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(BIT®) en la Micropropagación de
plantas y su aplicación a las
ornamentales”.
Dra. Maritza M. Escalona Morgado
Laboratory for Plant Cell and Tissue Culture
Centro de Bioplantas
Universidad de Ciego de Ávila, Cuba
Limitaciones de la micropropagación de
plantas
• Requiere gran número de envases pequeños.
Inmersión
completa y
renovación del
medio líquido
Inmersión completa
con transferencia
neumática del medio
de cultivo sin
renovación del medio
líquido
Inmersión parcial y
renovación del
medio líquido RITA® BIT®
3 2
Air pump
Regulator valve
Solenoid valve
Hydrophobic air filter
1- Dos frascos de cultivo conectados entre sí, uno para los explantes y otro
para el medio de cultivo.
2. Inicio de la inmersión, el medio de cultivo es impulsado por el aire del
compresor al frasco que contiene los explantes.
3. Fin de la inmersión, la segunda válvula solenoide se abre y el medio de
cultivo regresa al frasco que lo contiene.
Propagación masiva de
caña de azúcar
BIT®: Tercera Generación
Controlador
Inyección de CO2 mejora cultivo
fotomixotrófico.
Utilización de ventilación
forzada.
Mayor calidad de plantas.
Rotámetro
CO2
Compresor
BIT® para la investigación.
1L 250 mL
Efecto del BIT en el rendimiento biológico de la
micropropagación.
PROLIFERACIÓN DE BROTES,
SEGMENTOS NODALES Y
MICROBULBOS
MICROTUBERIZACIÓN
EMBRIOGÉNESIS SOMÁTICA
Propagación de la piña (Ananas comosus
L. (Mer) ) en BIT®
Micropropagación ®
Variedad BIT
convencional
14
12
10
8
Multiplication rate x10
6 pH value
0
0 4 6 7 8
w eeks
Micropropagación ®
Variedad BIT
convencional
Coeficiente de Multiplicación
a 35.0
20.0 30.0
No. de Nudos del BP
25.0
15.0
20.0
b b
10.0 b
15.0
10.0
5.0
5.0
0.0 0.0
PBZ 0 mg/L PBZ 0.5 mg/L PBZ 1 mg/L Con refrescamiento Sin refrescamiento
Tratamientos
Tratamientos
35 a
Coeficiente de Multiplicación
30
25 b
20 Convencional
15 c BIT
a
10 b
c
5
0
MS MS + 0,25 PB MS + 0,5 PB
Tratamientos
Propagación de prunus (GF677) en BIT®
9
a
8 a
7
Tasa de Multiplicación
b b
b b
6
5
4
3
2
1
0
Control/2F Control/3F PB 0,5/2F PB 0,5/3F PB 1,0/2F PB 1,0/3F
Tratamientos
0
10/600 15/600 10/400 15/400
Número de semilla/planta
12
10
8 microtubérculo
b
6 c c minitubérculo
bc
c
4
2
0
Capiro Canchan Papa-3
Genotipo
12 a
tubers 6
microtubérculos
minitubérculos
< 4 mm 33.3 a 21.8 a 25.7 a 3.1 b 4
4-6 mm 51.7 a 16.2 b 32.4 a 24.9 a 2
b b b
Etapa de formación de
microtubérculos
A B C
A: Microtubérculos MF ≤ 1,0 g
18 semanas de cultivo
MS+sacarosa. Oscuridad B: Microtubérculos MF 1,0 - 2,9 g
Seis semanas de cultivo
C: Microtubérculos con una MF≥ 3,0 g
MS+sacarosa (30gL-1) Luz
Cabrera et al., 2005. Plant. Cell. Tiss. Org. Cult., 83: 103-107.
Eficiencia del BIT® en la germinación de embriones somáticos de
Pinus radiata (Proyecto Neiker-Tecnalia, España, 2010-2012).
control
1 V/día 2 V/día
400
a
350
b
300
c
250
200 Incremento MF
100
50
5,6 5 5,6
0
3 Inm/día 3 Inm/día/1V 3 Inm/día/2V
Eficiencia del BIT® la germinación de embriones somáticos de
Quercus suber (Proyecto , UNIOVI, España, 2010-2012).
