..Jl,",4

2.1.6.1 Eosforilacin 1S
2~L.6_.2..Ao:e.s.tina
. ,_ __....6.
2.1.6.3 Internalizacin 17
2.2 Las protenas G 17
2..2.1 Sllbllnida
2.2.1.1 Las subunidades a 18
2.2.1.2 La subunidad ~y 19
2.2.2 ADP-ribosilacin 21
2.2.3 Ciclo de activacin de protenas G 22
2.2.3.1 Proteinas RGS
2.2.4 Sistemas de eu:cmres
2.2.5 Activacin por receptores trosina guinasa 24

CAPITULO3. Sistemas mediados por el efector adenilato
C~.Q_ ~~
3.1 Adenilato ciclasa (AC) 27
3.1.1 Estructura 21
3..1.2.Jso(or.mas. 28
3.1.3 Regulacin de la actividad 29
3.2 Al\-fPcclico (AMPc) 31
3.2.1 Fosfodiesterasas (PDEs) 32
3.2.1.1 Estructura 32
3.2.1.2 Mecanismos de regulacin 32
3.2.2 Acciones 33
3.3 Protena quinasa A 33
3.3.1 Isoformas 34
3.3.2 Estructura de R 34
3.3.3 Estructura de C 35
3.3.4 Compartimientalizacin 36
3.3.5 Sustratos 37
3.3.5.1 Defosforilacin 38
3.3.6 Receptores inhibidores 38
3.4 Mutaciones de GPCRs y protenas G 39
CAPTULO 4. Sistemas mediados por el efector fosfoliQlsa e 43

4.1 Fosfolipasa C (PLC) 43
.1.1.1 Estructura., !:I43.
4.1.2 Activacin 45
4.2 Receptores IP3 rianodine 47
4.3 Calcio 49
4.3.1 Ca2+ citoslico 49
4.3.2 Depsitos intracelulares 49
4.3.3 Influjo de Ca2+ 50
4.3.4 Ondas de propagacin 50
4.3.5 Regulacin de los receptores 51
4.4 Calmodulina (CaM) 52
4.4.1 Vas de activacin 52
4.4.2 Quinasas CaM-dependientes (CaMK) 53
4.4.2.1 Quinasas m ultifuncionales 53
4.4.2.1.1 Estructura 53
4.4.2.1.2 Mecanismo de activacin 54
4.4.2.2 Quinasas con sustrato nico 55
4..4 3 S" stratos 5.5
4.5 Diacilglicerol (DAG) 56
4.6 Protena quinasa C (PKC) 57
4.6.1 Isoformas 57
4.6.2 Estructura 57
4.6.3 Activacin 59
4.6.4 Compartimientalizacin 59
4.6.5 Sustratos 60
CAPTULO 5. Receptores asociados a enzimas 63

5.1 Receptores erotena tirosina quinasa (RPTK) 63
5.1.1 Estructura 64
5.1.2 Dimerizacin y autofosforilacin 66
5.1.3 Protenas adaptadoras 67
5.1.3.1 Dominios SH2 y SH3 67
5.1.3.2 Tipos de protenas adaptadoras 68
5.1.3.2.1 Proteinas acaptadoras con actividad enzimtica 68
5.1.3.2.2 Protenas adaptadora objetivo 70
.5..2 La va Ras 71
5.2.1 Las proteinas Ras 71
.5.2~.~ Ciclo de.activaci 72
.5..2...l..2_Me.canismD.s_de_activaci.- 3.
5.2-1-3 Efectores 73
5.2.2 La protena c-Raf 74
5.3 La va Ras/MAPK 75
5.3.1 Activacin de ERKpor GPCRs 75
5_3..2_Sll.strato 6
5.3.3 Isoformas de quinasas MAP 77
5.3.3.1 Las quinasas JNK 78
5.3.3.2 La quinasa p38/HOG 79
5.3.4 Convergencias y divergencias 79
5.4 Factoresde crecimiento~protenas G 80
.5..5Factoresde crecimiento 80
5.6 Receptoresprotena tirosina fosfatasas 84
56.1 PTPsdetransmembrana 84
5.6.2 PTPs citoslicas 85
5.7 Fosfatasasprotena serina-treonina 86
5.7.1 Clasificacin 87
5.7.2 Protena fosfatasa 1 (PP1) 87
5.7.3 Proteina fosfatasa 2 (PP2) 87
57 4 Inbibidores de las fcsfatasas PP] 89
5.8 Paradigma 89
5.8.1 Regulacin de la glucogenolisis 89
5.8.2 Receptor de la insulina y regulacin de la
glucogenognesis 90
5.8.3 Fosforilacin y defosforilacin 91
5.9 Receptoresprotena serinaftreoninaguinasas 92
5.9.1 Receptores TGF~ 92
5.9_l.1-Activaci _93
5.9.2 Eamilia Sma 13.
5.9.2.1...Rstructura 93
5.9_2.2-Actillaci 91
5.9.2.3 Regulacin de la transcripcin 95
5.9.2.3.1 Regulacin negativa 95
5.9.3 Euncioues Ji
CAPITULO 6. Receptores citoquinas 97

6.1 Citoquinas 97
6 1 1 Funciones 97
6.2 Receptores citoquinas 98
6..2 . 1 Estr..u.c.tu 9.8
6.2.201igomerizacin 98
6_.3_2r:oten,a_J 00
6.3.1Activacin de la transcripcin 100
6_.3.2 Protenas __ SIA. _00
6.4 Elr~ tor de erilrop_2Y.etina(poR) 101
6.5 Interleuquinas (IL) 104
6.5. 1Receptores 104
6.5.2 Funciones 104
6.6 Receptoresde la respuesta inmune e inflamatoria 105
6.6.1 El receptor de la clula T (TCR) 105
6.6.2 Complejo mayor de histocompatibilidad (MHC) 106
6.6.3 Activacin del linfocito T 106
6.6.4 Respuesta de las clulas T 108
6.6.5 Acciones mediadas por linfocitos 109
6.6.6 Interacciones del linfocito B con Th2 110
6.7 Interfern(IFN) 110
6.7.2 Receptores IFNa/(3 111
6.7.3 Receptores IFNy 111
6.8 Factor necrosante tumoral (TNF) 113
6.8.1 Receptores 113
6.8.2 El factor NF-KB 113
6.8.3 La familia de protenas ReljNF-KB 113
6.8.3.1 Dimerizacin 114
6.8.4 Las protenas heB 114
6.8.4.1 Fosforilacin y defosforilacin de IKBa 115
6.8.5 Seales activadoras de NF-KB 116
6.9 Quimioquinas 117
CAPITULO 7. Fosfolpidos 119

7.1 Fosfolpidos de membrana 119
7.2 Derivadosde fosfatidilinosito 119
7.2.1 Fosfolipasas 121
7.3 Fosfatidilinosito13-quinasa(PI3K) 121
7.3.1 Clasificaciny estructura 122
7.3.2 Receptores y vas de activacin 123
7.3.3 lnhibidores 124
7.4 QuinasaAktjPKB 124
7.4.1 Activacin 125
7.4.2 Sustratos 126
CAPITULO 8. Sistemas activados por va de la familia Rho 127

8.1 La familiaRho 127
8.1.1 Estructura 127
8.1.2 Actividad GTPasa 128
8.1.3 Inhibidores 129
8.1.4 Vas de activacin 129
8.1.5 Efectores 130
8.1.6 Funciones 130
8.1.6.1 Organizacin del citoesqueleto 130
8.1.6.1.1 Regulacin 131
8.1.6.2 Metabolismo de fosfolpidos 132
8.1.6.3 Contraccin del msculo liso 133
8.1.6.4 Morfognesisneuronal 133
8.1.6.5 Migracincelular 134
8.1.6.6 Trfico de membranas 134
8.1.6.7 transcripcin de genes 134
CAPITULO 9. Receptores guanilato ciclasa 137
9. 1 Guanilato ciclasa 137
9.1.1 Guanilato ciclas a particulada 137
9.1.1.1 Receptores 137
9.1.1.3 Regulacin del receptor 140
9.1.2 Guanilato ciclasa soluble 142
9.1.2.1 Regulacin por Iigandos 143
9.2 GMP cclico (GMPc) 143
9.2.1 Acciones 143
9.3 Protenas quinasas dependientes de GMPc (PKG) 144
9-3-1 lsoformas 144
9.3.3 Funciones 146
9.4 Canales inicos modulados por nucletidos cclicos 147
9.5 Fosfodiesterasas (POEs) 147
9.5.2 Actividad 149
9.6 Acciones mediadas por GMPc 150
9.6.1 Regulacin del tono de msculo liso 150
9.6.2 Accin en la mucosa intestinal 152
9.6.3 Accin en el rin 152
9.6.4 Fototransduccin 152
9.6.4.1 Clulas Iotorreceptoras 152
9.6.4.3 Enzimas de las clulas fotorreceptoras 153
9.6.4.4 Canales de las clulas fotorreceptoras 154
9.6.4.5 Acciones de la luz 155
9.6.4.5.1 Adaptacin 155
9.6.5 Receptores olfatorios 157
9.6.5.1 Neuronas olfatorias 157
CAPITuLO10. Canales incos 159

10.1 Canales iICOS 159
10.1.1 Propiedades 159
10.2 Canales catinicosdependientes de voltaje 159
10.2.2 El sensor de voltaje 162
10.2.3 Poro del canal 162
10.2.4 Activacin de las compuertas 164
10.2.4.1 Proceso de inactivacin 164
10.2.5 Conductancia y selectividad 165
10.2.6 Toxinas 166
10.2.7 Alteraciones genticas 166
10.3 Potencial de accin 167
10.4 Terminalespresinpticos 168
10.4.1 Regulacin 168
10.4.2 Vesculas sinpticas 170
10.5 Canalesinicos dependientes de ligandos
extracelulares 173
10.5.1 Neurotransmisores 173
10.5.2 Receptor postsinptico 173
10.5.3 Receptores ionotrpicos 174
10.5.4 El receptor nicotinico 175
10.5.4.1 La unin neuromuscular 177
10.5.5 El receptor 5-hidroxitriptamina (5-HT3) 178
10.5.6 El receptor glutamato 178
10.5.7 El receptor GABAA 179
10.5.8 El receptor glicina 180
10.6 Canalesinicos dependientes de elementosintracelulares
(receptoresmetabotrpicos) 180
10.6.1 Receptores metabotrpicos 180
10.6.2 Efecto directo en canales de K+ 180
10.6.3 Efecto directo en canales de Ca2+ 181
10.6.4 Efecto indirecto en canales de Ca2+ 183
10.7 Canalesinicos modulados por nucletidoscclicos 183
10.7.1 Los canales CNG 183
10.7.1.2 Activacin 184
10.7.1.3 Permeabilidad inica 185
10.7.1.4 Modulacin 185
10.7.2 Canales HCN 185
10.8 Canalesinicos mecnico-dependientes 187
CAPITULO!1. Receptores nucleares 189

11.1 Clasificacin 189
11.2 Estructura 190
11.3 Translocacin 193
11.4 Unin a ADN 194
11.4.1 Los elementos de respuesta hormonal (HREs) 194
11.4.2 Dimerizacin 195
11.5 Regulacinde la transcripcin 196
11.5.1 Cofactores 196
11.5.2 Coactivadores 197
11.5.3 Correpresores 199
11.5.4 Fosforilacin 200
11.6 Protenasremodeladorasde cromatina 201
11.6.1 Nucleosomas 201
11.6.2 Acetilacin y deacetilacin 202
11.7 Receptoreshurfanos 203
11.7.1 Aspectos estructurales 204
11.7.2 Receptores asociados a ligandos 204
11.7.3 Receptores sin ligandos 206
11.8 Homeostasisdel colesterol 207
CAPITULO12. Molculasde adhesin celular 211
12.1 El citoesqueleto 212
12.1.1 Losmicrotbulos 212
12.1.2 Los filamentos de actina 212
12.1.3 Los filamentos intermedios 212
12.2 La matriz extracelular (ECM) 213
12.2.1 Los glicosaminoglicanos (GAGs) 213
12.2.2 Los colgenos 214
12.2.3 Fibronectina 214
12.3 Molculas de adhesin celular 215
12.4 Cadherinas 215
12.4.3 Adhesin intercelular 216
12.4.4 Adhesiones intracelulares 217
12.4.4.1 Los desmosomas 217
12.4.5 Membranas epiteliales 218
12.4.6 Mutaciones de cadherinas y cncer 219
12.5 Superfamilia de protenas inmunoglobulina 220
12.5.2 Interacciones 220
12.6 Integrinas 221
12.6.2 Sitios de unin 221
12.6.3 Uniones a la matriz extracelular 223
12.6.3.1 Adhesiones focales 223
12.6.3.2 Hemidesmosomas 224
12.6.4 Desintegrinas 224
12.7 Selectinas 225

CAPITULO
13.Factoresreguladoresde genes 227
13.1 Elementos reguladores del ADN 227
13.3.1 El promotor 227
13.1.1.1 El promotor basal 228
13.1.1.2 Elementos promotores ascendentes 229
13.1.2 Potenciadores (enhancers) 230
13.2 Factoresde transcripcin 231
13.2.1 Factores basales de transcripcin 231
13.2.2 Factores ascendentes 231
13.2.2.1 Factores ascendentes constitutivos 232
13.3 Factoresde transcripcin activados por estmulos 234
13.4 La familia CREB 234
13.4.2 Miembros de la familia CRES 235
13.4.3 El elemento SRE 235
13.4.4 Activacin de la transcripcin 237
13.4.5 Represin de la transcripcin 238
13.4.6 Estimulos y quinasas activadoras de CRES 238
13.4.7 Genes conteniendo el motivo CRE 239
13.4.8 Discriminacin de seales 240
13.5 El factor SRF 240
13.5.1 El elemento SER 240
13.5.2 El factor de transcripcin SRF 241
13.5.3 Activacin 244
13.6 El factor SIF 242
13.7 Los factores c-Jun y c-Fos 242
13.7.1 El gen e-jun. 242
13.7.1.1 El promotor 243
13.7.1.2 La protena c-Jun 243
13.7.2 El gen e-fes 244
13.7.2.1 El promotor 244
13.7.2.2 La protena c-Fos 245
13.7.3 Control de la transcripcin de ejuny c-fos 245
13.7.3.1 Regulacin negativa 247
13.7.4 Translocacin 248
13.7.5 Dimerizacin 248
13.8 El factorde transcripcinAP-l 249
13.8.1 El elemento AP-l 249
13.8.2 Activacin de la transcripcin 250
13.8.3 Control post-tran scripcional 250
13.8.4 Expresin de genes 251
CAPTULO
14.Apoptosts 253
14.1 Caspasas 254
14.1.2 Caractersticas enzimticas 255
14.1.3 Mecanismos de activacin 255
14.1.3.1 Activacin de caspasas iniciadoras 255
14.1.3.2 Activacin de caspasas efectoras 255
14.2 Activacinde la apoptosis 256
14.2.1 Receptores y ligandos activadores de caspasas 256
14.2.2 El receptor Fas 257
14.2.3 Sealizacin por TNFRl 258
14.2.4 Activacin de caspasas por citocromo c 259
14.3 Inhibidores de caspasas 260
14.3.1 Regulacin por Bcl-2 260
14.3.2 Inhibidores naturales 262
14.3.3 Inhibicin por fosforilacin 263
14.4 Vas de regulacinde la apoptosis 263
14.4.1 Vas a travs de receptores 263
14.4.2 Vas a travs de mitocondrias 264
14.5 Sustratosde las caspasas 265
14.6 Funcionesfisiolgicas 267
14.7 Apoptosisy enfermedadeshumanas 267
14.8 Apoptosisen Cielegans 268
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book.
book.
,
CAPITULO 1
De las seales a la expresin gnica
1.1 Seales
El desarrollo y vida de los organismos eucariotes multice-
lulares representa un complejo intercambio de numerosos
eventos proliferativos y de diferenciacin. Para la coordina-
cin de estos eventos las clulas deben responder a seales
extracelulares, tanto del medio ambiente como del propio
organismo, con un conjunto especfico de mecanismos que
regulan la expresin de genes. Entre estos estmulos figuran
estmulos lumnicos, radiaciones ultravioleta, variaciones
osmticas, modificaciones mecnicas, etc. Entre la seal y
los genes se asocia un sistema de componentes celulares
para garantizar un exitoso proceso de transduccin de sea-
les. Adems, los organismos multicelulares han desarrollado
mecanismos de sealizacin que permiten la comunicacin
entre clulas para coordinar su comportamiento en beneficio
del organismo como conjunto. Esta comunicacin se realiza
por medio de numerosas molculas que son segregadas por
las clulas sealadoras y que se conocen como ligandos.
1.2 Ligandos
Son molculas que se unen a sitios especficos de las c-
lulas destinatarias por medio de protenas, llamadas recep-
tores. Diferentes molculas seales que incluyen protenas,
pequeos pptidos, aminocidos, nucletidos, esteroides, re-
tinoides, derivados de cidos grasos y an gases disueltos
como xido ntrico y anhidrido carbnico median la activa-
cin de las respuestas.
Las molculas seales, con las que las clulas se comuni-
can entre s, pueden actuar en la proximidad de las clulas
que las liberan, afectando slo a las clulas vecinas o a s
mismas, procesos conocidos como seales paracrinas y se-
ales autocrinas, respectivamente, o actuar en destinos a
book.
Receptores celulares y la transduccin de seales
tes, un dominio de unin al ligando y un dominio efector. El

dominio de unin acta como sitio de unin del ligando. La
unin del ligando al receptor depende de la especificidad y la
afinidad. La especificidad de un receptor se refiere a la ca-
pacidad de fijar un ligando con preferencia a otro. La afini-
dad se refiere a la fuerza de unin entre el receptor y el li-
gando, medida por la constante de equilibrio Keq o por la
constante de disociacin Kv.
1.3.1 Unin de ligandos La unin del ligando a su recep-
tor se hace generalmente por enlaces inicos aunque puede
hacerse por otros medios. La unin no es covalente y es
siempre reversible. As, la unin del ligando [L] al receptor
[RJpuede escribirse
L+R~ LR
donde L es el nmero de molculas del ligando, R el nme-
ro de molculas del receptor, y LR el nmero de receptores
ocupados. En equilibrio, las velocidades de formacin y di-
sociacin del complejo LR son iguales
[L] [R] k = [LR] k2
donde k, y k2 son las constantes de las velocidades de for-
macin y disociacin del complejo respectivamente, y [LJY
[R] las concentracines de ligando y de receptor libres. Una
interaccin de alta afinidad significa el predominio de LR es
decir que el equilibrio es hacia la derecha o que la cons-
tante de equilibrio K es grande, donde
K = [LR] =~
[L ][R] kz
y k es ms grande que k2. En vez de una constante de equi-
librio de asociacin, la expresin puede ser invertida
KD = [L ] [R ] = k2 [1J
[LR] kl
K es la constante de disociacin. Tambin es la concentra-

cin del ligando que, en equilibrio, produce la ocupacin del
500/0 de los receptores. Si el nmero total de la concentra-
cin de receptores es Rt tendremos que
[RJ = [Rt] - [LRI
3
De la seal a la expresin gnica
sustituyendo IR] en la ecuacin Il) tendremos que

[LR ] _ [L]
o
I [Rt I - [L ] + Ko
[LR ] = [Rt ][L] o [LR]{Rt] [L]

