Partes del Microscopio

Parte mecánica:

- Sistema de soporte o estativo:

o Pie
o Brazo
o Tubo
o Platina
o Revolver

- Sistema de ajuste:
o Tornillo macrométrico
o Tornillo micrométrico

Parte óptica:

- Fuente de iluminación

- Condensador y diafragma

- Lentes: oculares (10x y 12x) y objetivos (4x, 10x, 40x y 100x).

* PIE: Sirve como base del microscopio y tiene un peso suficiente para dar estabilidad al
aparato. En los microscopios antiguos tenía forma de herradura o de trípode pero en la
actualidad suele ser una plataforma rectangular. En él se integra la fuente luminosa.

* BRAZO: Es una columna perpendicular al pie. Puede ser arqueado o vertical y une al pie
con el tubo.

* TUBO: Es una cámara oscura unida al brazo mediante una cremallera. Tiene el revolver
con los objetivos en su parte inferior y los oculares en el extremo superior.

* PLATINA: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la
preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación
situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un
sistema de cremallera guiado por dos tornillos de desplazamiento permite mover la
preparación de delante hacia atrás o de izquierda a derecha y viceversa. En la parte
posterior de uno de los laterales se encuentra un nonius que permite fijar las coordenadas de
cualquier campo óptico; de esta forma se puede acudir a el cuando interesa.

* REVOLVER: Es un sistema que coge los objetivos, y que rueda para utilizar un objetivo
u otro.
* TORNILLOS MACRO Y MICROMÉTRICO: Son tornillos de enfoque, mueven la
platina hacia arriba y hacia abajo. El macrométrico lo hace de forma rápida y el
micrométrico de forma lenta. Llevan incorporado un mando de bloqueo que fija la platina a
una determinada altura.

* FUENTE DE ILUMINACIÓN: Se trata de una lámpara halógena de intensidad

graduable. Esta situada en el pie del microscopio. Se enciende y se apaga con un interruptor
y en su superficie externa puede tener una especie de anillo para colocar filtros que facilitan
la visualización.

* CONDENSADOR Y DIAFRAGMA: El condensador es un sistema de lentes situadas

bajo la platina su función es la de concentrar la luz generada por la fuente de iluminación
hacia la preparación. En el interior del condensador existe un diafragma (iris) cuya función
es limitar el haz de rayos que atraviesa el sistema de lentes eliminando los rayos demasiado
desviados (regula la cantidad de luz y ajusta la Apertura Numérica).

* OCULARES: Están colocados en la parte superior del tubo. Se denominan así, porque
están muy cercanos al ojo. Su función es la de captar y ampliar la imagen formada en en los
objetivos. En los modernos microscopios hay dos oculares (microscopios binoculares) que
están unidos mediante un mecanismo que permite ajustar la distancia interpupilar. En
general los mas utilizados son los de 10X ( producen un aumento de 10 veces ).

* OBJETIVOS: Están colocados en la parte inferior del tubo insertados en una pieza
metálica, denominada revolver, que permite cambiarlos fácilmente. Generan una imagen
real, invertida y aumentada. Los mas frecuentes son los de 4, 10, 40, y 100 aumentos. Este
último se llama de inmersión ya que para su utilización se necesita utilizar aceite de cedro
sobre la preparación. En la superficie de cada objetivo se indican sus características
principales, aumento, apertura numérica, y llevan dibujado un anillo coloreado que indica
el número de aumentos (rojo 4X, amarillo 10X, azul 40X y blanco 100X).

Las partes de un microscopio Los dos sistemas de lentes de un microscopio óptico

compuesto se denominan lente objetivo, la que está mas cercana al espécimen, y lente
ocular, que está en la pieza del ocular del microscopio. Los microscopios modernos llevan
la fuente de luz incorporada. En la Figura 3.6 se puede observar el recorrido de la luz
desde la f'uente luminosa, en la base del microscopio, hasta el ojo del obsenador. La luz
pasa frecuentemente a través de un filtro azul (para eliminar Iongitudes de onda largas) y a
través de otra serie de lentes que constituven el condensador. El condensador tiene como
función dirigir la luz sobre el espécimen, donde parte de la misma es absorbida y parte
difractada. La luz transmitida entra en la lente objetivo, que forma una imagen en el tubo
del microscopio. Posteriormente la lente ocular aumenta la imagen y la proyecta en la
última lente de la serie la de nuestro propio ojo. El ojo forma una imagen en la retina y el
cerebro la percibe.

Un microscopio compuesto ordinario proporciona una iluminación de campo claro. Esto

es debido a que el condensador dirige la luz a través del espécimen, y el fondo queda
iluminado de forma brillante. Los microscopios compuestos pueden ser modificados para
ver un espécimen mediante (1) contraste de fases, (2) campo oscuro, (3) fluorescencia, o (4)
por contraste diferencial de interferencia (Nomarsky); todos estos métodos se describirán
más tarde.

