UNIVERSIDAD NACIONAL MICAELA BASTIDAS DE APURMAC

ESCUELA ACADEMICA PROFESIONAL DE INGENIERA AGROINDUSTRIAL LABORATORIO DE

BIOTECNOLOGA AGROINDUSTRIAL

PRC TICA N 03
ESTUDIO DEL CRECIMIENTO DE MICROORGANISMOS: SEGUIMIENTO DEL
CRECIMIENTO DE SACHAROMYCES CEREVISIAE

I. Resumen

En el presente trabajo se evala el crecimiento de la levadura

Saccharomyces cerevisiae en un medio definido con diferentes fuentes de
carbono en donde se determin la curva de crecimiento y la velocidad de
fermentacin utilizando un medio definido en donde crecen todo tipo de
microorganismos. Para lo cual se prepar el inoculo con 100 ml de una
solucin que contenga: glucosa o sacrosa 20 g, extracto de levadura 0.1 g,
KH2PO4 0.5 g, MgSO4.7H2O 0.04 g y se ajust el pH a 4.06. Luego de
esterilizarlo a 115 C por 15 minutos a 15 libras/ pulg2 se inocul
aspticamente con la levadura scharomyces cerevisiae con una previa
agitacin se cultiv por 24 horas a 28C. Para el medio de fermentacin se
prepar 250 ml de una solucin con contenido de glucosa o sacarosa 20 g,
extracto de levadura 0.25 g, (NH4)2SO4 0.5g, KH2PO4 1.0 g, MgSO4.7H2O
0.1g, al cual se le agreg el 5 % del medio de inoculo pasado las 24 horas.
Posteriormente se tomaron datos de los pesos en base humedad y los pH
cada tres horas. Los resultados se muestran en la tabla N5.

II. Introduccin

Los microorganismos responsables de la fermentacin son de tres tipos:

bacterias, mohos y levaduras. Cada uno de estos microorganismos posee
una caracterstica propia sobre la fermentacin que es capaz de provocar.
La levadura Saccharomyces cerevisiae, es una de las ms utilizadas en
diversos procesos de la industria alimenticia. Este microorganismo es
mesfilo, por lo que crece a una temperatura entre 30 y 40 C, siendo la
temperatura ptima 37 C aproximadamente.

Las fuentes de carbono utilizadas por las levaduras como la Saccharomyces

Cerevisiae, varan desde los carbohidratos hasta los aminocidos. Adems,
la capacidad de utilizar ciertos tipos de azcares ha sido tradicionalmente
empleada para la caracterizacin de las distintas razas que esta especie
presenta. Entre los azcares que puede utilizar estn monosacridos como
la glucosa, fructosa, manosa y galactosa, entre otros. Por norma general, las
levaduras mantienen dos tipos de metabolismo muy bien diferenciados. Por
una parte, en condiciones en las que existen altas concentraciones de
glucosa, fructosa o maltosa, la tendencia es a realizar una fermentacin
alcohlica de estos, es decir, se realiza la gluclisis y posteriormente se
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forma etanol. Una vez que estos azcares escasean, se produce la

respiracin del etanol, va ciclo de Krebs.

En un sistema biolgico se define al crecimiento como el aumento

ordenado de las estructuras y los constituyentes celulares de un organismo.
Se puede considerar como crecimiento al incremento de clulas
individuales por un lado, y por otro lado se puede considerar al crecimiento
del nmero de clulas (proliferacin de la poblacin). El proceso de fisin
binaria consiste en el auto duplicacin del material hereditario seguido de
la reparticin en las dos clulas hijas, las que se separan por
estrangulamiento de la membrana celular y formacin de la pared celular.

La finalidad del presente estudio es determinar la curva de crecimiento del

microorganismo en este caso levaduras (Sacharomyces serevisiae) en
condiciones aerobias a diferentes fuentes de carbono y evaluar dicha curva
en funcin del peso en hmedo.

III. Objetivos

Determinar la curva de crecimiento en microrganismos como levaduras

cultivados en aerobiosis utilizando diferentes fuentes de carbono.
Comparar las tasas de crecimiento especifico durante la fermentacin
de sacharomyces cerevisia.
Controlar el desprendimiento de CO2 del medio inoculado.