[L ] + Ko [L ] + Ko
Graficando esta ecuacin se obtiene una hiprbola cuando
el eje de ordenadas es [LR] y el de las abscisas [L] (Figura
l. lA). Por la representacin de Scatchard (Figura 1.lB) se
puede cuantificar el nmero de receptores disponibles por la
interseccin de la recta con el eje de las abscisas IR).
1.3.2 Medicin de la afinidad Para medir los parmetros
de unin, las clulas o sus membranas son expuestas a li-
gandos marcados con molculas radioactivas. Despus de
su equilibracin se centrifugan determinndose el contenido
de marcado en el sobrenadante y el precipitado. Agregando
cantidades crecientes de ligando radioactivo, la cantidad que
se fija a las clulas en un principio aumenta rpidamente, a
medida que aumentan las concentraciones del ligando, para
despus hacerlo en forma ms gradual. El total del ligando
marcado que se ha fijado est compuesto por la unin del li-
gando a su receptor de manera especfica y por la unin a
protenas en forma no especfica. La unin no especfica se
puede medir repitiendo el ensayo de fijacin en presencia de
un exceso de ligando no marcado, que satura todos los sitios
de unin especfica, permitiendo la fijacin del ligando mar-
cado a los sitios no especficos. La diferencia entre la unin
total y la unin no especfica representa la unin especfica.
A B
--
_,a:
-
0.5
IRI
O, L....,;p-~-~_--':--
Ko1 23"
Il] [LR]
Figura 1.1 Curvas de saturacin. A. concentracin del complejo ligando-receptor relativa a la con-
centracin de ligando libre. B. representacin de Scatchard.
4
1.3.3 Agonistas y antagonistas Agonistas son agentes

que se unen a los receptores simulando la funcin de los li-
gandos naturales. Los antagonistas, por el contrario, se
unen al receptor bloqueando la respuesta de los ligandos
naturales o de los agonistas. Algunos agonistas tienen acti-
vidad biolgica similar a la de los ligandos naturales (agonis-
tas completos) pero lo ms comn es que sea menor, con-
formando el grupo de agonistas parciales.
Los antagonistas pueden bloquear la respuesta por varios
mecanismos. Se denomina antagonista competitivo cuando de
une al receptor en el mismo sitio que el ligando natural compi-
tiendo con l por los sitios de unin; antagonista no competiti-
vo es aquel que se une a un sitio distinto que el del ligando y
por modificaciones alostricas inhibe la accin del ligando; an-
tagonista funcional interfiere la funcin actuando en etapas
posteriores al receptor; y antagonistas qumicos cuando neu-
traliza la capacidad del ligando para unirse al receptor, como
la accin de un anticuerpo especifico de un ligando.
Algunos agonistas y antagonistas permiten diferenciar
subtipos de receptores. Tal el caso de isoprenalina que pro-
duce contraccin de los vasos sanguneos por accin sobre
los receptores adrenrgicos p>o.y fenilefrina que produce su
dilatacin por accin sobre cc-B.De manera similar, el anta-
gonista propranolol inhibe los receptores p-adrenrgicos y
prozosin los cc-adrenrgcos.
1.3.4 Clasificacin Los receptores pueden ser protenas
de transmembrana situadas en la superficie de la clula
destinataria o ser protenas localizadas en el interior de la
clula. Los receptores de la superficie de las clulas se cla-
sifican en tres categoras de acuerdo a los mecanismos de
transduccin que utilizan. 1) Receptores acoplados a prote-
nas G que a su vez activan o inhiben una enzima que genera
un segundo mensajero o modulan un canal inico. 2) Recep-
tores protena-tirosina quinasa que pueden tener actividad
cataltica en su propia molcula o estar asociados a tirosina
quinasas extrnsecas. 3) Receptores asociados a canales i-
nicos, implicados en la transmisin rpida de seales elc-
tricas entre clulas; responden a neurotransmisores que
abren o cierran transitoriamente los canales inicos.
5
De la seal a la expresin gnica
1.4 Transduccin de seales

El reconocimiento de la seal extracelular por su receptor
es el comienzo de una serie de eventos que llevan la infor-
macin desde el exterior de la clula hacia su interior, hasta
generar la respuesta. La transferencia de la informacin
hacia el interior de la clula se conoce como mecanismo de
transduccin de seales.
Los eventos generados por el receptor activado estimulan
la actividad cataltica de protenas destinatarias del cito-
plasma. Estas protenas pueden ser activadas directamente
por la seal originada en el receptor o a travs de un efector
cuyo producto es una pequea molcula conocida como se-
gundo mensajero (Figura 1.2).
La actividad de las protenas destinatarias, estimulada
por la unin del ligando o por el segundo mensajero, es alte-
rada por modificaciones covalentes y por cambios posterio-
res de conformacin o nmero de subunidades. La mayora
de las modificaciones covalentes son fosforilaciones, en resi-
duos de tirosina o serinajtreonina, por quinasas especficas.
Algunas de estas protena quinasas son sustratos de otras
quinasas o modulan su propia actividad por reacciones de
autofosforilacin. El denominador comn de todas las vas
efectoras es la amplificacin de la seal a medida que se pa-
sa de un componente al siguiente.
LIGANDO
~
Protenas G TRANSDUCTOR

AC, PLC, etc EFECTOR

AMP" C.>,~e. SEGUNDO MENSAJER
- ~- - ,~rel~
IT'""'AA.
EXPRESI&I GENICA
" '
Figura 1.2 Vas de transduccin de seales generadas por la unin del ligando a sus receptores.
6
,
CAPITULO 2
Receptores acoplados a protenas G
Los receptores acoplados a protenas G (GPCRs, G pro-

tein-coupled receptors) constituyen la familia ms numerosa
de receptores de superficie. Ms de 100 miembros de esta
familia, codificados por alrededor de mil genes, han sido
identificados en mamferos. Estos receptores son activados
por ligandos que incluyen aminas bigenas, pptidos, glu-
coprotenas, lpidos, nucletidos, iones, y proteasas. Esti-
mulos como luz, olores, y gusto, son mediados por esta cla-
se de receptores. Las GPCRs han recibido esta denomina-
cin por su capacidad para reclutar y regular la actividad de
protenas G heterotrimricas intracelulares. Estos recepto-
res estn organizados en una cadena peptidica que atravie-
sa la membrana 7 veces, de ah que tambin se los haya de-
nominado receptores 7TM (7 transmembrana).
2. 1 Receptores
2. l. 1 Estructura La familia de receptores acoplados a
protenas G, independientemente de la naturaleza de sus li-
gandos, presenta caractersticas estructurales similares.
Extracelular
Membrana
Intracelular
COOH
Figura 2.1 Estructura de GPCR. Polipptido constituido por siete o-hces que atraviesan la
membrana de la clula
7
Estos receptores estn constitudos por una cadena polipep-

tdica de unos 450 aminocidos plegada en una estructura
de siete a-hlices, de 22-28 residuos hidrofbicos cada una,
que atraviesan la membrana celular. Las hlices estn co-
nectadas por lazos que sobresalen en el citoplasma (lazos
el, ca, y e3) y en el espacio extracelular (lazos El, E2, Y
E3). (Figura 2.1).
El segmento N-terminal, que reside fuera de la clula, va-
ra de tamao entre 154 residuos en el receptor de calcito-
nina a 36 residuos en el receptor de rodopsina. Incluye resi-
duos de asparragina, que son sitios para la N-glicosilacin, y
residuos de cistena que influencian el plegado de la prote-
na. La glicosilacin influencia el trfico intracelular de los
receptores desde el retculo endoplsmico a la membrana
plasmtica. El segmento e-terminal intracelular contiene
residuos de serina o tirosina que pueden servir como sitios
de fosforilacin para quinasas y la desensibilizacin del re-
ceptor. Algunos e-terminales contienen un residuo de cis-
tena que puede servir como sitio de palmitoilacin lo cual
puede crear un cuarto lazo interno por la insercin de la cis-
tena palmitoilada a la membrana plasmtica. Este cuarto
lazo contiene un sitio de unin a protenas G.
Las siete a-hlices de los dominios de transmembrana es-
tn organizados como un ncleo en forma de anillo con los
aminocidos hidrofbicos enfrentados a la bicapa lipdica y
los hidrofilicos a la cara del ncleo. Se numeran de I a VII
desde el N- al e-terminal. Visto desde el lado extracelular
NH
Figura 2.2 Disposicin de tos dominios de transmembrana. Las siete a hlices se dispo-
nen en sentido contrario a las agujas del reloj.
8
las hlices estn organizadas secuencialmente en sentido

contrario a las agujas del reloj con la hlice 111casi en el
centro de la molcula. (Figura 2.2).
Los dominios de los lazos intracelulares son importantes
para la interaccin con protenas seales y reguladoras as
como para la interaccin con otras protenas como arresti-
na. Tambin contienen sitios consenso para la fosforilacin
por protena quinasas. Los lazos citoplasmticos que unen
las hlices 1-11y III-IVmuestran generalmente una significa-
tiva conservacin en tamao y secuencias entre los distintos
receptores. Por el contrario, el lazo entre las hlices V-VIes
de tamao variable siendo relativamente pequeo en recep-
tores opsina y muy largo en receptores <X2-adrenrgicosy
muscarnicos.
Los dominios de los lazos extracelulares tienen como as-
pecto ms destacado el puente disulfuro, presente en la ma-
yora de los receptores, formado por dos residuos cistena de
El y E2. El receptor de angiotensina posee un puente adi-
cional entre una cistena de E3 y el dominio N-terminal. Es-
tos puentes de disulfuro son importantes para el adecuado
plegamiento del receptor y para la formacin de un bolsillo
de unin del ligando.
2.1.2 Clasificacin Los GPCRs en humanos pueden agru-
parse en tres principales clases, que tienen pocas
homologas en las secuencias pero que participan de una es-
tructura general (Figura 2.3).
La clase A comprende a la mayora de los miembros de la
familia de GPCRs e incluye tres subclases. La mayora de los
receptores de la clase A tiene unos 20 aminocidos conser-
vados que incluyen dos residuos de cistena en El y E2 que
forman un puente disulfuro, la secuencia Gluj Asp-Arg-
TirjHis (motivo EjDRY jH) en la regin proximal de C2, re-
siduos de prolina en las regiones de transmembrana, un
motivo Asn-Pro-X-X-Tir en TM7, Y un residuo cistena en el
dominio C-terminal que puede ser palmitoilado formando un
cuarto lazo. En esta subfamilia hay receptores de rodopsina,
aminas bigenas y otros pequeos ligandos. Una segunda
subclase incluye receptores que responden a quimoquinas,
trombina, y otros pequeos pptidos. Estos ligando s se
9
unen al N-terminal, a los lazos E, y a regiones de trans-

membrana prximos a los lazos E. La tercer subclase tiene
un dominio N-terminal relativamente largo y une hormonas
glicoproteicas como LH, FSH y TSH.
La clase B incluye unos 20 receptores diferentes para una
variedad de hormonas peptdicas y neuropptidos como el
pptido vasoactivo intestinal (VIP), la calcitonina, hormona
paratiroidea, y glucagon. Estos receptores estn caracteriza-
dos por tener largas regiones N-terminales (ms de 100 re-
siduos) que tienen seis residuos cistena formando una red
de puentes de disulfuro. Tienen adems, dos residuos con-
servados de cistena en E 1 Y E2, Y pro tinas conservadas en
las regiones de transmembrana diferentes a las de la clase
A. El motivo DRY no est presente en esta clase.
La clase C, la menor de los GPCRs, contiene los recepto-
res glutamato metabotrpicos, el receptor GABAs, el receptor
A
-----_"
rF~~qA-ArF1f=r'1Aminas
L/GANDOS
r
bigenas. rodopsina
wo Pequeos pplidos (oxitocina
~ angiotensina. GnRH)
Hormonas glicoproteicas (LH, FSH)
Figura 2.3 Aspectos estructurales de las tres clases de GPCRs Las clases A, B. Y C mues-
tran los principales aspectos que las caracterizan y los ligandos que unen. Adaptado de Rana et
JO
vomeronasal de feromonas y los receptores del gusto. Estos

receptores poseen muy largos dominios N-terminales (500 a
600 aminocidos) implicados en la unin de ligandos y con-
tienen varios residuos conservados de cistena en las regio-
nes de transmembrana y lazos extracelulares C1 y C2.
2.1.3 Unin del ligando Numerosos ligando s se unen a
los GPCRs activndolos. Comprenden a aminas bigenas,
(epinefrina, serotonina, histamina, dopamina), neurotrans-
misores (acetilcolina), pptidos (angiotensina, vasopresina,
oxitocina), glucoprotenas (LH, FSH, TSH), aminocidos (glu-
tamato, glicina, GABA)etc.
Los distintos receptores acoplados a protenas G que unen
ligandos tienen una estructura similar aunque las secuencias
de sus aminocidos son generalmente muy diferentes. Cada
receptor presenta aminocidos especficos que participan, en
forma selectiva, en la unin con su respectivo ligando.
Los sitios de unin de pequeas molculas transmisoras,
como epinefrina, norepinefrina, dopamina, serotonina, his-
tamina, y acetilcolina, estn contenidos en una hendidura
formada por las hlices de transmembrana. Los residuos
implicados en la unin de agonistas y antagonistas a los re-
ceptores p2-adrenrgicos se encuentran en las hlices TM 111,
V, VI, YVII. La interaccin ms importante es un puente en-
tre la amina de los ligandos adrenrgicos y la cadena car-
boxilada del Asp 113 en 111.Otras interacciones incluyen
uniones de hidrgeno entre los hidroxilos del anillo catecol
de la epinefrina y las serinas Ser-204 y Ser-207 de TM V,
separadas por una vuelta de la a-hlice (Figura 2.4). La
unin de acetilcolina tambin forma un puente entre dos
hlices de transmembrana de los receptores muscarnicos.
De esta forma, la molcula ligando est orientada en un
plano paralelo a la membrana formando un puente entre
dos hlices de transmembrana de sus receptores alterando
la relacin entre ambas. Esta alteracin es el origen de la
seal transmitida a la clula.
La unin de hormonas glucoproteicas, como LH, FSH, y
TSH, a sus receptores tiene lugar en el largo N-terminal que
caracteriza a los receptores de este subgrupo. Se cree que
despus de la unin al dominio extracelular, el N-terminal
lI
S
I
S
\
Figura 2.4 Unin de adrenalina al receptor p-adrenrgico. El ligando interacciona con las seri-
nas 204 y 207 de la hlice 5 y con el grupo aspartato de la hlice 3. Adaptado de Ostrowskl el al.
de la hormona sufre un cambio conformacional que lleva a

su contacto con regiones de los lazos extracelulares del re-
ceptor.
Los sitios de unin para hormonas peptdicas, como
ACTHy glucagon, en la clase B de receptores, estn situa-
dos en el segmento N-terminal y en los lazos extracelulares
que unen las hlices de transmembrana. En los receptores
metabotrpicos de glutamato y GABAlos sitios de unin es-
tn contenidos en los largos dominios extracelulares que ca-
racterizan a la clase C de receptores.
2.1.4 Activacin Muchos GPCRs tienen cierta actividad
basal y pueden activar las protenas G en ausencia de ago-
nistas. Esta actividad constitutiva adems puede incremen-
tarse por mutaciones de casi cualquier dominio del receptor
lo que sugiere que, en ausencia de ligandos, interacciones
intramoleculares mantienen al receptor en una conforma-
cin inactiva.
12
Despus de la unin del agonista, el receptor experimenta

cambios conformacionales que afectan la posicin relativa
de las siete hlices de transmembrana en particular, la de
las hlices 3 y 6. Este movimiento de las hlices de trans-
membrana produce cambios en los lazos intracelulares que
incrementan su asociacin con las protenas G activndolas.
Los lazos intracelulares C2 y C3, y para algunos receptores
la parte proximal del segmento C-terminal son importantes
en la conexin del receptor a protenas G. El lazo C3 es el
determinante de la especificidad de unin para diferentes
subunidades a. de las protenas G, mientras que el lazo C2
es importante para la eficiencia de activacin de la protena
G (estimuladora o inhibidora). Los residuos C2 prximos a
TM3 son importantes para mantener al receptor en estado
inactivo mientras que los del otro extremo lo son para acti-
var la protena G. El motivo DRY est implicado en el proce-
so de activacin de los GPCRs de la familia A. El mecanismo
por el cual la seal es transmitida del receptor activado a la
protena G no es conocido.
Diferentes miembros de la familia de receptores pueden
activarse por un mismo ligando. Tal el caso de la adrenalina
que se une a diferentes receptores (X.- y 0-adrenrgicos. Al
menos 9 diferentes receptores acoplados a protena G son
activados por adrenalina, 5 ms son activados por acetil-
colina y al menos 15 por serotonina.
2.1.5 Dimerizacin Muchos receptores pueden funcionar
no como monmeros sino como dmeros o conjuntos oligo-
mricos. Un ejemplo de dimerizacin del receptor es el re-
ceptor metabotrpico GABABque opera como un heterod-
mero. Otros receptores como los de glutamato, vasopresina,
adenosina, opiodes, y an los receptores 02-adrenrgicos y
muscarnicos pueden unirse como homodmeros.
El mecanismo de formacin de dimeros difiere entre los
distintos receptores. Para el receptor 02-adrenrgico la dime-
rizacin dependera de la participacin de los segmentos de
transmembrana mientras que para el receptor -opcde in-
tervendra el segmento C-terminal. Por el contrario, para el
receptor metabotrpico glutamato la dimerizacin depende de
los puentes entre cistenas de los segmentos N-terminales.
13
2.1.6 Desensibilizacin La exposicin de los GPCRs a los

agonistas produce una rpida atenuacin de la respuesta
del receptor. Este proceso, denominado desensibilizacin del
receptor, puede ser de dos tipos: desensibilizacin homlo-
ga, cuando la exposicin prolongada a un agonista lleva a la
disminucin de la funcin de su propio receptor, y desensi-
bilizacin heterloga, cuando la exposicin a un agonista
produce la disminucin de funcin del propio as como de
otros receptores.
La desensibilizacin del receptor es la consecuencia de la
combinacin de diferentes mecanismos que incluyen 1) el
desacople del receptor de las protenas G por fosforilacin
del receptor, 2) la internalizacin del receptor de la superfi-
cie celular a compartimientos membranosos intracelulares,
y 3) la disminucin de la sntesis del receptor.
El medio ms rpido de desacople de los GPCRs de las
protenas G heterotrimricas es por modificacion covalente
del receptor por su fosforilacin por quinasas intracelulares.
Tanto PKA y PKC como GRKs (G protein coupled receptor
kinases) fosforilan a los GPCRs. Los miembros de la familia
GRKs fosforilan selectivamente receptores activados por
agonistas. Por el contrario, PKAy PKC no slo fosforilan los
GPCRs activados por agonistas sino que tambin a recepto-
res que no han sido expuestos a agonistas (desensibilizacin
heterloga) .
La activacin de GPCRs aumenta segundos mensajeros
intracelulares activando las protena quinasas PKA y PKC
las que a su vez pueden fosforilar los receptores desensibili-
sndolos.
La familia de quinasas de GPCRs o GRK est compuesta
por siete miembros que comparten secuencia homlogas. Su
organizacin comprende un dominio N-terminal que contie-
ne un dominio RGS (regulator of G protein signaling) simil,
importante para el reconocimiento de sustratos, un dominio
cataltico central, y un dominio C-terminal de unin a la
membrana plasmtica. Los miembros mejor conocidos de
estas quinasas son la quinasa de rodopsina GRK1 (rhodop-
sin kinase), y las quinasas del receptor 13-adrenrgico(13-AR)
14
GRK2 y GRK3 tambin conocidas como BARKl y BARK2 (B-