Poder total de aumento Casi todos los microscopios compuestos poseen varias lentes
objetivos, cada una con un poder de aumento diferente. Normalmente, existe una lente de
bajo poder (objetivo débil seco) que aumenta un objeto 10 veces (l0x), una de alto poder
(objetivo fuerte seco), que aumenta 40 veces (40x) y el objetivo de inmersión, 100 veces
(l00x). Casi todas las lentes del ocular proporcionan un aumento adicional de 10 veces
(l0x). Se puede calcular el poder total de aumento de un microscopio multiplicando cl
aumento que proporcionan las dos lentes, objetivo y ocular, en uso. (Véase la Tabla 3.1, en
la cual se incluyen tres ejemplos.) Si se desea observar la apariencia general de un
espécimen es recomendable usar un objetivo de bajo poder, porque su campo de visión es
grande. El objetivo de inmersión tiene un campo de visión pequeño, pero proporciona mas
detalles de la imagen (Figura 3.7).

Casi todos los microorganismos requieren, antes de ser examinados en un microscopio

óptico, una preparación especial; esto es debido a que poseen poco contraste natural. La
preparación y la tinción (tratamiento con colorantes) de un espécimen son fundamentales si
se desea obtener buenas imágenes. Muchas décadas de esfuerzos y errores han conducido a
métodos generales de preparación que resultan idóneos. A continuación describiremos la
observación en fresco de microorganismos vivos y varios tipos de tinciones.

Tabla 3.1. Aumento Total

Lente Ampliación
Microscopio Lente ocular
objetivo total
Microscopios ópticos
Debil seco 10x x 10x = l00x
Fuerte seco 40x x 10x = 400x
Aceite de inmersión 100x x 10x = 1000x

Microscopios electrónicos
Transmisión (MET) ~200000x
Barrido (MEB) ~10000x
 Figura 3.6 El camino de la luz en el microscopio compuesto. La luente de luz está en la
base. El condensador enfoca el haz de luz sobre el espécimen, donde parte se absorbe, parte
se refracta, y parte se transmite. La luz transmitida penetra en la lente objetivo, que
aumenta la imagen. El prisma hace que la imagen se forme en el tubo del microscopio,
haciendo la visión más cómoda. La lente ocular vuelve a aumentar la imagen y la enfoca en
el ojo.

3.1.4 Preparaciones en fresco

La forma más simple de preparar un espécimen para su examen microscópico es hacer una
preparación en fresco. Existen dos técnicas, una preparación en fresco simple ("entre
porta y cubre") consiste en colocar una gota de líquido con los microorganismos sobre un
portaobjetos y a continuación cubrirla con un cubreobjetos. Una preparación en gota
pendiente se realiza colocando una gota del material en un cubreobjetos y cubriéndolo con
un portaobjetos (invertido) con una excavación central (portaobjetos excavado) (Figura
3.8). Hay que sellar la preparación con vaselina alrededor de la excavación. La ventaja de
esta última técnica, es que la preparación no se seca y puede ser observada durante un
tiempo más largo.

Las preparaciones en fresco se utilizan para observar microorganismos vivos. Por ejemplo,
para la búsqueda de Trichomonas vaginalis en secreciones vaginales. Este protozoo de gran
movilidad causa inflamación de la vagina y la uretra. Si en la preparación se observan
células en forma de huso que se mueven mediante contracciones o sacudidas cruzando el
campo, probablemente se tratará de T. vaginalis, pudiéndose efectuar el diagnóstico.

Sin embargo, el inconveniente de la observación en fresco es que no permite aumentar el

contraste de la preparación. Por tanto, su uso, con un microscopio óptico de campo claro,
está bastante limitado. Normalmente, para observar microorganismos vivos se utiliza
alguno de los otros microscopios ópticos que hemos mencionado anteriormente.

Figura 3.7 El microscopio compuesto tiene tres lentes objetivos (tres sistemas de lentes).
Se muestra el mismo campo de Bacillus subtilis visto con el objetivo débil seco (100x),
fuerte seco (400x), y con el de inmersión (l000x). Los aumentos mayores revelan
progresivamente más detalle de una porción de campo menor.
 Figura 3.8 Preparación en gota pendiente. Esta preparación se realiza colocando una gota
de la suspensión bacteriana en un cubreobjetos en el cual se ha hecho previamente un
círculo con vaselina o parafina (a). La vaselina actúa como sellador. (b) Sobre el
cubreobjetos se coloca un portaobjetos con una excavación central que queda adherido
gracias a la vaselina (c). Se invierte la preparación y se observa colocándola en la platina
del microscopio (d). Las preparaciones en gota pendiente se utilizan para observar
microorganismos vivos.

