INTRODUCCIÓN

La espectrofotometría comprende una serie de técnicas analíticas usadas para

análisis cualitativa y cuantitativo.

Un método espectrofotométrico está basado en la medida directa de la

absorción de radiación electromagnética por parte de una muestra,
cuantificable a través de la Absorbancia, y la correlación de esta variable con la
concentración de la especie de interés en dicha muestra.

Desde hace muchos años se ha usado el color como ayuda para reconocer las
sustancias químicas; al reemplazar el ojo humano por otros detectores de
radiación se puede estudiar la absorción de sustancias, no solamente en la
zona del espectro visible, sino también en ultravioleta e infrarrojo.

Se denomina espectrofotometría a la medición de la cantidad de energía

radiante que absorbe un sistema químico en función de la longitud de onda de
la radiación, y a las mediciones a una determinada longitud de onda.

La teoría ondulatoria de la luz propone la idea de que un haz de luz es un flujo

de cuantos de energía llamados fotones; la luz de una cierta longitud de onda
está asociada con los fotones, cada uno de los cuales posee una cantidad
definida de energía.

El Hierro (símbolo químico: Fe, del latín Ferrum) es un elemento metálico. Se lo

puede encontrar en la naturaleza presentando dos estados de oxidación que
son, 2+ (ferroso) y 3+ (férrico).

I. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
  Determinar la cantidad de hierro en una tableta vitamínica por el
método espectrofotométrico.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
 Aprender el manejo, funcionamiento y cuidados del
espectrofotómetro.
 Elaborar una curva de calibración espectroscópica.
II. FUNDAMENTO TEÓRICO
2.1. ESPECTROFOTOMETRÍA
2.1.1. ESPECTROFOTÓMETRO

Los aparatos de medida de la absorción de la radiación electromagnética

se denominan espectrofotómetros y pueden representarse de forma
s
e
n
c
i
l
la mediante el siguiente esquema (4)

Figura 1. Esquema del espectrofotómetro

(Fuente: Rubinson K.A., J.F. Rubinson-2001)

La luz procedente de la fuente se hace pasar a través del monocromador,

que la desdobla en haces monocromáticos. El colimador tiene una rendija
de ajuste variable, y según su abertura se obtiene luz de una determinada
longitud de onda. La longitud de onda que se desee utilizar se selecciona
variando la posición del monocromador. La luz que sale del colimador se
hace pasar por la solución y luego incide sobre el fototubo, donde se
 detecta. La señal se envía a un registrador, el cual puede ser la escala de
un galvanómetro calibrado (4)

espectrofotómetro, es un instrumento que mide la fracción I/Io de un rayo

de luz incidente de una longitud de onda particular y de intensidad Io que
es transmitida por la muestra. (Aquí, I es la intensidad de la luz
transmitida por la muestra.) El instrumento tiene estos cinco
componentes fundamentales:

1. Una fuente de luz que produce luz con un rango de longitudes de

onda de 375 a 650 nm, aproximadamente.
2. Un monocromador, el cual selecciona una longitud de onda
particular y la envía a la celda de la muestra con una intensidad de
Io.
3. La celda de la muestra, la cual contiene la solución a ser analizada.
4. Un detector que mide la intensidad I, de la luz transmitida, desde la
celda de la muestra. Si la intensidad de la luz incidente es I o y la
muestra absorbe luz, la intensidad de la luz transmitida, I, es menor
que Io.
5. Un medidor que indica la intensidad de la luz transmitida.

2.2. HIERRO O FIERRO

2.2.1. ETIMOLOGÍA: La palabra Hierro proviene del latín Ferrum, la
hematita proviene del griego haimatites, sanguíneo, en alusión a su
color. (1)
2.2.2. PROPIEDADES QUÍMICAS

Químicamente, el hierro es un metal activo. Desplaza al hidrógeno de la

mayoría de los ácidos diluidos. Expuesto al aire húmedo, se corroe
lentamente, formando un óxido férrico hidratado de color marrón rojizo y
textura porosa, usualmente conocido como hollín (1)

2.2.3. APLICACIONES Y PRODUCCIÓN

El hierro tiene su gran aplicación para formar los productos siderúrgicos,

utilizando este como elemento matriz para alojar otros elementos aleantes
 tanto metálicos como no metálicos, que confieren distintas propiedades al
material.