adrenergic receptor kinase) respectivamente.
En clulas no estimuladas, las GRKs estn localizadas en
el citoplasma y translocan a la membrana por activacin del
receptor para unirse a sus sustratos. GRK1 transloca a la
membrana por activacin del fotorreceptor por la luz. Su ac-
tividad es regulada por la protena recoverina, sensora del
Ca2+ plasmtico. La translocacin de GRK2 y GRK3 a la
membrana plasmtica es regulada en parte por sus asocia-
ciones con las subunidades l3y de las protenas G he tero tri-
mricas que se unen al dominio C-terminal de la quinasa.
La translocacin de esas quinasas a la membrana es tam-
bin influenciada por la unin de fosfatidilinositol 4,5-
bisfosfato al dominio homlogo a pleckstrina C-terminal'
2.1.6.1 Fosforilacn Las GRKs fosforilan a los receptores
acoplados a protenas G en los residuos serina y treonina
localizados tanto en el tercer lazo intracelular como en
-
" pP rrr
,$/ P
-- Oe::lensibilizaciri liJo
Fosforilacin por GRK y unin de f3arrestina
Secues racin
Deosrornactrf
Figura 2.5 Proceso de desensibilizacin del receptor Il-adrenrgico. Los mecanismos impli-
cados incluyen fosforilacin del receptor. su secuestracin de la membrana plasmtica. y defos-
forilacin y reciclado a la superficie de la clula.
15
los dominios de la cola C-terminal. La mayora de los sitios

de fosforilacin de la rodopsina se encuentran en las
Ser334, 338, y 343 del segmento C-terminal.
2.1.6.2 Arrestinas La fosforilacin mediada por GRK tan-
to de rodopsina como de ~2ARno es suficiente para una in-
activacin completa y requiere, para tal fin, de un compo-
nente adicional, la arrestina.
Las arrestinas se dividen en dos grupos en base a la
homologa de secuencias, funcin, y distribucin tisular: 1)
arrestina visual y arrestina de conos, y 2) ~-arrestinas (~-
arrestina1 y ~-arrestina2). Las ~-arrestinas se expresan ubi-
cuamente fuera de la retina pero estn predominantemente
localizadas en tejidos nerviosos, concentradas en las sinap-
sis neuronal y en el bazo.
La arrestina visual es soluble en la oscuridad pero se aso-
cia a las membranas de los segmentos externos de los bas-
tones cuando la rodopsina absorbe luz y es fosforilada por la
rodopsina quinasa. Arrestina actua compitiendo con trans-
ducina (la protena G de retina) por la rodopsina fosforilada
activada por luz.
Una arrestina, similar a la visual, potencia los efectos
inactivantes de ~ARKen la desensibilizacin del ~2AR.Una
~-arrestina de 418 aminocidos y otra 0-arrestina2 o arres-
tina3, de 409 aminocidos, son ubicuas. Mientras que p-
arrestina se encuentra en muchos tejidos, arrestina3 es la
forma predominante en el epitelio olfatorio.
Las arrestinas se unen preferentemente a GPCRs activa-
dos por agonistas y fosforilados por GRK. La estuctura mo-
lecular de la arrestina visual comprende tres dominios fun-
cionales y dos dominios reguladores. Los dominios funciona-
les comprenden un dominio de reconocimiento del receptor
activado, que reconoce los GPCRs activados por agonistas,
un dominio secundario de unin al receptor, y un dominio
sensor del fosfato, que hace contacto con la porcin fosfori-
lada del GPCR. El dominio regulador est formado por un
dominio regulador N-terminal y un dominio regulador C-
terminal. En arrestinas no visuales hay un dominio de
unin a clatrina y ~2-adaptina. Las arrestinas se uniran a la
16
cola C-terminal del receptor.

2.1.6.3 Internalizacin Otro nivel de regulacin de
GPCRs es su internalizacin o secuestro que sigue a la ex-
posicin al agonista. La exposicin al agonista promueve la
translocacin de los GPCRs de la superficie celular hacia
un compartimiento intracelular. Este proceso de internaliza-
cin, conocido como endocitosis, comienza con la invagina-
cin de la membrana que contiene el receptor formando una
cavidad cubierta de clatrina. Estas cavidades se desprenden
de la membrana plasmtica y entran en la clula como
complejos macromoleculares de receptores formando vescu-
las cubiertas de clatrina. Estas pierden su cubierta de cla-
trina a medida que se internalizan en el citoplasma y su in-
terior se acidifica hasta llegar a un pH 5,0. La acidificacin
promueve la disociacin del complejo con liberacin del li-
gando. El receptor secuestrado recupera su funcin por de-
fosforilacin por la fosfatasa de las vesculas llamada GRP
(G protein coupled receptor phosphatase). El receptor re-
quiere de un cambio conformacional, inducido por acidifica-
cin vesicular, para que pueda ser defosforilado por GRP.
La arrestina debe disociarse antes de la defosforilacin. La
porcin de la vescula con los receptores vuelve a la mem-
brana plasmtica a la que se reincorpora para un nuevo ci-
clo. La porcin de la vescula con los ligandos libres se fu-
siona con vesculas cargadas de enzimas hidrolticas degra-
dando los ligandos (Figura 2.5).
La translocacin de los ~2ARsde la membrana plasmtica
al compartimiento intracelular ocurre rapidamente con un
tiempo medio de 2 mino La translocacin inducida por ago-
nistas tiene lugar en otros GPCRs pero, a diferencia de es-
tos, el fotorreceptor rodopsina no se internaliza y no es un
mecanismo de su desensibilizacin.
2.2 Las protenas G

Son parte de una familia de protenas que se caracteriza
por unir e hidrolizar GTP, mediando un mecanismo encar-
gado de transmitir informacin del receptor al efector. Las
protenas G son protenas heterotrimricas acopladas a
membrana que interactan con receptores 7TM.
17
Figura 2.6 Protena G heterotrimrca acoplada a un receptor 7TM. La protena est compuesta
por las subunldades Cl, tl. y 1 ancladas a la membrana plasmtica. Adaptado de Spiegel et al.
2.2.1 Subunidades Las protenas G estn compuestas por

las unidades a, ~ y y. Las subunidades ~ y y forman un com-
plejo py que ancla la protena a la cara interna de la mem-
brana citoplasmtica (Figura 2.6). Hay veinte subunidades
a de unos 400 aminocidos, cinco subunidades G~ cada
una de 340 aminocidos salvo G~5 que tiene 395 aminoci-
dos, 80% de los cuales son idnticos, y doce subunidades ay
de unos 75 aminocidos que pueden posibilitar unas 1440
combinaciones.
2.2. 1.1 Las sub unidades a Basado en la secuencia de
aminocidos de las subunidades Ga se han propuesto cua-
tro familias de estas protenas llamadas s, i, q, Y 12/13. La
clase Gas contiene Gas y Gaolfque son 880/0 idnticas. Ambas
activan la adenilato ciclasa y son ADP ribosiladas por la
toxna colrica que inhibe la actividad de su GTPasa intrn-
seca (Tabla 2. 1).
La clase Gai contiene Ga-l, Ga-2,Gai-3,el retinal Gr, dos
formas de subunidades Ga especficas de cerebro, Gao-l y
Gao-2,as como G2. Todos los miembros de esta clase, con
excepcin de Gz, contienen un residuo de cistena conserva-
do en el C-terminal que es el sitio de ADP-ribosilacin cata-
lizado por la toxina pertussis. La subunidad Gainhibe la AC
y Gal activa la fosfodiesterasa GMPc de retina. Miembros de
las subfamilias Ga y Gao estn implicadas en la regulacin
de la actividad de canales inicos y en la regulacin de la
PLC, mientras que la funcin de Gz es desconocida.
18
La clase Gaq contiene cinco miembros, Gall. Ga14, Ga15,

Ga16,y Gaq. Estas protenas, estrechamente relacionadas, no
son sustratos de las toxinas colrica y pertussis. GO:qy GO:ll
estn ampliamente expresadas en tejidos de mamferos, por
el contrario, los otros miembros de la clase Gaq estn res-
tringidos a clulas del estroma y clulas epiteliales as como
a clulas hematopoyticas. Estas subunidades activan la
PLC0,preferentemente a PLC02.
La clase GO:12/l3,resistente a las toxinas pertussis y col-
rica, contiene las protenas Ga12 y Ga13. Estas subunidades
estn ampliamente expresadas y actuaran activando las
protenas Rho.
Las subunidades Go;estn compuestas por dos dominios,
un dominio GTPasa y un dominio helicoidal. La interfase de
estos dos dominios posee una conformacin tridimensional
en forma de hendidura donde se aloja GDP. Luego de la es-
timulacin por el receptor esta regin se abre para liberar
GDP intercambindolo por GTP.
2.2.1.2 La sub unidad 0r Est formada por dos polippti-
dos, G0 y Gr, que funcionan como un monmero, porque las
dos subunidades no pueden disociarse. La familia G0
Tabla 2.1 Familias de la subunidad Ga
Familia Miembro Sensibilidad Distribucin Efector

a toxina tisular
Gs Gas Colrica Amplia AC

Gaolf Colrica cerebro/ojtato AC
Gi Gal.l .2 -3 Pertussis Amplia AC/K+
Gall. y 12 Pertussis Retina PDE
GaOA yoS Pertussis Cerebro K+
Gaz
Gq Gaqy Gal1 Amplia PLC~
Ga14 Estroma/epitelio PLCp
Ga15 y Ga16 Mieloide PLCp
G12/13 Ga12 Amplia Canal CI"
Ga13 Amplia
19
Figura 2.7 Estructura de subunidad P formando una hlice con 7 aletas WD
est constituda por cinco miembros diferentes (Gp, GPI,

GP2, GP3, y GP4). La subunidad P est formada por dos re-
giones, un segmento o-helicodal N-terminal seguido por 7
unidades repetidas llamadas repeticiones WD. Cada repeti-
cin WD consiste en un ncleo conservado de unos 40 ami-
nocidos, bordeado por un lado por el dipptido glicina-
histidina y por el otro por el dipptido triptofano-cido as-
prtico (WD), y una regin variable de 7 a 10 aminocidos.
Las 7 repeticiones WD estn dispuestas en anillo formando
una hlice con 7 aletas (Figura 2.7). Las subunidades p son
estructural y funcionalmente casi idnticas.
La familia Gy est compuesta por doce miembros (Gy-5,7-8,
10-14) Los C-terminales de todas las subunidades Gy contie-
nen la secuencia CisAAX donde A es cualquier aminocido
aliftico. Las subunidades Gy son modificadas por prenila-
cin del residuo cistena con remocin por protelisis de los
tres aminocidos finales y por carboximetilacin del termi-
nal COOH neoformado de la cistena (Figura 2.8).
Figura 2.8 Farnesilacin de la subunidad Gr. (aa)=aminocidos de la molcula Gr. F=farnesilo
20
La subunidad Gy, es modificada por farnesilacin mien-

tras que las otras subunidades Gy son modificadas por ge-
ranilgeranilacin. Estas modificacines son necesarias para
la asociacin de los dmeros By con la bicapa de lpidos, la
asociacin con la subunidad 0., y la interaccin con AC. Las
subunidades By de Gs, Gi, Go, y Gl son funcionalmente inter-
cambiables con sus respectivas subunidades.
2.2.2 ADP-ribosilacin Las subunidades a. pueden ser
ADP-ribosiladas por toxinas bacterianas: Ga.s y Ga.t lo son
por la toxina colrica; Ga., Ga.o,y Ga.t por la toxina pertus-
siso Las toxinas colrica y pertussis catalizan la transferen-
cia de ADP-ribosa de NAD a la subunidad a. con desprendi-
miento de nicotinamida. (Figura 2.9) La accin de la toxina
colrica es inhibir la actividad intrnseca de GTPasa y con-
secuentemente retardar la hidrlisis de GTP a GDP lo que
hace que la subunidad a. permanezca persistentemente acti-
vada aumentando la actividad de la adenilato ciclasa.
La ADP-ribosilacin por la toxina pertussis difiere de la
toxina colrica tanto en el sustrato como en el efecto. La
toxina pertussis tiene como sustrato a la subunidad a.i, as
como las subunidades 0.0 y a.t, Y su efecto es transferir ADP-
ribosa a una cistena situada cerca del C-terminal de a.j. La
ADP-ribosilacin bloquea la interaccin de las subunidades
a. inhibidoras con sus receptores previniendo el intercambio
-Arg-
1
eH..ll
Nicotinamida NH NHJ
~'N"'"
l\.i.H ci-
!O O O-PoO.cH
p
O fN_,)..".
N..L J Adenina
'1 J. N
'b
O' O' O
/.~, R'b
Rlosa ~ losa
OhOH O~OH
Figura 2.9 Nicolnamida adenina dinucleldo (NAO) requerida para transferir AOP-rlbosa a la
subunidad a. La flecha indica el sitio de separacin de nicotinamida
21
de GDP por Gl'P. Como consecuencia, el complejo permane-

ce unido a GDP y es incapaz de inhibir la adenilato ciclasa
lo que lleva a un aumento del AMPc.
2.2.3 Ciclo de activacin de protenas G Las protenas
G experimentan activaciones y desactivaciones cclicas por
influencia de Gl'P y receptores. Estos ciclos comprenden dos
reacciones qumicas: 1) una disociacin de las subunidades,
y 2) la hidrlisis de Gl'P por la subunidad a activada.
En su forma inactiva la protena G existe como un trmero
con GDP unido a la subunidad a. La subunidad Ga tiene
una mayor afinidad por GPr en el estado ligado a GDP. En
presencia de un ligando, los receptores catalizan el inter-
cambio de GDP unido por Gl'P. La unin de GTP en presen-
cia de Mg2+produce la activacin del trmero apy y su diso-
ciacin en complejo py y ce-G'I'P.El complejo ce-O'I'P pierde la
capacidad de permanecer asociado con el receptor y se des-
compone en a*Gl'P activado libre ms receptor libre. Una vez
que Ga se ha unido a GTP las dos subunidades activas, a y
py estn libres para asociarse con los efectores hasta que
GTP es hidrolizado. La subunidad a tiene actividad intrnse-
ca de GTPasa que hidroliza lentamente GTP unido a GDP. El
complejo a-GDP se reasocia con py para rehacer el hetero-
trmero inactivo (Figura 2.10).
Activado
GTP LOT'(z) Mg OTP Mg J 8... EFECTOR
~ I/J P11~
Mgrx @ oop
17
~'----
J
l
Figura 2.10 Cicto de activacin-inactivacin de protenas G. RGS seala el sitio de activacin

de GTPasas. La subunidad a unida a GTP se asocia a los efectores. Adaptado de Birnbaumer et al
22
La Tabla 2.2 muestra los ligandos unidos a receptores

acoplados a distintas protenas G.
Tabla 2.2 Receptores acoplados a diversas protenas G

Ligando G<xs GCkq Gal:!ll3 GCtt
Gav"
Acetilcolina M2.4 MI. 3.5
ACTH ACTH
cido lisofosfatldico LPA
Adenosina A2A.S A13

ADP/ATP/UTP P2Yl.S
Adrenoceptores PI.2 ~ <XI
Angiotensina AT12 At)

Bornbesina 881.2 88
8radiquinina 812

Colecistoquinina CCKA,s
Corticoliberina CRF 1,2a.p
Dopamina DA),5 DA2.4
Endotelina ETA.S ET
FSH FSH
GA8A GA8As
Glucagon Gluc
GIuta mato mglu2-4,S.S mgIU).5
GnRH GnRH
Histamina H2 HI
Leucotrinas LT8,C,D
LH LH
Melatonina MELlA ,re
Neuropptido y y 1-6
Neurotensina NT
Opioides j.l,K,O
Prostanoides DP,IP EP, TP
Serotonina 5HT4,5,7 5HT)A 5HT2A,2C
Somatostatina sst.
Taquinina NK13
Trombina PAR) PAR
TSH TSH
Vasopresina/oxitoc V2 V),OT
VIP VIPI2,
Fotones Rodopsina
23
2.2.3.1 Protenas RGS Las subunidades 00. purificadas

son ineficientes OTPasas en solucin pero en un contexto
celular la hidrlisis de Oa-OTP es mucho ms rpida que
usando componentes purificados. Este hecho sugiere la
existencia de factores que regulan la magnitud de la hidrli-
sis de Oa-OTP. Estos factores fueron reconocidos como pro-
teinas que contienen una secuencia conservada denominada
dominio ROS (regulator of O protein signaling).
Las protenas ROS actan como protenas activadoras de
OTPasa (OAPs) para acelerar (hasta 1000 veces) la magnitud
de la hidrlisis de Oa-OTP y limitar el tiempo de su actividad
(Figura 2.10). Estas protenas constituyen una familia cuyos
miembros se numeran de ROSI a ROSI5.
2.2.4 Sistemas de efectores Las protenas O regulan un
diverso grupo de molculas efectoras que incluyen enzimas
implicadas en la sntesis y degradacin de segundos mensa-
jeros intracelulares, as como a canales inicos, En algunos
casos la regulacin es directa y en otros puede ser indirecta.
Las subunidades a de las protenas O son las mediadoras
entre las seales de receptores y la correspondiente activa-
cin del sistema de efectores. Estimulan la adenilato ciclasa
por as, la fosfolipasa C~l por aq, la fosfodiesterasa de la reti-
na por a, y canales de K+por a(l, e inhiben la adenilato cicla-
sa por aj. Por su parte, las subunidades ~y desempean un
papel primordial en la transduccin de seales que implican
a muchas protenas O. Estas subunidades son estimulado-
ras de ciertas isoenzimas de la adenilato ciclasa (tipos II y
IV) aunque la estimulacin depende de la presencia de as
activada. Intervienen en la regulacin de otros efectores co-
mo la activacin de la fosfolipasa A'2en los segmentos ex-
ternos de los bastones, la estimulacin de los canales de K+
muscarnico-dependientes en msculo cardaco. El complejo
~y tambin activa MAP quinasa por una va dependiente de
Ras e inhibe la adenilato ciclasa tipo 1 y los canales de Ca2+.
Puede activar las fosfolipasas ~2y ~3.
2.2.5 Activacin por receptores tirosina quinasa Las
protenas G, aparte de ser activadas por receptores con siete
hlices de transmembrana, tambin son activadas por re-
ceptores tirosina quinasa. Estos receptores incluyen el re-
24
ceptor EGF, el receptor del factor de crecimiento insulina

smil, y el receptor de insulina. Todos los receptores tirosina
quinasa acoplados a protenas G tienen una secuencia con-
senso en sus dominios yuxtamembrana que interactan y
activan las protenas G. Esta secuencia consenso de 14 a 20
aminocidos contiene dos residuos bsicos en el N-terminal
y un motivo BBXXBen el C-terminal (B es un residuo bsico
y X es un residuo no bsico, no aromtico).
El receptor tirosina quinasa estimulado por EGF puede
fosforilar Gas aumentando su capacidad para estimular la
actividad de AC y producir la acumulacin de AMPc. Este
efecto ocurre slo en clulas que contienen la isoforma AC5.
La activacin de AC5, en respuesta a la activacin de recep-
tores P2Y del ndulo sinoauricular por ATP, produce un au-
mento del contenido intracelular de AMPcmediado por Gs.
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26
,
CAPITULO 3
Sistemas mediados por el efector adenilato ciclasa
3.1 Adenilato ciclasa (AC)

