DETERMINACION DEL GRUPO SANGUINEO

REACCION ANTIGENO-ANTICUERPO

1. INTRODUCCION
La membrana celular de los glóbulos rojos contiene en su superficie diferentes
proteínas, las cuales son las responsables de los diferentes tipos de sangre.
Existen principalmente dos tipos de proteínas que determinan el tipo de sangre,
la proteína A y la B.
2. OBJETIVO
 Comprender el concepto de grupo sanguíneo y conocer los tipos
sanguíneos más importantes.
 Conocer las reacciones antígeno-anticuerpo (reactivo y suero
 Determinar el grupo sanguíneo ABO.

3. FUNDAMENTO TEORICO

Los grupos sanguíneos son glucolípidos y proteínas que forman parte de la

membrana del hematíe y se diferencian por su diferente capacidad antigénica.
Las glucoproteínas están unidas a diferentes azúcares que les da la
especificidad de grupo. (A, B, O). Los antígenos crean reacciones antígeno-
anticuerpo que desencadenan una reacción de inmunidad tipo I. A parte del
sistema ABO y el sistema Rh, existen otros sistemas menos importantes
algunos relacionados con el sistema ABO como los sistemas LEWIS y Li, y
otros independientes del sistema ABO como el sistema Duffy

3.1 TIPOS Y GRUPOS DE SANGRE

Según las diferentes combinaciones de las proteínas de la superficie de los glóbulos

rojos dan como resultado los 4 grupos sanguíneos existentes:

Grupo A: Tiene proteína A en la superficie del glóbulo rojo.

Grupo B: Tiene proteína B en la superficie del glóbulo rojo.

Grupo AB: Tiene ambas proteínas A y B.

Grupo O: No tiene ninguna (A o B) en la superficie del glóbulo rojo. El Rh es otra

proteína que si está presente en la superficie del glóbulo rojo será Rh positivo y si está
ausente, es Rh negativo. De esta forma una persona debe de tener un grupo
sanguíneo formado por la proteína A, B ó las dos y además será Rh positivo o
negativo.
MATERIALES Y REACTIVO

EQUIPOS
 Centrifuga
 Microscopio

MATERIALES

 Tubos de ensayo
 Lamina de escoba
 Pipeta Pasteur
 Sueros reactivos A, B,O
 Muestra sanguínea
 Gradilla
 Solución salina
4. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

a) Preparar una suspensión Glob. Roj. en estudio al 5% en solución salina

al 0.9% Colocar una qota de Anti A en un tubo limpio y rotulado. "A"
b) Colocar una cota de Anti B en un tubo limpio y rotulado. "B" 4 Colocar
una gota de Anti-O en un tubo limpio y rotulado "O"
c) Agregar una gota de la suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio, a
cada tubo. Mezcla con suavidad y centrifuga de acuerdo con las
instrucciones por 15 seg a 3,400 rpm 6 ó por 1 min. él 1,000 rpm.
d) Resuspender con suavidad las células y/Examinar macroscópicamente
en busca de aglutinación.

5. CONCLUSIONES
Para determinar a que grupo sanguíneo pertenece nuestra muestra problema
tenemos que tener sueros ya reconocidos
De esa manera nos será más sencillo.
La reacción puede demorar hasta 3 minutos(esperar) no en todos los casos.

6. RECOMENDACIONES
 Tener los tubos limpios
 Rotular para no confundirse de muestra, ni dar resultados erróneos
 Repetir la prueba en caso de dudas para un resultado correcto
7. BIBLIOGRAFIA
 Practica desrrollada en clase
 http://wiki.fisiologia.me/images/8/8c/Practic8.pdf
 http://www.kardiagnostx.com/documentos/Hemato_35.pdf
8. ANEXOS
 INFORME

CONTROL COOMBS (SENCIBILIZADOR)

OBJETIVO:

I. IMPORTANCIA:
El control Coombs se utiliza en el laboratorio para comprobar la validez de
los tests negativos (Coombs) de antiglobulina demostrando la actividad
antigamma de la globulina antihumana utilizada en el test. Su preparación
consiste en la sensibilización de hematíes del grupo O D(Rho) positivo con
suero anti-D(Rho) capaz de producir aglutinación en albúmina. Se añade
una cantidad suficiente de anti-D(Rho) para recubrir las células, pero no
aglutinarlas. Cuando la globulina antihumana de un test de antiglobulina no
aglutina las células del test (reacción negativa), ésta permanece en el tubo
de ensayo en un estado activo. Cuando se agregan al tubo de ensayo los
hematíes recubiertos con el control Coombs de ORTHO, la aglutinación
resultante indica la presencia y la actividad de la globulina antihumana.