Algunos compuestos de hierro son empleados para propósitos

medicinales en el tratamiento de la anemia, cuando la cantidad de
hemoglobina o el número de los glóbulos rojos de la sangre disminuye. El
hierro se usa también en la preparación de tónicos. Forma compuestos
ferrosos en los que actúa con valencia +2 y férricos en los que tiene
valencia +3. Los compuestos ferrosos se oxidan fácilmente a férricos. El
más importante compuesto ferroso es el sulfato ferroso (FeSO 4), llamado
vitriolo verde; normalmente se presenta en cristales de color verde pálido
hidratados con siete moléculas de agua y se usa como medicina en
tónicos (1)

hierro(II) reaccionar con un compuesto orgánico (o-fenantrolina) para

formar un complejo de hierro rojo-naranja. Note en su estructura que o-
fenantrolina tiene dos pares de electrones desapareados que se pueden
usar en formar enlaces covalentes coordinados. La ecuación para la
formación del complejo de hierro es

3𝐶12 𝐻8 𝑁2 + 𝐹𝑒 2+ → [(
⏟𝐶12 𝐻8 𝑁2 )𝐹𝑒]2+
𝑟𝑜𝑗𝑜 𝑛𝑎𝑟𝑎𝑛𝑗𝑎

2.3. HIERRO ORAL

2.3.1. COMPUESTOS SOLUBLES EN AGUA

Los compuestos de hierro solubles en agua incluyen el sulfato. Su

solubilidad es instantánea en el estómago. La absorción puede variar de
aproximadamente un 1% a quizás un 50%, según el estado nutricional de
hierro del individuo, la presencia de promotores e inhibidores de absorción
del hierro en la comida y el contenido de hierro de la comida (3)

2.3.2. SULFATO FERROSO

El hierro se absorbe en el duodeno y yeyuno superior; la absorción es
mayor (20% a 30%) en personas con concentraciones bajas de hierro que
en personas con valores normales (10%). Los alimentos y aclorhidria
disminuyen la absorción de hierro. Elevada unión a proteínas plasmáticas.
Se distribuye y almacena principalmente en tejido hepático (90%). Se
metaboliza en el hígado. Su t1/2 es aproximadamente 6 h. Eliminación por
vía biliar. La cantidad que exceda a la necesidad diaria se excreta en la
orina, principalmente sin metabolizar (3)

TABLA 1. Contenido de hierro en una tableta de sulfato ferroso

1 tableta de sulfato ferroso Hierro en 1 tableta de sulfato ferroso

sulfato ferroso 30mg 110.3392 mg/ 300mg de sulfato
ferroso

(Fuente: laboratorios naturales y genéricos)

Figura 2. Pastillas de sulfato ferroso

 (Fuente: laboratorios naturales y genéricos)

III. PARTE EXPERIMENTAL

3.1. MATERIALES EQUIPOS Y REACTIVOS

1. Materiales
 01 Vaso precipitado, 100 ml.
 01 bureta, 25 ml.
 02 Piseta.
 01 Pipetas de vidrio, 10ml.
 02 Pipetas de vidrio, 5 ml.
 01 Papel filtro.
 01 Espátula.
 01 Probeta, 100ml.
 03 Fiolas, 100 ml.
 07 Fiolas, 50 ml.
 01 Fiola, 250 ml.
2. Equipos
 01 espectrofotómetro - JENWAY serie 6400.
 1 pH metro 370 - JENWAY.
 01 Agitador magnético
 01 Balanza analítica
 02 Soporte universal
3. Reactivos
 Solución de Hidroquinona.
 Solución de Citrato sódico.
 Solución de orto Fenantrolina.
 Solución de patrón de hierro.
 Solución de ácido clorhídrico, 6M.
3.2. ENSAYOS
1) PREPARACIÓN DE SOLUCIÓNES

