HumaCycler

| Gua rpida

Ref. 86100/5e
LISTA DE REVISIONES DEL MANUAL
Rev. /FECHA. DESCRIPCIN DE LA REVISIN
01/2015-05 Primera edicin

VERSIN DEL SISTEMA

COPYRIGHT

Copyright 2015, Human Gesellschaft fr Biochemica und Diagnostica mbH, Wiesbaden. Reserva-
dos todos los derechos.

Queda prohibida la reproduccin ntegra o parcial de la presente documentacin en forma algu-

na, as como el procesamiento, copia o distribucin a travs de medios electrnicos sin el permiso
previo y por escrito de HUMAN. Puesto que se han adoptado toda clase de medidas de precaucin
en el momento de elaborar las presentes instrucciones de funcionamiento, el fabricante declina-
r cualquier responsabilidad por error u omisin. Ello implica adems cualquier responsabilidad
reclamada por posibles daos derivados de un empleo incorrecto a partir de la presente informa-
cin. Sujeto a cambios sin previo aviso a consecuencia de futuros avances tecnolgicos.

ASISTENCIA Y SERVICIO TCNICO

NDICE

TABLE OF CONTENTS

1PREPARACIN 3
1.1 DESEMBALAJE DE HUMACYCLER 3
1.2 UBICACIN DE HUMACYCLER 4
1.3 CONDICIONES AMBIENTALES 4
1.4 CONEXIN DEL INSTRUMENTO AL ORDENADOR 4
1.5 INSTALACIN DEL SOFTWARE 5

2 INICIO DEL INSTRUMENTO 7

3 CONFIGURACIN DE COLORANTES, PLACAS Y PROGRAMAS 9

3.1 CUANTIFICACIN ABSOLUTA 9
3.2 ANLISIS DE POLIMORFISMO DE NUCLETIDO SIMPLE (SNP) 12
3.3 CUANTIFICACIN RELATIVA 12

4 EJECUTAR PROGRAMA 13

5 ANLISIS DE RESULTADOS 15

6PRECAUCIONES 21
Preparacin 3

1 PREPARACIN

1.1 Desembalaje de HumaCycler

-- Saque el instrumento de la caja de embalaje
-- Cercirese de que todos los accesorios descritos en la lista de embalaje se
encuentren en la caja
-- Retire la bolsa de plstico que cubre el instrumento
-- Site el instrumento en una ubicacin apropiada (vase seccin 1.2 Ubica-
cin de HumaCycler)

Antes de comenzar, retire el pasador de seguridad del instrumento girndolo

contrario a las manecillas del reloj (vase Figura 1).

Figura 1

1 Ajuste del pasador de seguri-

dad al lado derecho del ins-
trumento HumaCycler.
1

Introduzca el pasador en el puerto de desbloqueo (Unlocker) en la parte trasera

del instrumento y ajuste bien.

Figura 2

1 Ajuste del pasador de seguri-

dad en el puerto "Unlocker"
(Puerto de desbloqueo)

Por razones de seguridad re-

comendamos que el instru-
1
mento sea movido y desembala-
do por dos personas.
 4

1.2 Ubicacin de HumaCycler

-- Deje un espacio de por lo menos 30 cm alrededor del instrumento
-- Evite situar el instrumento cerca de corrientes de aire
-- Posicione el instrumento de tal manera que se pueda acceder fcilmente al
interruptor de palanca y a la conexin elctrica.
-- Ubique el instrumento en un entorno libre de polvo
-- Elija una superficie lisa y nivelada

1.3 Condiciones ambientales

-- Altitud mxima: 2000 m
-- Temperatura ambiente: 10...30C (
-- Humedad mxima: 70%
-- Alimentacin elctrica: 100...240 V; 50&60 Hz, 600 W

1.4 Conexin del instrumento al ordenador

-- Verifique que el interruptor de encendido en la parte trasera del instrumento
est apagado
-- Conecte el cable de alimentacin al mdulo de entrada de energa
-- Conecte el instrumento a una toma de corriente derivada a tierra
-- Instale uno de los convertidores de comunicacin en el puerto respectivo de-
trs del instrumento.
-- Conecte el interfaz de comunicacin al ordenador.