Las adenilato ciclasas son una familia de enzimas estre-
chamente relacionadas que generan AMPc a partir de ATP.
Estn conformadas por una protena de ms de 100 kDa
que generalmente contiene unos 1100 aminocidos, locali-
zada en membranas.
3.1.1 Estructura Las ACs estn formadas por una cadena
peptdica compuesta por dos porciones de seis segmentos
contiguos separados por un largo dominio hidrofbico. La
molcula contiene un corto segmento N-terminal intracelu-
lar seguido de seis a-hlices de transmembrana (dominio
M1), un largo dominio citoslico de 360 a 390 aminocidos
(Cl), un segundo grupo de seis segmentos de transmernbra-
na (dominio M2), y otro dominio citoplasmtico conteniendo
255 a 330 aminocidos (C2). Los dominios de transmern-
brana estn unidos por cortos lazos intra y extramernbrano-
sos. Los dominios Cl y C2 comprenden los subdominios Cla
y ci, y C2a y C2b respectivamente (Figura 3.1).
Las regiones Cla y C2a contienen los sitios catalticos de
la enzima. Estas regiones se unen cabeza a cola de cada
monmero para formar una estructura similar a una corona
con una hendidura central entre ambas. En los extremos de
esta hendidura hay dos bolsillos hidrofbicos, formados por
residuos de cada monmero, que proveen sitios de unin a
forskolina y ATP. La actividad cataltica requiere de ambos
dominios y mutaciones de uno de ellos puede inhibir la acti-
vidad cataltica (Figura 3.2).
El sitio de unin para la subunidad as ha sido localizado
en la regin N-terminal de CIa. Los sitios de unin para las
su bunidades ai y ao no han sido determinados pero no
27
Sistemas mediados por el efector adenilato ciclasa
C1b C2b
Figura 3.1 Estructura de adenilato ciclasa. Los cuadros sealan sitios de unin: a, a (1" b, a CaM
(AC-I), e, a Pr (AC-II), d, a CaMK (AC-III). Adaptado de $unahara et al.
compiten con <xs. Un sitio de unin a Ca2+-CaM ha sido iden-

tificado en el dominio C1bde la AC tipo I.
Los dominios C1 y C2 de las ACs de mamferos estn bien
conservados y presentan gran homologa entre las diferentes
isoformas, con estructuras 50 a 90 % idnticas, mientras
que las hlices de transmembrana son bastante diferentes.
3.1.2 Isoformas Las adenilato ciclasas de mamferos son
una gran familia de enzimas codificadas por al menos nueve
genes independientes. Las nueve soformas (ACI-ACIX)pre-
sentan una gran homologa en las secuencias y en su es-
tructura.
Las ACs estn expresadas en todos los tejidos, algunas,
como ACIV y ACVI, se expresan ampliamente mientras que
Figura 3.2 Estructura dimrica de los dominios C1 y C2 conteniendo los sitios cataliticos
de AC. La hendidura entre ambos dominios provee los sitios de unin a ATP y forskolna.
28
otras, 10 son ms especificamente en el sistema nervioso,

como ACI, o en el corazn, como ACV.
En el sistema nervioso se encuentran todos los subtipos.
Los subtipos 1y VIII se sintetizan slo en neuronas, particu-
larmente en regiones asociadas con aprendizaje y memoria
en clulas granulares de hipocampo. El tipo 11se encuentra
predominantemente en cerebro pero se detecta tambin en
pulmn y epitelio olfatorio. El tipo III se expresa predomi-
nantemente en neuronas del epitelio olfatorio mientras que
el hipotlamo es un rea importante para la expresin de
ACVIII.Los tipos IV, V, VI, VII, Y IX se encuentran en nume-
rosos tejidos includos cerebro, corazn, rin, e hgado.
3.1.3 Regulacin de la actividad Aparte de la capacidad
para responder a Ga.s y a forskolina, las diferentes formas de
ACs pueden recibir seales de variadas fuentes incluyendo
otras protenas G como Ga. y GJ3y, protenas quinasas (PKA,
PKC, y CaM quinasa), fosfatasas (calcineurina), calcio, y
Ca2+-CaM (Tabla 3.1).
Todas la isoformas de AC son estimuladas directamente
por Ga.s con pocas diferencias cuali y cuantitativas siendo el
mecanismo ms importante de activacin de las ciclasas.
Todas las ACs, con la posible excepcin de ACIX son activa-
das por forskolina que acta sinergicamente con Ga.s. La
subunidad J3y de la protena G es un potente inhibidor de AC
tipo I pero se requieren concentraciones de J3y mucho mayo-
res de las que pueden derivar slo de Ga.s. Tales concentra-
ciones pueden obtenerse por activacin de Ga. o Ga.o. La
subunidad J3y ejerce un efecto estimulador de AC tipos II Y
IV pero en coincidencia con la activacin por Ga.s. Aqu tam-
bin se requiere, para la activacin, que la concentracin de
J3y sea mayor que la derivada de Ga.s. El sistema responde
sinergicamente cuando los dos vas se activan simultnea-
mente con una baja concentracin de la va asociada a Ga.s y
una alta concentracin de la va asociada a Ga. o Ga.o lo que
supone que dos grupos de receptores deben ser activados
para asegurar el mximo efecto.
La interaccin directa de Ga. con AC es el mecanismo de
inhibicin ms evidente de la sintesis de AMPc. Este efecto
29
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,
CAPITULO 4
Sistemas mediados por el efector fosfolipasa e

Muchas hormonas, neurotransmisores y factores de cre-
cimiento, ejercen sus efectos fisiolgicos activando isoenzi-
mas de la fosfolipasa C (PLC). Ms de 25 diferentes recepto-
res de la superficie celular utilizan la transduccin de sea-
les por esta va.
4.1 Fosfolipasas C (PLC)

Son un grupo de enzimas, que activadas por receptores,
hidrolizan fosfatidilinositol bisfosfato para generar inositol
trisfosfato (IP3)y diacilglicerol (DAG) (Figura 4.1). IP3 activa
receptores de depsitos intracelulares incrementando la
concentracin de Ca'2+citoslico. El Ca2+ acta como un se-
gundo mensajero que activa numerosas funciones. El DAG
media la activacin de la proteina quinasa C.
4.1.1 Estructura Se conocen 12 isoenzimas de PLC en
mamferos divididas en seis grupos (13, 'Y, O,e, (, y 11)cada uno
con varios subtipos. En mamferos hay 4 isoenzimas 13 (131-
134), dos y (r1 y y2), tres o (01, 03, y (4), una e (el), una l: Cl:1)
y una 11C11 1).
Las PLCs estn formadas por una serie de dominios mo-
dulares, que incluyen el dominio PH, los motivos EF, y el
dominio C2, organizados alrededor de un cilindro aJJ3 cata-
ltico, formado por las cajas X e Y (Figura 4.2).
El dominio cataltico est formado por las regiones X e y
que comprenden hlices a y lminas 13 que alternan. Una
secuencia intermedia une ambas mitades X e y del cilindro.
Los residuos catalticos forman una cavidad en el extremo
C-terminal del cilindro que aloja al sustrato. Un solo ion
Ca2+, que se une al sitio activo, desempea un papel impor-
tante en la catlisis. Rodeando el sitio activo hay una cresta
43
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4.2 Receptores IP3Y rianodine

Los receptores IP3y rianodine (RYRs)representan los dos
principales canales de Ca2+ intracelulares responsables de la
movilizacin de Ca2+ almacenado. Los receptores rianodine
son ms evidentes en clulas excitables mientras que los
receptores IP3son universales.
Los receptores IP3 representan una familia de protenas,
cuya diversidad molecular se origina de empalmes alternati-
vos y de genes separados. Estn compuestos por cuatro
subunidades idnticas conteniendo cada una un sitio de
unin a IP3. Cada subunidad es una larga protena de
transmembrana con ms de 2700 aminocidos y ms del
900/0conservada entre rata y humanos. Tiene ocho secuen-
cias hidrofbicas (dominios de transmembrana) en el C-
terminal, una secuencia de 300-400 aminocidos, en el
segmento N-terminal, de unin al ligando (dominio de
unin), y un largo dominio hidrofbico de acoplamiento en-
tre ambos (dominio de acoplamiento) que contiene impor-
tantes sitios reguladores para fosforilacin, unin de ATP,y
empalmes alternativos. Los segmentos N-terminales como
los C-terminales del receptor se encuentran en la superficie
citoplasmtica. Los dominios de transmembrana 7 y 8 de las
cuatro subunidades forman el canal de Ca2+ (Figura 4.5).
Los receptores rianodine son estructural y funcionalmen-
te similares a los receptores IP3. El receptor rianodine tiene
casi el doble del tamao de IP3,compuesto por una molcu-
la de unos 5000 aminocidos organizados en un tetrmero.
Los dominios de transmembrana 7 y 8 son las regiones de
Dominio de
unin
Dominio de
acoplamiento
Figura 4.5 Subunidad de receptor IP" Sitio
de unin de IP, en el dominio de unin y sitios
de unin de A TP Y de fosforilacin en el
Dominio de dominio de acoplamiento. Los segmentos de
transmembran,.;.:a'-i.,l-l)WH;H,.t-_ transmembrana 7 y 8 de las cuatro subunida-
des forman el canal.
47
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inician en la regin apical y se propagan al polo basal. La

progacin de las ondas a travs del cito sol se hace por re-
ceptores rianodine o IP3. El mecanismo por el cual el Ca2+
amplifica su propia liberacin puede depender de la gene-
racin de flujos peridicos de IP3 durante cada espiga que se
propagan de un depsito a otro o al Ca2+ mismo que difunde
incrementando su propia liberacin. El incremento del Ca2+
citoslico inhibe posteriores liberaciones por inhibicin de
los canales y el subsecuente bombeo de Ca2+ a los depsitos
internos y fuera de la clula, restablecindose los niveles
basales.
4.3.5 Regulacin de los receptores En el estado de repo-
so el calcio libre intracelular y los niveles de IP3 son bajos.
El aumento de la produccin de IP3 y su unin al receptor
produce un cambio de su conformacin abriendo los canales
de Ca2+. IP3, en ausencia de Ca3+, tiene poco efecto pero su
actividad se incrementa a medida que el Ca2+ intracelular
aumenta llegando a un mximo a los 300 nM despus de lo
cual comienza a ser inhibitorio. IP3 exhibe una respuesta al
Ca2+ en campana, primero facilita su unin al receptor y a
mayores concentraciones la inhibe. Un feedback positivo
aumenta la liberacin inicial pero a medida que el Ca2+ con-
tina aumentando inhibe la unin de IP3 a su receptor dis-
minuyendo el Ca2+ intracelular. Una vez que la concentra-
cin de Ca2+ ha vuelto a su nivel de reposo el receptor vuelve
a su estado sensitivo. El efecto inhibidor del Ca2+ es media-
do por una protena llamada calmedina.
Los receptores IP3 pueden fosforilarse por PKA, PKC, O por
CaMI<.I1y su accin es aditiva lo que sugiere que lo hacen en
diferentes lugares. Las tres enzimas fosforilan serinas dis-
minuyendo la potencia de IP3 para liberar Ca2+. El receptor
IP3 es tambin regulado por nucletidos de adenina. ATP en
concentraciones entre 1 y 10 IlM aumenta la capacidad de
IP3para estimular el flujo de Ca2+ y el efecto es revertido con
concentraciones entre 0.1 y 1.0 mM. El receptor IP3 contiene
dos secuencias consenso para la unin de ATP en su domi-
nio de acoplamiento.
Varios agentes farmacolgicos pueden modular al recep-
tor IP3aunque de manera no especfica. Heparina puede ac-
51
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A B
Subunidad Subunidad Subunidad
catalltica reguladora de asociacin
Holoenzima
.
Figura 4.9 Estructura de la CaMKII. A: estructura de una subunidad de la enzima. B: varias
subunidades se ensamblan para formar la holoenzima
actividad Ca2+-CaM independiente.

CaMKI y CaMKIV son activadas por fosforilacin en pre-
sencia de Ca2+-CaM. Dos CaM quinasa quinasas actan co-
mo activadores, CaMI(Ka y CaMKKI3.Ambas quinasa quina-
sas fosforilan un residuo en el dominio cataltico de las
CaMKs aumentando su actividad. CaMKIV que ha sido fos-
forilada a su vez puede ser inactivada por la protena fosfa-
tasa PP2A que la defosforila. Las CaMKK se regulan a s
mismas por autoinhibicin as como por unin a Ca2+-CaM.
4.4.2.2 Quinasas con sustrato nico Ca2+-CaM activa la
quinasa fosforilasa que estimula la glucogenolisis, la quina-
sa de la cadena liviana de miosina (MLCK),que fosforila a la
miosina activando la contraccin de msculos lisos, y a
CaMKIII, que regula la sntesis de protenas va fosforilacin
del factor-2 de elongacin.
4.4.3 Sustratos Las CaM-quinasas fosforilan serinas y
treoninas en una gran variedad de sustratos, regulando
funciones tales como metabolismo de carbohidrato s, sntesis
y liberacin de neurotransmisores, canales inicos, homeos-
tasis de Ca2+, funciones del citoesqueleto, y expresin de ge-
nes. De las CaM-quinasas responsables en mediar muchas
de las acciones de Ca2+ en las clulas, la mejor estudiada es
CaM-quinasa II que se encuentra en todas las clulas ani-
males pero en especial en el sistema nervioso donde la acti-
vidad de la CaM-quinasa es elevada en particular en los
terminales nerviosos. La activacin de las neuronas que
usan catecolaminas como neurotransmisores produce el in-
flujo de Ca2+ que estimula a las clulas a segregar su neuro-
transmisor. El influjo de Ca2+ tambin activa la CaM-
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enzima inactiva.
4.6.3 Activacin Para que la PKC sea activada necesita la
fosforilacin del dominio cataltico y la separacin del seu-
dosustrato del sitio activo. La PKC es sintetizada como un
precursor inactivo probablemente asociado al citoesqueleto.
En este estado el sitio cataltico es accesible a ATP pero la
enzima es cataliticamente incompetente. En el procesamien-
to posterior el dominio cataltico de la PKC es fosforilado,
posiblemente por accin de la quinasa PDK1. Esto es segui-
do por dos autofosforilaciones en el segmento C-terminal del
dominio cataltico, que para la PI(C011se hace en los resi-
duos treonina 641 y serina 660. La primera autofosforila-
cin estabilizara la conformacin, la segunda autofosforila-
cin libera la PKC al citosol y es ahora cataliticamente com-
petente pero todava inactiva debido a la yuxtaposicin del
seudosustrato con el dominio cataltico.
La unin de DAG al dominio C1 y de Ca2+ a C2 transloca
la enzima del citoplasma a la membrana. DAG tambin re-
duce los requerimientos de Ca2+ para la unin de fosfolpi-
dos al dominio C2 y produce un cambio conformacional en
el dominio cataltico por el cual el seudosustrato se des-
prende del sitio cataltico y el sistema se vuelve competente
y accesible a sustratos. La PKC es ahora activa.
Los steres de forbol activan la PKC por un mecanismo
similar al de DAG. Los steres de forbol interaccionan con
las isoenzimas de PKC en el mismo sitio que DAGunindose
a las regiones ricas en cistena. Son activadores ms poten-
tes y metabolicamente ms estables que DAG por lo que su
accin es ms prolongada. El compuesto ms utilizado es
PMA (phorbol 12-myristate 13-acetate) tambin conocido
como TPA(tetradecanoyl phorbol acetate).
Diversos lpidos potencian el efecto de DAG y de Ca2+ o
activan directamente las PKCs. En particular, los lpidos
PI(3,4)P2y PI(3,4,5)P3 activan las nPKC y aPKC. Los cidos
grasos no saturados, araquidnico, lisofosfatdico y lisofos-
fatidilcolina incrementan la actividad de la PKC.
4.6.4 Compartimientalizacin Los anlisis inmunohis-
toqumicos sealan que determinadas isoformas de PKCs
estn presentes en diferentes clulas y compartimientos
59
book.
book.
book.
,
CAPITULO 5
Receptores asociados a enzimas
Son glucoprotenas de transmembrana que, a diferencia

de los receptores acoplados a protenas G, atraviesan la
membrana una sola vez. Se activan por unin de sus ligan-
dos y transducen las seales extracelulares al citoplasma.
Basado en la presencia o ausencia de actividad cataltica en
el dominio citoslico, estos receptores se clasifican en re-
ceptores con actividad enzimtica intrnseca (receptores pro-
tena tirosina quinasa) y receptores sin actividad enzimtica
propia pero con capacidad de asociarse a protena-tirosina
quinasas del citoplasma (receptores citoquinas).
La mayora de los receptores con actividad enzimtica
propia pertenece a la familia de tirosina quinasa. Otros re-
ceptores estn asociados a enzimas que catalizan la produc-
cin de GMP cclico (receptores guanilato ciclasa), defosfori-
lan residuos de tirosina fosforilados (receptores tirosina fos-
fatasa), o fosforilan, en algunas protenas, residuos de se-
rina o treonina (receptores serinajtreonina quinasa).
5.1 Receptores protena tirosina quinasa (RPTK)