IV. Revisin Bibliogrfica

4.1. Aspectos generales del metabolismo de saccharomyces cerevisiae

Los microorganismos son sistemas que necesitan una gran cantidad de
energa que se obtiene de la oxidacin de compuestos orgnicos reducidos
proporcionados por los nutrientes; en el curso de la oxidacin se libera
energa (que se acumula en forma de molculas almacenadoras de energa,
especialmente el ATP) y se producen elementos estructurales que servirn
para la construccin de nuevas clulas (crecimiento y diferenciacin). Al
proceso por el que se obtiene energa y elementos estructurales bsicos a
partir de nutrientes se le denomina catabolismo y al que utiliza la energa
obtenida en el catabolismo para sintetizar nuevos componentes celulares se
le denomina anabolismo. Ambos tipos de procesos ocurren simultneamente
y conforme se van produciendo elementos estructurales y energa en el
catabolismo, estos elementos se usan para formar nuevos componentes
celulares en procesos anablicos. La fuente de energa acta como donador
de electrones y, para que se produzca la liberacin de energa, se requiere
una reaccin de oxidacin-reduccin completa; es decir, la presencia de un
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aceptor de electrones. Si ese aceptor es el oxgeno, el aprovechamiento de

energa se realiza a travs de la fosforilacin oxidativa, en un proceso
denominado cadena respiratoria o de transporte de electrones. En otros
casos, en ausencia de aceptores externos de electrones, los organismos
llevan a cabo reacciones de oxidacin-reduccin equilibradas internamente,
que conducen a la obtencin de energa a travs de la fosforilacin a nivel de
sustrato. Es el proceso conocido como fermentacin (Alvero, 1998).

Los microorganismos actan como reactores y las enzimas como

catalizadores. El crecimiento microbiano es dependiente de la cantidad de
energa libre, liberada durante las reacciones y de la eficiencia con que esa
energa es capturada. Los organismos vivos utilizan energa qumica a travs
de reacciones del tipo xido-reduccin. El flujo de electrones durante las
reacciones redox genera energa, el proceso de transferencia de electrones
desde el donante al aceptor final es realizado mediante los "portadores de
electrones (electron carriers)". Los compuestos adenosine fosfatos son
compuestos muy importantes en el proceso de generacin de energa. El ATP
(Adenosine Trifosfato) tiene un papel fundamental en la generacin de
energa, cuando se hidroliza produce ADP (Adenosine Difosfato) con una
energa libre de -31 kJ/mol. Lo que pierde el ATP es un enlace fosfato. El ATP
es el medio por el cual la clula almacena temporariamente la energa
obtenida de los nutrientes o de la luz. La Adenanine presente en las
molculas de ATP y ADP es un cido nucleico presente en el ADN. Se presenta
el mecanismo de fermentacin de glucosa a alcohol y CO2, donde se observa
el papel del ATP y ADP en este proceso.
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Figura 1. Fermentacin de Glucosa

a) Fases de crecimiento de la Saccharomyces cerevisiae

La levadura Saccharomyces cerevisiae muestra cinco fases de crecimiento

bien definidas cuando se cultiva en medios lquidos con glucosa como fuente
de carbono: lag, logartmica, cambio diuxico, postdiuxica y estacionaria.
La fase lag es un periodo de adaptacin en el cual la clula se prepara para
dividirse. Durante la fase logartmica las clulas alcanzan su mxima velocidad
de duplicacin y llevan a cabo un metabolismo fermentativo (an en
condiciones aerobias) del que se produce etanol. Al disminuir la
concentracin de glucosa, las clulas atraviesan por el cambio diuxico, un
periodo breve de tiempo en el cual no hay divisin, y la clula cambia de un
metabolismo fermentativo a uno respiratorio. En la fase postdiuxica las
clulas usan como fuente de carbono el etanol producido durante la fase
logartmica e incrementan su resistencia al estrs gradualmente; en tanto que
la fase estacionaria se presenta cuando los nutrientes del medio se han
agotado y no hay divisin celular. En esta fase, las clulas acumulan
carbohidratos de reserva como trehalosa y glucgeno, alcanzan el mximo
nivel de resistencia a estrs y su pared celular se vuelve ms gruesa y
resistente a la digestin por liticasa (Mallol et al., 2004).