A: Agregados pre-germinados, B:
Embriones pre-germinados con
D E
Micropropagación ® Araceaes
Cultivo Variedad BIT
convencional
W. Butterfly 7.3 28.0
Syngonium
Pixie 2.2 18.4
Coeficiente de Multiplicación
12
10 a
a
8
6 b
4 bc
c
2
0
0 1 2 3 4
Número de cambios de medio
Micropropagación ®
Variedad BIT
Convencional
SeSu 2.1 6.8
12
Multiplication rate
10
8
6
4
2
0
cluster shoot divided
Brote seccionado Brote no seccionado
Frecuencia de Coeficiente de
Inmersión Multiplicación
3h 11.3 b
4h 12.5 a
6h 9.3 c
Semi-sólido BIT
12 veces en
comparación con el
SS
MULTIPLICACION
Formación de microbulbos de Lilium a partir de
escamas en BIT®
5 a
Número de microbulbos/explante
4,5
4
b
3,5
3
2,5
2
1,5
c c
1
c c
0,5
0
escamas/4F- escamas/2F- bulbos/4F-día bulbos/2F-día 1/2 bulbo/4F- 1/2 bulbo/2F-
día día día día
Tipo de explante
Desarrollo de microbulbos de Lilium a partir de
escamas en BIT®
9
8 a
7
6 b
b
5 a
a
4
3 b
2
1
0
Naranja Santander Blanco Concador
Variedades
Metabolismo del
Carbono
Asimilación de nutrientes
Fotosíntesis de las plantas in vitro en el BIT®
10
0
SS
Pn
0 7 14 21
-5 BIT®
-10
-15 Plátano
Days before acclimatization
Starch concentration
2,0 b 150
(mg/g FW)
1,5 c 100
1,0
50 b b b b
a a ab
a
0,5
b
ab
b b b
b
0,0 c c c c 0 c
0 7 14 21 28 35 42 49 56 63 70 IC 0 7 14 35
days
t (days)
PLÁTANO
16
b 120
14
12 c a
EA PK (U/g FW)(h)
10 c 90
a
8
6 d d 60 a
b
4 a b
2 e 30
0 b
b
0 7 14 21 0
0 7 14 21
time (days)
time (days)
EA SS EA TIB *5 EA SS EA TIB
Roels et al., 2006. Plant Cell Tiss. Org. Cult., 84 (2): 138-146.
Fisiología y Morfología de los brotes de plátanos cultivados en el
BIT® previo a la aclimatización.
Días Método Pn Transp. Long. Diam. Número MF Núemro
Cultivo (cm) (cm) hojas/ (g) raíces
brote
0 -7.63 c 1.33 b 3.02 c 0.41 c 1.40 c 0.67 b 0.00
7 SS -10.9 c 0.81 c 3.23 c 0.51 b 2.07 b 0.60 b 0.00
TIB -12.5 c 2.17 a 3.17 c 0.53 b 2.27 b 0.49 c 0.00
14 SS 1.92 b 1.34 b 3.63 b 0.57 b 2.33 b 0.71 b 0.00
TIB 8.86 a 1.56 a 4.19 a 0.56 b 2.73 a 0.86 a 1.80 b
21 SS 2.12 b 1.29 b 3.85 b 0.73 a 2.07 b 0.77 b 1.60 b
TIB 6.04 a 1.90 a 4.18 a 0.71 a 2.80 a 0.86 a 2.93 a
EVALUACIÓN EN EL CAMPO
Plantas de plátano CEMSA ¾ en el campo. Plantas
fueras de tipo.
Producción semilla
variedades de caña de
azúcar. Ingenio La Estrella,
CALESA, PANAMÁ
Aplicación comercial BIT®
Propagación de piña,
SBW, HOLANDA EN
GHANA
PRODUCCIÓN IN VITRO DE PLANTAS
“ UN PROCESO QUE TERMINA CUANDO EL AGRICULTOR
TIENE SUS GANANCIAS EN UNA CUENTA BANCARIA”
RETOS...
• Desarrollo de protocolos eficientes.
• Producción a partir de genotipos seleccionados.
• Producción de plantas a bajo costo.
ESTRÉS OXIDATIVO
ESTRÉS BIÓTICO Y
ABIÓTICO
CONCLUSIONES
• El Biorreactor de Inmersión Temporal es una técnica eficiente
para la propagación masiva de plantas porque incrementa el
coeficiente de multiplicación, la calidad de los brotes, permite
la semi-automatización del proceso y la reducción de los
costos de producción.