Los RPTKsestn unidos a un largo dominio citoplasmti-
co dotado de actividad protena quinasa especfica para tiro-
sina. La unin del ligando al receptor activa la quinasa que
agrega grupos fosfato a los residuos de tirosina propios y a
los de otras protenas. Los RPTKs estn implicados en pro-
cesos tales como proliferacin, diferenciacin, migracin ce-
lular, cambios metablicos y apoptoss, tambin tienen un
papel en varios procesos patolgicos como cncer y arte-
rioesclerosis.
La mayora de los ligandos que activan estos receptores
son factores de crecimiento, incluyendo insulina, el factor de
crecimiento epidrmico (EGF), el factor de crecimiento deri-
63
book.
book.
book.
sitio pudiendo cada uno activar una va diferente. La conse-

cuencia de la fosforilacin del receptor es, por un lado, el in-
cremento de la actividad cataltica intrnseca del receptor, y
por el otro, la creacin de sitios de unin para reclutar pro-
tenas de la cadena descendente de seales (protenas adap-
tadoras) y fosforilarlas (Figura 5.4).
5.1.3 Protenas adaptadoras Las tirosinas autofosforiladas
sirven como sitios de unin de alta afinidad para numerosas
protenas intracelulares (protenas adaptadoras) cada una de
las cuales se une a diferentes sitios fosforilados del receptor
activado. Muchas de estas protenas, una vez unidas, son a
su vez fosforiladas, activndose. Los diferentes RPTKs unen
diferentes combinaciones de estas protenas formando com-
plejos que activan distintas vas transductoras de seales.
5.1.3.1 Dominios 5H2 y 5H3 Las protenas citoplasmti-
cas que se unen a los residuos fosfotirosina de receptores ti-
rosina quinasas activados, tienen estucturas y funciones di-
versas pero generalmente comparten dos dominios no catal-
ticos, llamados SH2 y SH3, que conectan las protenas a los
componentes que estn en la cadena de seales. Cuando el
receptor es fosforilado convierte un sitio de su dominio cito-
slico en un sitio de unin SH2, donde una protena con un
dominio SH2 puede unirse. Los dominios SH2 se unen es-
pecificamente a los residuos tirosina fosforilados. Esta
unin puede dar lugar a la activacin de la protena ya sea
por su fosforilacin (caso PLCy)o por un cambio alostrico
(caso PI3K).Otro efecto sera localizar la protena con domi-
Dmero Receptor Complejo

activado activo
Unin de
Auto protelna
fosforilacin adaptadora
--
Proteina adaptadora
Figura 5.4 Activaci6n del receptor PTK por dimerizaci6n yautofosforilaci6n.
67
nio SH2 en estrecha proximidad a sus sustratos en la cara

interna de la membrana (caso Grb2).
Otro dominio de interaccin protena-protena es el domi-
nio SH3. El dominio SH3 provee la funcin de efector por el
cual algunas protenas se unen a componentes descenden-
tes de la va de seales. El adaptador Grb2, que consiste s-
lo en dominios SH2 y SH3, usa los dominios SH2 para con-
tactar los componentes ascendentes de la va de seales y
SH3 para contactar los componentes descendentes.
5.1.3.2 Tipos de protenas adaptadoras Las protenas
adaptadoras pueden ser: 1) enzimas, cuya actividad puede
ser directamente activada por fosforilacin, y 2) protenas
adaptadoras carentes de domnio cataltico, que se unen a
su vez a una subunidad cataltica que es activada. Estas
son protenas objetivo (targets) y sirven de intermediarias
entre los RPTKsy las molculas seales descendentes.
5. 1.3.2.1 Protenas adaptadoras con actividad enzima-
tica asociada. Estas protenas adaptadoras con dominio
SH2 que se unen a RPTKspueden dar lugar a la activacin
de su actividad enzimtica asociada, son protenas sustrato.
Para muchas quinasas la fosforilacin de un residuo de tiro-
sina conservado, presente en el dominio cataltico, es impor-
tante para su activacin. Las enzimas que se unen a RPTKs
activados pueden ser fosfolipasas, quinasas de la familia
Src, fosfatidilinositol 3' quinasa, o fosfatasas.
Fosfolipasas Un ejemplo de enzima que se une direc-
tamente a RPTKses la fosfolipasa C que hidroliza PIP2 a IP3
y DAG.Contiene dos dominios SH2 y un dominio SH3 entre
ambas. Los dominios SH2 interactan con los RPTKs acti-
vados y el dominio SH3 localiza la PLCyen el citoesqueleto.
Varios factores de crecimiento, como EGF y PDGF, que se
unen a RPTKs fosforilan tirosinas de PLCyactivndola, tra-
yendo la enzima en la proximidad con los sustratos en la
membrana plasmtica. (ver 4. 1.2).
Eosfatidilinositot s-ouinasa (PI3K) PI3K es una enzima
que responde a seales a travs de RPTKs en respuesta a
factores de crecimiento y citoquinas que requieren las fun-
ciones de Rho. La activacin de los receptores para PDGF e
nsulina activan PI3K (ver7.3).
68
Quillosas de la familia c-Src Src es el prototipo de una

familia de tirosina quinasas citoplasmticas de las que se
han identificado nueve miembros con caractersticas es-
tructurales muy similares. Src contiene un N-terminal mi-
ristoilado, por el que la protena se une a la cara citoplas-
mtica de la membrana donde estn localizados los sus-
tratos, un trecho de residuos cargados positivamente, que
interacta con grupos fosfolipdicos, un dominio SH3, un
dominio SH2, un dominio tirosina quinasa, y una cola C-
terminal que contiene un sitio regulador de la fosforilacin
de tirosina.
Src es una quinasa cuya actividad tiene dos papeles, por
un lado fosforila sustratos en los residuos de tirosina y por
el otro, se fosforila a si misma. Dos sitios de fosforilacin de
tirosinas regulan su actividad de quinasa: la fosforilacin
del residuo Tir-527, en la cola C-terminal, reprime su activi-
dad de quinasa, y la fosforilacin de la Tir-416, activa la ac-
tividad de quinasa.
La mayora de los miembros de la familia de quinasas Src
est mantenida en un estado inactivo por interaccin de la
Tir-527 fosforilada con el dominio SH2. La activacin requie-
re remover el fosfato de esa tirosina y fosforilar la Tir-416.
Cuando el RPTK es activado, la reaccin de autofosforilacin
crea una secuencia fosfopeptdica que se une a la regin
SH2 de Src liberando la regin que contiene la Tir-527 la
que puede ser defosforilada. Esto lleva a la fosforilacin de
Tir-416 y la activacin de la actividad de quinasa. Src acti-
vada fosforila a la protena de transmembrana de anclaje
Cbp (Csk binding protein). Cbp fosforilada recluta Csk a la
membrana plasmtica por interaccin del dominio SH2 de
Csk y la fosfotirosina de Cbp. Csk a su vez fosforila Src en el
residuo C-terminal (Tir527) lo que promueve una relacin
intramolecular que permite a la regin C-terminal unirse al
dominio SH2. La inactivacin de Src ocurre por remocin del
fosfato Tir-416 de su bucle de activacin por una fosfatasa
asociada a Csk (Figura 5.5).
La funcin normal de Src no ha sido determinada. Es po-
sible que los miembros de la familia Src estn implicados en
la activacin de PI3K en respuesta a variados estmulos. La
69
activacin de los miembros de la familia Src induce mitog-

nesis.
Proteina-tirosina fosfatasas (PTPs) son enzimas que
defosforilan a los RPrKs mismos y a sus sustratos. Pueden
tener el dominio cataltico integrando el dominio citoplasm-
tico del receptor o pueden ser protena-tirosina fosfatasas
citoplasmticas que se unen como protenas adaptadoras a
RPrKs activados (ver 5.6).
5.1.3.2.2 Protenas adaptadoras objetivo Son protenas
reclutadas por RPTKs activados que carecen de dominio ca-
taltico. Una de esas protenas adaptadoras es Grb2 (growth
factor receptor binding protein 2), una pequea protena
compuesta por un dominio central SH2 flanqueado por dos
dominios SH3, que se une al receptor activado pero no es
fosforilada (Figura 5.6).
Cuando Grb2 se une al RPTK activado atrae a Sos a la
que se une por el dominio SH3. El papel de Grb2 es ubicar a
Sos en la membrana en vecindad a Ras.
Sos tiene un dominio PH que interacta con lpidos de la
membrana, un dominio GEF en la parte media, y un sitio de
unin a Grb2 en la regin C-terminal. Cuando se une a
Grb2 Sos es fosforilada en las Ser y activada. Sos activada
acta como GEF (factor de intercambio de nucletidos de
guanina) especfico de Ras.
Una va alternativa usa la protena adaptadora Shc. La
protena Shc no tiene funcin cataltica pero sirve de enlace
--+
~ PTP
RPTK
L J
~~t!~~
.... ~~.(: .l (),. 416
Figura 5.5 Activacin y desactivacin de ta actividad quinasa de Src
70
c-src]
Figura 5.6 Estructura de molculas adaptadoras con y sin dominio cataltico.
de otras protenas con el RPfK. La fosforilacin de la tiro si-

na de Shc permite su asociacin con la protena Grb2 por su
dominio SH2.
5.2 La va Ras
La activacin de la protena Ras, unida al receptor activa-
do por medio de la protena adaptadora, se conoce como la
va Ras. La va Ras se inicia por la activacin de una serie de
eventos que ocurren en la cara citoplsmica de la membrana
plasmtica.
5.2.1 Las protenas Ras forman parte de una superfami-
lia de pequeas protenas G que unen e hidrolizan GTP. Las
protenas Ras son protenas monomricas, que a semejanza
de la protena Gse poseen actividad GTPasa intrnseca. Inter-
!,
vienen en la transduccin de seales que determinan prolife-

racin o diferenciacin celular a partir de la activacin de re-
ceptores tirosina quinasa y participan en procesos de senes-
cencia y apoptosis. Fueron descubiertas como productos hi-
peractivos de mutantes de genes ras que promueven cncer.
Los genes ras estn presentes en todas las clulas de eu-
cariotes desde levaduras a mamferos. En humanos, esta
familia incluye tres proto-oncogenes principales: Hsras, K-
ras, y N-ras. Las protenas Ras que estos genes codifican (H,
K, Y N) no presentan diferencias funcionales. Comparten es-
trecha semejanza en sus primeros 164 aminocidos pero el
segmento N-terminal, con excepcin de la cistena 186, es
muy desigual.
Despus de su sntesis en el citoplasma las protenas Ras
se unen a la cara interna de la membrana plasmtica por el
radical farnesilo unido a la cistena 186. Los cuatro amino-
cidos C-terminales constituyen la caja CAAX.donde C es la
71
cistena 186, A es cualquier aminocido aliftico y X cual-

quier aminocido. Tras la unin del radical farnesilo, catali-
zada por la enzima farnesiltransferasa, los tres aminocidos
siguientes al residuo cistena son eliminados y este es car-
boxilado (ver 2.2.1.2). Una segunda modificacin tiene lugar
por palmitoilacin de otra cistena del e-terminal. Ras debe
estar en la membrana plasmtica para funcionar.
Las protenas Ras son cadenas polipeptdicas de 189
aminocidos en las cuales se han caracterizado cinco moti-
vos conservados (G1 a G5) necesarios para los efectos trans-
formadores de Ras. Los residuos 25-45 comprenden la re-
gin efectora que comunica con protenas de la cadena des-
cendente. La secuencia de aminocidos 97 a 108 son respon-
sables de la interaccin con GEFs. Las otras regiones estn
implicadas en la interaccin con los nucletidos guanina.
5.2.1.1 Ciclo de activacin Las protenas Ras oscilan en-
tre dos estados conformacionales: la forma inactiva unida a
GDP y la forma activa unida a GTP. Una seal ascendente
estimula la disociacin de GDP de la forma unida a GDP se-
guido por la unin a GTP produciendo un cambio confor-
macional de la regin de unin al efector de modo que esta
regin interacta con el efector descendente. La forma unida
a GTP es convertida, por accin de la actividad GTPasa in-
trnseca, a la forma unida a GDP liberando el efector unido.
As se lleva a cabo un ciclo de activacin-inactivacin sir-
viendo Ras como conmutador que traduce una seal ascen-
dente a un efector descendente (Figura 5.7).
La reaccin de intercambio GDP a GTP, que es extrema-
damente lenta, es estimulada por el regulador GEP o GEF
[guanine nucleotide exchange factor). La accin de GEF, que
para Ras realiza Sos, es generalmente regulada por seales
ascendentes. GEF, activada por RPrKs activados, interacta
con Ras primero con la forma unida a GDP liberando GDP
para formar un complejo binario Ras-GEF. Luego GEF es
reemplazado por GTP para formar la forma unida a GTP li-
berando GEF.
La desactivacin de Ras se hace por unin al complejo
RasGTP de una protena activadora de GTPasa, Ras- GAP
(GTPase activating protein], que hidrlisa GTPcon liberacin
72
de Pi. RasGTP tiene baja actividad intrnseca de GTPasa la

que es potenciada por RasGAP. La protena RasGAP acta
como un regulador negativo de Ras acelerando su hidrlisis.
RasGAP contiene adems de un dominio cataltico dos
dominios SH2 y un dominio SH3. Por sus dominios SH2
GAP interacciona con los receptores tirosina quinasa activa-
dos, desplazndose desde el citoplasma a la membrana
plasmtica, y es rapidamente fosforilada en residuos de tiro-
sina en respuesta a factores de crecimiento.
Dos formas de RasGAP por empalmes alternativos han si-
do caracterizadas, una de las cuales (neurofibrina) es codifi-
cada por un gen cuya mutacin da lugar a fibromatosis.
Ambas GAPs se expresan ubicuamente y mantienen la ma-
yora de las protens Ras (950/0)en estado inactivo. Mutacio-
nes que inhiben la actividad GTPasa de Ras no responden a
GAP por lo que Ras se mantiene permanentemente activada
produciendo transformaciones neoplsicas.
5.2.1.2 Mecanismo de activacin Una gran variedad de
estmulos activan Ras. Entre los ms importantes figuran
los asociados a RPTI(s. Calcio y DAG pueden activar Ras por
intermedio de GEFs especializadas, como RasGRF que se
expresa predominantemente en el cerebro (Figura 5.8).
5.2.1.3 Efectores Ras, en su conformacin unida a GTP,
se une a protenas efectoras activndolas. Entre ellas estn
los miembros de la familia Raf (Rafl, B-Raf, Y A-Raf), PI3K, Y
miembros de la familia RalGEF (RalGDS, Rlf, y Rgl). El efector
SOS GDP + GTP

-~ GEF...-"
INACTIVO ~
Ras-GDP Ras-GTP EFECTORES

.A ~ J ACTIVADO
P, G~P~20
PTK
Figura 5.7 Ciclo de activacin-inactivacin de la protena Ras. Sos, activado por RPTKs
activados, es el RasGEF. Por su parte GAP es fosforilada por proteina tirosina quinasas con
lo que se activa.
73
.
de Ras mejor caracterizado es la serina-treonina qumasa
Raf1 (Figura 5.8).
5.2.2 La protena c-Raf Ras se une a las protenas Raf
activando la cascada de quinasas MAP.Las protenas Raf in-
tegran una familia que comprenden a Raf-1, A-Raf, y B-Raf.
En las clulas en reposo Raf1 se encuentra en el citosol
en una conformacin inactiva estabilizada por la protena
14-3-3. Las protenas 14-3-3 son una familia que se expresa
ubicuamente y que produce un cambio conformacional de
Raf1 ocultando su actividad enzimtica y secuestrndola en
determinados compartimientos celulares. Raf1 contiene dos
sitios fosfoserina de alta afinidad, Ser-259 y Ser-621, que
median la unin a un dmero 14-3-3. El complejo Ras:GTP,
anclado a la membrana, recluta a Raf1:14-3-3 a la membra-
na induciendo un cambio en su conformacin y la defosfori-
lacin de la Ser-259. La liberacin de uno de los dos sitios
de unin de 14-3-3 a Raf1, por Ras activado, incrementa la
asociacin de Raf1 con la membrana y estimula su activi-
dad. Una vez que c-Raf ha sido localizado en la membrana
plasmtica Ras no es ms requerida.
La activacin de Raf tambin requiere Ksr, que puede ac-
tuar como una protena adaptadora para la formacin de un
complejo ms grande que contina la operacin despus
que Raf se disocia de Ras:GDP.
RPTK DAG
Grb2~SOSRaSGR
~/
Ras
RalGEF Raf1 PI3K
Figura 5.8 Vlas de activacin de Ras y sus efectores.
74
5.3 La va RasjMAPK
La va Ras/MAP de transferencia de seales implica cas-
cadas de fosforilaciones mltiples de serina/treonina que
son de vida ms larga que las fosforilaciones de tirosina.
Los miembros de la familia Raf (Raf-1, A-Raf, y B-Ra) ac-
tivados fosforilan la quinasa MEK (MAPkinase-ERK kinase)
en residuos serina y treonina. En clulas no estimuladas
MEK se une a ERK1 y ERK2 retenindolas en el citoplasma
y evitando su acumulacin en el ncleo. En respuesta a es-
tmulos mitognicos que fosforilan y activan MEK, el com-
plejo MEK-ERKse disocia y MEKl activado fosforila resi-
duos tirosina y treonina de la quinasa MAPK/ERK(extrace-
lular regulated kinase), transformndola en una forma acti-
va (Figura 5.9).
La quinasa MAPen su forma inactiva no fosforilada, tiene
su sitio cataltico bloqueado por un segmento de aminoci-
dos, el labio de fosforilacin. La unin de MEK a la quinasa
MAPdesestabiliza la estructura del labio y produce la expo-
sicin de una tirosina que se encuentra oculta en la confor-
macin inactiva. Despus de la fosforilacin de esa tirosina,
MEK fosforila una treonina vecina. Los restos fosforilados de
tirosina y treonina de la quinasa MAPpermite la fijacin de
ATP al sitio cataltico y la formacin del sitio de unin de
protenas especficas para sustratos. La fosforilacin no slo
estimula la actividad cataltica de la quinasa MAPsino tam-
bin su dimerizacin (Figura 5.10).
5.3.1 Activacin de ERK por GPCRs La cascada de qui-
nasas MAPpueden activarse tambin por receptores acopla-
dos a protenas G tanto sensibles como insensibles a toxina
Figura 5.9 Regulacin de la activacin de MAPK. MEK retiene a ERK en el citoplasma y des-
pus de su activacin fosforila y activa a ERK que forma dmeros y puede Iranslocar al ncleo
75
pertussis. Los receptores insensibles a toxina pertussis, ta-

les como el receptor muscarnico tipo 1, lo hacen a travs de
una va Ras independiente que implica la activacin de Gaq y
subsecuentemente de PLCp. Los receptores sensibles a toxi-
na pertussis estn acoplados a GaojGai y emplean la sub-
unidad Bypara iniciar la activacin de la quinasa MAP de-
pendiente de Ras, de una manera similar a lo que hacen los
receptores dependientes de tirosina quinasa. Como se ob-
serva en los receptores B2-adrenrdicos, su fosforilacin por
PKAy PKC, que produce desensibilizacin heterloga, altera
su especificidad de G, a favor de Gi, con lo que se incremen-
ta la disponibilidad de la su bunidad py.
Esta subunidad inicia una va de reacciones Ras depen-
diente que conduce a la activacin de ERK. Con estimula-
ciones ms intensas el B-receptor es fosforlado por BARI(
que a su vez recluta B-arrestina la que acta como sitio de
anclaje de la protena tirosina quinasa Src por su dominio
SH3. Src inicia la va de activacin de ERK mediada por Ras.
Otros receptores de 7TM pueden llegar a Ras por otras vias.
As el LPA activa ERK implicando a PI3K y a Grb2jSos (Fi-
gura 5.11).
La activacin del receptor PTK por NGF, puede tambin,
por una va alternativa a Ras, activar la PLCy, estimulando
la protena quinasa C y la liberacin de calcio que a su vez
activa la va Ras- MAP.
5.3.2 Sustratos MAPK activada fosforila varias protenas
en la clula incluyendo otras protena quinasas y protenas
reguladoras de genes. MAPKjERK activada forma dmeros
que migran al ncleo y catalizan la fosforlacin de sus sus-
Grb2-Sos
!
Ras
!
Raf
!
MEK1MEK2
!
MAPKIERK
Figura 5.10 Componentes de la via RasMAP
~
76
tratos en los motivos Ser-Pro y Tre-Pro. En el ncleo fosfori1a

factores de transcripcin que resulta en la induccin rpida
de genes de respuesta inmediata tales como el factor c-Fos.
Las seales mitognicas iniciadas por factores de creci-
miento requieren de un aumento de la sntesis de protenas.
ERK activado fosforila y activa eIF-4E requerido para iniciar
la sntesis de protenas.
MAPK estimula fosfatasas que modulan la actividad de
numerosas enzimas y protenas. Tambin es sustrato de
MAPKsla protena MAP-2 asociada a microtbulos.
5.3.3 Isoformas de quinasas MAP La familia de protenas
referidas como MAP quinasas, puede clasificarse en tres
grupos funcionales ERK, JNK, Y p38. Estas protenas tienen
similares propiedades bioqumicas, secuencias de aminoci-
dos, y capacidad de fosforilar in vitro similares sustratos.
Sin embargo, cada una de las tres formas de quinasas MAP
son activadas por diferentes mecanismos. ERK es activada
por protena G y la mayora de los factores de crecimiento
mediando seales mitognicas y de diferenciacin, mientras
que JNK y p38 estn asociadas a respuestas celulares a
stress y citoquinas inflamatorias. Los destinatarios de cada
quinasa MAP tambin varan grandemente Las quinasas
MAP operan en tres vas cada una de las cuales comprende
una cascada de quinasas que resulta en la fosforilacin y
activacin de sus miembros. Los miembros de cada uno de
los grupos de esta familia son activados por fosforilacin
Receptor Receptor
muscarnico J3-a2ren ~ico
t PKA,
PKC~ ~IARK
Gaq GaiGa.-Gpr Arrestina-Src
t t
PLC Ras _._..-
t t
DAG Raf-1
t t
PKC
Figura 5.11 Activacin de ERK mediada por GPCRs. El grado de fosforilacin del receptor p-
adrenrgico, dependiente de la intensidad del estmulo, activa dstintas vas.
77
Receptoresasociadosa enzimas
dual de los aminocidos treonina y tirosina, los que estn

separados por un aminocido formando as un motivo TXY.
El aminocido presente en la posicin X vara en los distin-
tos grupos. As, las quinasas ERI( son fosforiladas en el do-
minio consenso de fosforilacin treonina-glutmico-tirosina
(TEY)mientras que JNK lo es en treonina-prolina-tirosina
(TPY)y p38jHOG en treonina-glicina-tirosina (TGY)(Figura
5.12).
5.3.3.1 Las quinas as JNK [c-jun N-terminal kinases).
Esta familia de quinasas, tambin llamadas SAPKs, (stress
activated protein kinases), se activa en respuesta a stress
ambiental y por receptores citoquinas involucrados en la
respuesta inflamatoria como IL-l y TNF-a,. En clulas de
mamferos. JNI( ha sido implicada en la respuesta inmune,
transformacin oncognica, y apoptosis. Las quinasas JNK
de mamferos estn codificadas por los genes jnkl, jnk2, y
jn,k3.
As como Ras es un intermediario en la traduccin de se-
ales a MAPKs,Racl y Cdc42 cumplen un papel similar en
el sistema de transduccin a JNKs de seales originadas en
la membrana celular. Un activador especfico de JNKs es
SEK, un homlogo de MEK-1, tambin denominado MKK4,
una quinasa con especificidad dual. Otra quinasa dual es
Va ERK Va JNK/SAPK Vap38/HOG