El Fe (II) forma un complejo de color rojo intenso con o-fenantrolina a

pH. Equivalente, a 3.5, que se logra mediante la adición de citrato
sódico. La disolución de la muestra se realiza con HCl, y de reduce el
hierro oxidado a Fe (II) con hidroquinona.

a) Hidroquinona: solución acuosa recién preparada que contiene

10 g/L. se almacena en recipiente de color ámbar.
b) Citrato sódico 25 g/L en agua
c) o – fenantrolina: se disuelve 0.625 g en 25 mL. de etanol y se
enraza a 250 ml con agua. Se conserva en frasco de color
ámbar.
d) Patrón de hierro: disolver en agua 0.0703 g de sulfato ferroso
amoniacal hexahidratado, agregar 0.25 ml de ácido sulfúrico
concentrado y aforar a 250 ml con agua.
e) Solución de HCl 6M
2) PREPARACIÓN DE MUESTRA
 En un matraz de 125 mL se coloca la muestra previamente
molida y se lleva a ebullición con 25 ml de HCl 6 M por 10-15
minutos.
 La solución se enfría y se filtra directamente a una Fiola de
100mL. transferir la muestra cuantitativamente hacia la Fiola,
enjuagando varias veces el matraz y el filtro. Enrazar y
homogenizar completamente.
 Diluir 5ml de esta solución a 100mL.
 Con una pipeta se transfiere 2 ml de muestra a una Fiola de
50ml, se agrega la cantidad necesaria de citrato sódico, 2ml de
hidroquinona y 3 ml de o-fenantrolina, se enraza y homogeniza
3) PREPARACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN
 Con una pipeta transferir 10ml de solución patrón de hierro a un
vaso de 50 ml y medir el pH. Agregar citrato sódico gota a gota
hasta conseguir un pH equivalente a 3.5 (se cuentan las gotas,
que debe ser aproximadamente 30)
  Con una pipeta se transfiere nuevamente 2 ml de solución
patrón a una Fiola de 50 ml y se añade el número de gotas
requeridas de la solución de citrato, en forma proporcional al
volumen de solución estándar medido. Se agregan 2 ml de
hidroquinona y 3 ml de o-fenantrolina, se enraza con agua y se
homogeniza completamente.
 Se prepara otras 3 soluciones con 1.5; 1.0 y 0.5 mL de solución
patrón de hierro y otra solución blanco (sin Fe) en Fiolas de 50
ml, se agrega citrato sódico en forma proporcional de acuerdo al
volumen de solución patrón. Las soluciones de hidroquinona, o-
fenantrolina se agregan a cada Fiola en los mismos volúmenes
que en el paso anterior; finalmente se enrazan con agua
destilada.
 Dejar que las soluciones reposen por lo menos 10 minutos, a fin
de desarrollar el color. Entonces se mide la absorbancia de las
soluciones a 508 nm. Se utiliza como blanco 3 mL de 0-
fenantrolina y 2mL de hidroquinona.
 Determinar la cantidad de citrato sódico requerida para llevar 10
ml de la muestra problema a pH= 3.5 (aproximadamente 3.5 ml)

IV. RESULTADOS
1) PREPARACIÓN DE SOLUCIÓNES
a) HIDROQUINONA
 Preparamos los gramos solo para 25 mL
10𝑔 → 1000𝑚𝐿
𝑋 → 25 𝑚𝐿
10 𝑔 𝑥 25 𝑚𝐿
= 𝟎. 𝟐𝟓𝒈/𝟐𝟓 𝒎𝑳
1000 𝑚𝐿

b) CITRATO SÓDICO
 Preparamos los gramos solo para 50 ml
25𝑔 → 1000𝑚𝐿
𝑋 → 50 𝑚𝐿
 25 𝑔 𝑥 50 𝑚𝐿
= 𝟏. 𝟐𝟓𝒈/𝟓𝟎 𝒎𝑳
1000 𝑚𝐿