Figura 2. Fases de crecimiento de la levadura saccharomyces cerevisae

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Fase de latencia: es el tiempo que tarda una bacteria determinada en

adaptarse al medio de cultivo y las nuevas condiciones ambientales.
Fase exponencial: la poblacin crece al ritmo mximo de forma que cada clula
se divide originando dos clulas, estas dos darn cuatro, y as sucesivamente,
duplicndose la poblacin en cada perodo divisional o tiempo de generacin (o
tiempo de duplicacin), tpico de cada cepa bacteriana para unas condiciones
de cultivo dadas. Al representar el logaritmo del nmero de clulas viables
respecto al tiempo, se obtiene una lnea recta.
Fase estacionaria: en un cultivo donde no hay renovacin del medio de cultivo,
los nutrientes se agotan y se acumulan productos metablicos txicos, con lo
que el crecimiento de la poblacin se ralentiza e incluso se detiene.
Fase de muerte: si se prolonga el cultivo, se llega a una situacin en que las
clulas mueren, disminuyendo el nmero de clulas viables.

b) Proceso de fermentacin de la Saccharomyces cerevisiae

La levadura Saccharomyces cerevisiae puede fermentar la glucosa a etanol.
En condiciones anaerobias sta es la nica manera de producir energa. En la
presencia de oxgeno, tiene lugar la respiracin. Sin embargo, se puede
producir fermentacin alcohlica incluso en condiciones aerobias (Dijken y
Scheffers, 1986).

La formacin aerbica de etanol a partir de glucosa en Saccharomyces

cerevisiae se produce de diferentes maneras en los tres tipos de tcnicas de
cultivo: discontinuo (batch), semicontinuo (fed- batch) y continuo
(chemostat). En cultivos tipo batch, primero se consume el azcar con la
consiguiente formacin de etanol seguido de una corta fase lag y consumo
posterior de etanol. (Barford, 1981).

Un proceso batch se caracteriza por una baja densidad mxima celular debido
a la inhibicin por etanol y por un bajo rendimiento en biomasa. Por esta
razn se utiliza ocasionalmente en procesos industriales. Hay diversas
hiptesis sobre la naturaleza del cuello de botella que origina el metabolismo
overflow de la glucosa (Sonnleitner y Kappeli, 1986)

4.2. Crecimiento de bacterias

La mayora de las bacterias se reproducen
por medio de una fisin binaria

Figura 3. Duplicacin de clulas

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El tiempo que tardan en formarse 2 clulas de una clula comn se llama

tiempo de generacin, pero como coincide con el tiempo en que se duplica
el nmero de clulas se denomina tambin tiempo de duplicacin. Este
tiempo vara significativamente segn la especie bacteriana y segn las
condiciones del medio de cultivo. (Barford, 1981)

4.3. Factores que afectan el crecimiento y la biodegradacin

4.3.1. Nutrientes
Los nutrientes deben estar disponibles de acuerdo a las necesidades de
crecimiento de las clulas. Sin embargo, la presencia de nutrientes en
cantidad adecuada no es suficiente, los nutrientes deben estar tambin en un
estado adecuado para su asimilacin. Los medios de cultivo pueden ser
medios sintticos o complejos. Los medios sintticos son aquellos que tienen
una composicin qumica bien definida. (Li, Wei y Chen, 2004)

4.3.2. PH
El PH afecta en forma muy significativa la actividad microbiana. Cada
organismo tiene un rango de PH dentro del cual es posible el crecimiento y
normalmente posee un PH ptimo muy bien definido. La mayora de los
ambientes naturales tienen valores de pH de 5.9 y los organismos con pH
equivalentes son los habituales. Slo unas pocas especies pueden crecer con
un pH inferior a 2 (acidfilos) o mayor a 10 (alcalfilos). Los hongos, como
grupo, tienden a ser ms tolerantes al cido que las bacterias. El PH
intracelular debe permanecer cercano a la neutralidad, con el objeto de
impedir la destruccin de macromolculas internas. (Li, Wei y Chen, 2004)