Factores de UV, TNF-a IL-1 UV,H,O" TNF-a
crecimiento (Stress. inflamacin) (Stress osmtico)
Grb2-Sos
!
Ras Rac/Cdc42
Tir
! ---!
Rtf MEfK1 ----..
SerlTre MEK1-MEK2 SEK/rKK4~MKK6
TirlTre
MAP'1";RK JNl5lf~-.!:Jltt~~
SerlTre ElklSAP c-Jun ATF-2 MEF2-c
Figura 5.12 Vas de transcripcin de las isoformas de quinasas MAP. A derecha amino-
cidos fosforiladosa los distintos niveles.
78
MKI(7, tambin un activador especfico de JNI(s. A su vez

SEI\: es regulada en forma especfica por MEKK. Otro esla-
bn de esta cadena es la enzima MLK3 (mixed linaeage ki-
nases), una molcula reguladora que precede a MEKK aun-
que tambin podra actuar sobre MKK4. JNK es tambin ac-
tivada por activacin de Ras por una va no identificada. Las
protenas JNKs son activadas por fosforilacin dual en resi-
duos de treonina y tirosina localizados en un motivo treoni-
na-prolina-tirosna (TPY)(Figura 5,12).
Las JNKs fosforilan a la protena c-Jun, en los residuos
de serina 63 y 73 aumentando su actividad transcripcional,
y tambin a ATF-2. Sustratos adicionales incluyen a los fac-
tores de transcripcin de la familia Ets, Elk-1 y SAP-1, que
son homlogos a p62/TCF, y participan en la regulacin de
c-fos.
La protena cito plasmtica JIP-1 (JNK interacting protein)
interacta con JNK. Contiene un dominio de unin a JNI(
en el N-terminal y un domino SH3 en el C-terminal. JIP-1
suprime las seales inducidas por JNK compitiendo con c-
Jun y ATF2 por JNK reteniendola en el citoplasma, y tam-
bin inhibiendo la fosforilacin de c-Jun por JNK.
5.3.3.2 La quinasa p38/HOG un homlogo en mamfre-
ros de HOG-1 en levadura, es una quinasa capaz de ser ac-
tivada por stress osmtico y citoquinas y debilmente por s-
teres de forbol. Tiene un motivo de fosforilacin treonina-
glicina-tirosina (TGY).Es expresada en una gran variedad de
tejidos humanos, aunque preferentemente en msculo. Tie-
ne como reguladoras a las quinasas duales MKK3 y MKK6
aunque es ms notoria la actividad de la ltima. Tambin
podra ser activada por MKK4. Entre los sustratos se en-
cuentran los factores de transcripcin ATF-2 Y SAP-1 y otras
protena quinasas (Figura 5.12).
5.3.4 Convergencias y divergencias Los estmulos pue-
den generar diferentes respuestas dependiendo de su inten-
sidad y duracin. Clulas PC12 tratadas con NGF se dife-
rencian pero dejan de crecer, pero tratadas con EGF conti-
nan proliferando. En ambos casos se activa la va
ERKfMAP. La diferencia es que NGF produce aumento pro-
longado de Ras-GTP mientras que EGF produce efectos
79
transitorios.
Un aspecto importante es que las vas de transduccin de
seales convergen y divergen permitiendo que respuestas di-
ferentes pero superponibles sean activadas en diferentes
circunstancias. En la va Ras-MAPK MEK es un punto de
convergencia que puede activarse por dos tipos de estmulos
en la superficie celular, actuando sobre receptores tirosina
quinasa o protenas G, produciendo funciones anlogas en
vas paralelas.
Otro ejemplo es dado por la activacin del factor de trans-
cripcin Jun en respuesta a la quinasa JNI( activada por
seales de stress o por estmulos que activan Ras.
La presencia de mltiples vas MAPK con componentes
anlogos es comn. Cada va funciona de una manera lineal
pero adems puede haber entrecruzamientos (crosstalk) en-
tre vas, cuando un componente de una va puede activar el
componente subsiguiente de otra o de su propia va. Por lo
general estas seales laterales son ms dbiles.
5.4 Factores de crecimiento y protenas G

Miembros de la superfamilia de receptores de factores de
crecimiento tambin pueden activar receptores acoplados a
protenas G. Estos receptores, con un slo dominio de
transmembrana acoplados a protenas G contienen una se-
cuencia consenso en sus dominios yuxtamembrana que in-
teracta y activa las protenas G. Esta secuencia consenso
de 14 a 20 aminocidos contiene dos residuos bsicos en el
N-terminal y un motivo BBXXBen el C-termnal (B es un re-
siduo bsico y X es un residuo no bsico, no aromtico).
5.5 Factores de crecimiento

Los factores de crecimiento son protenas que se unen a recepto-
res en la superficie de las clulas dando lugar fundamentalmente a
la activacinde la proliferaciny/o diferenciacincelular. Clulas de
mamifero cultivadas en un medio que contiene todos los elementos
nutritivos slo crecen si se agrega suero al medio. La falta de suero
detiene el crecimiento. Los elementos que provee el suero son cierta
protenas muy especificasllamadas factores de crecimiento,la mayo-
80
ra de las cuales se requieren a muy baja concentraciones (10-9a 10-

ro M).
Los factores de crecimiento pueden dividirse en clases amplias y
limitadas. Las clases de factores amplios, como PDGFy EGF, afectan
a muchos tipos de clulas (fibroblastos, msculo liso, neuroglia),
mientras que los factores limitados son especficosde un tipo de c-
lula, como la eritropoyetina que acta slo sobre los precursores de
glbulos rojos. Para cada tipo de factor de crecimiento hay un recep-
tor o grupo de receptores.
Aunque algunos factores de crecimiento estn presentes en la cir-
culacin general, la mayoria se originan de clulas en la vecindad de
las clulas afectadas y actan como mediadores locales. Aparte de
estimular la divisin celular, hay factores de crecimiento, como la
familia del factor transformador de crecimiento beta, que actan es-
timulando unas clulas e inhibiendo otras. Adems de regular el cre-
cimiento y la divisin celular, pueden regular la proliferacin, sobre-
vida, diferenciacin,migracin, etc.
Los factores de crecimiento incluyen PDGF, EGF, TGF-, IGF-I,
FGF, NGF,eritropoyetina, interleuquina-2 (IL-2).
EGF (epidermalgrowth factor) El factor de crecimiento epidrmico
es un polipptido de 53 aminocidos que se forma por la ruptura de
una proteina precursora. Se une a receptores de supeficie con gran
afinidad activando su tirosina quinasa citoslica. EGF tiene efectos
sobre las clulas de origen mesodrmico y ectodrmico particular-
mente keratinocitos y fibroblastos Tambin induce la expresin de
proto-oncogenes como Fos, Jun, y Myc.
PDGF(platelet-derivedgrowth factor) Uno de los primeros factores
identificados. Su descubrimiento surgi de la observacin que fibro-
blastos cultivados proliferaban en presencia de suero pero no de
plasma. La proliferacin de los fibroblastos puede producirse agre-
gando extractos de plaquetas. La liberacin de PDGF liberado del
cogulo de la sangre posiblemente juega un papel esencial en esti-
mular la divisin celular durante la cura de heridas. El factor de cre-
cimiento derivado de plaquetas est compuesto por dos cadenas po-
lipeptidicas distintas, Ay S, que forman homodimeros o heterodme-
ros. Slo las formas dimricas interaccionan con el receptor PDGF.
Dos clases de receptores han sido clonados, uno especfico para los
homodimerosAAy otro que une los dimeros SS y AB.
FGFs (fibroblast growth factors) Esta familia de factores de creci-
miento de fibroblastos est constituida por numerosos miembros.
Son polipptido s que regulan la proliferaciny diferenciacinde dis-
tintos tipos de clulas y tienen importancia en el desarrollo del es-
queleto y el sistema nervioso. Los FGFs interactan con receptores
de superficie de los cuales se han identificado cuatro tipos distintos
81
(FGFRl a FGFR4).Los receptores estn ampliamente expresados en

el desarrollo seo y varias alteraciones autosomales dominantes del
crecimiento de huesos resultan de mutaciones en los genes de FGFR.
La ms prevalente es la acondroplasia causada por un defecto gen-
tico de FGFR3,un receptor necesario para el control del crecimiento
de condrocitos en los cartlagos de crecimiento de los huesos. Otros
trastornos del crecimiento de los huesos, identificados como cranio-
sinostosis, resultan de mutaciones en FGFRl, FGFR2YFGFR3Yque
dan lugar a los sindromes de Pfeiffer,Crouzon, o Apert.
IGF (insulin-like growth factor) El factor de crecimiento insulina
simil en su forma IGF-l, originalmente llamado somatomedina e, es
un factor de crecimiento relacionado a la insulina producido en res-
puesta a la hormona de crecimiento.Tiene acciones autocrinas y pa-
racrinas adems de acciones endocrinas. Induce actividades celula-
res, en particular sobre el crecimiento de los huesos. Puede unirse al
receptor de la insulina pero con mucha menor afinidad. La forma
IGF-IIse expresa casi exclusivamente en tejidos embrionarios y neo-
natales por lo que se la considera un factor de crecimientofetal.
TGF~(transforming growth factors-B) La familia de factores trans-
formadores del crecimiento ~ comprende cuatro protenas estrecha-
mente relacionadas (TGF~-l a TGFB-5).Estas protenas son secreta-
das como precursores inactivos que por pocesos proteoliticos dan lu-
gar a la formacin de elementos maduros. Losprecursores contienen
un pptido seal N-terminal, un prodominio central de 50 a 375
aminocidos, y un dominio maduro e-terminal que constituye el fac-
tor de crecimiento activo. El domino maduro, que se separa despus
de la escisin proteolitica, contiene seis restos de cisteina que forman
tres enlaces disulfuro. Los monmeros se unen por una cisteina N-
terminal para formar homodimeros y heterodimeros funcionales. Va-
rias clases de receptores de superficie unen diferentes TGFsp con di-
ferente afinidad. La familia de receptores TGF~tienen actividad seri-
na-treonina intrinseca.
TGF tiene efectos proliferativosen clulas mesenquimales y epite-
liales. En ciertas condiciones tiene efectos antiproliferativosdisminu-
yendo la secrecin de inmunoglobulinas y suprimiendo la hematopo-
yesis, miognesis, adipognesis, y esteroidognesis adrenal.
Neurotrofinas Las neurotrofinas son una familia de pptidos rela-
cionados que regulan el desarrollo, mantenimiento, sobrevida y
muerte de neuronas en el sistema nervioso central y perifrico. In-
cluyen el factor de crecimiento neuronal (NGF),el factor neurotrfico
derivado del cerebro (BDNF),neurotrofina 3 (NT-3),Y neurotrofina
4/5 (NT-4/5). Los factores neurotrficos segregados por clulas de
un determinado campo protegen a las neuronas de la apoptosis, de
modo que el nmero final de neuronas que inervan un sitio reflejan
82
la disponibilidad de neurotrofmas. Las neurotrofmas tambin des-

empean un papel en regular la plasticidad neuronal y en regular el
nmero de celulas neuronales progenitoras. El hallazgo de que la
glndula submaxilar del ratn produce gran cantidad de NGFpermi-
ti su aislamiento y determinar la secuencia de aminocidos. NGFes
un homodmerode dos polipptidos con 118 restos.
Las neutro finas se sintetizan como protenas precursoras de 240 a
260 aminocidos que son procesadas hasta su secrecin al espacio
extracelular como protenas homodimricas maduras. Las proneuro-
trofinas se unen al receptor p75NTR con afmidad mayor que las neu-
rotrofinas maduras. Las proNGFmedian la degeneracin y apoptosis
de neuronas.
Las neurotrofinas se unen y activan un receptor tirosina quinasa
especifico.Hay dos clases de receptores de neurotrofinas: el receptor
p75, tambin conocido como receptor de neurotrofinas de baja afini-
dad (LANR),comn a todos los miembros de la familia de neurotrofi-
nas, y los receptores de alta afinidad que incluye a los receptores
protena tirosina quinasa TrkA, TrkB, y TrkC. TrkA es el receptor de
NGF,TrkB es el receptor para BDNFy NT-4,YTrkC es el receptor de
NT-3, aunque NT-3 puede unirse tambin a los otros receptores
aunque con menor afinidad que a TrkC. Existen isoformas de TrkB y
TrkC a las que les falta la regin cataltica citoplasmtica y no se sa-
be si actan como receptores agonistas o inhibidores.
El receptor p75 pertenece a la familia de receptores del factor de
necrosis tumoral. Une a las neurotrofinas pero no tiene el dominio
citoplasmtico de quinasa. Su papel es controvertido, puede dismi-
nuir la respuesta a neurotrofinas, puede aumentar la afinidad de los
receptores Trk por sus respectivas neurotrofinas, y puede unirse a las
neurotrofinas y prevenir su unin a los receptores de alta afinidad.
La unin de las neurotrofmas a sus receptores Trk especificosac-
tiva su tirosina quinasa. La unin de NGFal receptor TrkAen clulas
PC12 (una linea de clulas de feocromocitomade rata) produce su
dimerizacin que lleva a la activacin de su actividad tirosina quina-
sa intrnseca. Cada subunidad del dmero cataliza la fosforilacin de
la otra subunidad. Los sitios de fosforilacin incluyen tres tirosinas
situadas en el dominio quinasa y dos tirosinas fuera de ese dominio.
La fosforilacin en el domino quinasa tiene lugar primero y aumenta
la actividad cataltica de la quinasa. Despus se fosforilan las tirosi-
nas situadas fuera de la quinasa. La TrkAfosforiladasirve como ma-
triz para el reclutamiento de una variedad de protenas adaptadoras
y de enzmas cuyas molculas contienen el dominio SH2. Entre las
protenas que interactan con TrkAtirosina fosforilada estn las en-
zimas PLC'Y y PI3K,Yla protena adaptadora Shc. Cada una de estas
molculas activa distintas vas que pueden tener diferentes funcio-
nes. La va Ras-MAPKiniciada por Shc o por PLCypuede estar im-
83
plicada en diferenciacin mientras que la va de PI3Kpuede ser im-

portante para la sobrevida.
La unin de las neurotrofinas al receptor p75N1'R produce la acti-
vacin de vas totalmente diferentes. p75NTR carece de actividad cata-
ltica intrnseca de modo que sus seales son mediadas por interac-
cin con varios interactores citoplasmticos implicados en la induc-
cin de la muerte celular. La GTPasa RhoA modula el crecimiento
neurtico y la activacin de la va NF-kBmedia la sobrevida celular.
De modo que la unin a p75NTR puede resultar en sobrevida o muerte
celular dependiendo del factor citoplasmtico que ha sido reclutado y
del contexto celular.
Durante el desarrollo, muchos factores de crecimiento que regulan
la proliferacin de clulas no neuronales tambin estimulan la proli-
feracin de neuroblastos. Factores de crecimiento insulina simil, fac-
tores de crecimiento de fibroblastos, la familia del factor de creci-
miento epidrmico, y las neurotrofinas aumentan la proliferacin de
clulas neuronales precursoras.
5.6 Receptores protena tirosina fosfatasas

