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TIPOS DE MUTACIONES:
MUTACIONES ESPONTÁNEAS: por espontaneidad, con una
frecuencia de 10-10 y 10-5 por generación y por gen por la
cual no es recomendable para la selección, con relativa
frecuencia de reversión, causadas por integración y
escisión de elementos IS (Secuencias de Inserción) junto
con errores en el funcionamiento de enzimas (ADN
polimerasa, enzimas de recombinación y de reparación del
ADN.
MUTAGÉNISIS DIRIGIDA:
Comprende:
1.Delecciones: las producidas por enzimas de restricción
actuando sobre ADN monocatenario circular que lo llega
a linearizar , cuyos extremos llegan a convertirse en
extremos romos perdiéndose secuencias de nucleótidos.
2.Inserciones:
Por adaptador-conector: cuando se utilizan
moléculas adaptadoras de ADN (ADN bicatenario
sintetizado químicamente que puede ser utilizado
para conectar los extremos de dos moléculas de ADN)
o conectoras (que es similar al adaptador pero posee
un sitio de reconocimiento para una enzima de
restricción) para ser insertado en el sitio de
reconocimiento en el que ha actuado la enzima de
restricción.
Por transposones: ofrece una gran variedad de
ventajas. Puede obtenerse un fenotipo mutante con
una velocidad muy baja de reversión, hacen que sean
fáciles de aislar por los marcadores de resistencia
a antibióticos. Estos producen una interrupción en
la transcripción.
3.Mutaciones puntuales en lugares específicos del ADN:
Por bisulfito: puede convertir un residuo citosina
del ADN monocatenario en un residuo uracilo ya que el
bisulfito sódico en el ADN origina la deaminación de
la citosina que después va a llevar a la transición
de GC a AT.
Análogos de nucleótidos: pueden ser incorporados in
vitro en el ARN o en el ADN utilizando una enzima
que replicará el ácido nucleico de una forma
sincrónica. Incluyen a: N4-hidroxicitidina trifosfato
(N4-hidroxi-CTP) o N4-hidroxidesoxicitidina
trifosfato (N4-hidroxi-dCTP). La N4-hidroxicitosina
conduce a la formación de transiciones: de GC a AT
después de ser incorporada en una ronda de la
síntesis de ADN tanto con G como con A.
4.Mutagénesis con oligonucleótidos: para esto primero se
clona el gen deseado en un vector de ADN monocatenario
como el bacteriófago M13 y se después se le añade al
sistema un oligonucleótido sintético de 15 a 100 bases
que contenga una secuencia complementaria a la región
de interés pero con una base que no aparece.
ADN NORMAL
A T G C C T G T T A T G
T A C G G A C A A T A C
N-metil-N-nitro-nitrosoguanidina (NTG): Es un
mutágeno químico efectivo pero difícil de usar por
efectos carcinogénicos. La mayoría de sus mutaciones,
90%, son transiciones: GC a AT, en pequeño grado
delecciones y corrimientos de lectura como resultado
de la delección de pares de GC. El mecanismo exacto
de reacción no es conocido.
OPTIMIZACIÓN DE LA MUTAGÉNESIS:
Se basa en que el efecto de un mutágeno sobre un gen
específico o el efecto de una mutación sobre un proceso
complejo, como la biosíntesis de un metabolito
secundario, nunca puede ser predicho.