4.3.3. Temperatura
La temperatura es uno de los factores ambientales ms importantes que
afectan al crecimiento y a la supervivencia de los microorganismos. Las
especies bacterianas crecen generalmente bien en rangos estrechos de
temperatura. Las bacterias mesfilas crecen bien entre 15 y 45C, siendo el
rango ptimo entre 25 y 35 C. Las psycrfilas se desarrollan adecuadamente
debajo de los 20C. Las termfilas tienen un buen desarrollo entre 45 y 65 C.
Como regla del pulgar por cada aumento de 10C, la velocidad de
biotransformacin aumenta cerca de 2 veces. Esta aproximacin es slo vlida
hasta una determinada temperatura arriba de la cual la velocidad comienza a
decrecer. Los aumentos de temperatura en una primera etapa permiten
alcanzar mayores velocidades de degradacin debido a un aumento de la
actividad microbiana, un aumento de la solubilidad de los nutrientes en agua,
entre otras razones. En general a temperaturas mayores que 40 C el
crecimiento de bacterias decae debido a la desnaturalizacin de enzimas y
protenas. A temperaturas cercanas a los 0C, el crecimiento se detiene. Como
regla general las bacterias resisten mejor las bajas temperaturas, ya que para
esos casos se pueden encapsular y recobrar su actividad cuando las
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condiciones mejoran. En cambio cuando son sometidas a temperaturas

elevadas las clulas mueren. (Li, Wei y Chen, 2004)

4.3.4. Disponibilidad de agua

El agua es el componente principal de las clulas, por lo tanto un suministro
de agua adecuado es indispensable para lograr el mantenimiento y
crecimiento microbiano. Tambin el agua es el medio de transporte de los
sustratos (o contaminantes) hacia el interior de las clulas, y tambin el
transporte de los compuestos que se producen dentro de la clula y que son
devueltos al medio de cultivo. Sin agua la actividad microbiana no es posible.
(Li, Wei y Chen, 2004)

4.3.5. Otros factores vinculados a los sustratos

La estructura y origen de los sustratos (o reactivos) tienen un impacto decisivo
en la capacidad de los microorganismos de sobrevivir y en el cumplimiento de
la funcin que se desea. Cuando alguno de los sustratos presenta una baja
solubilidad en agua, se encuentra poco biodisponible para los
microorganismos y la reaccin bioqumica se ver demorada por un
problema de transferencia de masa. La concentracin de los compuestos
(tanto reactivos como productos) tambin es muy importante, por ejemplo
altas concentraciones de un compuesto pueden ser txicas e inhibir el
crecimiento de las bacterias. (Li, Wei y Chen, 2004)

V. Insumos, Reactivos , Equipos Y Materiales

Tabla N 1.
Insumos y reactivos y cantidades requeridos.
Levadura Sacharomyces 10 g
Cerevisiae
Glucosa, Sucrosa 20 g c/u
Extracto De Levadura 5.0 g/l
Kh2po4 4 g/l
Mgso4.7H2O 2 g/l
(Nh4)2so4 5 g/l
Agua Destilada 5l
HCL Al 10% 50 ml

Tabla N2.
Materiales y cantidades requeridas.
Matraces Erlenmeyer De 1L 02
Matraces Erlenmeyer De 250 Ml 06
Pipetas De 10 Ml 02
Vasos De Precipitacin De 200 Ml 04
Esptulas 02
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Pizetas 01
Pipetas 50ml, 10 Ml 02 c/u
Bagetas 02
Pinzas 01

Tabla N3.
Materiales adicionales.
Algodn 01
Cinta Masquen 01
Rotulador 01
Papel Aluminio 01
Tijera 01
Pabilo 1 rollo

Tabla N4.
Equipos utilizados.
Balanza Analtica 01
Estufa 01
Autoclave 01
pHmetro 01

VI. Metodologa

Preparacin de inoculo: preparar 100ml de una solucin que contenga:

glucosa o sacrosa 2g, extracto de levadura 0.1 g, KH2PO4 0.5 g,
MgSO4.7H2O 0.04 G, ajustar el ph a 3.8.Luego de esterilizarlo a 121 C
por 20 minutos a 15 libras/ pulg2, inocular aspticamente con la
levadura scharomyces cerevisiae usando una asa de siembra y cultivar
por 24 horas en agitacin a 28C.