II. MATERIALES:
 Micropipetas Pipetas
 Puntas
 Tubos de ensayo
 Centrifuga
 Gradilla
 Pipeta pasteur

MUESTRA
sangre anticuagulada
reactivo D

III. PROCEDIMIENTOS
1. Preparan una solusion de glóbulos rojos al 5 % lavados
2. Agregar reactivo anti D 1/12 V/V y tapar con párrafil
3. Incubar a 37° por 1 hora, agitar cada 15 minutos
4. Lavar con solución salina 4 veces
5. Rotular otro tubo, agregar 2 gotas de reactivo anti GH ( anti globulina
Humana ) y una gota de suspensión al 5% de glóbulo rojo.
6. Luego del lavado de glóbulos rojos, con lo que se ha preparado anti D, 1
gota de anti D y 11 gotas de solución salina
el resultado del lavado de glóbulo rojos se echará la misma cantidad de
solución anti D , incubar 15 minutos y agitar y volverlo a incubar 15
minutos por 1 hora
IV. RESULTADOS PRESENCIA de aglutinación
 INFORME

TEST DE COOMBS DIRECTO CUALITATIVO

OBJETIVO
 Determinar la presencia de AC adherido a membrana del hematíe
 Introducción a la aglutinación in vitro de hematíes sensibilizado ante la
procedencia de reactivo

I. FUNDAMENTO
Los métodos usualmente empleados en el laboratorio de
inmunohematología evidencian la reacción entre un anticuerpo y su
antígeno correspondiente a través de la aglutinación con el empleo de
reactivos que pueden agruparse en cuatro grupos básicos:
 células rojas reactivas
 antisueros que contienen anticuerpos dirigidos a antígenos
específicos,
 suero de antiglobulina humana (AGH) –que detectan
inmunoglobulinas
 complemento anticuerpos

1,2 Dentro del primer grupo, las células rojas reactivas son utilizadas
ampliamente con diferentes propósitos: corroborar grupo sanguíneo
celular mediante la determinación del grupo sanguíneo serológico del
sistema ABO, detectar e identificar anticuerpos atípicos diferentes a los
del sistema ABO (células de pesquisa y de panel celular), para el control
de calidad de reactivos y ensayos de laboratorio utilizados de manera
rutinaria en los bancos de sangre

Ayuda diagnostico de la:

 Enfermedad hemolítica del recién nacido
 Anemia hemolítica autoinmune
  Anemia hemolítica y sensibilización inducida por drogas
 Investigaciones de reacciones transfuncionales

I. REACTIVO
 CCC
 Glóbulos rojos O RH (+) lavados, al 5%
 Anti D 1/16(1 gota de anti D + 15 gotas de solución salina)
 Antiglobulina humana IgG-C3d o suero de coombs de poli especifico

II. MATERIALES
 Centrifuga
 Tubos de hemolisis,10 ò 12 x 75 mm
 Parafilm
 Pipetas de pasteur
 Papel de filtro
 Gradillas para tubos

MUESTRA
Suspensión glóbulos rojos del paciente lavados, al 5%

III. PROCEDIMIENTO
1. Suspensión al 5% de glóbulos rojos en estudio en solución salina al 0.9%
lavados 4 veces
2. Agregar una gota de suero de coombs poliespecifica
3. Mezclar con suavidad y centrifuga por 15 segundos a 3400 RPM o 1 min a
1000 RPM
4. Leer e interpretar los resultados

IV. RESULTADOS E INTREPRETACION

La muestra del paciente “X” salió con Rh (+) en la prueba de coombs
directo como se muestra en la imagen los GR reaccionaron (aglutinando)
con el antiglobulina humana
Coombs directo positivo
 INFORME

PRUEBA DE ANTIGLOBULINA O COOMBS INDIRECTA (PAI)

OBJETIVO

Detecta los anticuerpos o los componentes del complemento fijados en vitro a los
hematíes del paciente durante un tiempo de incubación en el laboratorio

I. FUNDAMENTO
Investigación de anticuerpos pruebas cruzadas de compatibilidad fenotipos
eritrocitarios
El factor Du es una variante del factor D que tiene gran importancia en las
pruebas de laboratorio porque es antigénica y es importante para saber si es
compatible en las transfusiones de sangre,transplante y embarazos de tal
manera que no aya problema en el organismo de la persona
La prueba indirecta busca anticuerpos contra los glóbulos rojos que fluyen
libremente en el suero sanguíneo, que corresponde al líquido claro y amarillento
que queda después de remover los glóbulos rojos y los materiales coagulantes.
Esta prueba de Coombs indirecta sólo se usa rara vez para diagnosticar una
afección y, con más frecuencia, se utiliza para determinar si una persona podría
tener o no una reacción a una transfusión de sangre. Valores normales La
ausencia de aglutinación (falta de agrupación de células) es lo normal.
Significado de los resultados anormales Una prueba de Coombs directa anormal
(positiva) significa que la persona tiene anticuerpos que actúan contra sus
glóbulos rojos, lo cual puede deberse a:

 Anemia hemolítica autoinmunitaria sin otra causa subyacente Anemia

hemolítica inducida por medicamentos (muchos medicamentos han sido
asociados con esta complicación)
 Eritroblastosis fetal (enfermedad hemolítica del recién nacido)
 Mononucleosis infecciosa Infección por micoplasma Sífilis Leucemia
linfocítica crónica u otro trastorno linfoproliferativo
 Lupus eritematoso sistémico u otra afección reumatológica Reacción a
transfusión como la ocasionada por unidades de sangre de compatibilidad
impropia

II. REACTIVOS
 Albúmina bovina al 22%
 CCC
 Glóbulos rojos “ O” Rh (+) lavados al 5%
 Anti-D
 Albúmina
 MUESTRA: Rh(+- o Rh(-) o Rh(+) débil (variante DU)
III. PROCEDIMIENTO
1. Hacer suspensión de GR 5% del paciente 1 gota de glóbulo rojo y 10
gotas de solución fisiológica
2. Rotular los tubos, agregar 1 gota anti D y mezclar , agregamos 1 gota de
albúmina
3. Agregar a cada tubo 1 gota de la suspensión de GR del paciente y
centrifuga 1000 RPM x 1 minuto
4. Lectura aglutina 3-4 + = Rh (+)
No aglutina o aglutina débil =continuar con el titulo anti D

IV. INTREPRETACION
D C INTREPRETACION
+ - Rh positivo debil
- - Rh negativo
+ + Prueba no valida

INFORME

PRUEBA DE COMPATIBILIDAD PRUEBA CRUZADA MAYOR

I. FUNDAMENTO
La prueba de compatibilidad es un procedimiento de laboratorio que
permite conocer si existe compatibilidad serología entre la sangre del
donante y el receptor la incompatibilidad se evidencia como aglutinación
y/o hemolisis
Significa que existe presencia de hemolisis glóbulos rojos transfundidos

II. MATERIALES
 Centrifuga
 Tubos de ensayo 10 x 75 mm
 Parafilm
 Pipestas pasteur
 Papel de filtro
 gradillas
REACTIVOS
 Solución fisiológica 0.9% (p/v)
 Suero del paciente
 Albumina bovina al 22-30 %
 Antiglobulina humana poli especifica

III. PROCEDIMIENTOS
PRIMERA FASE
1) Preparar glóbulos rojos del donante al 5 %
 2) Rotular 2 tubos (I.II)
3) Disponer 1 gota de glóbulos rojos del donador al tubo
4) Agregar 2 gotas del suero del paciente (receptor)
5) Mezclar suavemente y centrifugar 1000 RPM por minuto
6) Leer el resultado

 Si hay aglutinación no se procede

 Si no hay aglutinación continuamos con el siguiente paso

SEGUNDA FASE

7. Agregar 2 gotas de albumina de bovina , mezclar e incubar a 37°C

durante 15 a 30 minutos

8. Centrifugar 3500 RPM durante 15 segundos observar el sobrenadante

para evidenciar hemolisis, desprender suavemente el botón de células
del fondo del tubo y anotar los resultados,tubo en mano

TERCERA FASE
9. Lavar los hematíes 3-4 veces con solución salina, en el último lavado
invertir el tubo sobre papel filtro hasta la obtención de un “botón seco”
10. Agregar 2 gotas del reactivo poli especifico , mezclar y centrifugar a
3500 RPM durante 15 segundos
 Examinar si hay aglutinación anotar
11. Agregar una gota de células de control coombs, si la prueba es negativa
Centrifugar leer y anotar los resultados, esta prueba debe ser positiva ,
de lo contrario los resultados no son válidos y el procedimiento debe
repetirse

IV. INTREPRETACION

Se considera que existe compatibilidad si no se visualiza hemolisis o

aglutinación durante todo el procedimiento de la prueba ( I,II,III)
 Hemolisis o aglutinación en cualquier paso = incompatible
 Aglutinación en la primera centrifugación = incompatibilidad igM
 Aglutinación en segunda centrifugación = incompatibilidad por igG
 INFORME
COMPATIBILIDAD DE PRUEBA CRUZADA MENOR
OBJETIVO
Es el procedimiento inverso de la prueba cruzada mayor , en donde la células
del receptor se ponen en contacto con el suero plasma del donante

I. FUNDAMENTO

En esta prueba cruzada el suero del donante se pone a reaccionar con

hematíes del paciente. Es poco empleada. Esta prueba puede poner de
manifiesto la presencia de Ac del donante contra Ag de baja frecuencia.