c) O – FENANTROLINA
 Preparamos los gramos solo en 25mL
0.625𝑔 → 250𝑚𝐿
𝑋 → 25 𝑚𝐿
0.625 𝑔 𝑥 25 𝑚𝐿
= 𝟎. 𝟎𝟔𝟐𝟓𝒈/𝟐𝟓 𝒎𝑳
250 𝑚𝐿

d) Patrón de hierro:
 disolvemos en agua 0.0703 g de sulfato ferroso amoniacal
hexahidratado, agregamos 0.25 ml de ácido sulfúrico concentrado y
aforamos a 250 ml con agua.

2) PREPARACIÓN DE MUESTRA
 Pesar 0.3003 gr pastilla sulfato ferroso ( promedio pastilla =0.5008
g)
 Añadir 25 ml de HCl , 6M ; luego hervir de 10 a 15 minutos.
 Enfríanos la solución y filtramos directamente a una Fiola de
100mL. Enrazamos y homogenizamos completamente.
 Diluimos 5ml de esta solución a 100mL.
 Con una pipeta transferimos 10mL de solución de la muestra a un
vaso de 50 ml y medimos el pH. Para saber la cantidad de citrato
sódico se va agregar para alcanzar un pH de 3.5

Nro. de gotas = 67 gotas de citrato sódico

10𝑚𝐿 → 67 𝑔𝑜𝑡𝑎𝑠
 2𝑚𝐿 → 𝑋

𝑋 = 13.4 𝑔𝑜𝑡𝑎𝑠

 Con una pipeta transferimos 2 ml de muestra a una Fiola de 50ml,

agregamos la cantidad necesaria de citrato sódico que es 13 gotas,
2mL de hidroquinona y 3 mL de o-fenantrolina, enrazamos con agua

destilada a 50 mL y homogenizamos.

Figura 4. Muestra preparada

3) PREPARACIÓN DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN

 Con una pipeta transferimos nuevamente 2 ml de solución patrón a
una Fiola de 50 ml y añadimos 4 gotas de citrato sódico que es el
número de gotas requeridas, agregamos 2 ml de hidroquinona y 3 ml
de o-fenantrolina, enrazamos con agua y homogenizamos
completamente.
 preparamos otras 3 soluciones con 1.5; 1.0 y 0.5 mL de solución
patrón de hierro, agregamos citrato sódico en forma proporcional de
acuerdo al volumen de solución patrón; finalmente se enrazamos con
agua destilada.
TABLA 5. Preparación de la curva estándar

𝐹𝑒 3+ + 𝐻𝑄 → 𝐹𝑒 2+

𝐹𝑒 2+ + 3𝐶12 𝐻8 𝑁2 → [(𝐶12 𝐻8 𝑁2 )𝐹𝑒]2+

⏟
𝑐𝑜𝑚𝑝𝑙𝑒𝑗𝑜 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑟𝑒𝑎𝑑𝑜 (𝑟𝑜𝑗𝑜−𝑛𝑎𝑟𝑎𝑛𝑗𝑎)

A4 A3 A2 A1

4 gotas de 3 gotas de 2 gotas de 1 gotas de

citrato sódico citrato sódico citrato sódico citrato sódico
2 ml de 2 ml de 2 ml de 2 ml de
hidroquinona hidroquinona hidroquinona hidroquinona
3 ml de o- 3 ml de o- 3 ml de o- 3 ml de o-
fenantrolina fenantrolina fenantrolina fenantrolina

 Preparamos solución blanco (sin Fe) con 3 mL de 0-fenantrolina y 2mL

de hidroquinona en Fiolas de 50 mL.

3 mL de 0-fenantrolina
2 mL de hidroquinona
  Dejamos que las soluciones reposen por lo menos 10 minutos, a fin de
desarrollar el color. Entonces medimos la absorbancia de las soluciones
a 508 nm.

