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La diabetes es una enfermedad crnica que se caracteriza por la incapacidad del cuerpo de
metabolizar la glucosa debido a una deficiencia en la secrecin total o parcial de la hormona
insulina provocando una elevacin en el nivel de glucosa en la sangre. Segn la Organizacin
Mundial de la Salud (OMS) actualmente se reportan 62 millones de personas con esta
enfermedad; en Colombia existen 2.2 millones diagnosticadas y se cree que existen 1 milln ms
sin ser diagnosticadas [1]. Los efectos a largo plazo conducen a fallas en los rganos debido a que
no se conoce una cura hasta el momento por lo que es una enfermedad con la que se vive toda la
vida [1].Los pacientes con diabetes tipo 1 ms conocidos como insulinodependientes se tratan con
dosis diarias de insulina. En Colombia se tratan 300.000 pacientes con ampolletas de insulina
importada de la cual solo se cubre el 8% de la demanda lo que implica una problemtica inmediata
de salubridad nacional [2].
Hasta 1983 toda insulina utilizada para los tratamientos de pacientes insulinodependientes se
obtena del pncreas de los porcinos y bovinos, sin embargo el uso prolongado de esta causa una
respuesta inmune en la mayora de los casos [3], por lo cual se buscaron alternativas para la
sntesis y obtencin de la misma.
La produccin de insulina humana por Escherichia coli recombinante se realiz por primera vez en
1982 mediante el trabajo de Genentech y Eli Lily [4]; esta es la manera que se ha sintetizado hasta
el da de hoy obteniendo grandes cantidades aunque no lo suficiente para cubrir la demanda
mundial que aumenta peridicamente.
Como tcnica general se utilizan enzimas para insertar el gen humano que produce la insulina en
el ADN del microorganismo a utilizar, en la mayora de los casos ser la E. coli, la nueva
codificacin de las bacterias se encargara de elaborar un nuevo material que antes no era capaz de
generar. Con este mtodo y en condiciones adecuadas de cultivo los microorganismos crecern de
manera acelerada para generar una gran cantidad de la nueva sustancia en cortos periodos de
tiempo. Despus, la insulina ser extrada del cultivo de bacterias y mediante tratamientos
especficos se prepara para su uso comercial en los pacientes [6].
El plsmido de la bacteria el cual posee su ADN se interviene por accin enzimtica y es insertado
el gen de la insulina obtenido anteriormente, ahora se devuelve a la bacteria de origen para que se
reproduzca as cuando la bacteria se divide, el plsmido se comparte entre las dos clulas hijas
para seguir reproducindose, de esta manera el cultivo de bacterias codifica la insulina humana y
proporciona una manera segura para su obtencin.
Para nuestro balance estequiomtrico lo primero que se realizara ser encontrar la frmula
molecular de la bacteria a utilizar en el proceso para lo cual se consiguieron datos de la
composicin elemental de la E. coli de manera general y se tomara esta como aproximacin
debido a que cada proceso utiliza una cepa diferente pero esta frmula se acerca lo suficiente para
utilizarla en nuestros clculos.
50
C: 92
100 = 54,3478 g de Carbono
8
H: 92 100 = 8,6957 g de Hidrgeno
20
O: 100 = 21,7391 g de Oxgeno
92
14
N: 92 100 = 15,2174 g de Nitrgeno
3. Calculan el nmero de moles despus de la normalizacin
=
54,3478
C: 12 /
= 4,529 moles de Carbono
8,6957 2
H: 1 = 8,6957 moles de Hidrogeno
2 /
21,7391 2
O: 16 = 1,3587 moles de Oxgeno
2 /
15,2174 2
N: = 1,087 moles de Nitrgeno
14 2 /
4,529
C: =1
4,529
8,6957 2
H: = 1,92
4,529
1,3587 2
O: 4,529
= 0,3
1,087 2
N: = 0,2
4,529
+ + , , , + + +
Para encontrar los valores de los coeficientes estequiomtricos se realizaran balances elementales
y adems utilizaremos datos adicionales encontrados en la literatura para la produccin de este
compuesto en particular. Para el bioreactor Batch se considerar el valor de Yxs=0,453 g
biomasa/g de sustrato consumido [9] y el valor de RQ= 1,02 [4] obtenidos de experimentos
anteriores y reportado en la literatura como relaciones adicionales.
Los balances elementales sern:
C: 6=c+d+264*f {1}
H: 12+3*b=1,92*c+2*e+404*f {2}
N: b= 0,2*c+72*f {4}
= {6}
2,22=1,02*a+264*f {8}
4,74=2*e+404*f-3*b {9}
4,87=78*f+0,04*a+e {10}
0,76=b-72*f {11}
De la ecuacin (9) se obtiene el valor de a= 2,11, con el valor de a se obtienen todos los
coeficientes.
a= 2,11 d= 2,15
b= 0,77 e= 3,49
c= 3,78 f= 0,00017
Como nuestro proceso es aerobio se necesita la cantidad de oxgeno demanda para lo cual
realizamos un balance de oxgeno, encontramos los grados de reduccin para el sustrato, la
biomasa y el producto.
Grado de reduccin del sustrato:
4 + 2 3 4(6) + 12 2(6)
= = =4
6
Grado de reduccin de la biomasa:
(4 + 2 3)
= = 4 + 1,92 2(0,3) 3(0,2) = 4,72
ECUACION ESTEQUIOMETRICA
+ , + ,
, , , , + , + , + ,
De la cual se necesitan 1,54 moles tericas para realizar el proceso se le agrega un exceso de aire
para que sea efectivo ya que debe mantener una aireacin constante.
Referencias
[1] http://www.who.int/topics/diabetes_mellitus/es/
[3] Produccin de insulina humana por tcnicas de ADN recombinante, Beatriz Flores, Instituto de
Fisiologa Celular, UNAM
[2] http://www.el-nacional.com/noticias/salud/dotacion-insulina-solo-cubre-demanda-
nacional_207605
[8]Libro: https://books.google.com.co/books?id=2u-
6Q2XCMDgC&pg=PA24&lpg=PA24&dq=escherichia+coli+compo
sicion+de+carbono&source=bl&ots=4Vdnt8xINw&sig=8tytpfFBNf
XhQ2-NeGsX3owIf-k&hl=es-
419&sa=X&ved=0ahUKEwjLua2Yi6bXAhUG5yYKHU6SCxkQ6
AEIPzAH#v=onepage&q=escherichia%20coli%20composicion%20
de%20carbono&f=false
[9] Production of tilapia insulin-like growth factor-2 in high cell density cultures of recombinant
Escherichia coli
[10]