Se suministran tres convertidores con el instrumento: RS232C, USB y Bluetooth

(vase Figura 3). Si utiliza USB, debe instalar el driver del software suministrado.
Si utiliza Bluetooth, es necesario que el equipo cuente con el software pertinen-
te. El convertidor RS232C se puede utilizar directamente.

Figura 3
RS232C, Bluetooth y
convertidor USB.

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Preparacin 5

1.5 Instalacin del Software

El software HCy4 es especfico para cada instrumento y no debe utilizarse en
otros instrumentos.

Para instalar el software, inserte el CD suministrado en la unidad de disco ptico

del ordenador. Haga clic en el archivo HCy4 software y siga las instrucciones de
la instalacin.

Figura 4
 6

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INICIO del instrumento 7

2 INICIO DEL INSTRUMENTO

Presione el interruptor en la parte trasera del instrumento ajustando ON y pulse
el botn Run Switch en la parte delantera del instrumento. La luz indicadora
(Error y Running) parpadear una vez. Un pitido indicar que el instrumento est
efectuando una autoprueba. El modo Run Switch es usado para apagar el sis-
tema de control temporalmente o por lapsos cortos. Durante el modo Standby
apague el interruptor en la parte trasera del instrumento.

Para efectuar una corrida conecte el instrumento a la aplicacin HCy4 software.

Haga clic en Instrument (Instrumento) u Connect (Conectar) u Automatically

Connect (Conectar automticamente)

El software busca automticamente el puerto de comunicacin. Este procedi-

miento puede tardar unos minutos. Si la comunicacin falla, aparecer el aviso
de error Communication Failure (error de comunicacin). En ese caso, verifique
que el cable de comunicacin est conectado apropiadamente. Adems com-
pruebe si existe otro programa que est ocupando el puerto (vase Figura 5).

Figura 5

Una vez iniciado el software, aparecer la ventana de acceso User Login . Intro-
duzca los siguientes datos de acceso: User name:admin, Contrasea: admin y
haga clic a continuacin en OK (vase Figura 6).
 8

Figura 6

Haga clic en Service (Servicio) u User Management (Gestin de usuarios)u Add

User (Aadir usuario) e introduzca sus datos de acceso

En los accesorios se suministra un protector anti-condensacin que mejora la

precisin de los resultados de los experimentos y evita que los tubos en y cerca
de los extremos de la unidad de calentamiento se condensen, lo que podra pro-
ducir una seal de fluorescencia reducida. Adems el protector permite aislar el
calor generado. Es compatible con el uso de tubos para PCR individuales, tubos
para PCR 8 tiras, placas con medio borde y sin borde. Las placas con borde com-
pleto no puede utilizarse con el protector. Coloque el protector alrededor del
bloque de calentamiento antes de iniciar el experimento (vase Figura 7)

Figura 7

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CONFIGURACIN DE COLORANTES, PLACAS Y PROGRAMAS 9

3 CONFIGURACIN DE COLORANTES, PLACAS Y PROGRAMAS

3.1 Cuantificacin absoluta

Pulse Absolute Quantification (Cuantificacin absoluta para configurar un nue-
vo experimento de cuantificacin absoluta (vase figura 8).

Figura 8

1. Ajustar detectores
Pulse Detector
Introduzca las propiedades del experimento: nombre del experimento (genera-
do automticamente pero puede modificarse), el nombre de usuario, y comen-
tarios sobre el experimento.

Pulse Add Detector (Agregar detector) para aadir un nuevo parmetro. Intro-
duzca el nombre del parmetro y seleccione el colorante. Seleccione FAMsi est
utilizando un ensayo de PCR en tiempo real de HUMAN (VIH-1, VHC, VHB, CMV).