TABLA 4. Absorbancia de las soluciones estándar y la muestra

solución patrón de ʎ (longitud de absorbancia

hierro onda) nm
A1 0.391 508 A4 0.074
A2 0.223 BLANCO 0.000
A3 0.145 MUESTRA 0.272

ELABORACIÓN DE LA CURVA PATRÓN:

0.0703𝑔 𝐹𝑒(𝑁𝐻4 )2 (𝑆𝑂4 )2 . 6𝐻2 𝑂 → 250 𝑚𝐿

250 𝑚𝐿 → 0.25 𝐿

0.0703𝑔 (𝐹𝑒(𝑁𝐻4 )2 (𝑆𝑂4 )2 . 6𝐻2 𝑂) 55.85 𝑔 𝐹𝑒 103 𝑚𝑔

𝐹𝑒 = x 𝑥
0.25 L 392.14 𝑔 𝐹𝑒(𝑁𝐻4 )2 (𝑆𝑂4 )2 . 6𝐻2 𝑂 1g

𝐹𝑒 = 40.0495 𝑚𝑔/𝐿
CONCENTRACIÓN DE LAS DIFERENTES SOLUCIONES PATRÓN

1. Calculando para 0.5 ml de patrón.

𝑪 𝟏 ∗ 𝑽𝟏 = 𝑪 𝟐 ∗ 𝑽𝟐

0.5
𝐶2 = 40.0495𝑚𝑔/𝐿𝑑𝑒 𝐹𝑒 ( ) = 0.4005
50

2. Calculando para 1.0 ml de patrón.

𝑪 𝟏 ∗ 𝑽𝟏 = 𝑪 𝟐 ∗ 𝑽𝟐
 1
𝐶2 = 40.0495𝑚𝑔/𝐿𝑑𝑒 𝐹𝑒 ( ) = 0.801
50

3. Calculando para 1.5 ml de patrón.

𝑪 𝟏 ∗ 𝑽𝟏 = 𝑪 𝟐 ∗ 𝑽𝟐
1.5
𝐶2 = 40.0495 𝑚𝑔/𝐿𝑑𝑒 𝐹𝑒 ( ) = 1.201
50

4. Calculando para 2.0 ml de patrón.

𝑪 𝟏 ∗ 𝑽 𝟏 = 𝑪 𝟐 ∗ 𝑽𝟐
2
𝐶2 = 40.0495𝑚𝑔/𝐿𝑑𝑒 𝐹𝑒 ( ) = 1.602
50

Siendo los datos para graficar

TABLA 5. Datos para graficar

X = C (concentración) Y =A (Absorbancia)
(ppm Fe)
0.0 0.0
5.86 0.391
4.39 0.223
2.93 0.145
1.46 0.074

Graficamos C (ppm Fe) Vs A

 ABSORBANCIA VS CONCENTRACION
0.45

0.4
y = 0.0636x - 0.0195
0.35
R² = 0.9598
0.3 0.272
ABSORBANCIA

0.25

0.2

0.15

0.1

0.05

0
0 1 2 3 4 5 6 7
-0.05
C (CONCENTRACION ) FE (PPM 4.61

Figura 6. Curva de calibración espectrofotométrica para hierro

La concentración es: 4.61 ppm Fe

DETERMINAMOS LA ABSORTIVIDAD MOLAR PROMEDIO

𝐴 =𝑎∗𝑏∗𝐶
A= absortividad
a = absortividad
C= concentración
TABLA 5. Datos para hallar la absortividad

N° C A
1 1.46 0.074
2 2.93 0.145
3 4.39 0.223
4 5.86 0.391
 0.074 𝑚𝑔 1𝑀𝑂𝐿 1𝑔
1) 𝑎 = = 0.0507 ∗ ∗ = 0.9078 ∗ 10−6 𝑀𝑂𝐿/𝐿
1 ∗ 1.46 𝐿 55.85𝑔 𝐹𝑒 1000 𝑚𝑔