Medio de fermentacin: preparar 250 ml de una solucin que contenga:

glucosa o sacarosa 5 g, extracto de levadura 0.25 g, (NH4)2SO4 0.5g,
KH2PO4 1.0 g, MgSO4.7H2O 0.1g.
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Preparacin de medio de inoculo

Sacrosa :2g
Preparacin de inoculo PH: 3.8 ajustado
Extracto de levadura: 0.1 g
KH2PO4 :0.5 g
MgSO4.7H2O: 0.04 g
Esterilizar Esterilizar a 121 C x 20 min a 15
libras/ pulg2

Inocular

Incubar 24 horas a
Siembra y cultivar
48C 28C.

Preparacin de medio fermentativo

Sacarosa: 5 g
Extracto de levadura 0.25g
(NH4)2SO4 0.5g Medio fermentativo
KH2PO4 1.0 g
MgSO4.7H2O 0.1g.

Figura 4. Se muestra el procedimiento para obtener Preparacin de medio de

inoculo y Preparacin de medio fermentativo.

VII. Procedimiento

5%=12.8 ml
Levadura: 10 g medio de fermentacin
Medio inoculo

Sacar 3 ml x 3
hr a 80 C
24 hr x
48 C
pH: 4.01 pH: 4.07 X0= 3 ml X1
t0 = 0 t1 Pesar en peso
hmedo

Figura 5. Se muestra los procedimientos y parmetros a considerar al

momento de la ejecucin de la prctica.
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VIII. RESULTADOS

Tabla N5.
Resultados de biomasa determinado en funcin del tiempo, peso en hmedo
y pH.
Tiempo peso pH
(horas) (g)
0 3,13 4,01
3 3,23 3,43
9 3,24 3,24
12 3,12 2,79
15 3,07 4,30
18 3,01 5,8
21 3,09 2,76

De la tabla N5, cabe resaltar que los pesos efectuados en el tiempo 0, 3, 9,

fueron ejecutados de manera continua el primer da, pero para los pesos
restantes por factores externos del laboratorio se pes despus de dos das.
Y el peso y pH en el tiempo 15 fue obtenido mediante una interpolacin, ya
que los estudiantes tomaron la muestra incorrecta. De all el anlisis de que
los resultados obtenidos a partir del tiempo 12 puedan que la fase en la que
se encuentran los microorganismos sea la fase posterior a la estacionaria.

grafica de crecimiento de biomasa

3.3 y = -0.0071x + 3.2058
R = 0.4249
[gramos ] peso humedo

3.25
3.2
3.15
3.1
3.05
3
2.95
0 5 10 15 20 25
tiempo (hr)

Figura 6. Crecimiento de biomasa en funcin del peso hmedo.

En la figura se ve que hay gran variacin en cuanto al peso hmedo de la

biomasa, donde no se muestra la fase estacionaria, ello debido a factores
que se mencionaran en las discusiones.
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Donde la ecuacin ser: Y = Ax + B

A= -0.0071
B=3.2058
R2= 0.4249
El pendiente (m)
M=A=-0.0071

Determinar la tasa de crecimiento especfico al inicio de la fase logartmica

con la siguiente formula:

IX. Discusiones
Boulton y Quain (2006), mencionan que la levadura Saccharomyces
cerevisiae puede fermentar la glucosa a etanol. En condiciones
anaerobias sta es la nica manera de producir energa. Sin embargo, se
puede producir fermentacin alcohlica incluso en condiciones
aerobias. De ello decimos que la ejecucin del crecimiento microbiano
para la presente prctica se realiz en forma anaerobia.

Segn White et al., (2003), Indicaron que cuando se realiza la

transferencia de un cultivo a otro, es decir el Re-pitching, el proceso
genera una fuente potencial de estrs osmtico, que se exacerba con el
uso de mostos de alta gravedad. La respuesta al stress es dependiente
del estado fisiolgico de las clulas, y que las clulas en fase
estacionaria muestran mayor resistencia al stress, en comparacin con
las clulas en fase exponencial. En este caso no se puede evaluar
verdicamente estos cambios, ya que las muestras recogidas en la
prctica tuvieron problemas en cuanto a la funcin del tiempo, no se
tom los datos establecidos en cierto tiempo ello debido a factores
externos.