Son enzimas que remueven grupos fosfato de fosfotirosi-
nas de protenas. Su actividad especfica asegura que la fos-
forilacin de la tirosina sea de corta vida y que los niveles de
tirosina fosforilada en la clula en reposo sea baja. El balan-
ce entre la actividad de fosforilacin por quinasas y la acti-
vidad de defosforilacin por fosfatasas controla el resultado
de numerosas cascadas de transduccin de seales. En mu-
chos casos la defosforilacin sirve para volver a las protenas
a su estado de reposo dando por terminada una accin, en
otros, la protena fosforilada en condiciones basales se acti-
va por defosforilacin. En casos particulares, como el del
factor e-Jun. requiere de la defosforilacin de los residuos
serinajtreonina cercanos al sitio de unin a ADNy fosforila-
cin de serinas en la regin N-terminal para ser completa-
mente activo.
Las protena tirosina fosfatasas (PTPs)son una familia de
protenas que puede dividirse en dos grupos, las PTPs de
transmembrana o receptores PTP, y las PTPs citoslicas.
Son enzimas monomricas cuya diversidad estructural refle-
ja diferencias en el reconocimiento de sustratos.
5.6.1 PTPs de transmembrana Los receptores de estas
84
fosfatasas han sido clasificados en ocho subfamilias (tipo 1 a

tipoVIII).Poseen un dominio extracelular seguido de una re-
gin de transmembrana y un dominio citoplasmtico C-
terminal. El dominio citoplasmtico se caracteriza, en la
mayora de los casos, por contener dos motivos catalticos
repetidos (D1 Y D2) en tndem. El ms prximo a la mem-
brana es responsable de ms del 99% de la actividad catal-
tica mientras que el siguiente motivo, que es inactivo y falta
en algunas subfamilias, recluta mltiples sustratos fosfori-
lados para el dominio activo adyacente. Estos dominios son
los ms conservados de estas protenas (Figura 5.13).
Los dominios extracelulares son dispares y varan desde
cortas cadenas a estructuras extendidas, semejantes a las
de los receptores Pl'Ks, conteniendo repeticiones de fibro-
nectina o inmunoglobulina smil. No se han identificado li-
gandos para estas fosfatasas.
Un ejemplo de PrP es CD45. Cuando el receptor de las c-
lulas T (TCR)se activa se asocia con Lck, una PrK de la fa-
milia Src. Lck se mantiene inactiva, por la interaccin de su
dominio SH2 con un residuo fosfotirosina situado en su C-
terminal (ver 5.1.3.2.1). La fosfatasa CD45 defosforila este
residuo activando Lck (ver 6.6.4). Otro ejemplo es el de la
fosfatasa MKP-1. Esta fosfatasa es el producto de uno de los
genes de respuesta inmediata inducido por ERK. Cuando
MKP-1 transloca al citoplasma es fosforilada y activada por
ERK que a su vez defosforila e inactiva ERK (Figura 5.14).
5.6.2 PTPs citoslicas Las PTPs citoplasmticas tienen
dos dominios SH2 en la mitad N-terminal de la protena y
un dominio cataltico en la mitad C-terminal. Existen dos
Figura 5.13 Estructura de una protena tirosina fosfatasa de

transmembrana. Su dominio extracelular, variable en las distin-
tas fosfatasas, contiene repeticiones de fibronectna o similares
a inmunoglobulina.
85
isoformas, SH-PTPl y SH-PTP2, las que pueden ser activa-

das por unin a RPTI(s fosforilados (ver 5.1.3.2.1).
SH-PTPl (o SHP-l, Src homology phosphatase-l) tiene
accin de desactivacin de una serie de vas transductoras
de seales relacionadas con la proliferacin y diferenciacin
de clula hematopoyticas. Por su dominio SH2 se une a un
residuo tirosina fosforilado del receptor Epo con 10 que se
vuelve sensible a la fosforilacin por Jak2. SHP-1 fosforilada
y activada es capaz ahora de defosforilar e inactivar tanto a
la quinasa Jak como al factor STAT5con lo que controla ne-
gativamente la transcripcin de la proliferacin de clulas
hematopoyticas progenitoras (ver 6.4).
SH-PTP2 (o SHP-2) se une a y es fosforilada por recepto-
res PTKs activados. Acta como una fosfatasa para sustra-
tos implicados en la cascada de seales de RPTKs activados
por factores de crecimiento.
SHP-2 tambin funciona como un adaptador y como tal
puede promover la activacin de ERK sin comprometer su
actividad de fosfatasa. Despus de la activacin del receptor
SHP-2 se une por sus dominios SH2 a las tirosinasfosfori-
ladas y acta como sitios de unin a Grb2 activando las
reaccines de la va Ras-MAP.
5.7 Fosfatasas protena serina-treonina

Son fosfatasas oligomricas caracterizadas por su asocia-
cin con subunidades. Estas subunidades direccionan a la
fosfatasa a determinadas localizaciones restringiendo as su
accin a un limitado grupo de sustratos tales como la cade-
na liviana de miosina o el glucgeno.
~ /-r:
~
........ (ERK)
- -1-
- - --~- - - - - - --- - Figura 5.14 Interacciones entre ERK y la fosfatasa
MKp1
==~====ADN
86
Estas fosfatasas comprenden la subunidad cataltica y la

subunidad inhibidora. Esta ltima determina la distribucin
subcelular, la selectividad de sustratos y las actividades ca-
talticas. As PP1, que es potencialmente activa para muchos
sustratos, nunca se encuentra en forma libre, o est unido a
su subunidad reguladora Gm, asociada con glucgeno for-
mando el complejo heterodimrico PPIG, o est unida a la
su bunidad Inh 1 previniendo la defosforilacin de otros sus-
tratos.
5.7.1 Clasificacin Las fosfatasas serina treonina se cla-
sifican en dos superfamilias: PPP y PPM. La familia PPM
(fosfatasas activadas por magnesio) comprende a PP2C de-
pendiente de Mg2+y a la fosfatasa mitocondrial piruvato
dehidrogenasa (PDP). La familia PPP (fosfoprotena fosfata-
sas) comprende numerosas subunidades catalticas y regu-
ladoras formando un amplio nmero de fosfatasas serina
treonina funcionales de las que PPl y PP2 son las ms
abundantes.
5.7.2 Protena fosfatasa 1 (PPl) defosforila muchas pro-
tenas regulando funciones como plasticidad snptica, ciclo
celular, transcripcin de genes, y metabolismo de carbohi-
dratos y de lpidos. Las isoformas PPla, p, y yl se expresan
ampliamente en tejidos de mamferos mientras que PPly2 se
expresa predomnantemente en testculo. La actividad de
PPl es regulada por muchas hormonas y factores de creci-
miento actuando, fundamentalmente, a travs de nhibido-
res endgenos y en algunos casos a trevs de subunidades
reguladoras. Los inhibidores de PPl comprenden al Inhibi-
dor-l (1-1), al lnhibidor-2 (1-2), a la fosfoprotena de Mr
32.000 regulada por dopamina y AMPc (DARPP-32), al In-
hibidor nuclear de PPl (NIPP-l), allnhibidor de la fosfatasa
de Mr 17.000 activada por quinasa C (CPl17), Y al Inhibidor
ribosomal de PP1(RIPP-l).
Uno de los paradigmas de regulacin por PPl es la accin
sobre el factor de transcripcin CREB. PPl tambin partici-
pa en la regulacin del metabolismo del glucgeno (ver 5.8).
5.7.3 Protena fosfatasa 2 (PP2) PP2A tiene una amplia
gama de funciones biolgicas incluyendo el control del ciclo
celular, organizacin del citoesqueleto, transcripcin de ge-
87
book.
5.7.4 Inhibidores de las fosfatasas PPl 1) 1nhibidor-1 (1-1)

es un potente inhibidor de PPl cuando se fosforila por PKA. El ele-
mento esencial de 1-1 que media la inhibicin de PPl es la fosforila-
cin de treoninass. Su actividad incluye el control del metabolismo de
glucgeno, plasticidad sinptica, crecimiento de clulas tumorales de
la pituitaria y control de la contraccin muscular.
2) DARPP-32 (dopamine and cAMP-regulated phosphoprotein of

apparent Mr 32,000). Es un homlogo de 1-1 y como tal inhibe la ac-
tividad de PPldespus de la fosforilacin de la treoninaj- por PKA. Se
encuentra fundamentalmente en el cerebro pero tambin en rin y
tejido adiposo. DARPP-32 es activado por muchas hormonas y neu-
rotransmisores que modulan los niveles de AMPc. En el cerebro do-
pamina y glutamato tienen efectos opuestos sobre DARPP-32. Do-
pamina, a travs de receptores DI, activa la adenilato ciclasa y por
PI(A activa DARPP-32. Glutamato, a travs de receptores NMDA,por
aumento de Ca2+ intracelular defosforila DARPP-32 y revierte su acti-
vidad.
3) Inhibdor -2 (1-2)inhibe especficamente PPl formando un com-
plejo estable e inactivo con la subunidad cataltica de PPl. El com-
plejo se activa por ATP-Mgy la activacin se acompaa de la fosfori-
lacin de 1-2 en la treonina-; por GSK-3. 1-2 tambin es fosforilado
en 3 serinas por la caseina quinasa 11. El nico papel fisiolgico pro-
puesto para 1-2 es el control de la motilidad espermtica. La isoforma
PPly2, especfica de testculo, forma un complejo inactivo con 1-2 que
inmoviliza el esperma inmaduro. La activacin de complejo por GSK-
3 facilita la motilidad en el esperma maduro.
4) NIPP-l (nuclear inhibitor of PP1) es un potente inhibidor de
PP1. Al igual que 1-2, forma un complejo inactivo con PPl y su acti-
vidad como inhibidor de PPl es reducida por fosforilacin por PKA.
El papel fisiolgico de NIPP-l no ha sido establecido. 5) RIPP-l (ribo-
somal inhibitor of PP1) tiene una actividad semejante a 1-2 y su acti-
vidad parece controlar la sintesis de proteinas en los ribosomas. 6)
CP117 (C-kinase activated PPl inhibitor, apparent Mr 17,000) se ex-
presa exclusivamente en msculo liso controlando su contractilidad
cuando es fosforilada por PKC.
5.8 Paradigma
La regulacin de la glucogenognesis y de la glucogenolisis ofrece
un buen ejemplo de la participacin de numerosos mecanismos des-
criptos en este captulo.
5.8.1 Regulacin de la glucogenolisis La adrenalina impulsa la
glucogenolisis. Actuando sobre receptores r3-adrenrgicos estimula la
AC y la formacin de AMPc y de PKA. PKAfosforila y activa la fosfori-
89
lasa quinasa que a su vez fosforilay activa la glucgeno fosforilasa

(la fosforilasa b inactiva pasa a fosforilasa a fosforilada activa) que
libera glucosa-l-fosfato. PKAtambin fosforila e inactiva la glucge-
no sintasa. En condiciones de reposo la actividad de fosforilasab es
suprimida por la presencia de glucosa-S-fosfatoy ATP.En el mscu-
lo esqueltico la fosforilasa quinasa se activa por el incremento del
Ca'2+citoslico. PKAno slo activa la fosforilasa quinasa sino que
tambin aumenta su afinidad por Ca2+ (Figura5.15).
5.8.2 Receptor de insulina y regulacin de la glucogenognesis
El receptor de la insulina es un RPTKformado por dos heterodimeros
unidos por puentes de disulfuro. Cada heterodimero tiene una sub-
unidad a. y una subunidad P Las subunidades 0., extracelulares, po-
seen el lugar de unin de la hormona. Cada una de las subuni-
dades p tiene un segmento de transmembrana y un dominio citosli-
co con actividad tirosina quinasa. La fijacin de la insulina al recep-
tor produce un cambio de conformacinque activa la tirosina quina-
sao El receptor activado adquiere la capacidad de autofosforilarse y
catalizar la fosforilacin de residuos de tirosina de otras protenas.
Las mejor caracterizadas de estas protenas son los sustratos del re-
ceptor insulina o IRS (insulin receptor sustrate 1), un polipptido de
130 kD que se encuentra en la mayora de los tejidos y del cual se
han identificado cuatro isoformas. IRS se fija a travs de su dominio
PTB al receptor de insulina activado. El dominio PTB se une direc-
tamente a la regin de tirosina fosforiladas del receptor insulina que
est prxima a la membrana y esto produce la fosforilacindel sus-
trato en mltiples sitios por la actividad quinasa del receptor. Se ini-
cian as, dos vas de seales, una que es Ras dependiente y otra Ras
independiente, pero solo esta ltima tiene efecto en la sintesis de
glucgeno.En la va Ras dependiente, IRS-l fosforiladose fija al do-
minio SH2 de Grb2 que a su vez se une a Sos activando la va Ras-
MAP.
En la va Ras independiente IRS-l fosforilado se fija por sus do-
minios SH2 a la subunidad reguladora p85 de PI3K activndola. La
activacin de PI3Kproduce un incremento rpido de fosfoinositidos
los que reclutan hacia la membrana plasmtica, por su dominio PH,
a numerosas serinaj treonina quinasas, entre las cuales la protena
quinasa B (PKB)es la ms importante, donde son fosforiladasy acti-
vadas. PKB,tambin llamada Akt, cuando es activada es liberada al
citosol donde induce diversos efectos de la insulina. Uno de los sus-
tratos de PKB es la quinasa glucgeno sintasa (GSK-3P) cuya activi-
dad es inhibida por fosforilacin.
La inactivacin de GSK-3preduce la fosforilacinde residuos de
serina de la glucgenosintasa (GS)con lo que se activa. Sin embargo
para que se produzca un comienzo abrupto de la sintesis de gluc-
geno es necesario que los grupos fosfato de GS sean removidos. La
90
Glltcgenogllesi$
P~Kf-I;SUlina PGCR-Adrenalina
...
..
IRS-l Q
PI3K ISPK PP1-lnh1

AMPc

...
AktlPKB
~ +
GJIll-G..m2 PKA
+ q ~ ...
GSK-3fl ....... IGSK-3f~ FosfOrila! quinasa
GS +r-Q Fosforilasa a - Fosforilasa b

... ,j -
UDP-glucosa.. ~ucge"iiOl - Glucosa -t-fosfato
Figura 5.15 Regutacin de la glucogenognesis y glucogenolisis
activacin de la fosfatasa protena serina-treonina (PPIG)cumple ese

papel. Esta activacin es mediada por accin de la protena quinasa
estimulada por nsulna, ISPK (nsulin-stimulated proten knas).
GSKtambin es inactivada por CaMque la fosforila(Figura 5.15).
La insulna, mediada por PI3K, activa el transporte de glucosa en
msculo y grasa a travs de la translocacin del transportador de
molculas de glucosa (GLUT4)desde vesculas intracelulares a la
membrana plasmtica estimulando la captacin de glucosa. Mediada
por la va PI3K, la insulina fosforila factores de transcripcin, activa
la expresin de genes, y promueve la sntesis de protenas. A travs
de la va Ras-MAPKse estimulan fosfatasas que modulan la actividad
de numerosas enzimas y protenas.
5.8.3 Fosforilaciny defosforilacinLa serina-treoriina fosfatasa
PPI nunca se encuentra como forma soluble libre. O est unida a su
sub unidad reguladora Gm, asociada a glucgeno, con la que forma el
complejo enzimtico PPIG o est unida a su subunidad inhibidora
Inhl que previene la defosforilacin no controlada de otros sustratos.
Los sitios de fosforilacinde la subunidad G de PPIG permiten gene-
rar las respuestas apropiadas para adrenalina o insulna. La adrena-
lina, por activacin de la PKA,activa la fosforilasa y adems asegura
que la fosforilasa permanezca activada, fosforilando en la posicin 2
a la subunidad reguladora Gm de la fosfatasa. Esto produce el des-
prendimiento de PPl que es secuestrada por Inh l inactivando a la
fosfatasa. PKAtambin fosforila e inactiva GS. Cuando la adrenalina
es removida el metabolismo de glucgenose restablece por defosfori-
lacin de la serina del sitio 2 de la subunidad Gm de PPIG mediada
por 2 fosfatasas PP2Ay la Ca2+ dependiente PP2B (calcneurina). La
nsulna por su parte por fosforilacin de IRS-l activa IRSK-l que
fosforilala sub unidad Gm en la posicin 1 permitiendo la nteraccin
91
con PPl. El complejoPPIG produce defosforilacinde GS activndo-

la y defosforilala fosforilasa quinasa con 10 que se inactiva (Figura
5.15).
Los mecanismos que controlan la actividad de PPl son diferentes
en hgado y en msculo. En el hgado la subunidad GL no es contro-
lada por fosforilacin. La inhibicin de la actividad de fosfatasa, ne-
cesaria para suprimir la accin de GS, se ejerce por unin de la sub-
unidad reguladora GL a la fosforilasa activada.
5.9 Receptores protena serinaftreonina quinasa

Son receptores de transmembrana con un dominio seri-
na/treonna citoslico. Unen numerosos polipptidos rela-
cionados que constituyen la familia de ligandos
TGFf3 (transforming growth factor). En mamferos, esta fa-
milia de ligandos se divide en subfamilias que incluyen BMP
(bone morphogenetic protein), activina, y TGFf3.
5.9.1 Receptores TGFf3 En base a sus propiedades es-
tructurales y funcionales los receptores de los ligando s
TGFf3se dividen en dos subfamilias, tipo I y tipo II (Tf3R-IY
Tf3R-II),muy similares. Ambos receptores son glicoprotenas
que tienen un dominio extracelular de unin a TGFf3,un so-
lo segmento de transmembrana, y un dominio con actividad
intrnseca de protena serina-tirosina quinasa en su seg-
mento citoplasmtico e-terminal.
La regin extracelular, N-glicosilada, contiene 10 ms
cistenas. El receptor tipo I tiene en su porcin citoplasmti-
ca una regin conservada de 30 aminocidos precediendo al
dominio quinasa, llamada dominiuo GS, que contiene la
A B
DOMInio GS
(TTSO;~SC!..P)
S.odtu~.
FK8P12
Dominio
eMsilic:o
Figura 5.16 Receptores TGFfl. A. Estructura de los receptores tipo I y 11.B. Activacin del receptor.
La unin deTGFpl a TGF(l1l da lugar al desprendimiento de la protena inhibidora FKBP12 seguida
de fosforilacin del receptor tipo I por el receptor tipo 11activndolo.
92
secuencia TTSGSGSGLPcon un motivo Leu-Pro (LP)que sir-

ve como sitio se unin de la protena FKBP12, una molcula
que acta como un regulador negativo de la seal del recep-
tor. El dominio quinasa de los receptores tipo I y 11 se ajusta
a la secuencia de un dominio protena serina-tirosina qui-
nasa. Como tal los receptores tipo I fosforilan sus sustratos,
las protenas Smad, en los residuos serna, mientras que los
del tipo 11 se fosforilan a s mismos y al receptor tipo I en los
residuos serina y treonina. La actividad protena quinasa de
TBR-IIes constitutivamente activa (Figura 5.16).
5.9.1.1 Activacin El ligando TGFBl es un homodmero
unido por uniones disulfuro. Primero se une a TBR-Ilcrean-
do una combinacin receptor-ligando de alta afinidad por el
receptor tipo 1. Cuando los dos receptores estn en estrecha
proximidad el receptor tipo I se desprende de la protena in-
hibidora FKBP12 y es fosforilado por el receptor tipo II en
los tres residuos serina y los dos residuos treonina de su
dominio GS. Con esto la protena serina-treonina quinasa de
TBR-1 se activa formndose un complejo receptor activo.
Debido a que el TGFBIes un dmero se forman dos comple-
jos receptores (tetrmero) alrededor del ligando.
Los receptores TGFB tipo I activados inician la transduc-
cin de seales a travs de la fosforilacin de protenas
Smad especficas que comunican las seales al ncleo.
Smad como efectores de las seales de TGFBintegran la va
TGFB/Smad.
5.9.2 Familia Smad Nueve miembros de la familia Smad
se han identificado en mamferos los que pueden clasificarse
en tres grupos: R-Smad (Smads regulados por receptores),
Co-Smad (Smads partcipes comunes), e I-Smad (Smads in-
hibidores). Entre las R-Smads, sustratos directos de los re-
ceptores TGFB,Smad 1, 5 Y 8 son sustrato de los receptores
BMP. Smad 2 y 3 son sustratos de TBR-1y median las sea-
les de TGFB y activina. Smad 4 es el nico miembro de este
grupo en vertebrados. I-Smad est integrada por Smad 6,
que inhibe preferentemente las seales de BMP, y Smad 7
que inhibe las seales de TGFBy BMP.
5.9.2.1 Estructura R-Smads y Co-Smads comparten dos
93
Interaccin con receptor