II. REACTIVOS
 Solución salina fisiológica : cloruro de sodio al 0,85 o 1,9 % (p/v)
 Albumina bovina al 22-30%
 Antiglobulina humana

III. MATERIALES
 Centrifuga
 Aglutinoscopio
 Tubos de ensayo 10 x 75 mm
 Parafilm
 Pipetas pasteur
 Papel filtro

IV. PROCEDIMIENTOS

FASE I
 1. Preparar una suspensión de globulos rojos del receptor al 5% en S.F
2. En un tubo de ensayo II gotas del suero del donante
3. Agregar 1 gota de la suspensión de hematies al 5 %del receptor,mezclar
centrigar
4. Observar el sobrenadante para detectar hemolisis .desprender suavemente el
botón de células del fondo del tubo para observar si hay aglutinación . anotar
los resultados tubo en mano
 Observar si hay hemolisis desprendemos suavemente el botón celular del
fondo del tubo no hubo aglutinación .seguimos con las fases

FASE II
5. Agregar 2 gotas de albumina de bovina ,mezclar e incubar a 37 C durante 15 a
30 minutos
6. Centrifugar, observar el sobrenadante para evidenciar hemolisis , desprender
suavemente el botón de células del fondo del tubo y anotar los resultados , tubo
en mano

FASE III
7. Lavar 3-4 veces con salina para la prueba de antiglobulina indirecta , en el
ultimo lavado invertir el tubo sobre papel filtro hasta la obtención de un “botón
seco “
8. Agregar II gotas del reactivo poliespicifico,mezclar y centrifugar inmediatamente
examinar si hay aglutinación empleando ayuda visual.anotar los resultados
tubo en mano
9. Agregar una gota de células control de coombs, si la prueba es negativa.
centrifugar y leer resultados . esa prueba debe ser positiva , de lo contrario los
resultados no son validos y el procedimiento completo debe repetirse
10. Agregamos una gota de la CCC si la prueba es negativa

V. INTREPRETACION
Se considera que existe compatibilidad si no se visualiza hemolisis o
aglutinación en ninguno de los pasos de la prueba cruzada
 Hemolisis o aglutinación en cualquier paso =incompatible
 Aglutinación en primera centrifugación = incompatible x igM
 Aglutinación en segunda centrifugación = incompatibilidad x igG

INFORME

DETECCION DE AG SECRETOR

OBJETIVO
Determinar si el paciente tieen el antígeno A o B secretor en la saliva

I. FUNDAMENTO
Se pone en contacto en la saliva con el suero que contiene el anticuerpo
especifico contra el antígeno que se requiere encontrar en la saliva , en
seguida se adiciona hematíes que representan en su superficie el antígeno
estudiado
Si la persona de un grupo B, pone en contacto su saliva , primero con un suero
anti B,posteriormente se adiciona hematies del grupo sanguíneo B .si no
aglutina el paciente tiene Ag B secretor
II. MATERIALES
 Centrifuga
 Baño maria
 Tubos de ensayo
 Gradilla
 Pipeta pasteur
 Reactivos de antígeno (A,B)
 Puntas
 Micropipetas

III. PROCEDIMIENTO
1. en un tubo recoger de 3 a 5 ml de saliva del paciente a investigar el antígeno
secretor
2. calentar la saliva durante 10 minutos en baño maria a temperatura de
ebullición ( para destruir las enzimas salivales )
3. centrifugar la saliva a 3500 rpm durante 5 minutos
4. adicionar en un tubo 1 gota del sobrenadante de la saliva
5. adicionar 1 gota del antisuero capaz de reaccionar con el antígeno que se
pretende detectar (A, B) el antisuero a utilizar depende del grupo sanguíneo
a que pertenece el paciente.
6. Mezclar y incubar a temperatura ambiente durante 10 minutos.
7. Agregar una gota de la suspensión de hematíes al 5%, según el antígeno
que deseamos detectar en la saliva.
8. Mezclar y incubar a temperatura ambiente durante 5 minutos
9. Centrifugara 3500 rpm durante 15 segundos
 La presencia de aglutinación es considerada negativo y la ausencia de
aglutinación indica positivo
 El resultado positivo se produce en personas secretoras y negativo en
personas no secretoras