Li, Wei y Chen, (2004) enfatizan que el pH es un factor muy importante

en el proceso de fermentacin ya que controla la contaminacin por
microorganismos extraos al proceso. Adems tambin influye en el
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crecimiento de la levadura y en la produccin de etanol. Durante el

proceso la levadura toma nitrgeno de los aminocidos orgnicos
perdiendo as su carcter anftero y pasando a cido. Esto causa una
reduccin del pH en el medio. Cuanto menor sea el pH del medio menor
es la probabilidad de contaminacin, ya que se hace un medio hostil
para posibles microorganismos extraos que quieran crecer all. Pero a
medida que el pH se hace menor la fermentacin se hace ms lenta
porque las levaduras no se desarrollan adecuadamente. El rango de pH
para la S. cereviseae es de 4,4-5,5 siendo el ptimo de 4,5 para su
crecimiento. Para la presente practica el medio de inoculo present un
pH de 4.01, y el medio de fermentacin un pH de 4.07, de ello se hace
mencin que este parmetro no se ajust correctamente para un
desarrollo ptimo del microorganismo, en los primeros tres tiempos se
ve un descenso del pH (4.01, 3.43 y 3.24) por lo tanto se dice que el
medio de trabajo fue inocuo entonces el medio presentaba menor
probabilidad de contaminacin, y la fermentacin se realizaba en forma
lenta. Pero para el tiempo (15 y 18 hs) se ve un incremento en cuanto
al pH (4. 30 y 5.8), de esto deducimos que halla la probabilidad de que
el medio de fermentacin se ha contaminado debido a las
manipulaciones que ha presentado para realizar los respectivos anlisis,
y el desarrollo se mantiene casi constante. Pero de todo ello la prctica
fue interrumpida por dos das, en los cuales se haya podido evaluar ms
la fase exponencial, ya que la fase presentada no es la mencionada.

X. Conclusiones

Se logr determinar la curva de crecimiento del microorganismos como es

la levaduras saccharomyces serevisiae cultivados en anaerobiosis utilizando
diferentes fuentes de carbono, pero la curva presentada en la figura 6,
presenta errores en el tiempo de medicin, por ello la curva no se asemeja
a la curva de desarrollo de los microorganismos, es ms podemos decir que
la fase de estacionaria se llev a cabo en los das que no se realiz la
medicin y peso del medio de fermentacin. Por ello se menciona que la
curva del tiempo 0 al tiempo 9 se encuentra en fase exponencial, mientras
los tiempos 12 en adelante ya nos muestran la fase de lisis del S. cerevisiae.
Para obtener mejores resultados lo correcto sera volver a realizar la
prctica.

No se puede comparar las tasas de crecimiento especfico durante la

fermentacin de sacharomyces cerevisiae, con las curvas de crecimiento
microbiano, por motivos de falta de pesos en los tiempos (dos das) que no
se recogieron los datos.

El control del desprendimiento de CO2 del medio de inoculo se realiz

mediante una fermentacin anaerobia, ya que una vez inoculado la
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levadura al matraz, este fue sellado evitando el pase del oxgeno, por eso
que la fermentacin no rebalso.

XI. Cuestionario

1. Cul es la importancia de controlar el desprendimiento de CO2 en una

fermentacin?

Desde el punto de vista energtico la fermentacin alcohlica es una reaccin

exotrmica, se libera una cierta cantidad de energa. La fermentacin alcohlica
produce gran cantidad de CO2, que es la que provoca que algunos vinos como
el Champagne y el Cava tengan burbujas. Este CO2 pesa ms que el aire, y
puede llegar a crear bolsas que desplazan el oxgeno de los recipientes donde
se produce la fermentacin. Por ello es necesario ventilar bien los espacios
dedicados a tal fin. La liberacin del dixido de carbono es a veces
tumultuosa y da la sensacin de hervir, de ah proviene el nombre de
fermentacin, palabra que en castellano tiene por etimologa del latn fervere.