Homodiflerizacin de Smad
T FosfS!ilacin
t"""'2~"""~)"<,<"~~"""'

rM"""1:I-I'k~n'ac""'"'Jld'779~~mi"'$~$
"~"":"~I'
I FosIorilac6n I
.. por MAPK ..
Unin aAON Interaccin con Smad4
Interaccin con protenas de unin a AON
Activacin de la transcripcin
Figura 5.17 Dominios Smad y sus funciones. Adaptado de Massagu
dominios, con secuencias similares, en sus N- y C-

terminales, conocidos como dominios MH 1 Y MH2 respecti-
vamente, separados por una regin de longitud variable rica
en prolina. El dominio MHl interacciona con el ADN. El do-
mino MH2 contiene sitios de fosforilacin por el receptor,
est implicado en interacciones protena-protena, y tiene
funciones efectoras.
Las interacciones entre dominios MH2 de las tres suba-
milias da lugar, en el estado basal, a la formacin de com-
plejos que permanecen inactivos por la interaccin entre los
dominios MH 1 Y MH2. MH2 tambin media la asociacin
con el receptor tipo I, con Smad4, y con coactivadores de la
transcripcin. La regin de enlace contribuye a la formacin
de homo-oligmeros Smad y contiene sitios de fosforilacin
por MAPK (Figura 5.17).
5.9.2.2 Activacin El primer paso de la va TGF~jSmad,
el reclutamiento de Smad2 y Smad3 al complejo receptor-
TGF~, es controlado por una protena asociada a membrana
llamada SARA (Smad anchor for receptor activation) que
contiene el dominio FYVE (Fen-Tir-Val-Glu].
La protena SARA se une cooperativamente a Smad2 y
Smad3 no fosforilados y al complejo TGF~-receptor y pre-
senta las Smads al receptor tipo I activado. Las R-Smads in-
teractan directamente con el receptor tipo I activado y se
activan por fosforilacin en los motivos SS(V jM)S cercanos
al C-terminal. Despus de la fosforilacin R-Smads y SARA
se disocian del complejo TGF~-receptor. La fosforilacin de
R-Smads libera la interaccin MH l-MH2 autoinhibibidora y
permite que formen complejos con Smad4 a travs de sus
dominios SH2 (Figura 5.18).
94
NOCU:O
Figura 5.18 Activacin de la transcripcin por receptores TGFjl. Smad 2 y 3 se unen al receptor
tipo I asociados a SARA. Una vez fosforilados se desprenden del receptor asocindose a Smad 4.
Juntos migran al ncleo y se unen por el dominio MH1 a ADN en el sitio SBE activando la trans-
cripcin. Por el dominio SH2 tambin se unen a colaclores.
R-Smads existen, en estado no activado, como monme-

ros y despus de su fosforilacin forman horno- y hetero-
oligmeros entre s as como hetero-oligmeros con Smad4.
Los complejo heteromricos R-Smad-Co-Smad translocan al
ncleo.
5.9.2.3 Regulacin de la transcripcin En el ncleo, los
complejos R-Smad-Co-Smad estn implicados en la trans-
cripcin de genes. Los dominios SH 1 de Smad3 y Smad4
poseen la propiedad intrnseca de unirse a una secuencia
especfica de ADN que contiene las secuencias 5'-AGAC-3'
(Ala-Gli-Ala-Cis] llamada SBEs (Smad binding elements). R-
Smads interacta, a travs de sus dominios SH2, con el co-
activador CBP / p300.
5.9.2.3.1 Regulacin negativa Existen mecanismos de
regulacin negativa que desactivan la actividad de las
Smads. La va Smad es regulada negativamente por I-Smads
que compiten con R-Smads por la interaccin con el recep-
tor tipo 1 o con Smad4. l-Srnads pueden ser inducidos por la
familia de ligandos TGF0 y por otros estmulos como EGF e
interfern-v, La activacin de la va MAPK/ERK por el factor
de crecimiento de hepatocitos y por EGF fosforilan la regin
de enlace de R-Smads inhibiendo su translocacin al n-
cleo.
95
5.9.3 Funciones Este sistema regula numerosas funcio-

nes celulares tales como proliferacin, diferenciacin, mi-
gracin, y apoptosis. Es importante en el desarrollo embrio-
nario, donde participa en el desarrollo de tejidos especficos,
y en mantener la homeostasis durante la vida adulta. Alte-
raciones de sus funciones han sido implicadas en perturba-
ciones del crecimiento y en varias enfermedades como cn-
cer, transtornos fibrticos caracterizados por la excesiva
acumulacin de material de la matrz intersticial en pulmo-
nes, hgado y rin, y enfermedades autoinmunes. Debido a
su poder inhibidor del crecimiento el receptor TGF0 tipo 1
est generalmente inactivado en los cnceres colorectales
hereditarios no polipoideos y mutaciones de Smad ocurren
en cnceres de pncreas.
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96
,
CAPITULO 6
Receptores citoquinas
6.1 Cito quinas

Son pequeas protenas solubles segregadas por clulas
que pueden alterar el comportamiento o las propiedades de
la misma clula o de otras. Las citoquinas son sintetizadas,
almacenadas y transportadas por clulas del sistema inmu-
ne y tambin por otras clulas como hemticas, oncogni-
cas, y biolgicas pero los productores predominantes son las
clulas T auxiliares (helper, Th) y los macrfagos.
Las citoquinas han recibido diversas denominaciones: lin-
foquinas (citoquinas producidas por linfocitos), monoquinas
(citoquinas producidas por monocitos), leucoquinas (cito-
quinas producidas por leucocitos), quimoquinas (citoquinas
con actividades quimiotcticas), interleuquinas (citoquinas
producidas por un linfocito y actuando sobre otro), e interfe-
rones.
Son muy potentes an en pequeas concentraciones. Su
accin pueden limitarse a actuar sobre las clulas que las
segregan (accin autocrina), sobre clulas vecinas (accin
paracrina), o sobre clulas a distancia (accin endocrina).
Diferentes clulas pueden segregar la misma citoquina y
una misma citoquina puede actuar en diferentes tipos clu-
lares (pleiotropas). Diferentes citoquinas pueden tener la
misma funcin. Se producen frecuentemente en cascada,
una citoquina estimula las clulas destinatarias a producir
citoquinas adicionales.
6.1.1 Funciones Las citoquinas regulan la transcripcin
de genes para inducir la diferenciacin o proliferacin de de-
terminadas clulas. Cumplen un papel esencial en el siste-
ma inmunitario a travs de la activacin de clulas T, E, Y
macrfagos. Actan como factores de maduracin de las c-
lulas sanguneas promoviendo la diferenciacin y prolifera-
97
cin de clulas hemticas. Ejercen acciones en la respuesta

inflamatoria. TNF tiene acciones citotxicas sobre algunos
tumores malignos.
Se han descripto ms de 100 citoquinas. Los grupos que
llevan a cabo las funciones ms importantes son las inter-
leuquinas (IL), los interferones (IFN), el factor necrosante
tumoral (TNF), y el factor estimulador de colonias de mono-
citos granulocitos (GM-CSF), que estimula la hematopoyesis.
Otros grupos incluyen interferones y quimoquinas.
6.2 Receptores citoquinas. Son receptores sin actividad
tirosina quinasa propia pero con capacidad para asociarse a
protena quinasas del citoplasma. Su estructura es semejan-
te a los RPrKs aunque no tienen el sitio cataltico.
6.2.1 Estructura. Los receptores citoquinas consisten en
un dominio extracelular de unin al ligando, un dominio de
transmembrana nico, y un dominio citoplasmtico que ca-
rece de actividad tirosina quinasa.
En el domino extracelular hay unos 200 a 250 aminoci-
dos que comprenden dos subdominios (subdominios 1 y 2).
Cada subdominio consiste en siete hebras 0 estructural-
mente relacionadas a los dominios fibronectina tipo 111. Una
regin bisagra de cuatro residuos une a ambos subdomi-
nios. El dominio extracelular de los diferentes receptores ci-
toquinas presenta secuencias similares (Figura 6.1).
La porcin de transmembrana es una a. hlice. El dominio
citoplasmtico es de longitud variable y tiene pocas similitud
de secuencias entre los receptores citoquinas. Tiene una re-
gin de ocho aminocidos rica en prolina que est constitu-
tivamente (no dependiente de ligando) asociada a las tirosina
quinasas JAKs. Residuos de tirosina en la cola citoplasmtica
son sitios de unin a dominios SH2 cuando se fosforilan.
Los receptores de los linfocitos T y B tambin presentan
esta organizacin por lo que igualmente sern considerados.
6.2.2 Oligomerizacin Varios miembros de la familia de
receptores citoquinas incluyendo los receptores de hormona
de crecimiento, prolactina, eritropoyetina, factor estimulador
del crecimiento de colonias, y trombopoyetina, forman
homodmeros.
98
SlbJnldad 2
,
unin aJak
Figura 6.1 Receptor de la hormona de crecimiento. La unin de GH al receptor induce su dime-

rlzacin y promueve la aposicin de las quinasas Jak2 y su autofosforlacln. Tambin se fosforilan
residuos de tirosina del receptor.
La dimerizacin es fundamental para la transduccin de

seales. Sin embargo, la mayora de los receptores citoqui-
nas funcionan como heterodmeros o heterooligmeros con-
teniendo una subunidad a, ligando especfica, y una sub-
unidad p comn. La subunidad a puede unir al ligando en
ausencia de la subunidad p pero la oligomerizacin con la
subunidad p se requiere para la alta afinidad de unin al li-
gando (Figura 6.1).
6.2.3 Clasificacin Basado en su estructura y actividad
los receptores citoquinas se dividen en: a) la familia hemo-
poyetina, cuyos receptores son dmeros o trmeros con cua-
tro cistenas conservadas en la regin N-terminal y un moti-
vo Trp-Ser-X-Trp-Ser (motivo WSXWS) situado cerca del
dominio de transmembrana. Ejemplos de esta familia son
los receptores IL-2 a IL-7 y GM-CSF adems de los recepto-
res Epo, Prl y GH. b) la familia interfern, incluye los recep-
tores IFNa, p, y y que tienen los residuos de cistena conser-
vados pero no el motivo WSXWS. c) la familia del factor de
necrosis tumoral cuyos receptores tienen cuatro dominios
extracelulares, incluyen a los receptores para TNFa y TNFp
solubles as como a CD40 (activador de clulas B y macrfa-
gos) y Fsa (inductor de apoptosis) unidos a membrana. d) la
familia de quimoquinas cuyos receptores tienen siete hlices
de transmembrana que interactan con protenas G. Esta
familia incluye receptores para IL-8, MIP-1 Y RANTES. Re-
ceptores CCR5 y CXCR4 son usados por HIV.
99
Otra clasificacin agrupa los receptores citoquinas en fa-

milia clase 1, que corresponde a la familia hemopoyetina de
la clasificacin precedente, y familia clase 11,que correspon-
de a las dems.
6.3 Protenas Jak Las Jaks son tirosina quinasas cito-
plasmticas de la familia Janus, que incluyen a Jak1, Jak2,
Jak3 Y TYK2. Estas protenas desempean un papel esen-
cial en la transduccin de seales por los receptores cito-
quinas. Se unen constitutivamente a una regin prxima a
la membrana del dominio citoplasmtico. Se caracterizan
por la presencia de un dominio tirosina quinasa en el C-
terminal, un dominio de seudoquinasa, y un segmento N-
terminal para la interaccin con los receptores de citoquinas
y otras protenas efectoras y moduladoras.
6.3.1 Activacin de la transcripcin La interaccin del
receptor citoquina con sus ligandos da lugar a la activacin
de una cascada de eventos intracelulares. La unin de las
citoquinas al dominio extracelular del receptor promueve la
dimerizacin de sus subunidades. La dimerizacin del re-
ceptor hace que las dos molculas Jak se aproximen. Cada
molcula Jak transfosforila a la otra (autofosforilacin) con
lo que se activan. Tambin fosforila residuos de tirosina en
el receptor mismo. Las tirosinas fosforiladas del receptor son
los sitios potenciales de anclaje, va SH2, de molculas
transductoras. Las Jaks tambin pueden fosforilar y activar
protenas sealadoras (Figura 6.2).
6.3.2 Protenas STAT Las protenas STAT (signal trans-
ducers and activators of transcription) son factores de
transcripcin que se encuentran en el citoplasma antes de
la unin de las citoquinas al receptor. Constituyen una fa-
milia de varios miembros que contienen dominios SH2, un
sitio de fosforilacin de tirosina y un dominio de unin a
ADN.STATse une por su dominio SH2, directamente o a tra-
vs de una proteina adaptadora, a las tirosinas fosforiladas
del receptor en la proximidad de la quinasas Jak activadas.
Estas fosforilan y activan a las protenas STATlas que luego
se disocian del receptor y forman horno- y hetero-dmeros va
interaccin fosfotirosina-dominio SH2. Los dmeros STAT
translocan al ncleo donde se unen a secuencias especficas
100
Figura 6.2 Va Jak-STAT. Cascada de eventos evocada por la interaccin del receptor citoqui-
na con sus ligandos.
(secuencia consenso 5' TTCCCCGAA31 de regiones de reco-

nocimiento en genes destinatarios cuya transcripcin es ac-
tivada. La transmisin de seales media por Jak-STAT se
conoce como la va Jak-STAT.
STATtambin puede ser fosforilada en los residuos serina
por quinasas MAP potenciando su actividad de transcrip-
cin. Algunos de los posibles genes destinos de STATs son
IEGs porque muchos de estos genes tienen sitios de unin a
STAT en sus promotores. La estimulacin de la va Jak-
STAT es slo transitoria y la terminacin de su activacin
puede hacerse por una fosfatasa.
6.4 El receptor de eritropoyetina (EpoR)

La eritropoyetina (Epo) es el principal factor responsable
en regular la produccin de eritocitos. El sitio ms impor-
tante de su sntesis en organismos adultos, estimulada por
la anoxia tisular, es el rin y en menor grado el hgado.
Epo acta junto a otros factores de crecimiento para inducir
la proliferacin y maduracin de clulas precursoras de los
eritrocitos. Adems puede promover la sobrevida de neuro-
nas colinrgicas del septum. Epo es una glucoprotena de
165 aminocidos.
101
El receptor de Epo es una protena de 508 aminocidos

conteniendo un pptido seal de 24 aminocidos, un seg-
mento extracelular de 226 aminocidos, un segmento de
transmembrana de 22 aminocidos, y un dominio citoplas-
mtico de 236 aminocidos. Incluye tambin un grupo de
cuatro residuos de cistena conservados y un motivo
WSXWSen el segmento extracelular.
El receptor Epo existe como un dmero, antes de la unin
del ligando, en una conformacin que previene la activacin
de Jak. El receptor no unido al ligando tiene la conforma-
cin similar a la de una tijera abierta en la cual los extremos
C-terminal de los subdominios 2 se encuentran separados.
La unin del ligando aproxima estas regiones y tambin
acerca los dominios citoplasmticos. La reorganizacin del
receptor por la dimerizacin acerca las dos protenas JAK de
manera que puedan fosforilar y activar la actividad de tiro-
sina quinasa de las Jaks. Las Jaks activadas inducen la fos-
forilacin de tirosinas en los dominios citoplasmticos de
cada monmero receptor (Figura 6.3). Esto lleva a la
aproximacin de protenas seales, como STAT, PI3K, pro-
tena tirosina fosfatasas SHPl y SHP2, y Shc, a los residuos
de tirosina, las que a su vez son fosforilados. La activacin
de EpoR es mediada por STAT5.
La PTP citoslica SHP-l sirve para atenuar la seal intra-
celular de Epo. Su dominio SH2 se une al residuo fosfotiro-
sina (Y429)en el receptor Epo y esto la hace susceptible a la
fosforilacin por Jak2 con lo que se activa. SHP-l activada
defosforila e inactiva la quinasa Jak2 y al activador de la
transcripcin STAT5 con lo que previene su dimerizacin y
transcripcin al ncleo. Como regulador negativo de la
transcripcin SHP-l controla la proliferacin de las clulas
hemopoyticas.
El receptor de la hormona de crecimiento (GHR) La hormona
de crecimiento (GH) es sintetizada como prohormona en la anterohi-
pfisis y la hormona madura se secreta como un pptido de 191 ami-
nocidos depus de eliminar un pptido de 26 aminocidos de su ex-
tremo N-terminal.
El receptor de la hormona de crecimiento (GHR) es una glucopro-
tena que forma parte de la superfamilia de los receptores citoquinas
del tipo 1.
102
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ece btores

Temas de Biologa Celular

1. Biologa Celular. 1. Ttulo

2006 Samuel T aleisni k

Ninguna parle de esta publicacin. incluido el diseo de lapa. pue-

'-?E<l' . {B' Miembros de l. CMARA

CAPTULO 2. Receptores acoplados a protenas G 7

2.1.6 Desensihilizacin.., ..Jl,",4

CAPTULO 4. Sistemas mediados por el efector fosfoliQlsa e 43

CAPTULO 5. Receptores asociados a enzimas 63

CAPITULO 6. Receptores citoquinas 97

CAPITULO 7. Fosfolpidos 119

CAPITULO 8. Sistemas activados por va de la familia Rho 127

CAPITuLO10. Canales incos 159

CAPITULO!1. Receptores nucleares 189

De las seales a la expresin gnica

tes, un dominio de unin al ligando y un dominio efector. El

K es la constante de disociacin. Tambin es la concentra-

sustituyendo IR] en la ecuacin Il) tendremos que

[LR ] = [Rt ][L] o [LR]{Rt] [L]

1.3.3 Agonistas y antagonistas Agonistas son agentes

1.4 Transduccin de seales

Receptores acoplados a protenas G

Los receptores acoplados a protenas G (GPCRs, G pro-

Estos receptores estn constitudos por una cadena polipep-

las hlices estn organizadas secuencialmente en sentido

unen al N-terminal, a los lazos E, y a regiones de trans-

vomeronasal de feromonas y los receptores del gusto. Estos

de la hormona sufre un cambio conformacional que lleva a

Despus de la unin del agonista, el receptor experimenta

2.1.6 Desensibilizacin La exposicin de los GPCRs a los

GRK2 y GRK3 tambin conocidas como BARKl y BARK2 (B-

los dominios de la cola C-terminal. La mayora de los sitios

cola C-terminal del receptor.

2.2 Las protenas G

2.2.1 Subunidades Las protenas G estn compuestas por

La clase Gaq contiene cinco miembros, Gall. Ga14, Ga15,

Tabla 2.1 Familias de la subunidad Ga

Familia Miembro Sensibilidad Distribucin Efector

Gs Gas Colrica Amplia AC

Figura 2.7 Estructura de subunidad P formando una hlice con 7 aletas WD

est constituda por cinco miembros diferentes (Gp, GPI,

Figura 2.8 Farnesilacin de la subunidad Gr. (aa)=aminocidos de la molcula Gr. F=farnesilo

La subunidad Gy, es modificada por farnesilacin mien-

de GDP por Gl'P. Como consecuencia, el complejo permane-

GTP LOT'(z) Mg OTP Mg J 8... EFECTOR

Figura 2.10 Cicto de activacin-inactivacin de protenas G. RGS seala el sitio de activacin

La Tabla 2.2 muestra los ligandos unidos a receptores

Tabla 2.2 Receptores acoplados a diversas protenas G

2.2.3.1 Protenas RGS Las subunidades 00. purificadas

ceptor EGF, el receptor del factor de crecimiento insulina

Sistemas mediados por el efector adenilato ciclasa

3.1 Adenilato ciclasa (AC)

compiten con <xs. Un sitio de unin a Ca2+-CaM ha sido iden-

otras, 10 son ms especificamente en el sistema nervioso,

Sistemas mediados por el efector fosfolipasa e

4.1 Fosfolipasas C (PLC)

4.2 Receptores IP3Y rianodine

inician en la regin apical y se propagan al polo basal. La

actividad Ca2+-CaM independiente.

Receptores asociados a enzimas

Son glucoprotenas de transmembrana que, a diferencia

5.1 Receptores protena tirosina quinasa (RPTK)