3.1.5 Tinciones

El microscopio de campo claro es más útil para la observación de especímenes teñidos. Los
colorantes son compuestos químicos utilizados para aumentar el contraste. Existen algunos,
llamados colorantes vitales, que pueden añadirse directamente a una preparación en fresco;
por tanto, colorean células vivas. No obstante, la mayoría de los colorantes son solamente
efectivos después de que los microorganismos hayan sido fijados, es decir, se encuentren
muertos y adheridos al portaobjetos. Para la fijación por calor, se realiza una fina
extensión de una gota de muestra líquida sobre un portaobjetos y se deja secar al aire; a
continuación, se pasa la preparación de Forma rápida sobre la llama de un mechero. El
calor de la llama mata las células microbianas por desnaturalización de sus proteínas. Las
proteínas coaguladas unen las células al porta. Cuando se desea fijar especimenes delicados
se utiliza la fijación química, va que es menos lesiva que el calor. Para ello se añade una
gota del fijador, por ejemplo, ácido ósmico, formaldehído, o glutaraldehído, sobre la
muestra líquida con los microorganismos.

La fijación posee algunos inconvenientes. Por ejemplo, a menudo distorsiona la apariencia

real de las células, lo cual dificulta la identificación; además, no permite la observación del
movímiento de los microorganismos. Después de la fijación, se añade el colorante, que
debe permanecer el tiempo suficiente en contacto con el espécimen, para que pueda ser
absorbido. A continuación, se retira el exceso de colorante, normalmente lavando con agua.

Tipos de colorantes Casi todos los colorantes son sales, compuestos formados por iones
cargados. Los colorantes básicos son aquellos en los cuales el agente que tiñe es el ion
cargado positivamente, mientras que en los ácidos, el colorante es el ion cargado
negativamente. Los colorantes más utilizados son los de tipo básico, va que la mayor parte
de las células microbianas Poseen cargas débilmente negativas en su superficie, lo cual
facilita su unión. Entre los colorantes básicos más comunes se encuentran la safranina, la
fucsina básica, el cristal violeta y el azul de metileno. Los colorantes ácidos se unen a las
partes de las células cargadas positivamente. Se utilizan para teñir tejidos animales
infectados con microorganismos. Entre los más frecuentes están la eosina, la fucsina ácida
y el rojo Congo.

TABLA 3.2 Técnicas de tinción para bacterias

Tinción Uso Técnicas
Tinciones Un colorante; proporciona Se tine con un colorante básico
simples contraste para observar mejor un (azul de metileno, cristal violeta, o
organismo completo fucsina básica) durante unos 5
minutos. Aclarar brevemente con
agua. Se tiñen casi todas las
bacterias; la rnayoría de los tejidos
no se tiñen.
Tínciones
diferenciales
Tinción de Dos o más colorantes; distingue Se cubre la preparación de bacterias
Gram entre bacterias Gram positivas y fijadas con cristal violeta y después
Gram negativas con una solución de iodo
(mordiente). Todas las células
quedan tenidas de color violeta
oscuro. Se decolora con acetona al
95%.

Las células Gram positivas

permanecen tenidas, pero las
negativas pierden el colorante. Se
tiñe con safranina (contraste). El
color violeta de las Gram positivas
 se vuelve más oscuro y las Gram
negativas se tiñen de rosa.
Tinción de Dos colorantes; distingue entre las Se tiñen las células con fucsina
ácido-alcohol micobacterias (ácido-alcohol básica y se calienta a emisión de
resistencia resistentes) y el resto de las vapores durante 5 minutos. Todas
(Ziehl-Neelsen) bacterias las bacterias se tinen de rojo. Se
decolora brevemente con una
mezcla de alcohol-HCl. Las
bacterias resistentes permanecen
teñidas de rojo; todas las demás se
decoloran. Se trata con el colorante
de contraste azul de metileno. Las
bacterias ácido-alcohol resistentes
continúan tenidas de rojo, las otras
se tiñen de azul.
Tinciones
especificas
Tinción de Tiñe selectivamente las endosporas Se cubre la preparación con verde
esporas de de malaquita y se calienta a emisión
Wirtz-Cortitlin de vapores durante 60 segundos. Se
lava con agua durante 30 segundos
y se tiñe con safranina. Las
endosporas retienen el color verde;
el resto de la célula toma el color
rosa.
Tinción de Permite observar los flagelos A las células previamente fijadas, se
flagelos de le añade una mezcla de ácido tánico
Leifson (mordiente) y del colorante
rosanilina. El mordiente engruesa
los flagelos y el colorante los fine.
Tinción Revela la presencia de cápsulas Se utiliza tinta china o nigrosina
negativa para tenir una preparación en fresco
del espécimen. Las particulas de
colorante no pueden penetrar en la
cápsula, que se observa como una
región clara alrededor de la célula.