2. Cmo est caracterizado la fase exponencial de crecimiento microbiano?

Es el periodo de la curva del crecimiento en el cual el microorganismo crece

exponencialmente, es decir que cada vez que pasa un cierto tiempo de
generacin la poblacin se duplica. Bajo condiciones apropiadas la velocidad de
crecimiento es mxima. Las condiciones ambientales afectan la velocidad de
crecimiento exponencial.

3. Qu es la fase lag y que factores influyen en su duracin?

Cuando una poblacin microbiana es inoculada en medio fresco, el crecimiento

generalmente no principia de inmediato sino despus de un cierto tiempo,
llamado fase lag que puede ser breve o largo, dependiendo de las condiciones.
Si un cultivo que crece exponencialmente es inoculado al mismo medio bajo las
mismas condiciones de crecimiento no se observa la fase lag y el crecimiento
exponencial contina a la misma velocidad. Sin embargo, si el inculo se toma
de un cultivo viejo (fase estacionaria) y se inocula en el mismo medio,
generalmente se presenta la fase lag, aun cuando las clulas del inculo estn
vivas. Esto se debe a que las clulas generalmente agotan diferentes coenzimas
esenciales u otros constituyentes celulares y se requiere de cierto tiempo para
su resntesis. Un retraso tambin se presenta cuando el inculo est formado
por clulas daadas (pero, no muertas) por tratamientos con calor, radiacin o
sustancias qumicas, debido al tiempo necesario para que las clulas puedan
reparar dicho dao. Tambin se observa cuando una poblacin se transfiere de
un medio de cultivo rico a uno pobre. Esto sucede debido a que para que
contine el crecimiento en un medio de cultivo en particular, es necesario que
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las clulas tengan un complemento ntegro de enzimas para la sntesis de los

metabolitos esenciales que no estn presentes en dicho medio.
Factores externos: Condiciones ambientales o culturales: pH, T, Aw, O2,
CO2
Condiciones nutricionales: Tasa C/N 10:1, 12:1
Factores internos: Capacidad metablica

4. Realice una discusin respecto a los valores encontrados de produccin de

etanol y la biomasa bajo condiciones anaerbicas.
La biomasa producida tanto como el etanol en los primeros tres tiempos fueron
ptimos, pero no se llev la evaluacin de forma constante, ya que por los dos
das que no se tuvo acceso a los laboratorios no se observa claramente la fase
exponencial o estacionaria, los posteriores tiempos evaluados se presencia una
disminucin en cuanto a la biomasa, probablemente porque en esos tiempos
la fase haya sido la de lisis, por ende la produccin de etanol tambin fue
disminuyendo.

XII. Bibliografa

Alvero, C. 1998. Biologa de los microorganismos y clulas de inters

industrial. En Ingeniera Bioqumica (Gdia Casablancas F. y Lpez Santn
J., Eds). Editorial Sntesis, Madrid.
Barford, P. 1981. A mathematical model for the aerobic growth of
Saccharomyces cerevisiae with a saturated respiratory capacity. Biotechnol.
Bioeng. 23: 1735-1762.
Dijken, P. y Scheffers, A. 1986. Redox balances in the metabolism of sugars
by yeasts. FEMS Microbiol. Rev. 32: 199-224.
Li Y., Wei G. and Chen J. 2004. Glutathione: a review on biotechnological
production. Appl. Microbiol. Biotechnol. 66: 233-242.
Mallol, L., 2004.Garay-Arroyo A., Lledas F. y Covarrubias Robles A.A. 2004.
Artculo de revisin: La respuesta a estrs en la levadura Saccharomyces
cerevisiae. Revista Latinoamericana de Microbiologa. 46 (1-2): 24-46.
Sonnleitner, B. y Kappeli, O. 1986. Growth of Saccharomyces cerevisiae is
controlled by its limited respiratory capacity: Formulation and verification
of a hypothesis. Biotechnol. Bioeng. 28: 927-937.

White, P. et al., (2003). The osmotic stress response of ale and lager brewing
yeast strains. En K. A. SMART (Ed.), Brewing Yeast Fermentation
Performance (Segunda ed., pgs. 46-59). Oxford, UK: Blackwell Science.

Boulton, C., Y Quain, D. (2006). Brewing Yeast and Fermentation. Oxford,

UK.: Blackwell Science Ltd.