0.145 𝑚𝑔 1𝑀𝑂𝐿 1𝑔
2) 𝑎 = = 0.0495 ∗ ∗ = 0.8863 ∗ 10−6 𝑀𝑂𝐿/𝐿
1 ∗ 2.93 𝐿 55.85𝑔 𝐹𝑒 1000 𝑚𝑔

0.223 𝑚𝑔 1𝑀𝑂𝐿 1𝑔
3) 𝑎 = = 0.0508 ∗ ∗ = 0.9096 ∗ 10−6 𝑀𝑂𝐿/𝐿
1 ∗ 4.39 𝐿 55.85𝑔 𝐹𝑒 1000 𝑚𝑔

0.391 𝑚𝑔 1𝑀𝑂𝐿 1𝑔
4) 𝑎 = = 0.0667 ∗ ∗ = 1.1943 ∗ 10−6 𝑀𝑂𝐿/𝐿
1 ∗ 5.86 𝐿 55.85𝑔 𝐹𝑒 1000 𝑚𝑔

Promedio :

La absortividad molar promedio es: 0.9495 *10-6 MOL/L

CALCULAMOS LA CANTIDAD DE HIERRO EN LA MUESTRA EXPRESADO

EN mg Y %(P)

La cantidad de Fe en mg en los 100 mL. de solución original es:

𝑚𝑔
𝑚𝐹𝑒 = 4610 ∗ 0.1𝐿 = 461𝑚𝑔/𝑡𝑎𝑏𝑙𝑒𝑡𝑎
𝐿
461𝑚𝑔 → 0.461𝑔

0.461𝑔 𝐹𝑒
%(𝑃)𝐹𝑒 = ∗ 100
0.5008 𝑔

%(𝑃) 𝐹𝑒 = 92.05%

V. DISCUSIONES

 Con el método espectrofotométrico siguiendo la metodología de la

guía de practica determinamos la cantidad de hierro en la tableta
de sulfato ferroso; lo cual, según laboratorios naturales y genéricos
S.A.C una tableta de sulfato ferroso tiene 300 mg, entonces la
cantidad de hierro es de 110.3392 mg/tableta de sulfato ferroso, en
 la práctica resulto 461.0 mg de Fe /tableta de sulfato ferroso,
comparando con la teoría hay una diferencia, esto se dio por los
errores que cometimos al preparar las soluciones para la curva de
calibración, descartamos la solución que contenía 2 ml de patrón
de hierro, porque la absorbancia no es coherente con las
absorbancias de las demás soluciones del patrón de hierro.

VI. CONCLUSIÓN
 Determinamos la cantidad de hierro en una tableta de sulfato
ferroso por el método espectrofotométrico, que resulto 461.0 mg
de Fe/tableta de sulfato ferroso, la teoría nos indica 110.3392 mg
de Fe /tableta de sulfato ferroso, entonces podemos decir que la
tableta de sulfato ferroso si cumple con lo mencionado en su
composición según laboratorios naturales y genéricos.
 Aprendemos el manejo, funcionamiento y cuidados del
espectrofotómetro.
 Elaboramos una curva de calibración espectroscópica para la
determinar la concentración del Fe, lo cual resulto 4.61 ppm de
Fe, se observa en la figura 7

VII. RECOMENDACIONES

 Se debe realizar las practicas con cuidado para no cometer errores.

 Se debe utilizar los materiales adecuadamente.
 Se debe manipular adecuadamente los equipos para no maltratarlos.

VIII. BIBLIOGRAFÍA
1. Delgado A. Terapia parenteral. Revista Latinoamericana de
Farmacología. 2004; p. 27-30.
2. Laboratorios naturales y genéricos S.A.C.
3. Ministerio de salud- dirección general de medicamentos, insumos y
drogas, centro de atención farmacéutica (CAF DIGEMID) – Perú
4. Rubinson K.A., J.F. Rubinson-2001- Análisis Instrumental, K.A.
Rubinson, J.F. Rubinson. Prentice Hall, Pearson Education S.A.