Pulse Add Detector (Agregar detector) para aadir otro parmetro. Introduzca
el nombre del parmetro y seleccione el colorante. Seleccione HEX para el Con-
trol interno (IC) si est utilizando un ensayo de PCR en tiempo real de HUMAN
(VIH-1, VHC, VHB, CMV) (vase Figura 9).

Figura 9
 10

2. Ajustar la informacin de la muestra

Pulse Muestra, introduzca la ID de la muestra y presione Enter para aadir la
muestra a la lista de ID de muestras. Si desea realizar anlisis en tandas, selec-
cione Batch Add (Aadir grupo de muestras). Introduzca el ID de la muestra y
el nmero de ellos, haga clic en Aadir para agregar las muestras automtica-
mente.

3. Ajustar placa
Pulse Plate (Placa)

Seleccione un pocillo de la placa para la muestra

Seleccione la muestra correspondiente en el lado izquierdo

Seleccione el ensayo y ajuste las propiedades de la muestra (Unknown, (Desco-

nocido) Standard (Estndar), Non-template Control (Control sin plantilla) y Po-
sitive Control (Control positivo)) y las unidades de concentracin. Seleccione IU/
ml para los ensayos de PCR en tiempo real de HUMAN (vase Figura 10).

Figura 10

4. Ajustar el programa
Pulse Program para visualizar el perfil de temperatura por defecto (vase
Figura 11).

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CONFIGURACIN DE COLORANTES, PLACAS Y PROGRAMAS 11

Figura 11

En el perfil de temperatura se pueden realizar las siguientes modificaciones:

Aadir etapa
Hold Stage (Etapa de espera)
Etapa PCR
Melting Stage (Etapa de fusin)
Infinite Stage (Etapa infinita)
Add Step (Aadir paso) Aadir antes o despus de un paso existente
Ciclos
Liquid Quantity of the Test (Cantidad de lquido de la prueba)
Temperatura
Tiempo
Measuring Step (Paso de medicin)
Borrar
Ejemplo de un perfil de ciclo modificado (Figura 12).
 12

Figura 12

El ajuste se puede guardar como archivo plantilla.

Pulse Save as (Guardar como) Save as template (Guardar como plantilla)

El archivo se guardar como archivo de plantilla.

3.2 Anlisis de polimorfismo de nucletido simple (SNP)

Los pasos de configuracin del anlisis SNP son bsicamente los mismos de la
cuantificacin absoluta. No hay ajustes para aadir o cancelar ensayos en los
elementos de la prueba. El programa solo puede aadir elementos del ensayo y
seleccionar filtros para alelo 1 y alelo 2.

3.3 Cuantificacin relativa

Los pasos de configuracin del programa de Cuantificacin relativa son bsica-
mente los mismos de para la cuantificacin absoluta. No hay ajustes para aadir
o cancelar ensayos en los elementos de la prueba. Para experimentos con tubos
monocromticos, verifique durante en anlisis la informacin de la muestra que
aparece al lado izquierdo de esa misma muestra y seleccione muestras de com-
paracin estndar. Durante el anlisis, seleccione un mtodo en las opciones de
ajustes del anlisis.

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Ejecutar programa 13

4 EJECUTAR PROGRAMA
Para asegurar la obtencin de mejores curvas. es necesario ajustar el valor Gain
(ganancia) del instrumento antes de que inicie la reaccin de la amplificacin.
Para ajustar el valor Gain vaya a Gain Settings (Ajustes de ganancia) enTools
(Herramientas). Seleccione Custom Gain (Personalizar ganancia) para ajustar el
valor. El valor Gain (ganancia) predeterminado es 7.
En Custom Gain puede modificar el valor Gain. Prepare la configuracin de la
muestra como se describe en el manual de usuario. Ajuste el programa, la mues-
tra y la temperatura as:
Temperatura 55C
Tiempo 10 s
Ciclos 10

Haga clic en Run (Ejecutar) y Start Run (Iniciar ejecucin). Aparecer el interfaz
para ajustar el valor Gain (vase Figura 13). Seleccione Custom Gain (Personali-
zar Gain) y pulse OK. Observe las curvas de fluorescencia de las muestras.

Figura 13

Los valores de fluorescencia deben estar entre 1000 y 2000. Si los valores son
demasiado altos, repita la ejecucin y disminuya el volumen Gain del colorante
correspondiente. Si los valores son demasiado bajos, repita la ejecucin e incre-
mente el volumen Gain del colorante correspondiente. Si los valores de fluores-
cencia se encuentran dentro del margen esperado, configure el programa, las
muestras y la placar para proceder con el anlisis.
La fluorescencia, las curvas de temperatura y el programa se pueden visualizar
durante la corrida seleccionando el elemento correspondiente. Adems se mos-
trar el estado de la corrida, p. ej. fecha de inicio y finalizacin, ciclo y paso ac-
tuales (vase Figura 14).
 14

Figura 14

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Anlisis de resultados 15

5 ANLISIS DE RESULTADOS
Una vez completada la corrida, aparecer una ventana que le permitir guardar
el experimento. Pulse Yes (S) para guardar o No si desea ver el experimento y
no guardarlo.
Las curvas de fluorescencia y la placa se mostrarn automticamente (vase
Figura 15). Para modificar los ajustes del anlisis, pulse Analysis Settings (Ajus-
tes del anlisis). Una vez realizadas las modificaciones necesarias pulse Apply
Analysis Settings (Aplicar ajustes de anlisis) para guardar los cambios.

Figura 15

Figura 16

Pulse Result Summary (Resumen de resultado) para ver todos los valores de los
pocillos correspondientes.
 16

1. Anlisis de cuantificacin absoluta

Todas las concentraciones de muestras desconocidas se calculan automtica-
mente con una curva estndar. La curva estndar del ensayo se genera de acuer-
do a los valores CT y a los concentraciones de los patrones utilizados. Para mos-
trar los resultados de la curva estndar, pulse Standard Curve.

Figura 17

2. Anlisis de la curva de fusin

Para ver el anlisis de la curva de fusin haga clic en Derivative Curve (Curva
derivada) or Fluorescence Curve (Curva de fluorescencia) para ver los diferentes
grficos de la curva de fusin (vase Figura 18).

Figura 18

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Anlisis de resultados 17

Figura 19

3. Anlisis de cuantificacin relativa

La muestra del tubo de ensayo debe identificarse con la misma barra. Haga clic
en Relative Quantification (Cuantificacin relativa) para visualizar el histogra-
ma o el Amplification Plot (Grfico de amplificacin) para mostrar las curvas de
fluorescencia (vase Figura 20).

Figura 20
 18

Figura 21

4. Anlisis SNP:
Haga clic en SNP para ver el diagrama de dispersin de alelos o bien haga clic en
Amplification Plot (Grfico de amplificacin) para mostrar las curvas de fluores-
cencia (vase Figura 22).

Figura 22

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Anlisis de resultados 19

Figura 23
 20

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Precauciones 21

6 PRECAUCIONES
1. Apague y desenchufe el instrumento si no va a ser utilizado durante un peri-
odo de tiempo largo y cbralo con un pao a prueba de polvo.
2. No limpie la superficie del instrumento con agentes de limpieza corrosivos.
Utilice un pao humedecido con un limpiador suave.
3. Limpie regularmente el mdulo segn la frecuencia de uso y el entorno de
trabajo del instrumento.
4. La pegatina de los accesorios se utiliza para tener a la mano la informacin
del servicio tcnico autorizado de HUMAN. El usuario escoger el lugar para
pegarla.
5. El desempolvador de caucho de los accesorios se utiliza para quitar el polvo
de los pocillos. No presione fuerte al limpiar los pocillos para evitar que los
componentes pticos de los pocillos se deterioren. Evite rayar la superficie de
los componentes pticos de los pocillos.
 22

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